花生DNA的五种改良CTAB提取方法的比较分析及其应用 被引量：13

1

作者 熊发前 刘俊仙 +8 位作者 刘菁 贺梁琼 蒋菁 唐秀梅 黄志鹏 吴海宁 钟瑞春 韩柱强 唐荣华 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期2207-2216,共10页

花生是世界上重要的油料作物和经济作物之一,也是最重要的植物食用油来源之一,但花生分子标记和功能基因组学等分子生物学研究较落后。因此,本研究旨在建立适合自身的花生基因组DNA的提取方法,为开展花生分子标记研究和分子生物学研究... 花生是世界上重要的油料作物和经济作物之一,也是最重要的植物食用油来源之一,但花生分子标记和功能基因组学等分子生物学研究较落后。因此,本研究旨在建立适合自身的花生基因组DNA的提取方法,为开展花生分子标记研究和分子生物学研究提供帮助。本研究使用了5种改良CTAB法提取花生基因组DNA,所得DNA的纯度和浓度分别通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测,再利用8种分子标记技术的48条单引物和4对转座子保守区扩增引物对提取获得的花生基因组DNA的质量进行扩增验证和应用。结果表明:(1)综合花生基因组DNA的质量检测数据以及花生分子标记技术和转座子保守区的扩增验证结果来看,五种改良CTAB法的DNA提取效果表现依次为:方法一>方法五>方法四>方法三>方法二,其中方法一为最佳首选,方法五和方法四的提取效果也好,但是由于其有利用到强腐蚀性的平衡酚,不安全且不环保,所以不推荐;(2)在花生上建立了8种分子标记技术和4类转座子保守区的扩增体系;(3)克隆获得了花生4类转座子保守区序列。本研究为今后开展花生分子标记研究及转座子的克隆鉴定利用提供了帮助。 展开更多

关键词 花生 dna 分子标记技术 转座子 单引物扩增反应

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花生DNA提取方法比较 被引量：18

2

作者 梁雪莲 郑奕雄 +1 位作者 陈晓玲 曾锦姬 《生物技术》 CAS CSCD 2007年第1期41-44,共4页

目的:旨在筛选优化花生DNA提取方法。方法:采用SDS法、改进SDS法;CTAB法、改进CTAB法四种方法对花生叶DNA进行提取,并从电泳结果、纯度、得率、等方面对其进行比较研究,从而确定花生DNA提取适用流程;结果:CTAB法DNA平均得率为55.0μg/g.... 目的:旨在筛选优化花生DNA提取方法。方法:采用SDS法、改进SDS法;CTAB法、改进CTAB法四种方法对花生叶DNA进行提取,并从电泳结果、纯度、得率、等方面对其进行比较研究,从而确定花生DNA提取适用流程;结果:CTAB法DNA平均得率为55.0μg/g.Fw,略小于SDS的60.3,但其A260/A280平均值为1.81,比SDS的1.55更接近标准要求。结论:综合考虑CTAB法是提取花生DNA的最佳方法,可提取到较高质量的DNA,符合分子检测要求;虽然改良CTAB法也相对好于SDS法,但由于步骤增加反而加剧DNA降解。 展开更多

关键词 花生 叶片dna SDS法 改进SDS法 CTAB法 改进CTAB法

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花生不同部位对提取DNA的影响 被引量：12

3

作者 李庆云 庄东红 +1 位作者 胡忠 黄秀丽 《花生学报》 2003年第2期16-20,共5页

采用CTAB法和SDS法,分别从花生的根尖、下胚轴、种子、幼叶中提取基因组DNA,所提DNA片段长度都在21kb以上;同种方法中部位之间的DNA纯度没有差异,产率差异极其显著,从种子、根尖、下胚轴到幼叶产率依次升高,CTAB法中产率从128.5～498.5n... 采用CTAB法和SDS法,分别从花生的根尖、下胚轴、种子、幼叶中提取基因组DNA,所提DNA片段长度都在21kb以上;同种方法中部位之间的DNA纯度没有差异,产率差异极其显著,从种子、根尖、下胚轴到幼叶产率依次升高,CTAB法中产率从128.5～498.5ng/mg,SDS法中产率从225.0～542.6ng/mg;两种方法中,相同部位之间只有叶片在纯度上差异显著,产率上相同部位之间的差异极其显著。用CTAB法从叶片中提取DNA,采用RAPD方法,对19个花生品种的基因组进行扩增,结果显示所提DNA满足分子分析的要求。RAPD可用于亲本和品种的鉴定。 展开更多

关键词 花生 提取 dna 根尖 下胚轴 种子 幼叶

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花生DNA导入大豆后代几种生化性状的变异分析 被引量：2

4

作者 王丕武 张晓玲 +3 位作者 张军 刘宗昭 许守民 苗以农 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期1-6,共6页

分析了花生总ＤＮＡ导入大豆后，后代几种生化性状的变异表现。结果表明，变异后代种子的蛋白质含量明显提高，表现出超亲现象；脂肪含量有一定程度下降，低于双亲；氨基酸的组成也发生了变化，其总量高于双亲。变异后代过氧化物酶活力... 分析了花生总ＤＮＡ导入大豆后，后代几种生化性状的变异表现。结果表明，变异后代种子的蛋白质含量明显提高，表现出超亲现象；脂肪含量有一定程度下降，低于双亲；氨基酸的组成也发生了变化，其总量高于双亲。变异后代过氧化物酶活力显著高于双亲，淀粉酶和超氧物歧化酶活力介于双亲之间。同工酶分析结果表明，变异后代的过氧化物酶、淀粉酶和超氧物歧化酶酶谱与亲本之间均有差异，且表现出与双亲明显不同的特征来，有的酶带明显源于供体亲本。 展开更多

关键词 花生dna 蛋白质 氨基酸 同功酶 大豆

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花生总DNA的快速提取与纯化研究 被引量：7

5

作者 熊劲芳 向育君 张正奇 《生物学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期32-34,共3页

优化了花生总DNA的提取条件。用 3 .50ml细胞提取液 ,2 .50ml饱和KC1溶液 ,0 .2 5倍样液体积的酚 /氯仿 /异戊醇 (2 1∶2 8∶1 )溶液 ,0 .30倍样液体积的氯仿 /异戊醇溶液 ,0 .60倍体积的异丙醇 ,可从 1 0g花生芽中提得 4 .0mg纯DNA。... 优化了花生总DNA的提取条件。用 3 .50ml细胞提取液 ,2 .50ml饱和KC1溶液 ,0 .2 5倍样液体积的酚 /氯仿 /异戊醇 (2 1∶2 8∶1 )溶液 ,0 .30倍样液体积的氯仿 /异戊醇溶液 ,0 .60倍体积的异丙醇 ,可从 1 0g花生芽中提得 4 .0mg纯DNA。用该法提取总DNA的产率高 ,时间短 。 展开更多

关键词 总dna 花生 快速提取 纯化

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CTAB法少量快速提取花生基因组DNA 被引量：13

6

作者 周浩 闫彩霞 +2 位作者 郭凌超 刘宇 单世华 《山东农业科学》 2012年第7期8-9,15,共3页

比较了两种改进的基因组DNA提取方法,并应用于SSR扩增分析。结果表明,CTAB法是一种快捷有效的提取基因组DNA的方法,能完全满足SSR分子标记的分析要求。

关键词 花生 基因组dna CTAB SSR

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农杆菌介导花生的遗传转化研究Ⅱ.花生基因组DNA提取方法的改良与鉴定 被引量：4

7

作者 单世华 张海平 +1 位作者 李春娟 庄伟建 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2003年第3期273-275,共3页

针对花生基因组DNA常规提取方法的不足,对提取程序进行改良.改良后的方法具有简便、快速、安全、得率高等特点,对所鉴定植株生长影响相对较小,所提取DNA可直接用于PCR、限制性酶切等分子生物学试验.

关键词 花生 农杆菌介导 遗传转化 基因组dna 提取方法 改良 鉴定

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化学发光法对花生多肽的体外抗氧化活性和对DNA损伤的保护作用的研究 被引量：6

8

作者 刘丽娜 何东平 +2 位作者 张声华 王文亮 杜方岭 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第4期69-73,共5页

采用多个化学发光体系系统地研究了花生多肽的体外抗氧化活性及其对DNA损伤的保护作用。运用邻苯三酚-鲁米诺化学发光体系测定了花生多肽对超氧阴离子的清除作用,硫酸铜-邻菲哕啉-抗坏血酸-双氧水、硫酸亚铁-鲁米诺-双氧水和硫酸亚铁-... 采用多个化学发光体系系统地研究了花生多肽的体外抗氧化活性及其对DNA损伤的保护作用。运用邻苯三酚-鲁米诺化学发光体系测定了花生多肽对超氧阴离子的清除作用,硫酸铜-邻菲哕啉-抗坏血酸-双氧水、硫酸亚铁-鲁米诺-双氧水和硫酸亚铁-鲁米诺3个体系测定了花生多肽对羟基自由基的清除作用,双氧水-鲁米诺体系测定了花生多肽对体外双氧水的清除作用,采用硫酸铜-邻菲哆啉-抗坏血酸-双氧水-脱氧核糖核酸测定了花生多肽对体外DNA损伤的保护作用。试验结果表明花生多肽具有较好的体外清除活性氧和保护DNA损伤的活性。花生多肽可作为开发抗氧化产品的新资源。 展开更多

关键词 花生多肽 化学发光法 抗氧化活性 dna损伤

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花生DNA导入栽培大豆的研究初报 被引量：3

9

作者 王丕武 王蕴波 +3 位作者 宋惠 张晓玲 邬信康 许守民 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 1992年第3期1-3,共3页

利用外源DNA导入技术,将花生DNA导入栽培大豆受体中,并引起了受体的叶片大小、花色、茸毛色、结荚习性、粒形、种皮色、脐色、株高、成熟期、主茎节数和产量性状的广泛变异。超氧物歧化酶(SOD)同工酶鉴定结果表明,在D_2变异株中存在着... 利用外源DNA导入技术,将花生DNA导入栽培大豆受体中,并引起了受体的叶片大小、花色、茸毛色、结荚习性、粒形、种皮色、脐色、株高、成熟期、主茎节数和产量性状的广泛变异。超氧物歧化酶(SOD)同工酶鉴定结果表明,在D_2变异株中存在着供体的谱带。 展开更多

关键词 花生 大豆 变异 dna导入

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一种快速高效提取花生叶片DNA的简化方法 被引量：1

10

作者 刘宇 李春娟 +6 位作者 闫彩霞 赵小波 孔青 孙全喜 苑翠玲 王娟 单世华 《花生学报》 北大核心 2019年第1期58-61,共4页

为获得适用于高通量测序的高质量花生叶片DNA,本方法取第三对真叶为实验材料,设计烧制圆球状枪头和离心管装置代替研钵研磨,并在CTAB法的基础上在杂质沉淀前快速分离DNA等简化方法提取DNA。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明DNA条带清晰、完... 为获得适用于高通量测序的高质量花生叶片DNA,本方法取第三对真叶为实验材料,设计烧制圆球状枪头和离心管装置代替研钵研磨,并在CTAB法的基础上在杂质沉淀前快速分离DNA等简化方法提取DNA。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明DNA条带清晰、完整性高。经超微量分光光度计检测,DNA浓度范围在104～131ng/μL,OD_(260)/OD_(280)为1.7～2.0,OD_(260)/OD_(230)大于2.0,说明杂质少,可获得高纯度,高浓度的DNA。此方法与常用的植物基因组DNA提取方法相比,具有成本低、时间短、质量高的优点,可用于基因组重测序、分子生物学技术以及分子标记筛选等后续研究,可提高花生分子育种与筛选工作效率。 展开更多

关键词 花生 dna提取 简化方法

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一种优化的提取花生根尖细胞DNA的方法 被引量：8

11

作者 詹洁 余永昌 +1 位作者 何龙飞 伍荣冬 《花生学报》 2006年第3期10-13,共4页

采用传统的CTAB法和SDS法提取花生根尖细胞的DNA,SDS法提取效果优于CTAB法,但仍不能满足实验要求。对传统的SDS法进行简化和优化,建立了改良SDS法,利用改良SDS法提取花生根尖DNA,效果较好,能够满足分子生物学研究需要。

关键词 dna提取 花生 根尖 改良SDS法

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花生种质资源的遗传变异与DNA分子多态性 被引量：4

12

作者 唐荣华 高国庆 +3 位作者 韩柱强 张君诚 钟瑞春 庄伟建 《花生学报》 2003年第B11期277-284,共8页

早期研究结果表明在栽培花生种质资源中用分子标记技术只检测出很少的多态性,让人产生花生缺乏遗传变异的结论,但显然与花生的起源和进化研究结果相矛盾。另外通过对国内外花生种质资源的综合鉴定,几乎所有的性状都存在丰富的变异。本... 早期研究结果表明在栽培花生种质资源中用分子标记技术只检测出很少的多态性,让人产生花生缺乏遗传变异的结论,但显然与花生的起源和进化研究结果相矛盾。另外通过对国内外花生种质资源的综合鉴定,几乎所有的性状都存在丰富的变异。本文综述了花生种质资源的遗传变异和产生的途径,以及花生DNA分子多态性的研究进展,认为花生栽培种在遗传性状和DNA分子水平上都存在丰富的变异。 展开更多

关键词 花生 种质资源 遗传变异 dna分子多态性 分子标记

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花生种子萌发早期胚轴细胞DNA合成的特点 被引量：6

13

作者 周晓强 傅家瑞 《植物生理学报（0257-4829)》 CSCD 1993年第1期77-81,共5页

花生种子吸胀6h后胚轴DNA中有~3H-胸苷掺入。咖啡因和羟基脲均对6～12h的~3H—胸苷掺入具强烈的抑制作用;当12～24h时,咖啡因的抑制作用较大;但30h以后,羟基脲的抑制作用超过咖啡因。双链DNA放射性从种子吸胀9h后迅速上升,单链DNA放射... 花生种子吸胀6h后胚轴DNA中有~3H-胸苷掺入。咖啡因和羟基脲均对6～12h的~3H—胸苷掺入具强烈的抑制作用;当12～24h时,咖啡因的抑制作用较大;但30h以后,羟基脲的抑制作用超过咖啡因。双链DNA放射性从种子吸胀9h后迅速上升,单链DNA放射性在吸胀12h后出现一个明显的峰。但在吸胀12h后,单链DNA形成和存在的时间是短暂的。 展开更多

关键词 花生 胚轴 dna 合成 萌发

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常用DNA标记的评述及在花生上的应用 被引量：7

14

作者 刘峰 石运庆 +3 位作者 闫彩霞 李春娟 毕玉平 单世华 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第1期201-206,共6页

简要介绍了5种传统的、最常用的DNA分子标记(RFLP、RAPD、AFLP、SSR和SNP)的技术原理及它们的优缺点,也总结了TRAP这种新产生的分子标记的技术原理、优点及应用前景。综述了这几类分子标记在花生种质进化、遗传多样性分析、分子图谱构... 简要介绍了5种传统的、最常用的DNA分子标记(RFLP、RAPD、AFLP、SSR和SNP)的技术原理及它们的优缺点,也总结了TRAP这种新产生的分子标记的技术原理、优点及应用前景。综述了这几类分子标记在花生种质进化、遗传多样性分析、分子图谱构建及抗虫、抗病等方面的研究。利用SSR和RAPD标记能够发现野生种和栽培种多态性进而实现分子标记对花生的遗传多样性分析,可以将许多花生品种分为不同的品种群,能够对花生进行种质进化研究。RFLP和AFLP技术利于花生图谱构建,利用DNA中特定的限制性酶切位点上碱基对的改变及酶切位点之间的分子重排,可以发现花生品种间的DNA许多多态性位点,进而绘制分子标记图谱。AFLP技术在花生青枯菌和花生抗黄曲霉的研究方面有很大进展。RAPD技术在花生根瘤菌、花生线虫病等方面已有显著进展。最后对分子标记在花生育种中的应用前景进行了简单展望。 展开更多

关键词 花生 分子标记 辅助育种

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外源DNA导入花生引发变异的几点分析 被引量：3

15

作者 刘思衡 庄伟建 《花生学报》 2002年第2期27-29,40,共4页

概述了外源DNA导入花生引发变异的主要方法、性状遗传及选择效果 。

关键词 花生 外源dna 遗传 育种

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青枯菌诱导下花生基因组DNA表观遗传变化的MSAP分析 被引量：1

16

作者 徐志军 黄莉 姜慧芳 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期93-99,共7页

以高感青枯病品种中花12号和高抗青枯病品种远杂9102为材料,调查青枯菌接种12 h后花生基因组DNA的甲基化水平和变化模式。甲基化敏感扩增多态性(Methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP)分析表明,正常生长的中花12号和... 以高感青枯病品种中花12号和高抗青枯病品种远杂9102为材料,调查青枯菌接种12 h后花生基因组DNA的甲基化水平和变化模式。甲基化敏感扩增多态性(Methylation-sensitive amplification polymorphism,MSAP)分析表明,正常生长的中花12号和远杂9102的基因组DNA甲基化比率均为35.1%,经青枯菌接种12 h后,中花12号降低到31.3%,而远杂9102的基因组DNA甲基化比率则升高至37.2%。与对照相比,青枯菌接种12 h胁迫下中花12号和远杂9102基因组DNA的甲基化和去甲基化分别为5.9%,12.4%,18.3%,11.9%。由此推测,高抗青枯菌的花生经青枯菌侵染后基因组DNA某些位点的甲基化状态发生变化而使基因表达发生了改变,产生或启动对青枯菌胁迫的能动应激机制。 展开更多

关键词 花生 青枯菌 dna甲基化 甲基化敏感扩增多态性

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国槐DNA导入花生D_5代性状遗传变异的分析 被引量：3

17

作者 刘风珍 万勇善 +1 位作者 于元杰 沈法富 《西北植物学报》 CAS CSCD 2003年第2期285-290,共6页

利用花粉管通道技术将国槐DNA导入花生栽培品种79266,D_2代变异株98D010-7经连续自交,D_5代获得9个株系,61个株行,641个单株,观察D_5代群体内每个单株的开花型、株型、主茎高、第一对侧枝长、分枝数及单株结果数等主要农艺性状的表现型... 利用花粉管通道技术将国槐DNA导入花生栽培品种79266,D_2代变异株98D010-7经连续自交,D_5代获得9个株系,61个株行,641个单株,观察D_5代群体内每个单株的开花型、株型、主茎高、第一对侧枝长、分枝数及单株结果数等主要农艺性状的表现型。结果表明:①79266和98D010-7均为连续开花型,D_5代出现了交替开花型变异株,占总株数4.37％,开花型分离株行占16.39％;②79266株型直立,98D010-7株型匍匐,D_5代表现型有直立、匍匐和半匍匐3种类型,分别占34.95％、14.04％和51.09％;表现分离的株行占73.77％;③株高和第一对侧枝长与79266相比显著降低;④单株分枝数与受体平均值相近,只有1个株系分枝数显著少于受体79266,其它8个株系差异不显著;⑤D_5代群体有3个株系的单株结果数显著大于受体79266的单株结果数。 展开更多

关键词 花生 外源dna 遗传变异

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盐生植物总DNA经花粉管通道导入花生研究初报 被引量：2

18

作者 庄东红 曹军 +4 位作者 胡忠 郑奕雄 陈贤友 李庆云 邹湘辉 《广东农业科学》 CAS CSCD 2005年第1期31-33,共3页

利用花粉管通道法将海滩盐生植物秋茄总DNA和海边月见草总DNA导入花生,在140mmol/LNaCl溶液处理下,转基因花生后代(T2)的发芽率有明显的提高,转秋茄DNA花生和转海边月见草DNA花生的发芽率分别是原种的2.0倍和1.8倍。

关键词 耐盐性 dna 花粉管通道 花生 转基因

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花生叶片DNA快速提取方法的优化 被引量：6

19

作者 王蕾 赵新涛 +6 位作者 许梦琦 宿烽 任艳 李双铃 石延茂 袁美 王传堂 《山东农业科学》 2014年第7期11-14,共4页

以花生幼叶为试材,对高通量DNA提取法、SDS简易法、TPS法以及TENP法4种不同的DNA提取方法进行比较和优化。结果表明,与其他3种改良方法比较,改良TPS法具有不需液氮磨样、提取速度快、试剂种类少、成本低、DNA溶解速度快、质量较好的优点... 以花生幼叶为试材,对高通量DNA提取法、SDS简易法、TPS法以及TENP法4种不同的DNA提取方法进行比较和优化。结果表明,与其他3种改良方法比较,改良TPS法具有不需液氮磨样、提取速度快、试剂种类少、成本低、DNA溶解速度快、质量较好的优点,提取的DNA可用于花生SSR分析。 展开更多

关键词 花生 基因组dna 提取方法 幼叶

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植物总DNA样品的快速制备 被引量：22

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作者 王艳 李韶山 刘颂豪 《激光生物学报》 CAS CSCD 2000年第1期79-80,F003,共3页

利用 Qiagen微量植物 DNA提取试剂盒 ,在 1小时内即可从植物组织获得总 DNA。提取过程中勿需酚 /氯仿和 SDS抽提 ,操作简便、快捷。所得 DNA样品的 OD2 60 /OD2 80 值在 1 .7— 1 .9之间 ,样品纯度高 ;该样品不含 PCR反应抑制剂及其他... 利用 Qiagen微量植物 DNA提取试剂盒 ,在 1小时内即可从植物组织获得总 DNA。提取过程中勿需酚 /氯仿和 SDS抽提 ,操作简便、快捷。所得 DNA样品的 OD2 60 /OD2 80 值在 1 .7— 1 .9之间 ,样品纯度高 ;该样品不含 PCR反应抑制剂及其他酶反应抑制剂 ,可被各种限制性内切酶完全降解 ,适合于 PCR、印迹、RAPD、AFLP和 RFLP分析等各种下游应用。 展开更多

关键词 dna提取 水稻 花生 玉米 植物

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