摘要
Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 是由Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ａ的Ｎ 端１１１ 位氨基酸残基和Ｃｅｃｒｏｐｉｎ Ｄ 的Ｃ 端１２３７ 位氨基酸残基构成的一个杂合肽，抗菌活性高于天然抗菌肽。根据Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 的氨基酸序列，以酵母偏爱密码设计了Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因，全长１４０ｂｐ 。采用基因片段化学合成结合ＰＣＲ 法合成Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因。合成的Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因克隆到ｐＣＲＴＭ２１ 上，进行ＤＮＡ 序列测定，证实合成的Ｃｅｃｒｏｐｉｎ ＡＤ 基因的ＤＮＡ 序列与设计序列完全一致。将Ｃｅｃｒｏｐｉｎ 基因定向克隆到大肠杆菌酵母穿梭质粒ｐＣＬＷＡ２ 的Ｂａｍ ＨＩ和Ｓａｌ Ⅰ位点上，构建成含Ｃｅｃｒｏｐｉｎ 基因的重组质粒ｐＣＡＤ，将重组质粒转化入宿主酵母ＡＢ１０３ ，以大肠杆菌Ｋ１２Ｄ３１ 为指示菌，用活性蛋白酸性ＰＡＧＥ 法测定，具有抑菌活性，表明Ｃｅｃｒｏｐｉｎ 基因在酵母中获得表达。
Cecropin ADisa hybrid peptidethatexhibitsgreaterantibacterialactivitythanthe naturalCecropinsanditisconsistof1 11aminoacidresiduesinthe N endofcecropin Aand 12 37 aminoacidresiduesinthe C endof Cecropin D.Basedontheamino acidsequenceofCecropin AD, Cecropin ADgene was designed accordingtothe coden usageofyeast.The designed gene was140 bp in size synthesized bythe combination ofoligo deoxynucletidessynthesisand PCRmethod.The PCRproduct wasclonedintothe pCRTM2.1 vector.Thesynthetic gene was provedto be correctby therestriction patten andthe DNAsequenceanalysis.Thesynthetic Cecropin ADgene wasinserted intothe E.coli yeastshuttle plasmid pCLWA2 which contains an α factor promoterleader system . The recombinantplasimid wastransferredinto yeast host AB103.Using E.coli K12D31 asindicator strain ,theexpressed productdisplayed antibacterialactivity bytestofacidic PAGE.
出处
《蚕业科学》
CAS
CSCD
1999年第3期175-180,共6页
ACTA SERICOLOGICA SINICA
基金
广东省自然科学基金
