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柯萨奇病毒A16型VP1-VP4基因克隆及其表达产物的抗原相关性分析 被引量：4
1
作者 宋远斌 何思杰 +4 位作者 余楠 陈欣欣 王斌 车小燕 曾其毅 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1713-1717,共5页
目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1-VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16... 目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1-VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16型病毒免疫兔血清及肠道病毒71型病毒免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA分析其抗原相关性及交叉反应性。结果成功构建的重组质粒pQE30a/VP1-VP4并经IPTG诱导,重组蛋白VP1-VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1-VP4可以被CVA16免疫兔血清特异识别,部分与肠道病毒71型免疫血清存在交叉反应。结论在大肠杆菌M15中高效表达出柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白,经纯化产物具有较强的抗原反应性。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A16型 vp1蛋白 vp2蛋白 vp3蛋白 vp4蛋白 克隆 原核表达 抗原反应性
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大西洋鲑传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的构建及其表达 被引量：1
2
作者 李守湖 秦闯 +1 位作者 李新苍 石建高 《水产科技情报》 2025年第1期26-32,共7页
传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组... 传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组腺病毒载体,利用PCR方法分别扩增出IPNV VP2基因和VP3基因,通过多基因片段同源重组技术将IPNV VP2基因和VP3基因克隆到pAd-Track-CMV载体,经过线性化后与pAd-easy-1载体在BJ5183菌体内进行同源重组,构建出重组腺病毒质粒;通过PCR及NotⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,再经PacⅠ线性化后用于转染293T细胞,获得重组腺病毒;通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达监控重组腺病毒的复制情况,用Western-blotting法分别检测IPNV VP2蛋白和VP3蛋白的表达,并测定重组病毒滴度。结果显示,分别克隆出IPNV VP2和VP3基因,基因总长度为2211 bp,构建出目的基因重组腺病毒载体,该病毒在293T细胞中分别表达出蛋白分子质量约为54 kD和26 kD的产物,滴度为1.0×10^(9)个/mL TCID_(50)。结果表明,已成功获得IPNV VP2基因和VP3基因重组腺病毒,该病毒在293T细胞中滴度较高,能够稳定表达。传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的成功构建可为大西洋鲑传染性胰腺坏死病活载体疫苗的研制提供参考。 展开更多
关键词 大西洋鲑 传染性胰腺坏死病 vp2基因 vp3基因 腺病毒载体
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朝鲜语“VP_1+■+VP_2”结构在汉语中的对应形式 被引量：2
3
作者 南日 《汉语学习》 CSSCI 北大核心 2009年第5期75-79,共5页
朝鲜语的"VP1+■+VP2"结构在汉语中最常见的对应形式有两种,即分别由结构助词"地"和"得"构成的"VP1+地+VP2"结构和"VP1+得+VP2"结构。本文主要讨论朝、汉两种语言这些结构的特点以... 朝鲜语的"VP1+■+VP2"结构在汉语中最常见的对应形式有两种,即分别由结构助词"地"和"得"构成的"VP1+地+VP2"结构和"VP1+得+VP2"结构。本文主要讨论朝、汉两种语言这些结构的特点以及对应规律。本文通过对大量的朝、汉语对译语料的分析,认为朝、汉语的这种对应关系主要取决于语义。 展开更多
关键词 “vp1+ +vp2” “vp1+地+vp2” “vp1+得+vp2” 对应
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携带FPV VP2基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗免疫原性研究
4
作者 陈慧敏 王文婕 +7 位作者 韩新雨 贾钰航 余祖华 贾艳艳 廖成水 丁轲 尚珂 陈松彪 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第7期947-952,共6页
本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2... 本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2特异性Ig G抗体、中和抗体、IL-4和IFN-γ水平的变化。同时口服免疫8周龄健康田园猫,检测疫苗的攻毒保护效果。结果显示,与对照组相比,重组菌免疫后对小鼠体重无明显影响(P>0.05);重组菌免疫小鼠后能够显著诱导血清中针对VP2特异性抗体和中和抗体水平(P<0.05);IL-4和IFN-γ细胞因子水平显著升高(P<0.05),且在免疫后第28天达到峰值;重组菌免疫猫后对FPV感染具有一定程度的免疫保护效果,可明显降低实验猫致死率并且延缓发病时间和发病程度。以上结果表明,构建的FPV VP2重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗能够有效刺激机体产生免疫应答且具有较好的免疫保护效力,为进一步研发FPV新型疫苗奠定了良好基础。 展开更多
关键词 泛猫白细胞减少综合症病毒 vp2 SL1344ΔcrpΔasd 口服疫苗 免疫原性
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犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
5
作者 龚婷 马辉 郑鸣 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第7期81-84,118,共5页
为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000... 为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000、1∶2048000,染色体数目分别为106、105、103,重链分别为IgG1、IgG2b和IgG1,轻链均为κ链,均能与VP2蛋白和CPV感染的F81细胞发生特异性反应,均与4种常见病毒不发生交叉反应。该研究获得了3株抗体效价高、特异性强、免疫学活性好的VP2蛋白单克隆抗体,可为CPV基础性研究和免疫学诊断试剂盒开发奠定基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 vp2蛋白 单克隆抗体 制备与鉴定
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“S别VP呢罢”的形成及同义糅合句式的兴替
6
作者 叶建军 《古汉语研究》 北大核心 2025年第3期64-78,127,128,共17页
清代中叶始见的特殊测度句式“S别VP呢罢”的生成机制是糅合,而糅合的动因是言者对事件“SVP”的真实性存在矛盾心理。糅合句式“S别VP呢罢”后来消亡了,但是在清代中叶以后出现了若干与之同义的糅合句式,并在历史发展过程中发生了兴替... 清代中叶始见的特殊测度句式“S别VP呢罢”的生成机制是糅合,而糅合的动因是言者对事件“SVP”的真实性存在矛盾心理。糅合句式“S别VP呢罢”后来消亡了,但是在清代中叶以后出现了若干与之同义的糅合句式,并在历史发展过程中发生了兴替。陈述句式或感叹句式与测度句式发生糅合是汉语中一种常见的句式糅合模式。 展开更多
关键词 测度句式 “S别vp呢罢” 句式糅合 同义糅合句式
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Vps16通过调控心肌细胞自噬流减轻心肌I/R损伤的机制研究
7
作者 李媛彬 欧阳翌国 +3 位作者 陈歆 邱爱珠 张海琴 陈壮 《医师在线》 2025年第11期3-8,共6页
目的 探讨液泡分选蛋白16(Vps16)在心肌缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用及其机制。方法 分别构建大鼠心肌I/R模型[分组:对照空载体(AdVector)+假手术(Sham)组、Vps16过表达腺病毒载体(AdVps16)+Sham组、AdVector+I/R组、AdVps16+I/R组]和H... 目的 探讨液泡分选蛋白16(Vps16)在心肌缺血/再灌注(I/R)损伤中的作用及其机制。方法 分别构建大鼠心肌I/R模型[分组:对照空载体(AdVector)+假手术(Sham)组、Vps16过表达腺病毒载体(AdVps16)+Sham组、AdVector+I/R组、AdVps16+I/R组]和H9c2细胞低氧/复氧(H/R)模型(分组:siCtrl+AdVector组、siCtrl+AdVps16组、siUVRAG+AdVector组、siUVRAG+AdVps16组)。采用免疫印迹试验(Western blot)检测心肌I/R后Vps相关蛋白的表达;通过心内注射腺病毒Vps16过表达载体(AdVps16)干预,超声心动图评估心功能,生化法检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织形态学变化;在H9c2细胞中进一步检测Vps16-紫外线抗性相关基因(UVRAG)-RAS相关蛋白7(Rab7)信号轴对自噬流的影响;细胞免疫荧光技术观察自噬小体与Rab7的定位情况;并利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验评估细胞损伤情况。结果 与Sham组大鼠比较,I/R组大鼠心肌组织中UVRAG、Rab7、Vps16和Vps33b蛋白表达水平显著降低,Vps26蛋白表达水平升高(P <0.01);与AdVector+I/R组比较,AdVps16+I/R组在再灌注24 h后的左室收缩末期内径(LVIDs)减少,左室短轴缩短率(LVFS)和左室射血分数(LVEF)增加,CK-MB水平降低(P <0.05),心肌组织病理损伤减轻;进一步研究发现,在H9c2细胞中,Vps16过表达联合UVRAG或Rab7可显著提高微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ比值并降低p62表达,促进自噬体与Rab7共定位,增强自噬流;而敲低UVRAG则部分抑制Vps16介导的自噬体成熟及细胞保护作用,表现为LDH释放水平增加。结论 Vps16通过调控UVRAG/Rab7信号轴促进心肌细胞自噬流,从而减轻心肌I/R损伤。 展开更多
关键词 vps16 UVRAG Rab7 缺血/再灌注 自噬流
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历时构式语法视角下的图式性构式“且VP吧”研究
8
作者 朱献珑 王雪乔 《外语教学》 北大核心 2025年第5期14-20,共7页
“且VP吧”是北方方言中司空见惯的表达形式,但迄今尚未见到针对该构式的系统性研究。本研究以历时构式语法为理论框架,基于BCC语料库历时语料,探讨图式性构式“且VP吧”建构特征,并考察该构式演变历程和演变动因。研究发现:在形式方面... “且VP吧”是北方方言中司空见惯的表达形式,但迄今尚未见到针对该构式的系统性研究。本研究以历时构式语法为理论框架,基于BCC语料库历时语料,探讨图式性构式“且VP吧”建构特征,并考察该构式演变历程和演变动因。研究发现:在形式方面,准入该构式的构件为时间副词“且”、语气助词“吧”及表长时义的延续性VP;在意义方面,该构式在实际应用过程中发生变异性扩展,新生出强烈的现场协同移情语义。该构式的变异性扩展历经变异萌芽期、扩展形成期与语义稳定期三个阶段。在此过程中,形式_旧—意义_新配对逐渐占据优势并最终主导构式的使用。扩展的主要动因源于认知经济性、言语信据性及高频率使用等。 展开更多
关键词 “且vp吧”构式 历时构式语法 变异性扩展
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长链非编码RNA VPS9D1-AS1调控miR-532-3p/WEE1轴对卵巢癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响
9
作者 刘宏伟 王雅红 +2 位作者 周齐 闫亚男 王颖欣 《中国优生与遗传杂志》 2025年第5期1025-1032,共8页
目的探究长链非编码RNA VPS9D1反义RNA1(lncRNA VPS9D1-AS1)靶向调控微小RNA-532-3p/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(miR-532-3p/WEE1)信号轴对卵巢癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法将SKOV3细胞分为Control组、si-NC组、si-VPS... 目的探究长链非编码RNA VPS9D1反义RNA1(lncRNA VPS9D1-AS1)靶向调控微小RNA-532-3p/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(miR-532-3p/WEE1)信号轴对卵巢癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法将SKOV3细胞分为Control组、si-NC组、si-VPS9D1-AS1组、si-VPS9D1-AS1+anti-NC组、si-VPS9D1-AS1+anti-miR-532-3p组;以qRT-PCR法检测组织与细胞中lncRNA VPS9D1-AS1、miR-532-3p水平;以双荧光素酶实验检测lncRNA VPS9D1-AS1、WEE1分别与miR-532-3p靶向关系;以Edu、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;以Western blot法检测细胞增殖、凋亡、EMT相关蛋白及WEE1表达情况;以裸鼠移植瘤验证lncRNA VPS9D1-AS1对卵巢癌移植瘤生长及miR-532-3p/WEE1轴的影响。结果在卵巢癌组织及SKOV3细胞中lncRNA VPS9D1-AS1高表达,miR-532-3p低表达。lncRNA VPS9D1-AS1、WEE1与miR-532-3p之间存在靶向结合位点。si-VPS9D1-AS1组较si-NC组Edu阳性率和lncRNA VPS9D1-AS1水平及WEE1、Ki67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin表达降低,细胞凋亡率和miR-532-3p水平及p21、Bax、E-cadherin表达升高(P<0.05);以沉默miR-532-3p可部分逆转沉默VPS9D1-AS1对SKOV3细胞恶性表型的改善作用;裸鼠移植瘤实验显示,si-VPS9D1-AS1组较si-NC组裸鼠移植瘤生长缓慢,lncRNA VPS9D1-AS1水平及WEE1表达降低,miR-532-3p水平升高(P<0.05)。结论lncRNA VPS9D1-AS1可通过调控miR-532-3p/WEE1轴参与卵巢癌细胞增殖、凋亡、EMT过程。 展开更多
关键词 长链非编码RNA vpS9D1反义RNA1 微小RNA-532-3p 蛋白激酶WEE1 卵巢癌 上皮间质转化
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“看VP”句式的否定羡余现象
10
作者 史金生 郑淑清 《辞书研究》 2025年第5期1-12,125,共13页
文章讨论了“看VP”句式不同语用推论意义下两类否定羡余句式的发展路径和形成机制。“提醒、警告、威胁”用法的“看VP”句式经过脱落、否定弱化等手段形成强语气表达“看不VP”和“看不把NPVP”结构;“提醒、警告、担心”用法的“看V... 文章讨论了“看VP”句式不同语用推论意义下两类否定羡余句式的发展路径和形成机制。“提醒、警告、威胁”用法的“看VP”句式经过脱落、否定弱化等手段形成强语气表达“看不VP”和“看不把NPVP”结构;“提醒、警告、担心”用法的“看VP”句式经过否定溢出和否定移位形成委婉表达“不看VP”。经过句式内部和外部的共存与竞争后,“看VP”句式的“威胁”用法持续活跃发展,“担心”用法萎缩、衰退。对“看不VP”和北京话“不看VP”的讨论,为羡余否定研究增添了新的类型和视角。 展开更多
关键词 看vp 羡余 否定弱化 否定溢出
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转运必需内体分选复合物螺旋纤丝Vps24⁃Vps2的冷冻电镜结构研究
11
作者 刘德生 李耀旺 孙珊 《电子显微学报》 北大核心 2025年第1期28-35,共8页
转运必需内体分选复合物-Ⅲ(endosomal sorting complex required for transport-Ⅲ,ESCRT-Ⅲ)介导了一系列细胞膜重塑事件,包括多囊体的形成、细胞分裂和病毒释放等。这些过程的关键步骤之一是将ESCRT-Ⅲ蛋白亚基组装成纤丝状结构。在... 转运必需内体分选复合物-Ⅲ(endosomal sorting complex required for transport-Ⅲ,ESCRT-Ⅲ)介导了一系列细胞膜重塑事件,包括多囊体的形成、细胞分裂和病毒释放等。这些过程的关键步骤之一是将ESCRT-Ⅲ蛋白亚基组装成纤丝状结构。在本研究中,作者利用冷冻电镜技术解析了由Vps24和Vps2融合蛋白(Vps24-Vps2)形成的双链螺旋纤丝的结构,分辨率为4.07A。在该结构中,呈伸展构象的Vps24-Vps2单体首先形成反向结合的二聚体,二聚体之间再错位结合形成一股螺旋,两股螺旋互相缠绕最终形成纤丝。该结构为理解ESCRT-Ⅲ丝状结构组装以及解聚过程提供了结构基础。 展开更多
关键词 转运必需内体分选复合物 ESCRT vps24 vps2 冷冻电镜结构
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MPLS VPN安全问题探讨 被引量：1
12
作者 吴英桦 《现代电信科技》 2005年第8期14-19,共6页
首先指出MPLSVPN可能受到的安全威胁,然后分析了三层VPN、二层VPN在数据面、控制面和管理面上传送信息的安全性,提出目前在网络上可以采用的安全措施。
关键词 MPLS vpN 二层vp 三层vpN 安全 二层vpN 安全问题 安全威胁 安全措施 安全性
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猪轮状病毒VP6蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：4
13
作者 潘向英 曾智勇 +7 位作者 梁海英 汤德元 王彬 叶泥 田红利 边孟婷 柳佳佳 黄书 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1231-1240,共10页
【目的】通过构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6截短蛋白(第177—382位氨基酸)的原核表达系统,建立检测PoRV抗体的间接ELISA方法,为PoRV血清学监测提供检测手段。【方法】设计1对针对截短VP 6基因的特异性引物,以pMD19-T-VP6... 【目的】通过构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6截短蛋白(第177—382位氨基酸)的原核表达系统,建立检测PoRV抗体的间接ELISA方法,为PoRV血清学监测提供检测手段。【方法】设计1对针对截短VP 6基因的特异性引物,以pMD19-T-VP6重组质粒为模板扩增VP 6截短基因。利用pET-32a(+)原核表达载体构建pET32a-PoRV-VP6重组质粒。以大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞为宿主菌,对重组质粒进行诱导表达,并优化表达条件。利用His标签镍柱对pET32a-PoRV-VP6重组蛋白进行纯化,以此作为包被抗原,通过单一变量法优化抗原包被浓度、血清稀释度、二抗稀释度及一抗、二抗孵育时间等工作条件。确定间接ELISA方法的阴阳性临界值,检验其特异性、敏感性、重复性及符合性,并对2021—2024年采自贵州地区不同猪场的384份临床猪血清进行检测。【结果】试验成功构建pET32a-PoRV-VP6重组表达载体,实现VP6蛋白的原核截短表达,蛋白分子质量大小约40 ku,具有良好的反应原性。对间接ELISA方法条件进行优化,确定VP6包被抗原最佳浓度为2μg/mL、阳性血清稀释度为1∶100、血清样品和二抗孵育时间均为60 min、TMB反应时间为10 min、阴阳性临界值(D 450 nm)为0.410。建立的间接ELISA方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒标准阳性血清不发生反应,特异性强;批内和批间重复试验变异系数均<10%,重复性好;与PoRV A型ELISA抗体检测试剂盒的总体符合率为96.80%。间接ELISA方法检测临床384份猪血清样品结果显示,样品总阳性率为28.91%。【结论】本研究成功实现了PoRV VP6蛋白的截短表达,并建立了PoRV间接ELISA抗体检测方法,适用于临床PoRV抗体检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(PoRV) vp6蛋白 截短表达 间接ELISA
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共表达IBDV VP2蛋白和AIV HA蛋白的重组NDV的构建 被引量：2
14
作者 王晓晓 司凯新 +7 位作者 尚珂 陈松彪 余祖华 丁轲 陈建 李日顺 郁川 何雷 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第6期748-756,共9页
为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒(nVarIBDV)VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的耐热型重组NDV,将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中;然后,重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞,拯... 为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒(nVarIBDV)VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的耐热型重组NDV,将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中;然后,重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞,拯救出共表达VP2蛋白和HA蛋白的重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA和r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2并鉴定。RT-PCR鉴定表明目的基因成功插入至重组NDV的P、M基因之间;IFA检测结果表明,重组病毒r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2感染细胞可稳定表达VP2蛋白和HA蛋白,而重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA感染细胞后仅检测到VP2蛋白表达。生物学特性检测表明2株重组病毒均具有亲本毒株的高增殖效价、低毒力和良好耐热性特点。综上所述,本研究成功地构建了共表达nVarIBDV VP2蛋白和H9N2 AIV HA蛋白的重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA和r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2,为n VarIBDV、H9N2 AIV及基因Ⅶ型NDV的综合防控提供了一种新的策略。 展开更多
关键词 新城疫病毒 传染性法氏囊病毒 vp2蛋白 禽流感病毒 HA蛋白
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人A组轮状病毒VP6蛋白的原核表达及其小鼠多克隆抗体的制备 被引量：1
15
作者 张卫斌 吕长坤 +2 位作者 杨颖 王向鹏 王明永 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第9期910-916,共7页
目的表达和纯化人A组轮状病毒VP6蛋白,制备小鼠抗VP6蛋白多克隆抗体。方法通过RT-PCR方法从人A组轮状病毒感染的粪便标本中扩增VP6基因,构建pET-32a-VP6原核表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞;用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖... 目的表达和纯化人A组轮状病毒VP6蛋白,制备小鼠抗VP6蛋白多克隆抗体。方法通过RT-PCR方法从人A组轮状病毒感染的粪便标本中扩增VP6基因,构建pET-32a-VP6原核表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞;用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导VP6表达,采用镍柱(Ni-NTA)亲和层析纯化VP6蛋白,用SDS-PAGE和Western blotting鉴定VP6蛋白;将VP6蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体滴度。结果构建了pET32a-VP6重组表达质粒,VP6蛋白主要以包涵体形式表达。经亲和层析法纯化了VP6蛋白,免疫小鼠后获得了多克隆抗体,抗体效价为1∶32000,抗体可以和VP6蛋白发生特异性反应。结论表达和纯化了人A组轮状病毒的VP6蛋白,制备了小鼠抗VP6蛋白的多克隆抗体,为人A组轮状病毒诊断抗原的制备和血清学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 人A组轮状病毒 vp6蛋白 原核表达 多克隆抗体
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“有没有VP”和“VP与否”结构的语体鉴定及体原子分析
16
作者 李博迪 《今古文创》 2025年第15期119-121,共3页
本文根据语体语法理论对现代汉语中的“有没有VP”结构和“VP与否”结构进行语体鉴定,通过交际时空以及语法时空中VP能否重叠、结构能否用于传统新闻标题为鉴定标准,得出“有没有VP”具有口语体属性“,VP与否”具有正式体属性。经过体... 本文根据语体语法理论对现代汉语中的“有没有VP”结构和“VP与否”结构进行语体鉴定,通过交际时空以及语法时空中VP能否重叠、结构能否用于传统新闻标题为鉴定标准,得出“有没有VP”具有口语体属性“,VP与否”具有正式体属性。经过体原子的深入分析发现:“有没有VP”的非正式体属性是短弱律作用的结果,“VP与否”结构的正式体属性是古今律和平衡律作用的结果。 展开更多
关键词 有没有vp vp与否 语体属性 体原子
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脑心肌炎病毒VP22A基因真核表达载体的构建 被引量：1
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作者 邵帅 纪晓岚 +1 位作者 刘明启 李琼毅 《中国动物保健》 2025年第1期240-241,共2页
为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至... 为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性单克隆菌落,对阳性单克隆提取重组质粒并双酶切进行验证,对阳性重组质粒进行测序。重组质粒双酶切和测序结果表明,pc DNA3.1-Flag-VP2和pc DNA3.1-Flag-2A真核表达载体构建成功。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 vp2基因 2A基因 真核表达载体
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猪细小病毒2型VP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
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作者 帅文娜 李佳乐 +8 位作者 郭子强 罗梦 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 童光志 李兆龙 高飞 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第8期78-84,共7页
旨在制备猪细小病毒(PPV)VP2的多克隆抗体,并进行其检测能力验证。将PPV VP2克隆至原核表达载体pCold-TF,由1 mmol/L IPTG诱导得到VP2蛋白;纯化后VP2蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(I... 旨在制备猪细小病毒(PPV)VP2的多克隆抗体,并进行其检测能力验证。将PPV VP2克隆至原核表达载体pCold-TF,由1 mmol/L IPTG诱导得到VP2蛋白;纯化后VP2蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证其反应性。ELISA检测结果显示,多克隆抗体效价达1∶128000;Western blot和IFA分析表明,其能特异性识别和结合PPV,说明重组VP2蛋白具有较好的免疫原性和反应原性。本研究为VP2血清学检测方法的建立及其蛋白的功能研究提供了材料。 展开更多
关键词 猪细小病毒 vp2蛋白 多克隆抗体 原核表达
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猪萨佩罗病毒VP4蛋白多克隆抗体制备及功能验证
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作者 钟祖昌 李本强 +6 位作者 陶洁 程靖华 石迎 刘佩红 唐攀 焦嘉杰 刘惠莉 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第4期78-84,共7页
为深入揭示猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)致病机制,以毒株SHCM2019为研究对象,原核表达VP_(4)蛋白并制备多克隆抗体。根据VP_(4)氨基酸序列进行PSV遗传进化分析,然后将VP_(4)基因与原核表达载体连接,经诱导表达得到可溶性VP_(4... 为深入揭示猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)致病机制,以毒株SHCM2019为研究对象,原核表达VP_(4)蛋白并制备多克隆抗体。根据VP_(4)氨基酸序列进行PSV遗传进化分析,然后将VP_(4)基因与原核表达载体连接,经诱导表达得到可溶性VP_(4)蛋白。纯化后的VP_(4)蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证其反应性。ELISA结果显示,多克隆抗体效价达1∶128000;Western blot和IFA结果表明,其能特异性识别和结合PSV,说明重组VP_(4)蛋白具有较好的免疫原性和反应原性。本研究成功表达了VP_(4)蛋白并制备了多克隆抗体,为VP_(4)蛋白功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪萨佩罗病毒 vp4蛋白 原核表达 多克隆抗体
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