摘要
为了建立快速、简便的番鸭小鹅瘟病诊断方法,用纯化的小鹅瘟病毒(Goose parpovirus,GPV-PT)免疫BABL/c鼠,取脾细胞和骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA和间接免疫荧光检检(indirect immunofluorescence assay,IFA)筛选,获得3株能稳定分泌抗GPV单克隆抗体的杂交瘤细胞株(分别命名为D11、7-7和E16)。三株单抗的免疫球蛋白亚类分别为IgM、IgG3和IgM,3株单抗均具有ELISA、IFA和中和特性;其中两株(D11和E16)具有致敏胶乳特性;特异性测定显示3株单抗仅与GPV反应,而与番鸭细小病毒(Duck parpovirus,MPV)、番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus,MDRV)、禽呼肠孤病毒(Avian reovirus,ARV)、鸭副粘病毒(Paramyxovirus,PMV)、鸭肝炎病毒(Duck hepatis virus,DHV)、正常细胞和胚液等均无交叉反应;在-20℃保存期为18个月。结果表明3株单抗均具有良好的特异性,为研制免疫学快速诊断奠定了基础。
BALB/c mice were immunized with Goose parpovirus （GPV） antigen. Then, their spleen cells were harvested and fused with SP2/0 myeloma cells. Three hybridomas （7-7, D11 and El6） were identified in indirect ELISA and IFA to secrete monoclonal antibodies （MAbs） specific for GPV. Isotyping analysis revealed that both D11 and E16 belonged to IgM, and 7-7 to IgG3. These Mabs showed reactivity in ELISA, IFA and neutralization. The MAbs D11 and El6 also possessed reactivity with polyadelic latex particles. All MAbs had no cross-reactivity with Muscovy duck parpovirus （MPV）, Muscovy duck reovirus （MDRV）, Avian reovirus （ARV）, Paramyxovirus （PMV）, Duck hepatis virus （DHV）, muscovy duck embryofibroblast （MDEF） and normal embryo allantoic liquid.
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
2011年第6期20-24,共5页
Chinese Journal of Animal Infectious Diseases
基金
福建省农业科学院创新团队(STIF-Y02)
福建省公益类项目(2009R10025-6)
国家公益类(农业)科研专项经费项目(201003012)
关键词
小鹅瘟病毒
单克隆抗体
制备
Goose parpovirus （GPV）
monoclonal antibody
generation
