摘要
目的探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＴＴＶ核酸的优化条件，初步测定慢性丙型肝炎及慢性非甲－戊，非庚肝炎患者中ＴＴ病毒的检出率．方法将标本分别予以４℃保存１ｗｋ、室温保存１ｗｋ及１ｗｋ内将标本于－３５℃与室温间反复冻融６次３种储存方法．分别以ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ方法（方法１），ＮＰ－４０法（方法２）及聚乙二醇法提取ＴＴＶＤＮＡ，分别以套式ＰＣＲ与单管套式ＰＣＲ检测ＴＴＶ．以ＰＣＲ直接序列分析方法测定扩增产物以验证扩增产物的特异性．结果在１０份已知病毒标志均为阴性的血清中，方法１与方法２提取核酸后可在４份血清中检出ＴＴＶ，方法３提取核酸后的检出率为０．１次ＰＣＲ、单管ＰＣＲ与单管套式ＰＣＲ对１０份已知病毒标志均为阴性血清的ＴＴＶ检出率分别为１０％，４０％和４０％．将２份血清按原血清、１０－１～１０－１０系列稀释后检测，发现，１次ＰＣＲ、套式ＰＣＲ和单管套式ＰＣＲ的检出水平分别为原倍、１０－５与１０－４及阴性、１０－４与１０－４．４℃保存１ｗｋ、室温保存１ｗｋ及反复冻融标本的最低检测稀释度为１０－５，１０－４，１０－３与１０－４，１０－４，１０－３．对一份ＰＣＲ产物进行序列分析证实为ＴＴＶ特异性基因．检测３１份慢性丙型?
基金
国家自然科学基金
