背景与目的:既往研究表明,肿瘤相关抗原CEP65(cancer and em bryoexpression protein65)仅表达于肿瘤和胚胎组织,本研究拟揭示CEP65在细胞中的分布,为进一步阐明CEP65在肿瘤发生、发展中的功能奠定基础。方法:构建肿瘤及胚胎特异表达基...背景与目的:既往研究表明,肿瘤相关抗原CEP65(cancer and em bryoexpression protein65)仅表达于肿瘤和胚胎组织,本研究拟揭示CEP65在细胞中的分布,为进一步阐明CEP65在肿瘤发生、发展中的功能奠定基础。方法:构建肿瘤及胚胎特异表达基因Cep65与GST融合表达的真核表达质粒,通过DEAE-Dextran方法转染COS7细胞,分离细胞的胞浆蛋白和核蛋白,W estern blot检测CEP65在细胞中的分布情况。构建Cep65与红色荧光蛋白基因融合表达的真核表达质粒,转染细胞后,利用荧光显微镜观察CEP65在细胞中的分布。结果:通过细胞组分生化分析分离细胞胞浆蛋白和核蛋白,W estern blot检测结果表明,表达的CEP65分布在细胞浆和细胞核中。荧光蛋白定位进一步分析发现,转染单纯荧光蛋白表达质粒的细胞,其荧光在细胞内呈弥散性分布,而转染CEP65与荧光蛋白基因融合表达质粒的细胞,在细胞质及细胞核内形成聚集的荧光颗粒。结论:CEP65可在COS7细胞中高效表达,其表达产物存在于细胞质和细胞核内;CEP65可能是一种核相关蛋白。展开更多
文摘背景与目的:既往研究表明,肿瘤相关抗原CEP65(cancer and em bryoexpression protein65)仅表达于肿瘤和胚胎组织,本研究拟揭示CEP65在细胞中的分布,为进一步阐明CEP65在肿瘤发生、发展中的功能奠定基础。方法:构建肿瘤及胚胎特异表达基因Cep65与GST融合表达的真核表达质粒,通过DEAE-Dextran方法转染COS7细胞,分离细胞的胞浆蛋白和核蛋白,W estern blot检测CEP65在细胞中的分布情况。构建Cep65与红色荧光蛋白基因融合表达的真核表达质粒,转染细胞后,利用荧光显微镜观察CEP65在细胞中的分布。结果:通过细胞组分生化分析分离细胞胞浆蛋白和核蛋白,W estern blot检测结果表明,表达的CEP65分布在细胞浆和细胞核中。荧光蛋白定位进一步分析发现,转染单纯荧光蛋白表达质粒的细胞,其荧光在细胞内呈弥散性分布,而转染CEP65与荧光蛋白基因融合表达质粒的细胞,在细胞质及细胞核内形成聚集的荧光颗粒。结论:CEP65可在COS7细胞中高效表达,其表达产物存在于细胞质和细胞核内;CEP65可能是一种核相关蛋白。
