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大西洋鲑传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的构建及其表达 被引量：1
1
作者 李守湖 秦闯 +1 位作者 李新苍 石建高 《水产科技情报》 2025年第1期26-32,共7页
传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组... 传染性胰腺坏死病(infectious pancreatic necrosis,IPN)是由传染性胰腺坏死病病毒(infectious pancreatic necrosis virus,IPNV)引起的一种主要危害鲑科鱼类的传染病。为克隆传染性胰腺坏死病病毒(IPNV)VP2基因和VP3基因,并构建其重组腺病毒载体,利用PCR方法分别扩增出IPNV VP2基因和VP3基因,通过多基因片段同源重组技术将IPNV VP2基因和VP3基因克隆到pAd-Track-CMV载体,经过线性化后与pAd-easy-1载体在BJ5183菌体内进行同源重组,构建出重组腺病毒质粒;通过PCR及NotⅠ和HindⅢ双酶切鉴定,再经PacⅠ线性化后用于转染293T细胞,获得重组腺病毒;通过绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达监控重组腺病毒的复制情况,用Western-blotting法分别检测IPNV VP2蛋白和VP3蛋白的表达,并测定重组病毒滴度。结果显示,分别克隆出IPNV VP2和VP3基因,基因总长度为2211 bp,构建出目的基因重组腺病毒载体,该病毒在293T细胞中分别表达出蛋白分子质量约为54 kD和26 kD的产物,滴度为1.0×10^(9)个/mL TCID_(50)。结果表明,已成功获得IPNV VP2基因和VP3基因重组腺病毒,该病毒在293T细胞中滴度较高,能够稳定表达。传染性胰腺坏死病病毒VP2蛋白和VP3蛋白重组腺病毒载体的成功构建可为大西洋鲑传染性胰腺坏死病活载体疫苗的研制提供参考。 展开更多
关键词 大西洋鲑 传染性胰腺坏死病 vp2基因 vp3基因 腺病毒载体
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携带FPV VP2基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗免疫原性研究
2
作者 陈慧敏 王文婕 +7 位作者 韩新雨 贾钰航 余祖华 贾艳艳 廖成水 丁轲 尚珂 陈松彪 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第7期947-952,共6页
本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2... 本试验旨在评价表达泛猫白细胞减少综合症病毒(FPV)VP2蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门菌SL1344ΔcrpΔasd口服疫苗的免疫原性。将重组菌按照10^(6)CFU/只的剂量口服免疫6周龄雌性KM小鼠,在免疫后第7、14、21、28、35和42天进行称重,检测VP2特异性Ig G抗体、中和抗体、IL-4和IFN-γ水平的变化。同时口服免疫8周龄健康田园猫,检测疫苗的攻毒保护效果。结果显示,与对照组相比,重组菌免疫后对小鼠体重无明显影响(P>0.05);重组菌免疫小鼠后能够显著诱导血清中针对VP2特异性抗体和中和抗体水平(P<0.05);IL-4和IFN-γ细胞因子水平显著升高(P<0.05),且在免疫后第28天达到峰值;重组菌免疫猫后对FPV感染具有一定程度的免疫保护效果,可明显降低实验猫致死率并且延缓发病时间和发病程度。以上结果表明,构建的FPV VP2重组减毒鼠伤寒沙门菌口服疫苗能够有效刺激机体产生免疫应答且具有较好的免疫保护效力,为进一步研发FPV新型疫苗奠定了良好基础。 展开更多
关键词 泛猫白细胞减少综合症病毒 vp2 SL1344ΔcrpΔasd 口服疫苗 免疫原性
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犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
3
作者 龚婷 马辉 郑鸣 《家畜生态学报》 北大核心 2025年第7期81-84,118,共5页
为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000... 为获得犬细小病毒(canine parvovirus disease,CPV)VP2蛋白单克隆抗体,该研究利用原核表达技术对VP2蛋白进行截短表达,制备单克隆抗体。结果显示:获得了3株稳定的单克隆抗体(C6F7、D2E4、E3F6),其抗体效价分别为1∶1024000、1∶1024000、1∶2048000,染色体数目分别为106、105、103,重链分别为IgG1、IgG2b和IgG1,轻链均为κ链,均能与VP2蛋白和CPV感染的F81细胞发生特异性反应,均与4种常见病毒不发生交叉反应。该研究获得了3株抗体效价高、特异性强、免疫学活性好的VP2蛋白单克隆抗体,可为CPV基础性研究和免疫学诊断试剂盒开发奠定基础。 展开更多
关键词 犬细小病毒 vp2蛋白 单克隆抗体 制备与鉴定
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“S别VP呢罢”的形成及同义糅合句式的兴替
4
作者 叶建军 《古汉语研究》 北大核心 2025年第3期64-78,127,128,共17页
清代中叶始见的特殊测度句式“S别VP呢罢”的生成机制是糅合,而糅合的动因是言者对事件“SVP”的真实性存在矛盾心理。糅合句式“S别VP呢罢”后来消亡了,但是在清代中叶以后出现了若干与之同义的糅合句式,并在历史发展过程中发生了兴替... 清代中叶始见的特殊测度句式“S别VP呢罢”的生成机制是糅合,而糅合的动因是言者对事件“SVP”的真实性存在矛盾心理。糅合句式“S别VP呢罢”后来消亡了,但是在清代中叶以后出现了若干与之同义的糅合句式,并在历史发展过程中发生了兴替。陈述句式或感叹句式与测度句式发生糅合是汉语中一种常见的句式糅合模式。 展开更多
关键词 测度句式 “S别vp呢罢” 句式糅合 同义糅合句式
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历时构式语法视角下的图式性构式“且VP吧”研究
5
作者 朱献珑 王雪乔 《外语教学》 北大核心 2025年第5期14-20,共7页
“且VP吧”是北方方言中司空见惯的表达形式,但迄今尚未见到针对该构式的系统性研究。本研究以历时构式语法为理论框架,基于BCC语料库历时语料,探讨图式性构式“且VP吧”建构特征,并考察该构式演变历程和演变动因。研究发现:在形式方面... “且VP吧”是北方方言中司空见惯的表达形式,但迄今尚未见到针对该构式的系统性研究。本研究以历时构式语法为理论框架,基于BCC语料库历时语料,探讨图式性构式“且VP吧”建构特征,并考察该构式演变历程和演变动因。研究发现:在形式方面,准入该构式的构件为时间副词“且”、语气助词“吧”及表长时义的延续性VP;在意义方面,该构式在实际应用过程中发生变异性扩展,新生出强烈的现场协同移情语义。该构式的变异性扩展历经变异萌芽期、扩展形成期与语义稳定期三个阶段。在此过程中,形式_旧—意义_新配对逐渐占据优势并最终主导构式的使用。扩展的主要动因源于认知经济性、言语信据性及高频率使用等。 展开更多
关键词 “且vp吧”构式 历时构式语法 变异性扩展
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长链非编码RNA VPS9D1-AS1调控miR-532-3p/WEE1轴对卵巢癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响
6
作者 刘宏伟 王雅红 +2 位作者 周齐 闫亚男 王颖欣 《中国优生与遗传杂志》 2025年第5期1025-1032,共8页
目的探究长链非编码RNA VPS9D1反义RNA1(lncRNA VPS9D1-AS1)靶向调控微小RNA-532-3p/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(miR-532-3p/WEE1)信号轴对卵巢癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法将SKOV3细胞分为Control组、si-NC组、si-VPS... 目的探究长链非编码RNA VPS9D1反义RNA1(lncRNA VPS9D1-AS1)靶向调控微小RNA-532-3p/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(miR-532-3p/WEE1)信号轴对卵巢癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法将SKOV3细胞分为Control组、si-NC组、si-VPS9D1-AS1组、si-VPS9D1-AS1+anti-NC组、si-VPS9D1-AS1+anti-miR-532-3p组;以qRT-PCR法检测组织与细胞中lncRNA VPS9D1-AS1、miR-532-3p水平;以双荧光素酶实验检测lncRNA VPS9D1-AS1、WEE1分别与miR-532-3p靶向关系;以Edu、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡;以Western blot法检测细胞增殖、凋亡、EMT相关蛋白及WEE1表达情况;以裸鼠移植瘤验证lncRNA VPS9D1-AS1对卵巢癌移植瘤生长及miR-532-3p/WEE1轴的影响。结果在卵巢癌组织及SKOV3细胞中lncRNA VPS9D1-AS1高表达,miR-532-3p低表达。lncRNA VPS9D1-AS1、WEE1与miR-532-3p之间存在靶向结合位点。si-VPS9D1-AS1组较si-NC组Edu阳性率和lncRNA VPS9D1-AS1水平及WEE1、Ki67、Bcl-2、N-cadherin、Vimentin表达降低,细胞凋亡率和miR-532-3p水平及p21、Bax、E-cadherin表达升高(P<0.05);以沉默miR-532-3p可部分逆转沉默VPS9D1-AS1对SKOV3细胞恶性表型的改善作用;裸鼠移植瘤实验显示,si-VPS9D1-AS1组较si-NC组裸鼠移植瘤生长缓慢,lncRNA VPS9D1-AS1水平及WEE1表达降低,miR-532-3p水平升高(P<0.05)。结论lncRNA VPS9D1-AS1可通过调控miR-532-3p/WEE1轴参与卵巢癌细胞增殖、凋亡、EMT过程。 展开更多
关键词 长链非编码RNA vpS9D1反义RNA1 微小RNA-532-3p 蛋白激酶WEE1 卵巢癌 上皮间质转化
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“看VP”句式的否定羡余现象
7
作者 史金生 郑淑清 《辞书研究》 2025年第5期1-12,125,共13页
文章讨论了“看VP”句式不同语用推论意义下两类否定羡余句式的发展路径和形成机制。“提醒、警告、威胁”用法的“看VP”句式经过脱落、否定弱化等手段形成强语气表达“看不VP”和“看不把NPVP”结构;“提醒、警告、担心”用法的“看V... 文章讨论了“看VP”句式不同语用推论意义下两类否定羡余句式的发展路径和形成机制。“提醒、警告、威胁”用法的“看VP”句式经过脱落、否定弱化等手段形成强语气表达“看不VP”和“看不把NPVP”结构;“提醒、警告、担心”用法的“看VP”句式经过否定溢出和否定移位形成委婉表达“不看VP”。经过句式内部和外部的共存与竞争后,“看VP”句式的“威胁”用法持续活跃发展,“担心”用法萎缩、衰退。对“看不VP”和北京话“不看VP”的讨论,为羡余否定研究增添了新的类型和视角。 展开更多
关键词 看vp 羡余 否定弱化 否定溢出
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转运必需内体分选复合物螺旋纤丝Vps24⁃Vps2的冷冻电镜结构研究
8
作者 刘德生 李耀旺 孙珊 《电子显微学报》 北大核心 2025年第1期28-35,共8页
转运必需内体分选复合物-Ⅲ(endosomal sorting complex required for transport-Ⅲ,ESCRT-Ⅲ)介导了一系列细胞膜重塑事件,包括多囊体的形成、细胞分裂和病毒释放等。这些过程的关键步骤之一是将ESCRT-Ⅲ蛋白亚基组装成纤丝状结构。在... 转运必需内体分选复合物-Ⅲ(endosomal sorting complex required for transport-Ⅲ,ESCRT-Ⅲ)介导了一系列细胞膜重塑事件,包括多囊体的形成、细胞分裂和病毒释放等。这些过程的关键步骤之一是将ESCRT-Ⅲ蛋白亚基组装成纤丝状结构。在本研究中,作者利用冷冻电镜技术解析了由Vps24和Vps2融合蛋白(Vps24-Vps2)形成的双链螺旋纤丝的结构,分辨率为4.07A。在该结构中,呈伸展构象的Vps24-Vps2单体首先形成反向结合的二聚体,二聚体之间再错位结合形成一股螺旋,两股螺旋互相缠绕最终形成纤丝。该结构为理解ESCRT-Ⅲ丝状结构组装以及解聚过程提供了结构基础。 展开更多
关键词 转运必需内体分选复合物 ESCRT vps24 vps2 冷冻电镜结构
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猪轮状病毒VP6蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 被引量：4
9
作者 潘向英 曾智勇 +7 位作者 梁海英 汤德元 王彬 叶泥 田红利 边孟婷 柳佳佳 黄书 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1231-1240,共10页
【目的】通过构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6截短蛋白(第177—382位氨基酸)的原核表达系统,建立检测PoRV抗体的间接ELISA方法,为PoRV血清学监测提供检测手段。【方法】设计1对针对截短VP 6基因的特异性引物,以pMD19-T-VP6... 【目的】通过构建猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP6截短蛋白(第177—382位氨基酸)的原核表达系统,建立检测PoRV抗体的间接ELISA方法,为PoRV血清学监测提供检测手段。【方法】设计1对针对截短VP 6基因的特异性引物,以pMD19-T-VP6重组质粒为模板扩增VP 6截短基因。利用pET-32a(+)原核表达载体构建pET32a-PoRV-VP6重组质粒。以大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞为宿主菌,对重组质粒进行诱导表达,并优化表达条件。利用His标签镍柱对pET32a-PoRV-VP6重组蛋白进行纯化,以此作为包被抗原,通过单一变量法优化抗原包被浓度、血清稀释度、二抗稀释度及一抗、二抗孵育时间等工作条件。确定间接ELISA方法的阴阳性临界值,检验其特异性、敏感性、重复性及符合性,并对2021—2024年采自贵州地区不同猪场的384份临床猪血清进行检测。【结果】试验成功构建pET32a-PoRV-VP6重组表达载体,实现VP6蛋白的原核截短表达,蛋白分子质量大小约40 ku,具有良好的反应原性。对间接ELISA方法条件进行优化,确定VP6包被抗原最佳浓度为2μg/mL、阳性血清稀释度为1∶100、血清样品和二抗孵育时间均为60 min、TMB反应时间为10 min、阴阳性临界值(D 450 nm)为0.410。建立的间接ELISA方法与猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪冠状病毒(PDCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病毒标准阳性血清不发生反应,特异性强;批内和批间重复试验变异系数均<10%,重复性好;与PoRV A型ELISA抗体检测试剂盒的总体符合率为96.80%。间接ELISA方法检测临床384份猪血清样品结果显示,样品总阳性率为28.91%。【结论】本研究成功实现了PoRV VP6蛋白的截短表达,并建立了PoRV间接ELISA抗体检测方法,适用于临床PoRV抗体检测和疫苗免疫效果评价。 展开更多
关键词 猪轮状病毒(PoRV) vp6蛋白 截短表达 间接ELISA
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共表达IBDV VP2蛋白和AIV HA蛋白的重组NDV的构建 被引量：1
10
作者 王晓晓 司凯新 +7 位作者 尚珂 陈松彪 余祖华 丁轲 陈建 李日顺 郁川 何雷 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第6期748-756,共9页
为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒(nVarIBDV)VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的耐热型重组NDV,将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中;然后,重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞,拯... 为构建共表达新变异型传染性法氏囊病毒(nVarIBDV)VP2蛋白和H9亚型禽流感病毒(AIV)HA蛋白的耐热型重组NDV,将nVarIBDV VP2基因和AIV HA基因经2A肽连接后插入重组质粒pNDV-Ⅶ-F中;然后,重组质粒与辅助质粒pTM-N/P/L共转染BHK-21细胞,拯救出共表达VP2蛋白和HA蛋白的重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA和r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2并鉴定。RT-PCR鉴定表明目的基因成功插入至重组NDV的P、M基因之间;IFA检测结果表明,重组病毒r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2感染细胞可稳定表达VP2蛋白和HA蛋白,而重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA感染细胞后仅检测到VP2蛋白表达。生物学特性检测表明2株重组病毒均具有亲本毒株的高增殖效价、低毒力和良好耐热性特点。综上所述,本研究成功地构建了共表达nVarIBDV VP2蛋白和H9N2 AIV HA蛋白的重组病毒r NDV-Ⅶ-F-VP2-HA和r NDV-Ⅶ-F-HA-VP2,为n VarIBDV、H9N2 AIV及基因Ⅶ型NDV的综合防控提供了一种新的策略。 展开更多
关键词 新城疫病毒 传染性法氏囊病毒 vp2蛋白 禽流感病毒 HA蛋白
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人A组轮状病毒VP6蛋白的原核表达及其小鼠多克隆抗体的制备 被引量：1
11
作者 张卫斌 吕长坤 +2 位作者 杨颖 王向鹏 王明永 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第9期910-916,共7页
目的表达和纯化人A组轮状病毒VP6蛋白,制备小鼠抗VP6蛋白多克隆抗体。方法通过RT-PCR方法从人A组轮状病毒感染的粪便标本中扩增VP6基因,构建pET-32a-VP6原核表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞;用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖... 目的表达和纯化人A组轮状病毒VP6蛋白,制备小鼠抗VP6蛋白多克隆抗体。方法通过RT-PCR方法从人A组轮状病毒感染的粪便标本中扩增VP6基因,构建pET-32a-VP6原核表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞;用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导VP6表达,采用镍柱(Ni-NTA)亲和层析纯化VP6蛋白,用SDS-PAGE和Western blotting鉴定VP6蛋白;将VP6蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA检测抗体滴度。结果构建了pET32a-VP6重组表达质粒,VP6蛋白主要以包涵体形式表达。经亲和层析法纯化了VP6蛋白,免疫小鼠后获得了多克隆抗体,抗体效价为1∶32000,抗体可以和VP6蛋白发生特异性反应。结论表达和纯化了人A组轮状病毒的VP6蛋白,制备了小鼠抗VP6蛋白的多克隆抗体,为人A组轮状病毒诊断抗原的制备和血清学检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 人A组轮状病毒 vp6蛋白 原核表达 多克隆抗体
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“有没有VP”和“VP与否”结构的语体鉴定及体原子分析
12
作者 李博迪 《今古文创》 2025年第15期119-121,共3页
本文根据语体语法理论对现代汉语中的“有没有VP”结构和“VP与否”结构进行语体鉴定,通过交际时空以及语法时空中VP能否重叠、结构能否用于传统新闻标题为鉴定标准,得出“有没有VP”具有口语体属性“,VP与否”具有正式体属性。经过体... 本文根据语体语法理论对现代汉语中的“有没有VP”结构和“VP与否”结构进行语体鉴定,通过交际时空以及语法时空中VP能否重叠、结构能否用于传统新闻标题为鉴定标准,得出“有没有VP”具有口语体属性“,VP与否”具有正式体属性。经过体原子的深入分析发现:“有没有VP”的非正式体属性是短弱律作用的结果,“VP与否”结构的正式体属性是古今律和平衡律作用的结果。 展开更多
关键词 有没有vp vp与否 语体属性 体原子
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脑心肌炎病毒VP22A基因真核表达载体的构建 被引量：1
13
作者 邵帅 纪晓岚 +1 位作者 刘明启 李琼毅 《中国动物保健》 2025年第1期240-241,共2页
为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至... 为构建脑心肌炎病毒VP2 2A基因真核表达载体。参考EMCV毒株基因组序列,设计VP2 2A基因特异性引物,PCR扩增VP22A基因目的片段,双酶切目的基因和pc DNA3.1-Flag质粒产生相同的黏性末端,使用T4 DNA连接酶连接相同的黏性末端,连接产物转化至DH5α感受态细胞,菌液PCR鉴定阳性单克隆菌落,对阳性单克隆提取重组质粒并双酶切进行验证,对阳性重组质粒进行测序。重组质粒双酶切和测序结果表明,pc DNA3.1-Flag-VP2和pc DNA3.1-Flag-2A真核表达载体构建成功。 展开更多
关键词 脑心肌炎病毒 vp2基因 2A基因 真核表达载体
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猪细小病毒2型VP2蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备
14
作者 帅文娜 李佳乐 +8 位作者 郭子强 罗梦 李丽薇 周艳君 姜一峰 童武 童光志 李兆龙 高飞 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第8期78-84,共7页
旨在制备猪细小病毒(PPV)VP2的多克隆抗体,并进行其检测能力验证。将PPV VP2克隆至原核表达载体pCold-TF,由1 mmol/L IPTG诱导得到VP2蛋白;纯化后VP2蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(I... 旨在制备猪细小病毒(PPV)VP2的多克隆抗体,并进行其检测能力验证。将PPV VP2克隆至原核表达载体pCold-TF,由1 mmol/L IPTG诱导得到VP2蛋白;纯化后VP2蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证其反应性。ELISA检测结果显示,多克隆抗体效价达1∶128000;Western blot和IFA分析表明,其能特异性识别和结合PPV,说明重组VP2蛋白具有较好的免疫原性和反应原性。本研究为VP2血清学检测方法的建立及其蛋白的功能研究提供了材料。 展开更多
关键词 猪细小病毒 vp2蛋白 多克隆抗体 原核表达
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猪萨佩罗病毒VP4蛋白多克隆抗体制备及功能验证
15
作者 钟祖昌 李本强 +6 位作者 陶洁 程靖华 石迎 刘佩红 唐攀 焦嘉杰 刘惠莉 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第4期78-84,共7页
为深入揭示猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)致病机制,以毒株SHCM2019为研究对象,原核表达VP_(4)蛋白并制备多克隆抗体。根据VP_(4)氨基酸序列进行PSV遗传进化分析,然后将VP_(4)基因与原核表达载体连接,经诱导表达得到可溶性VP_(4... 为深入揭示猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)致病机制,以毒株SHCM2019为研究对象,原核表达VP_(4)蛋白并制备多克隆抗体。根据VP_(4)氨基酸序列进行PSV遗传进化分析,然后将VP_(4)基因与原核表达载体连接,经诱导表达得到可溶性VP_(4)蛋白。纯化后的VP_(4)蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证其反应性。ELISA结果显示,多克隆抗体效价达1∶128000;Western blot和IFA结果表明,其能特异性识别和结合PSV,说明重组VP_(4)蛋白具有较好的免疫原性和反应原性。本研究成功表达了VP_(4)蛋白并制备了多克隆抗体,为VP_(4)蛋白功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪萨佩罗病毒 vp4蛋白 原核表达 多克隆抗体
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VPS13B基因复合杂合变异致儿童Cohen综合征1例
16
作者 梅鑫 贺孝良 +4 位作者 高伟娜 王梦瑶 申静雯 魏菁 薛云 《中国当代儿科杂志》 北大核心 2025年第6期740-745,共6页
患儿,女,7岁,因视力急剧下降就诊。自1岁起,患儿出现发育迟缓,并伴有视力障碍及中性粒细胞减少等表现。结合基因检测及分子致病性研究,患儿最终确诊为VPS13B基因复合杂合变异(c.6940+1G>T和c.2911C>T)所致的Cohen综合征(Cohensynd... 患儿,女,7岁,因视力急剧下降就诊。自1岁起,患儿出现发育迟缓,并伴有视力障碍及中性粒细胞减少等表现。结合基因检测及分子致病性研究,患儿最终确诊为VPS13B基因复合杂合变异(c.6940+1G>T和c.2911C>T)所致的Cohen综合征(Cohensyndrome,CS)。c.6940+1G>T导致38号外显子跳跃,引发移码与提前终止。反转录聚合酶链反应结果显示,患儿VPS13B基因表达量显著下降(P<0.05)。生物信息学分析提示上述两种变异均可能导致截短蛋白。该病例提示,结合临床特征与分子致病性评估(DNA、RNA及蛋白质分析)可有效提高CS早期诊断的准确性。 展开更多
关键词 Cohen综合征 vpS13B基因 表型 基因型 儿童
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大口黑鲈双RNA病毒VP2蛋白原核表达及多克隆抗体制备
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作者 张秋爽 马宝福 +6 位作者 郑果 林强 梁红茹 牛银杰 罗霞 李宁求 付小哲 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第7期18-25,共8页
【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重... 【目的】研究大口黑鲈双RNA病毒(largemouth bass birnavirus,LBBV)VP2蛋白的抗原性,为后续LBBV疫苗研究提供基础材料。【方法】PCR扩增LBBV VP2基因,构建重组质粒pET-VP2,PCR和测序鉴定后转入大肠杆菌中进行诱导表达和纯化。以纯化的重组VP2蛋白为抗原,皮下多点注射免疫新西兰大白兔,耳中央动脉采血并分离血清,通过间接ELISA方法测定多克隆抗体效价;利用Ni-NTA镍离子亲和层析纯化抗体,用BCA法测定纯化后抗体的浓度。通过Western blot和间接免疫荧光鉴定VP2多克隆抗体特异性;采用固定病毒-稀释血清法测定血清的中和效价。【结果】PCR扩增获得了1266 bp的VP2基因片段。PCR和测序鉴定结果表明,重组质粒pET-VP2构建成功。VP2重组蛋白的诱导表达和纯化试验结果获得了64 ku的重组蛋白,符合预期大小。成功制备了VP2蛋白的多克隆抗体,其质量浓度为10 mg/mL,效价为1∶1024000,可特异性识别LBBV VP2蛋白;血清中和试验结果显示,VP2多抗中和抗体效价为1∶64。【结论】成功获得了大肠杆菌表达的LBBV重组VP2蛋白,制备了抗VP2蛋白的多克隆抗体,该多抗对LBBV具有中和作用。 展开更多
关键词 大口黑鲈 大口黑鲈双RNA病毒 vp2蛋白 多克隆抗体
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猫杯状病毒VP1蛋白B细胞表位的串联表达及间接ELISA方法的建立
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作者 王真真 汤傲星 +9 位作者 刘春草 李娜 林亮亮 宋若楠 贾楠楠 杜汉宇 朱杰 李传峰 刘光清 孟春春 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期103-109,共7页
为建立一种检测猫杯状病毒抗体的间接ELISA方法,本试验将截短的猫杯状病毒VP1蛋白表达为重组蛋白纯化后作为包被抗原。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了比较。结果显示,抗... 为建立一种检测猫杯状病毒抗体的间接ELISA方法,本试验将截短的猫杯状病毒VP1蛋白表达为重组蛋白纯化后作为包被抗原。采用棋盘式方法优化反应的最佳血清稀释度和抗原包被量,同时对间接ELISA方法的其他反应条件进行了比较。结果显示,抗原包被量为2μg/mL,血清最佳稀释度为1∶1000,37℃作用1 h;二抗的最佳工作浓度为1∶10000;TMB底物显色液37℃避光显色反应15 min。特异性试验结果显示,同FPV和FHV阳性血清均无交叉反应。此方法对猫细小病毒阳性血清的敏感性为1∶40960;组内、组间变异系数均小于5%。与本实验室建立的包被全病毒的方法平行比较,显示其检测阴阳性血清的值高度一致。结果表明,建立的基于截短的猫杯状病毒VP1蛋白建立的间接ELISA方法非常适用于临床样本的检测,可为猫杯状病毒的防控工作提供技术支撑。 展开更多
关键词 猫杯状病毒 vp1蛋白 串联的B细胞表位 间接ELISA
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基于猪轮状病毒完整VP6蛋白的间接ELISA方法的建立
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作者 洪雨娟 李本强 +4 位作者 陶洁 程靖华 唐攀 石迎 刘惠莉 《微生物学通报》 北大核心 2025年第10期4839-4847,共9页
【背景】猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)是引起猪腹泻的重要病原之一,近期其感染率再次出现升高趋势,有必要加强临床监测以助力该病的防控。【目的】针对PoRV最新流行株的VP6蛋白,建立一种检测PoRV IgG抗体的间接ELISA方法,为临床P... 【背景】猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)是引起猪腹泻的重要病原之一,近期其感染率再次出现升高趋势,有必要加强临床监测以助力该病的防控。【目的】针对PoRV最新流行株的VP6蛋白,建立一种检测PoRV IgG抗体的间接ELISA方法,为临床PoRV抗体普查提供技术支持。【方法】克隆PoRV优势基因型G9P[23]I5的VP6基因并原核表达与鉴定;以VP6重组蛋白作为捕获抗原,与PoRV阳性猪血清进行方阵滴定试验,优化并确定间接ELISA最优参数并分析其特异性、敏感性和重复性。【结果】建立的ELISA技术流程及参数:VP6抗原最佳包被量0.1μg/孔,4℃包被过夜;5%脱脂奶粉封闭2 h,阳性血清最佳稀释度是1:1000,37℃孵育1 h;Goat pAb to Pig IgG H&L(HRP)(1:15000稀释)37℃孵育1 h,四甲基联苯胺(3,3′,5-5′-tetramethylbenidine,TMB)显色15 min;最佳临界值OD_(450)=0.42,可检测到抗体的最大稀释度为1:8000;批内和批间系数均小于10%;具有较好的特异性;检测130份临床血清样品,此方法与商品化PoRV ELISA检测试剂盒方法的总体符合率达93.85%;本研究建立间接ELISA方法的灵敏度高于商品化PoRV ELISA检测试剂盒。【结论】本研究建立的PoRV抗体间接ELISA方法具有较高的检测可靠性,适用于临床PoRV抗体的大规模筛查。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 间接ELISA vp6重组蛋白 抗体监测
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