摘要
目的 探讨内生多肽Elafin调节气道黏液高分泌的分子机制.方法 构建人 Elafin 重组质粒,原代培养正常人支气管上皮细胞 HBE16,分为对照组、香烟抽提物（CSE）刺激组、CSE 刺激＋转染重组质粒、CSE 刺激＋空质粒组、单纯转染重组质粒以及空质粒组6组.四甲基偶氮唑盐法检测各组细胞活力,Western blot法检测p-JNK、p-ERK、p-P38和IκBα蛋白含量,荧光素酶报告基因系统测定激活蛋白-1（AP-1）及核转录因子-κB（NF-κB）活性,RT-PCR检测各组黏蛋白（MUC）5AC mRNA 表达水平,ELISA 法分析各组细胞 MUC5AC 蛋白的相对含量.结果 CSE刺激组的p-JNK、p-ERK、p-c-Jun、IκBα、AP-1、NF-κB、MUC5AC和MUC5AC mRNA 含量分别为（0.55±0.03）μg/mg、（0.64±0.06）μg/mg、（0.60±0.07）μg/mg、（0.27±0.03）μg/mg、7.49±0.31、4.42±0.22、（0.71±0.04）mg/L和0.81±0.04,与对照组的（0.26±0.02）μg/mg、（0.30±0.05）μg/mg、（0.19±0.04）μg/mg（0.61±0.04）μg/mg、2.54±0.22、2.37±0.16、（0.23±0.02）mg/L和0.32±0.03比较差异有统计学意义（均P＜0.05）.转染重组Elafin后再给予CSE刺激,p-JNK、p-ERK、p-c-Jun、IκBα、AP-1、NF-κB、MUC5AC和MUC5AC mRNA含量分别为（0.38±0.04）μg/mg、（0.31±0.04）μg/mg、（0.14±0.03）μg/mg、（0.54±0.03）μg/mg、2.60±0.19、2.55±0.21、（0.28±0.03）mg/L、0.35±0.05,与CSE组相比差异有统计学意义（均P＜0.05）;p-P38蛋白含量在CSE刺激及转染Elafin前后无明显变化.结论 内生多肽Elafin可降低JNK和ERK磷酸化水平并抑制IκBα蛋白降解,从而降低转录激活蛋白-1和核因子-κB的活性,下调黏蛋白5AC的高表达,而p38MAPK在其中的作用并不明显.
Objective To explore the effects of endogeny polypeptide elafin on mucin （MUC）5AC overexpression. Methods Eukaryotic expression vector pEGFP-N1-Elafin was constructed. HBE16 cells were cultured and divided into 6 groups：a control group, a cigarette smoke extract （CSE） stimulated group,a CSE and Elafin transfected group, a CSE and pEGFP-N1 transfected group, a single elafin transfected group, and a single pEGFP-N1 transfected group. After 24 h, the protein levels of phosphorylation Jun Nterminal kinase （p-JNK）, phosphorylation extracellular signal-regulated kinase （p-ERK）, p-P38 and inhibitor of NF-κB （IκB） α were detected by Western blot. The transcription activities of activiator protein-1（AP-1） and nuclear factorκB （NF-κB） were detected by luciferase reporter gene detection system. The levels of MUC5AC protein and mRNA were detected by ELISA and RT-PCR. Results In CSE group, there was a significant increase of MUC5AC protein （0. 71 ±0. 04） mg/L and mRNA expression （0. 81 ±0. 04）,with elevation of p-JNK production （ 0. 55 ± 0. 03 ） μg/mg, p-ERK production （0. 64 ± 0. 06） μg/mg, p-c-Jun production （0. 60 ±0. 07） μg/mg, AP-1 activity （7. 49 ±0. 31 ） and NF-κB activity （4. 42±0. 22）, all significantly higher than those in the control group （ t = 4. 50-14. 28, P 〈 0. 01 ）, and IκBα protein production was （0. 27 ± 0. 03 ） mg/L, significantly lower than that in the control group （ t = 6. 82, P =0. 008）. Transfected recombinant elafin reduced MUC5AC protein （0. 71 ± 0. 04） mg/L and mRNA level （0. 81 ± 0. 04 ）, decreased p-JNK （0. 38 ± 0. 04 ） μg/mg and p-ERK （0. 31 ± 0. 04 ） μg/mg production,inhibited AP-1 activity （2.60 ± 0. 19） and NF-κB activity （2. 55 ± 0. 21 ）, but increased IκBα protein （0. 54 ± 0. 03 ） μg/mg, compared with single CSE-stimulated group （ all P 〈 0. 05 ）. p-P38 showed no significant change after CSE stimulation or transfection of elafin. Conclusion Endogeny polypeptide elafin may down-regulate MUC5AC overexpression, and this is through the inhibition of AP-1 and NF-κB activation via effects on mitogen-activated protein kinases and IκB pathway by Elafin.
出处
《中华结核和呼吸杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期801-805,共5页
Chinese Journal of Tuberculosis and Respiratory Diseases
基金
国家自然科学基金（30770951）
国家自然科学基金中俄国际合作项目（30910303）
中俄政府间合作项目（2009：13-01）
