An HA-1-DC nucleic-acid vaccine was constructed to induce anti-leukemia effect after hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). DCs were generated from HSCT donors in vitro, and its immunologic activity was assay...An HA-1-DC nucleic-acid vaccine was constructed to induce anti-leukemia effect after hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). DCs were generated from HSCT donors in vitro, and its immunologic activity was assayed by using flow cytometry and mixed lymphocytes reaction. HA-1 gene was electroporated into the cultured DCs to construct a DC nucleic-acid vaccine. After transfection for 48 h, the expression of HA-1 protein could be detected by using Western blot. The DCs were cultured with syngenic lymphocytes to induce specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs). The cytoxicity of the CTLs was detected by LDH assay. The results showed that The DCs derived from peripheral blood monocytes (PBMCs) expressed the phenotype of DCs, and were effective in stimulating proliferation of the allogenic lymphocytes. After electroporating for 48-h, HA-1 protein was detected by using Western blot. The cytotoxity of inducing CTLs was higher than the control group. It was suggested that minor histocompatibility antigen HA-1 could be considered as a target of immunotherapy against leukemia after HSCT.展开更多
背景:miRNA作为重要的基因转录后调控因子,在骨质疏松症的发生和发展过程中发挥着关键作用。通过对miRNA调节骨质疏松症生物学的深入探究,其潜在的疗愈机制得以揭示,此领域已成为当前研究的热门焦点。目的:探讨miRNA在骨质疏松症发生中...背景:miRNA作为重要的基因转录后调控因子,在骨质疏松症的发生和发展过程中发挥着关键作用。通过对miRNA调节骨质疏松症生物学的深入探究,其潜在的疗愈机制得以揭示,此领域已成为当前研究的热门焦点。目的:探讨miRNA在骨质疏松症发生中的调控作用及其分子机制,并对以miRNA为靶点的骨质疏松症治疗策略所遭遇的关键问题及其解决方案进行综述。方法:以“miRNA,osteoporosis,angiogenesis,osteogenesis,genetherapy,drugdelivery”为英文检索词,以“miRNA,骨质疏松,基因治疗,核酸药物,递送载体”为中文检索词,检索PubMed、Web of Science数据库和中国知网2025年3月以前发表的文献。通过阅读文题和摘要进行初步筛选,排除相关性差、信息陈旧或观点重复且缺乏权威性的文献,最后纳入138篇文献进行综述。结果与结论:①miRNA是一种高效的、应用范围广泛、可精准调控细胞活动的非编码RNA,在调控骨细胞功能与骨血管生成方面展现出显著的优势,在骨质疏松症的治疗中具有潜在价值;②尽管基于miRNA的靶向治疗药物在其他疾病领域已进入临床前研究阶段,但在临床转化过程中,仍面临核酸体内稳定性不足及脱靶效应的挑战;③针对miRNA疗法所面临的挑战,研究者们提出了多种应对策略,包括精准定位miRNA的靶基因降低脱靶效应;化学修饰提高核酸药物在体内的稳定性;降低核酸生产成本推进研究;利用病毒载体、外泌体和各类生物材料优化核酸药物的递送途径;④科技的进步在提升核酸药物载体性能上持续创新,未来终将达到精确而高效的药物递送及靶向治疗效果。展开更多
芝麻是八大类食物过敏原之一,快速准确识别芝麻过敏原对预防其过敏有重要意义。核酸适配体可以高效识别靶标过敏原,在过敏原检测中有良好的应用前景。为了获得芝麻主要过敏原Ses i 2的特异性核酸适体,本研究以Ses i 2为靶标,通过磁珠筛...芝麻是八大类食物过敏原之一,快速准确识别芝麻过敏原对预防其过敏有重要意义。核酸适配体可以高效识别靶标过敏原,在过敏原检测中有良好的应用前景。为了获得芝麻主要过敏原Ses i 2的特异性核酸适体,本研究以Ses i 2为靶标,通过磁珠筛选法(磁珠-SELEX)开展10轮筛选,经由高通量测序获得6条候补序列(S1~S6),并进行家族性、同源性分析及二级结构预测。结果表明,6条候选核酸适体的重复率可达46.38%,其自由能在-9.02到-2.47 kcal·moL^(-1)之间,根据自由能能量稳定原则,S1和S5吉布斯自由能最低最稳定,分别为-6.70和-9.02 kcal·moL^(-1)。利用ELISA试验进行亲和力测试,结果表明核酸适体S1和S2的亲和能力较强,S1:KD=67.02 nmol·L^(-1),R2=0.925 8,S2:KD=97.65 nmol·L^(-1),R2=0.795 1。核酸适体S1与过敏原Ses i 2的结合力和其他过敏原蛋白相比有显著差异,可视为具有特异性。本研究最终获得一条兼具良好亲和力和特异性的核酸适体S1,为芝麻过敏原快速检测提供了技术支撑。展开更多
为确定凝胶电泳后条带中DNA的长度和浓度,该文提出了一种通过DNA荧光强度精确分析DNA长度及浓度的有效方法。对D2000 DNA ladder进行凝胶电泳,采集图像并进行处理。利用荧光强度与DNA浓度之间的线性关系以及迁移距离与DNA长度的线性关...为确定凝胶电泳后条带中DNA的长度和浓度,该文提出了一种通过DNA荧光强度精确分析DNA长度及浓度的有效方法。对D2000 DNA ladder进行凝胶电泳,采集图像并进行处理。利用荧光强度与DNA浓度之间的线性关系以及迁移距离与DNA长度的线性关系进行数据分析。结果显示:采用SYBR Green I作为荧光染料电泳DNA时,图像中各像素点中的绿色与红色灰度值可以反映DNA的特征信息,且绿色灰度值明显高于红色灰度值;对于小于2000 bp的DNA片段,其分子量与迁移距离呈反比例函数关系,当二者分别取对数时,其相关系数达0.971,可用于建立DNA分子量与迁移距离的数学模型以计算DNA分子量;通过计算电泳峰峰值及电泳峰积分面积,发现对于浓度比为2∶1的两个DNA条带,二者的比值为2.16与1.96、2.11与1.94、2.16与1.93,表明电泳峰积分面积能更有效地反映DNA的真实浓度值。该研究对于核酸凝胶电泳仪的开发具有重要应用价值。展开更多
目的建立炭疽芽孢杆菌的微滴式数字聚合酶链式反应(Droplet digital PCR,ddPCR)方法对炭疽芽孢杆菌实验室活动污染的定量评估提供技术支持。方法以炭疽芽孢杆菌pXO1质粒编码保护性抗原pagA基因为靶序列,优化微滴数字PCR方法的反应条件,...目的建立炭疽芽孢杆菌的微滴式数字聚合酶链式反应(Droplet digital PCR,ddPCR)方法对炭疽芽孢杆菌实验室活动污染的定量评估提供技术支持。方法以炭疽芽孢杆菌pXO1质粒编码保护性抗原pagA基因为靶序列,优化微滴数字PCR方法的反应条件,建立实验室微环境中炭疽芽孢杆菌核酸定量方法;对比微滴式数字PCR方法和平板计数法的定量评估效果,分析ddPCR的灵敏性、特异性和重复性。结果建立的ddPCR方法最佳引物和探针终浓度分别为900nmol·L^(-1)和250nmol·L^(-1),最佳退火温度为60℃,最佳升降温速度为1℃/s,本方法的最低检测下限为1.12copies·μL^(-1),未发现与常见疫病存在交叉反应,重复性试验的变异系数小于5%。结论本研究中建立的炭疽芽孢杆菌的微滴数字PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,为疫情监测、流行病学调查和实验室污染微环境检测提供重要技术。展开更多
文摘An HA-1-DC nucleic-acid vaccine was constructed to induce anti-leukemia effect after hematopoietic stem cell transplantation (HSCT). DCs were generated from HSCT donors in vitro, and its immunologic activity was assayed by using flow cytometry and mixed lymphocytes reaction. HA-1 gene was electroporated into the cultured DCs to construct a DC nucleic-acid vaccine. After transfection for 48 h, the expression of HA-1 protein could be detected by using Western blot. The DCs were cultured with syngenic lymphocytes to induce specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs). The cytoxicity of the CTLs was detected by LDH assay. The results showed that The DCs derived from peripheral blood monocytes (PBMCs) expressed the phenotype of DCs, and were effective in stimulating proliferation of the allogenic lymphocytes. After electroporating for 48-h, HA-1 protein was detected by using Western blot. The cytotoxity of inducing CTLs was higher than the control group. It was suggested that minor histocompatibility antigen HA-1 could be considered as a target of immunotherapy against leukemia after HSCT.
文摘背景:miRNA作为重要的基因转录后调控因子,在骨质疏松症的发生和发展过程中发挥着关键作用。通过对miRNA调节骨质疏松症生物学的深入探究,其潜在的疗愈机制得以揭示,此领域已成为当前研究的热门焦点。目的:探讨miRNA在骨质疏松症发生中的调控作用及其分子机制,并对以miRNA为靶点的骨质疏松症治疗策略所遭遇的关键问题及其解决方案进行综述。方法:以“miRNA,osteoporosis,angiogenesis,osteogenesis,genetherapy,drugdelivery”为英文检索词,以“miRNA,骨质疏松,基因治疗,核酸药物,递送载体”为中文检索词,检索PubMed、Web of Science数据库和中国知网2025年3月以前发表的文献。通过阅读文题和摘要进行初步筛选,排除相关性差、信息陈旧或观点重复且缺乏权威性的文献,最后纳入138篇文献进行综述。结果与结论:①miRNA是一种高效的、应用范围广泛、可精准调控细胞活动的非编码RNA,在调控骨细胞功能与骨血管生成方面展现出显著的优势,在骨质疏松症的治疗中具有潜在价值;②尽管基于miRNA的靶向治疗药物在其他疾病领域已进入临床前研究阶段,但在临床转化过程中,仍面临核酸体内稳定性不足及脱靶效应的挑战;③针对miRNA疗法所面临的挑战,研究者们提出了多种应对策略,包括精准定位miRNA的靶基因降低脱靶效应;化学修饰提高核酸药物在体内的稳定性;降低核酸生产成本推进研究;利用病毒载体、外泌体和各类生物材料优化核酸药物的递送途径;④科技的进步在提升核酸药物载体性能上持续创新,未来终将达到精确而高效的药物递送及靶向治疗效果。
文摘芝麻是八大类食物过敏原之一,快速准确识别芝麻过敏原对预防其过敏有重要意义。核酸适配体可以高效识别靶标过敏原,在过敏原检测中有良好的应用前景。为了获得芝麻主要过敏原Ses i 2的特异性核酸适体,本研究以Ses i 2为靶标,通过磁珠筛选法(磁珠-SELEX)开展10轮筛选,经由高通量测序获得6条候补序列(S1~S6),并进行家族性、同源性分析及二级结构预测。结果表明,6条候选核酸适体的重复率可达46.38%,其自由能在-9.02到-2.47 kcal·moL^(-1)之间,根据自由能能量稳定原则,S1和S5吉布斯自由能最低最稳定,分别为-6.70和-9.02 kcal·moL^(-1)。利用ELISA试验进行亲和力测试,结果表明核酸适体S1和S2的亲和能力较强,S1:KD=67.02 nmol·L^(-1),R2=0.925 8,S2:KD=97.65 nmol·L^(-1),R2=0.795 1。核酸适体S1与过敏原Ses i 2的结合力和其他过敏原蛋白相比有显著差异,可视为具有特异性。本研究最终获得一条兼具良好亲和力和特异性的核酸适体S1,为芝麻过敏原快速检测提供了技术支撑。
文摘为确定凝胶电泳后条带中DNA的长度和浓度,该文提出了一种通过DNA荧光强度精确分析DNA长度及浓度的有效方法。对D2000 DNA ladder进行凝胶电泳,采集图像并进行处理。利用荧光强度与DNA浓度之间的线性关系以及迁移距离与DNA长度的线性关系进行数据分析。结果显示:采用SYBR Green I作为荧光染料电泳DNA时,图像中各像素点中的绿色与红色灰度值可以反映DNA的特征信息,且绿色灰度值明显高于红色灰度值;对于小于2000 bp的DNA片段,其分子量与迁移距离呈反比例函数关系,当二者分别取对数时,其相关系数达0.971,可用于建立DNA分子量与迁移距离的数学模型以计算DNA分子量;通过计算电泳峰峰值及电泳峰积分面积,发现对于浓度比为2∶1的两个DNA条带,二者的比值为2.16与1.96、2.11与1.94、2.16与1.93,表明电泳峰积分面积能更有效地反映DNA的真实浓度值。该研究对于核酸凝胶电泳仪的开发具有重要应用价值。
文摘目的建立炭疽芽孢杆菌的微滴式数字聚合酶链式反应(Droplet digital PCR,ddPCR)方法对炭疽芽孢杆菌实验室活动污染的定量评估提供技术支持。方法以炭疽芽孢杆菌pXO1质粒编码保护性抗原pagA基因为靶序列,优化微滴数字PCR方法的反应条件,建立实验室微环境中炭疽芽孢杆菌核酸定量方法;对比微滴式数字PCR方法和平板计数法的定量评估效果,分析ddPCR的灵敏性、特异性和重复性。结果建立的ddPCR方法最佳引物和探针终浓度分别为900nmol·L^(-1)和250nmol·L^(-1),最佳退火温度为60℃,最佳升降温速度为1℃/s,本方法的最低检测下限为1.12copies·μL^(-1),未发现与常见疫病存在交叉反应,重复性试验的变异系数小于5%。结论本研究中建立的炭疽芽孢杆菌的微滴数字PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,为疫情监测、流行病学调查和实验室污染微环境检测提供重要技术。
