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番茄环斑病毒HC-RT-PCR-ELISA检测 被引量：11
1
作者 赵文军 安德荣 +2 位作者 朱水芳 黄文胜 陈红运 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期174-179,共6页
番茄环斑病毒 (ToRSV)是我国对外检疫一类有害生物 ,目前国内尚无存在的报道。PCR技术是一种快速灵敏的植物病毒检测方法 ,但核酸内的聚合酶抑制物会导致漏检现象 ,而只通过凝胶电泳进行结果判定会出现假阳性 ,这两方面限制了PCR技术在... 番茄环斑病毒 (ToRSV)是我国对外检疫一类有害生物 ,目前国内尚无存在的报道。PCR技术是一种快速灵敏的植物病毒检测方法 ,但核酸内的聚合酶抑制物会导致漏检现象 ,而只通过凝胶电泳进行结果判定会出现假阳性 ,这两方面限制了PCR技术在对外检疫中的应用。利用共价结合在PCR管壁上的引物特异性杂交诱捕核酸粗提液中的靶标核酸 ,洗掉杂质及抑制物质 ,在同一管内作RT PCR ,凝胶电泳检测液相产物的同时对固相产物进行杂交检测 ,提高了结果的可靠性及灵敏度。利用所建立的HC RT PCR ELISA成功地从法国进口葡萄苗中检出ToRSV。 展开更多
关键词 HC-rt-pcr-elisa检测 番茄环斑病毒 植物检疫 杂交诱捕PCR
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甲型肝炎病毒的RT-PCR-ELISA检测法 被引量：4
2
作者 吴星 毛群颖 张华远 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2006年第6期639-640,共2页
目的建立一种半定量检测甲型肝炎病毒(HAV)RNA的RT-PCR-ELISA方法。方法将5′端磷酸化的特异性探针包被在氨基化的微孔板上,以生物素标记的探针为引物,提取样品中的HAVRNA,反转录并扩增HAVDNA,变性后的PCR产物与探针杂交,并被捕获在微... 目的建立一种半定量检测甲型肝炎病毒(HAV)RNA的RT-PCR-ELISA方法。方法将5′端磷酸化的特异性探针包被在氨基化的微孔板上,以生物素标记的探针为引物,提取样品中的HAVRNA,反转录并扩增HAVDNA,变性后的PCR产物与探针杂交,并被捕获在微孔板上,再与酶标亲和素结合,显色测定。结果所建立的方法结果判断客观,灵敏度比凝胶电泳法高一个数量级,分析不同时间检测结果,差异无显著意义。结论已建立了半定量检测HAVRNA的RT-PCR-ELISA方法。 展开更多
关键词 甲型肝炎病毒 rt-pcr-elisa
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RT-PCR-ELISA法定量检测人FGF mRNA
3
作者 陈少波 李东 +2 位作者 吕建新 周翔天 瞿佳 《眼视光学杂志》 2002年第4期222-225,共4页
目的 :建立一种灵敏、特异、精确的定量检测人成纤维细胞生长因子mRNA(FGFmRNA)的逆转录 聚合酶链反应 酶联免疫吸附分析技术。方法 :设计两条特异探针 ,其序列分别与FGFmRNART PCR产物的一条链的不同区域互补。其中一条为带有氨基修... 目的 :建立一种灵敏、特异、精确的定量检测人成纤维细胞生长因子mRNA(FGFmRNA)的逆转录 聚合酶链反应 酶联免疫吸附分析技术。方法 :设计两条特异探针 ,其序列分别与FGFmRNART PCR产物的一条链的不同区域互补。其中一条为带有氨基修饰的捕获探针 ,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合 ,另一条为标记生物素的检测探针。提取人外周血单个核细胞总RNA ,进行RT PCR扩增 ,产物热变性后与检测探针一起加入已包被捕获探针的微孔板内进行夹心杂交 ,最后加入链亲和素 辣根过氧化物酶 (SAV HRP)及底物 ,在 4 5 0nm波长处检测吸光度。结果 :该方法检测FGFmRNA灵敏度高、特异性好 ,与非目的扩增收稿日期 :2 0 0 2 -10 -3 0 ;修回日期 :2 0 0 2 -11-2 0基金项目 :浙江省自然科学基金资助项目 (No.3 975 10 )。作者简介 :陈少波 ( 1965 -) ,男 ,浙江温州人 ,高级工程师。通信作者 :吕建新 (E -mail:jx@mail.wzptt.zj.cn)。产物杂交无阳性信号 ;重复性良好。结论 :本方法具有操作简单、灵敏度高、特异性好的优点 ,适合于FGFmRNA的定量检测。 展开更多
关键词 酶联夹心杂交 逆转录—聚合酶链反应 细胞生长因子 FGFmRNA rt-pcr-elisa法
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人隐孢子虫RT-PCR-ELISA检测方法的建立 被引量：6
4
作者 徐前明 李国清 +5 位作者 叶亦见 梁详解 高振勇 岳彩玲 程家林 朱海波 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期150-153,共4页
目的建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法。方法根据人隐孢子虫与其他隐孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中p1引物带有生物素标记)用来扩增含高变区目的片段;采用RT-PCR方法扩增目的片段,扩增产... 目的建立一种高度敏感和特异的人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法。方法根据人隐孢子虫与其他隐孢子虫粘附蛋白p23基因的多重比对,设计一对引物(其中p1引物带有生物素标记)用来扩增含高变区目的片段;采用RT-PCR方法扩增目的片段,扩增产物与探针引物进行液相杂交,将杂交产物与微孔板上包被的链霉亲和素结合,再与辣根过氧化酶标记的抗地高辛抗体反应。用所建立的方法对22份临床样本进行检测,并与常规检测方法进行比较。结果所建立的RT-PCR-ELISA检测方法具有高特异性和敏感性,比常规的PCR方法灵敏度提高了100(0.08:8ng)左右。临床检测结果显示,该方法的检出率高达86%(19/22),而RT-PCR、蔗糖漂浮法和抗酸染色法的检出率仅为27%(6/22)、27%(6/22)和50%(11/22)。结论本试验成功建立了人隐孢子虫的RT-PCR-ELISA检测方法,检出率比常规检测方法高。 展开更多
关键词 人隐孢子虫 PCR—ELISA RT-PCR 检测
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DAS-ELISA与RT-PCR检测马铃薯病毒结果比较与分析
5
作者 王凤姣 肖乐书 +3 位作者 杨丽君 陈光露 胡新喜 秦玉芝 《中国马铃薯》 2025年第4期305-311,共7页
马铃薯病毒病是制约马铃薯产业健康发展的重要因素之一,建立快速、准确的检测技术是病毒病防控的关键前提。比较分析双抗体夹心酶联免疫吸附测定(Double antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)和反转录聚合... 马铃薯病毒病是制约马铃薯产业健康发展的重要因素之一,建立快速、准确的检测技术是病毒病防控的关键前提。比较分析双抗体夹心酶联免疫吸附测定(Double antibody sandwich-enzyme linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)和反转录聚合酶链式反应(Reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)两种方法在检测不同来源马铃薯材料病毒含量差异与适用性,为实现马铃薯产业不同场景样品病毒病的高效快速检测提供依据。采用DAS-ELISA和RT-PCR分别对23份田间显症马铃薯样品和30份微茎尖离体培养材料进行不同病毒[马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)、马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)、马铃薯M病毒(Potato virus M,PVM)和马铃薯卷叶病毒(Potato leafroll virus,PLRV)]检测,对比分析结果表明,大田显症样品,DAS-ELISA与RT-PCR检测结果一致性高;隐症离体培养材料,两次DAS-ELISA检测结果重复性较差,与RT-PCR结果的一致性分别为59.33%和80.66%。本研究认为DAS-ELISA方法适用于田间病毒显症样品的高通量初步筛查与鉴定,RT-PCR适用于脱毒苗、基础种薯等病毒隐症关键材料的精准检测。 展开更多
关键词 马铃薯 病毒 DAS-ELISA RT-PCR
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SCL基因在白血病和正常骨髓基质细胞中的表达 被引量：3
6
作者 王震 李扬秋 +5 位作者 吴秀丽 陈少华 杨力建 张洹 朱康儿 韩忠朝 《现代临床医学生物工程学杂志》 CAS 2002年第6期406-408,共3页
目的　初步了解干细胞白血病 (SCL)基因在白血病和正常骨髓基质细胞中的表达情况 .方法　通过长期体外培养扩增骨髓基质细胞 ,运用RT -PCR -ELISA检测SCL基因的表达 .结果　SCL表达于绝大多数CML、AML、CLL患者骨髓基质细胞中 ,部分正... 目的　初步了解干细胞白血病 (SCL)基因在白血病和正常骨髓基质细胞中的表达情况 .方法　通过长期体外培养扩增骨髓基质细胞 ,运用RT -PCR -ELISA检测SCL基因的表达 .结果　SCL表达于绝大多数CML、AML、CLL患者骨髓基质细胞中 ,部分正常骨髓基质细胞也表达SCL基因 . 展开更多
关键词 SCL基因 骨髓基质细胞 rt-pcr-elisa 白血病
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GATA3基因在白血病骨髓基质细胞中的表达 被引量：1
7
作者 吴秀丽 李扬秋 +6 位作者 王震 陈少华 杨力建 罗更新 张洹 朱康儿 韩忠朝 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期1-3,共3页
目的了解转录因子GATA3基因在白血病和正常骨髓基质细胞(BMSC)中表达的情况。方法体外扩增培养BMSC,运用RTPCRELISA方法检测GATA3基因的表达情况,并对其相对表达水平进行半定量比较。结果GATA3基因在正常和白血病的BMSC中均有一定的表达... 目的了解转录因子GATA3基因在白血病和正常骨髓基质细胞(BMSC)中表达的情况。方法体外扩增培养BMSC,运用RTPCRELISA方法检测GATA3基因的表达情况,并对其相对表达水平进行半定量比较。结果GATA3基因在正常和白血病的BMSC中均有一定的表达。BMSC中急性髓性白血病(AML)和慢性粒细胞白血病(CML)组的GATA3基因表达率与正常组比较无明显差异,而急性淋巴细胞白血病(ALL)组的GATA3表达率比正常组低,且AML的BMSC中GATA3基因表达水平>ALL>正常>CML。结论转录因子GATA3基因可在正常和白血病骨髓基质细胞中表达,并可能影响骨髓微环境的造血调控作用,其表达模式的改变可能与白血病发生发展有一定的关系。 展开更多
关键词 GATA-3基因 白血病 骨髓基质细胞 rt-pcr-elisa
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从印度尼西亚进口玉米中首次截获玉米褪绿斑驳病毒
8
作者 单振菊 水克娟 +4 位作者 闫邦奇 刘明航 徐淼锋 廖力 张卫东 《植物检疫》 2025年第2期63-66,共4页
玉米褪绿斑驳病毒(maize chlorotic mottle virus,MCMV)是我国进境植物检疫性有害生物。主要分布于秘鲁、美国、墨西哥、刚果民主共和国、肯尼亚、阿根廷、巴西等国家,中国台湾、四川和云南曾有过报道。2024年6月拱北海关技术中心通过... 玉米褪绿斑驳病毒(maize chlorotic mottle virus,MCMV)是我国进境植物检疫性有害生物。主要分布于秘鲁、美国、墨西哥、刚果民主共和国、肯尼亚、阿根廷、巴西等国家,中国台湾、四川和云南曾有过报道。2024年6月拱北海关技术中心通过双抗体夹心酶联免疫吸附(DAS-ELISA)、RT-PCR方法、实时荧光RT-PCR和序列比对分析进行验证,首次从印度尼西亚进口玉米种子中检出该病毒。这是我国首次从印度尼西亚进口玉米种子中截获该病毒,可为海关一线人员执法把关提供技术支撑。 展开更多
关键词 玉米褪绿斑驳病毒 DAS-ELISA RT-PCR 实时荧光RT-PCR 序列分析
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百合无症病毒的RT-PCR和IC-RT-PCR检测 被引量：43
9
作者 王继华 瞿素萍 +2 位作者 孔宝华 陆琳 余朝秀 《云南农业大学学报》 CAS CSCD 2004年第2期148-150,173,共4页
应用DAS-ELISA,RT-PCR和IC-RT-PCR技术检测百合无症病毒(LSV)。结果表明:RT-PCR和IC-RT-PCR分别可从2ng和200ng百合叶片组织中检测出LSV,分别是DAS-ELISA敏感度的1000倍和10倍。百合鳞茎的不同取样部位对PCR检测结果的影响较大,RT-PCR... 应用DAS-ELISA,RT-PCR和IC-RT-PCR技术检测百合无症病毒(LSV)。结果表明:RT-PCR和IC-RT-PCR分别可从2ng和200ng百合叶片组织中检测出LSV,分别是DAS-ELISA敏感度的1000倍和10倍。百合鳞茎的不同取样部位对PCR检测结果的影响较大,RT-PCR难以从鳞片和根部检测出病毒,但IC-RT-PCR可以检测出病毒。 展开更多
关键词 百合 无症病毒 RT-PCR IC-RT-PCR DAS—ELISA 检测技术 切花
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厦门地区病毒性腹泻诺如病毒感染状况 被引量：18
10
作者 郑惠能 李莉 +6 位作者 陈娟娟 黄仕杰 马桂林 温慧欣 沈理通 周常义 黄建炜 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期259-262,共4页
目的了解本地区病毒性腹泻患者诺如病毒感染情况,为进一步探索诺如病毒流行规律和防控对策提供依据。方法收集2007年4月至2008年7月3个监测哨点医院病毒性腹泻患者粪便标本共323份,应用ELISA方法检测粪便标本中病毒抗原,实时荧光逆转录... 目的了解本地区病毒性腹泻患者诺如病毒感染情况,为进一步探索诺如病毒流行规律和防控对策提供依据。方法收集2007年4月至2008年7月3个监测哨点医院病毒性腹泻患者粪便标本共323份,应用ELISA方法检测粪便标本中病毒抗原,实时荧光逆转录聚合酶链反应法(Real-Time RT-PCR)分组别检测病毒核酸,部分病毒核酸阳性的标本扩增RdRp基因片段后测序验证病毒组别。结果323例患者粪便标本中,ELISA检测抗原阳性68例,阳性率21.05%;Real-Time RT-PCR检测核酸阳性107例,阳性率33.13%;诺如病毒检出率为38.08%。诺如病毒GGⅡ组占74.77%,少数为GGⅠ组(1.87%),尚有25份(23.36%)未定型。结论厦门地区存在诺如病毒流行,以GGⅡ组毒株流行为主,而且是病毒性腹泻的主要病原。 展开更多
关键词 诺如病毒 病毒性腹泻 逆转录聚合酶链反应法 酶联免疫吸附试验
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广东省东莞市犬狂犬病的流行病学调查 被引量：8
11
作者 张险朋 周萍 +6 位作者 郭宵峰 谢海燕 张端秀 殷三鸿 温清萍 李永福 杨德胜 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期629-632,共4页
调查了广东省东莞市2008年犬的饲养情况及2006年的免疫情况；应用ELISA对2006～2007年采自东莞市32个镇区的1772份犬血清样品进行了狂犬病病毒抗体效价的检测；采用RTPCR方法对2006～2007年采自上述区域的104份犬脑组织样品和789份犬唾... 调查了广东省东莞市2008年犬的饲养情况及2006年的免疫情况；应用ELISA对2006～2007年采自东莞市32个镇区的1772份犬血清样品进行了狂犬病病毒抗体效价的检测；采用RTPCR方法对2006～2007年采自上述区域的104份犬脑组织样品和789份犬唾液样品进行了病原学检测。结果，全市共养犬10万多只，其中农村和城镇各占50％，狂犬病疫苗的注射率约为83．5％。1772份犬血清样品中，免疫合格率为52．31％，其中2006年的免疫合格率为35．92％，2007年的免疫合格率为70．69％；893份犬脑组织和唾液样品中。狂犬病病毒的阳性率为1．57％。结果表明，2007年东莞市犬的狂犬病免疫水平有大幅度提高，当地犬可能携带狂犬病病毒。 展开更多
关键词 犬 狂犬病 逆转录聚合酶链式反应 酶联免疫吸附试验 流行病学 东莞
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猪瘟病毒4种检测方法的比较 被引量：14
12
作者 张朝红 张彦明 +3 位作者 张永国 郭抗抗 魏中锋 孙裴 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第5期24-28,共5页
应用病毒分离鉴定、荧光抗体法、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和夹心ELISA 4种方法,分别对23份猪瘟病料组织中的猪瘟病毒(CSFV)进行了检测,并比较4种检测方法的优缺点。结果显示,病毒分离鉴定法准确性较高,诊断比较容易,但存在试验步... 应用病毒分离鉴定、荧光抗体法、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和夹心ELISA 4种方法,分别对23份猪瘟病料组织中的猪瘟病毒(CSFV)进行了检测,并比较4种检测方法的优缺点。结果显示,病毒分离鉴定法准确性较高,诊断比较容易,但存在试验步骤繁琐,所需时间长的缺点;荧光抗体检测法所需时间较短,但需要经验比较丰富人员来判定结果,且存在假阳性结果,特异性比较差;RT-PCR检测法具有快速、敏感等优点,特别是样品保存不理想时更有价值,利用套式PCR(nested-PCR)可以提高检测的特异性;夹心ELISA检测法具有快速、敏感等优点,但在样品保存不理想时会出现假阴性结果。 展开更多
关键词 猪瘟 病毒分离鉴定 荧光抗体 反转录-聚合酶链式反应 ELISA
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RT-PCR检测猪传染性胃肠炎病毒 被引量：20
13
作者 李军 林继煌 +4 位作者 陆承平 何孔旺 倪艳秀 还红华 钱永清 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期246-248,共3页
根据猪传染性胃肠炎病毒 ( TGEV)纤突蛋白 S基因的 5′端核酸序列设计了 1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为 886bp。在优化 RT-PCR反应条件的基础上 ,建立了检测 TGEV的 RT-PCR方法。用此RT-PCR方法检测 56份猪腹泻粪样 ,同时用夹... 根据猪传染性胃肠炎病毒 ( TGEV)纤突蛋白 S基因的 5′端核酸序列设计了 1对引物。该对引物扩增的目的片段长度为 886bp。在优化 RT-PCR反应条件的基础上 ,建立了检测 TGEV的 RT-PCR方法。用此RT-PCR方法检测 56份猪腹泻粪样 ,同时用夹心 ELISA法作对照。结果显示 ,RT-PCR法检测的 2 0份阳性粪样 ,用夹心 ELISA法检测有 1 4份呈阳性 ,两者的符合率为 89%。 RT-PCR法比夹心 ELISA法敏感性更高 ,可用于 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 RT-PCR 猪 诊断方法
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河南省信阳市动物中新布尼亚病毒感染情况调查 被引量：9
14
作者 杜燕华 黄学勇 +4 位作者 王海峰 尤爱国 胡小宁 康锴 许汴利 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期766-768,共3页
目的了解河南省信阳市动物中新布尼亚病毒感染情况,为研究其传播途径和防治策略奠定基础。方法在信阳市商城县和光山县采集动物血液,应用荧光RT-PCR方法检测血液标本中是否携带新布尼亚病毒核酸,采用双抗原夹心ELISA方法检测新布尼亚病... 目的了解河南省信阳市动物中新布尼亚病毒感染情况,为研究其传播途径和防治策略奠定基础。方法在信阳市商城县和光山县采集动物血液,应用荧光RT-PCR方法检测血液标本中是否携带新布尼亚病毒核酸,采用双抗原夹心ELISA方法检测新布尼亚病毒总抗体。结果在调查点采集到5种动物血清标本合计312份,结果均未检测到新布尼亚病毒核酸;141份动物血清检测到新布尼亚病毒总抗体,总体阳性率为45.19%,鼠、牛、羊、猪和狗分别为1.06%,100.00%、76.27%、3.57%和75.00%,5种动物的抗体阳性率有统计学意义。结论河南省信阳市牛、羊、狗等家养动物中存在新布尼亚病毒抗体,可能为该病毒的储存宿主。 展开更多
关键词 新布尼亚病毒 发热伴血小板减少综合征 荧光RT—PCR ELISA
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猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立 被引量：13
15
作者 杨利峰 杨建民 +2 位作者 周向梅 彭红 赵德明 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期292-295,共4页
将RT-PCR方法和高灵敏度的地高辛检测系统相结合,先建立猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的RT-PCR方法,用地高辛标记RT-PCR产物;再建立CSFV的PCR-ELISA方法,用生物素标记的探针在链亲和素包被的微量板孔中杂交捕获地高辛标记... 将RT-PCR方法和高灵敏度的地高辛检测系统相结合,先建立猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)的RT-PCR方法,用地高辛标记RT-PCR产物;再建立CSFV的PCR-ELISA方法,用生物素标记的探针在链亲和素包被的微量板孔中杂交捕获地高辛标记的PCR产物,最后进行免疫显色得出结果。试验主要对RT-PCR ELISA的各种反应条件进行了优化,确定了1mg/L的链亲和素、50μg/L生物素标记的探针、1∶3000抗地高辛的过氧化物酶、37℃杂交2h等为最适反应条件。该方法的敏感性比常规琼脂糖凝胶电泳检测高100倍以上,克服了组织样品中CSFV含量少而难以检测的困难,为猪瘟的早期诊断和分子流行病学调查提供了一条新途径。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 RT—PCR ELISA 诊断
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用RT-PCR和ELISA对暴发性急性胃肠炎事件中诺沃克样病毒检测的比较 被引量：11
16
作者 蒋力云 吴新伟 +7 位作者 刘于飞 张伟 刘远 沈纪川 李泽荣 狄飚 周秀珍 王鸣 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第3期247-249,共3页
目的　诺沃克样病毒是世界范围内急性非细菌性流行性胃肠炎的重要病原。采用RT-PCR和ELISA两种方法对广州市多起暴发性急性胃肠炎事件中病人标本进行诺沃克样病毒检测 ,了解广州市诺沃克样病毒流行情况 ,并对RT-PCR和ELISA两种检测方法... 目的　诺沃克样病毒是世界范围内急性非细菌性流行性胃肠炎的重要病原。采用RT-PCR和ELISA两种方法对广州市多起暴发性急性胃肠炎事件中病人标本进行诺沃克样病毒检测 ,了解广州市诺沃克样病毒流行情况 ,并对RT-PCR和ELISA两种检测方法进行比较。方法　用RT-PCR和ELISA对 76份腹泻病人粪便 ,2 3份肛拭子 ,12份食物进行诺沃克样病毒检测。结果　粪便通过RT-PCR检出阳性 37份 ,ELISA检出阳性 17份 ,肛拭子仅通过RT-PCR检出 1份阳性 ,食物无阳性检出。结论　这是首次我国实验室证实的由诺沃克样病毒引起的急性胃肠炎暴发。RT-PCR的阳性率大于ELISA ,且检品以粪便为好。并且我们的分离株与诺沃克原型株相应序列比较的同源性大于 90 % 展开更多
关键词 诺沃克样病毒 RT-PCR ELISA
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猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立及其初步应用 被引量：9
17
作者 孙世琪 郭慧琛 +6 位作者 尚佑军 魏旭文 靳野 马军武 韩雪清 刘湘涛 谢庆阁 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第9期3-6,共4页
建立了检测CSFV的快速、敏感、特异的RT PCRELISA方法。在RT PCR过程中以地高辛标记的dUTP(DIG dUTP)标记PCR产物 ,用生物素标记的捕获探针在链亲和素包被微量板孔中杂交捕获PCR产物。该方法的敏感性较常规RT PCR方法高 10 0倍 ,可检测... 建立了检测CSFV的快速、敏感、特异的RT PCRELISA方法。在RT PCR过程中以地高辛标记的dUTP(DIG dUTP)标记PCR产物 ,用生物素标记的捕获探针在链亲和素包被微量板孔中杂交捕获PCR产物。该方法的敏感性较常规RT PCR方法高 10 0倍 ,可检测出 35 0 μL1∶10 0 (相当于 3.5mg)的兔脾组织悬液中的C株CSFV ,特异性强 ,避免了PCR过程中因污染导致的假阳性结果。通过对RT PCR和微量杂交系统的条件优化 ,该方法用于检测C株兔脾组织毒、细胞适应毒和野毒感染的猪组织毒样品 。 展开更多
关键词 猪瘟 RT-PCRELISA 诊断方法 应用 生物素标记 微量杂交系统
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逆转录-半套式-聚合酶链反应在乙脑早期诊断中的应用 被引量：4
18
作者 黄庆生 马文煜 +4 位作者 姜绍谆 张富泉 李别虎 肖毅 刘利兵 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第4期258-261,共4页
目的：为了探讨ＲＴ－ＰＣＲ用于乙脑临床诊断的可行性。方法：根据乙脑病毒Ｅ蛋白基因区设计了３条引物，采用逆转录－半套式－聚合酶链反应（ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法，从实验室到临床应用上，对该方法的敏感性和特... 目的：为了探讨ＲＴ－ＰＣＲ用于乙脑临床诊断的可行性。方法：根据乙脑病毒Ｅ蛋白基因区设计了３条引物，采用逆转录－半套式－聚合酶链反应（ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法，从实验室到临床应用上，对该方法的敏感性和特异性、临床检测的可靠性进行了探索，并与ＩｇＭＥＬＩＳＡ捕捉法进行了比较。结果：本方法所用引物的敏感性高，特异性强。在此基础上，检测了４７例临床上确诊为乙脑患者的标本（特异性ＩｇＭ阳性），４３例ＲＴ－ｓｅｍ－ｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ结果为阳性，与ＩｇＭ检测的符合率为９１％。在２０例特异性ＩｇＭ阴性、临床上怀疑为乙脑的患者中，１２例ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ结果为阳性，阳性率为６０％。结论：上述结果提示，ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ用于乙脑患者的临床诊断是可行的，若与ＩｇＭＥＬＩＳＡ捕捉法相结合可进一步提高阳性率。另外，对１６例核酸检测阳性的患者进行了追踪检查，结果有１４例患者恢复期标本的ＲＮＡ检测仍为阳性，提示该病毒并未随着症状的消失而立即消失。 展开更多
关键词 乙型脑炎 诊断 RT-PCR ELISA 早期诊断
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脂蛋白对培养巨噬细胞表达噬巨细胞移动抑制因子的实验研究 被引量：5
19
作者 林秋雄 单志新 +3 位作者 余细勇 杨敏 林曙光 Hui-yao LAN 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2005年第3期329-332,共4页
目的:探讨不同脂蛋白对培养的人巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子基因和蛋白水平的影响。方法:2 8SC人巨噬细胞株用含有1×10 5U·L-1青霉素、10 0mg·L-1链霉素和10 %FBS的RPMI 16 40培养基于37℃,5 %的CO2 中培养。以每... 目的:探讨不同脂蛋白对培养的人巨噬细胞表达巨噬细胞移动抑制因子基因和蛋白水平的影响。方法:2 8SC人巨噬细胞株用含有1×10 5U·L-1青霉素、10 0mg·L-1链霉素和10 %FBS的RPMI 16 40培养基于37℃,5 %的CO2 中培养。以每孔1×10 4个细胞接种于6孔板中,每孔2ml培养液,加入终浓度为15 0mg·L-1的不同脂蛋白,于37℃共同孵育2 4h收集细胞和培养介质。采用RT PCR和ELISA分别测定MIFmRNA和蛋白表达水平。结果:巨噬细胞有MIF表达,低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、胆固醇和甘油三脂组诱导巨噬细胞MIFmRNA和蛋白表达水平,试验组较正常对照组升高(P <0 .0 5 ) ;而高密度脂蛋白和极低密度脂蛋白组诱导巨噬细胞MIFmRNA和蛋白表达水平,试验组与正常对照组变化相近(P >0 .0 5 )。结论:不同脂质对巨噬细胞MIFmRNA和蛋白表达作用不同。MIF可能参与了低密度脂蛋白、氧化型低密度脂蛋白、胆固醇和甘油三脂所致的动脉粥样硬化进程。 展开更多
关键词 脂蛋白类 巨噬细胞移动抑制因子 动脉粥样硬化 细胞培养 逆转录聚合酶链反应 酶联免疫分析
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肺癌组织中Endostatin mRNA转录表达与血清Endostatin水平关系的相关性研究 被引量：4
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作者 刘颖 周清华 +3 位作者 孙芝琳 陆艳蓉 孙泽芳 张洁 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期665-669,共5页
目的:探讨非小细胞肺癌患者肺癌组织中EndostatinmRNA转录表达水平与血清中内皮抑素(Endo-statin)水平的关系以及两者水平与肺癌临床病理生理特征的关系。方法:用ELISA法检测46例非小细胞肺癌患者血清中Endostatin的水平;用RT-PCR法检... 目的:探讨非小细胞肺癌患者肺癌组织中EndostatinmRNA转录表达水平与血清中内皮抑素(Endo-statin)水平的关系以及两者水平与肺癌临床病理生理特征的关系。方法:用ELISA法检测46例非小细胞肺癌患者血清中Endostatin的水平;用RT-PCR法检测其肺癌组织中EndostatinmRNA的转录表达水平。结果:1)肺癌患者血清中Endostatin水平为20.85±4.56ng/ml;肺癌组织中EndostatinmRNA的转录表达产物的OD比值为0.872±0.071。2)肺癌患者血清中Endostatin水平及肺癌组织中EndostatinmRNA的转录表达水平均与肺癌原发肿瘤大小、有无远处转移、细胞分化程度和P-TNM分期等有密切关系(P<0.05),而与肺癌原发部位、淋巴结转移状态、组织学类型,患者性别、年龄和吸烟与否等均无明显关系(P>0.05)。3)肺癌组织中CollagenⅩⅧ/EndostatinmRNA的转录表达与血清中Endostatin水平呈非常显著正相关(r=0.686,P<0.01)。结论:肺癌患者肺癌组织中EndostatinmRNA的转录表达与血清Endostatin水平有非常显著正相关关系,且均与肺癌的发生、发展、远处转移和细胞分化不良有密切关系,非小细胞肺癌患者血清中Endostatin水平和肺癌组织中EndostatinmRNA的转录表达水平可能是预测肺癌恶性行为的有用指标。 展开更多
关键词 肺肿瘤 内皮抑素 转录表达 逆转录-聚合酶链式反应 酶联免疫吸附测定
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