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大肠杆菌Nissle 1917 FliC高变区缺失的构建、原核表达及体外TLR5活性检测
1
作者 周桂仙 吴诗卉 +4 位作者 王敏乐 廖义潇 李双 杨泽敏 杨颖 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第3期449-457,共9页
运用生物信息技术分析FliCEcN的结构和潜在的抗原表位;借助ClonExpress?同源重组技术设计引物,缺失FliCEcN高变区不同结构域,并克隆至pET-28a(+)表达载体中表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定鞭毛蛋白变体;采用鲎试剂显色法检测鞭毛蛋... 运用生物信息技术分析FliCEcN的结构和潜在的抗原表位;借助ClonExpress?同源重组技术设计引物,缺失FliCEcN高变区不同结构域,并克隆至pET-28a(+)表达载体中表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定鞭毛蛋白变体;采用鲎试剂显色法检测鞭毛蛋白变体中内毒素残留,并使用不同质量浓度的鞭毛蛋白变体刺激Caco-2细胞,通过检测IL-8的分泌水平来评估各鞭毛蛋白变体的生物学活性。生物信息分析结果显示,FliCEcN高变区的多数结构域被预测为含有潜在的抗原表位;PCR结果显示,fliC_(△820~1518)、fliC_(△736~963)、fliC_(△985~1200)、fliC_(△748~828)、fliC_(△1114~1191)和fliC_(△1225~1311)分别约为1095、1566、1578、1713、1716、1707 bp;SDS-PAGE结果显示,经镍柱纯化处理和透析复性的鞭毛蛋白变体分别约为41.36、57.06、57.50、61.97、61.95、61.56 kDa;Western blot结果显示,6个鞭毛蛋白变体均能与抗His单克隆抗体和大肠杆菌H7抗原诊断血清发生特异性反应;TLR5活性检测结果显示,缺失不同结构域的鞭毛蛋白变体保留了其TLR5激动剂功能。结果表明,本试验成功构建了6种FliC_(EcN)缺失高变区不同结构域的鞭毛蛋白变体,且各鞭毛蛋白变体均保留了其TLR5激动剂功能,展现了良好的生物学特性,为进一步研究鞭毛蛋白在缺失不同结构域后的佐剂效应以及鞭毛蛋白抗体滴度对其佐剂效应影响提供了参考依据。 展开更多
关键词 大肠杆菌Nissle 1917 鞭毛蛋白 佐剂 原核表达 tlr5
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基于TLR5-肠道菌群途径探讨电针对营养型肥胖小鼠的作用机制 被引量：5
2
作者 高璐琪 司原成 +4 位作者 康朝霞 张二伟 李志菊 张丽娟 王显云 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期321-327,共7页
目的基于TLR5-肠道菌群探讨电针对营养型肥胖小鼠的作用机制。方法选取60只SPF级C57BL/6小鼠,其中10只空白鼠为正常组,另外50只通过高脂饮食诱导营养型肥胖模型,筛选得到营养型肥胖模型鼠20只,随机均分成模型组和电针组,每组10只。电针... 目的基于TLR5-肠道菌群探讨电针对营养型肥胖小鼠的作用机制。方法选取60只SPF级C57BL/6小鼠,其中10只空白鼠为正常组,另外50只通过高脂饮食诱导营养型肥胖模型,筛选得到营养型肥胖模型鼠20只,随机均分成模型组和电针组,每组10只。电针组针刺中脘、天枢、关元、丰隆四穴,得气后接通电针仪,连续21 d进行电针处理。观察各组实验鼠一般指标(体重、Lee’s指数)、组织指标(肾周脂肪组织质量)、血清指标[胆固醇(CHO)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血糖]、分子指标[瘦素(LEP)、脂联素(ADPN)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脂多糖结合蛋白(LBP)和胆囊收缩素(CCK)]等差异变化;运用免疫组织化学方法检测Toll样受体5(TLR5)蛋白分布差异变化,使用RT-PCR法检测TLR5基因表达的差异变化;采用16S rDNA二代基因测序技术分析肠道菌群结构的差异变化。结果模型组的体重、Lee’s指数、肾脏周围脂肪质量、血清CHO、TG、HDL-C含量、脂肪细胞因子LEP及游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)含量、肠黏膜组织中IL-6、IL-1β、TNF-α、LBP和CCK含量显著高于正常组,脂肪细胞因子ADPN含量显著低于正常组,经电针治疗后,均明显改善。模型组肠黏膜上TLR5的蛋白和基因表达显著高于正常组,经电针干预后明显下调。模型组肠道菌群的种类显著少于正常组,经电针干预后明显增加;模型组拟杆菌纲(Bacteroidia)、变形菌纲(Gammaproteobacteria)、迟缓埃格特菌科(Eggerthellacrae)、疣微菌科(Sutterellaceae)比例明显升高,芽孢杆菌纲(Bacilli)、梭菌纲(Clostridia)、梭菌科(Clostridiaceae)、放线菌纲(Actinobacteria)比例明显下降,经电针干预后明显改善。结论电针具有较好治疗营养型肥胖症的作用,通过平衡肠道菌群的结构,良性调节肠黏膜上TLR5蛋白的分布与表达,降低肠黏膜慢性炎症反应,促进机体脂质代谢,达到减肥降脂目的。 展开更多
关键词 电针 营养型肥胖 tlr5 16S rDNA测序
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斑点叉尾鮰TLR5和TLR5S基因在不同病原诱导下的表达特征 被引量：7
3
作者 李敏 李琪 +3 位作者 王启龙 路飏 陈松林 沙珍霞 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2012年第5期30-38,共9页
分别用迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila、链球菌Streptococcus iniae和斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(channel catfish hemorrhage reovirus,CCRV)对斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus进行感染实验,取感染后0h... 分别用迟钝爱德华氏菌Edwardsiella tarda、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila、链球菌Streptococcus iniae和斑点叉尾鮰呼肠孤病毒(channel catfish hemorrhage reovirus,CCRV)对斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus进行感染实验,取感染后0h、12h、24h、48h、72h和7d的头肾、肠、肝脏和脾脏,采用实时定量PCR方法检测了TLR5和TLR5S基因在这4种免疫相关组织中的时空表达特征,探讨它们与斑点叉尾鮰先天免疫反应的关系。结果表明,链球菌和迟钝爱德华氏菌能够引起TLR5和TLR5S强烈的上调表达,其中以感染链球菌12h后TLR5S在头肾中的表达上调量最为显著,与对照组相比提高了132倍(P<0.01)。在感染嗜水气单胞菌后的24h内TLR5和TLR5S基因的表达量上升,但随后却显示出了明显的下调趋势,而斑点叉尾鮰呼肠孤病毒在TLR5和TLR5S基因表达中起到了明显的抑制作用,于大部分组织中表达下调。在感染12h的脾脏中,TLR5基因的表达量仅为对照组的0.017倍(P<0.01),而TLR5S基因表达量达到最低,仅为对照组的0.01倍(P<0.01)。从不同的组织来看,TLR5在肠中的表达上调幅度最大,而TLR5S在头肾中的表达增幅最明显,如感染链球菌和迟钝爱德华氏菌12h后,TLR5在肠中的表达量分别增加了50.4倍(P<0.01)和14.8倍(P<0.01),TLR5S在头肾中的表达量分别上升了52.8倍(P<0.01)和132倍(P<0.01)。以上结果进一步证明了TLR5和TLR5S基因在斑点叉尾鮰先天免疫反应过程中发挥着非常重要的作用,同时在抗病原侵袭过程中表现出了一定的组织特异性和病原特异性。 展开更多
关键词 斑点叉尾鮰 先无免疫 tlr5 tlr5S 基因表达 病原
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斜带石斑鱼TLR5S基因结构及功能分析 被引量：8
4
作者 林克冰 葛辉 +4 位作者 林琪 吴建绍 何丽斌 方琼珊 周宸 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期109-115,共7页
Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)属于先天免疫系统中的一种模式识别受体(PRR),可分为可溶型和跨膜型2种.它可以识别病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP),从而启动信号转导.本研究从NCBI数据库中... Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)属于先天免疫系统中的一种模式识别受体(PRR),可分为可溶型和跨膜型2种.它可以识别病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP),从而启动信号转导.本研究从NCBI数据库中得到斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)可溶型TLR5(ECTLR5S)cDNA全长序列(Genbank登录号:GQ396667).其cDNA序列全长2 439bp,包括69bp的5′UTR,435bp的3′UTR和1 935bp的开放阅读框,共编码644个氨基酸,预测编码蛋白质分子质量为72.28ku,等电点为6.37.将ECTLR5S基因氨基酸序列与其他脊椎动物的TLR5S基因氨基酸序列进行比对,结果显示出很高的相似性,其中与牙鲆相似度可达69%.Real time PCR检测结果显示ECTLR5S基因在斜带石斑鱼不同器官中均有表达,其中在肝脏中的表达量最高,其次是脾脏、血淋巴、肾脏等.Realtime PCR检测ECTLR5S基因在哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染3,6,12,24,48h后的肝脏中表达情况,结果显示ECTLR5S基因在3,6,12,24h时表达量显著上调(p<0.05),而在48h下降至初始水平.这些结果说明ECTLR5S基因可能参与到斜带石斑鱼抗弧菌感染的免疫反应中,并且肝脏是其发挥作用的重要器官. 展开更多
关键词 斜带石斑鱼 tlr5S 哈维氏弧菌 REAL TIME PCR
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TLR5基因多态性与非贲门胃癌的关联研究 被引量：7
5
作者 高芳 卫星如 +3 位作者 马立聪 田旭阳 党彤 贾彦彬 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2020年第1期114-117,共4页
目的探讨TLR5基因单核苷酸多态性与非贲门胃癌发病风险的关系,为非贲门胃癌的早期诊断和治疗提供理论基础和实验依据。方法用病例对照关联研究的方法,在包头地区汉族人群中收集了288例经组织病理学诊断为非贲门胃癌的患者和281例正常对... 目的探讨TLR5基因单核苷酸多态性与非贲门胃癌发病风险的关系,为非贲门胃癌的早期诊断和治疗提供理论基础和实验依据。方法用病例对照关联研究的方法,在包头地区汉族人群中收集了288例经组织病理学诊断为非贲门胃癌的患者和281例正常对照。用Taq Man法对TLR5基因SNP rs34270714、rs5744174、rs851139、rs17163737进行基因分型;Haploview 4.0软件被用来构建单体型,同时运用非条件性Logistic回归计算比值比(OR)及其95%可信区间(CI),评估各等位基因、基因型及单体型与非贲门胃癌发病风险的关系。结果包头地区汉族人群中TLR5基因SNP rs17163737与非贲门胃癌的发病风险相关联,与携带GG基因型的人群比较,GT基因型携带者非贲门胃癌的发病风险提高1.605倍(GT vs GG:OR=1.605,95%CI=1.131~2.280),其余SNP与非贲门胃癌的发病风险无关联(P>0.05)。同时,单体型分析结果显示:rs5744174-rs851139-rs17163737存在强连锁不平衡,构成单体型区域(Block);然而各单体型均与非贲门胃癌发病风险无关联。结论包头汉族人群中TLR5基因SNP rs17163737 GT基因型携带者非贲门胃癌的发病风险增高。 展开更多
关键词 tlr5 基因多态性 非贲门胃癌
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溃疡性结肠炎小鼠结肠中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达 被引量：6
6
作者 刘翔 丁元伟 林虹 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第22期19-22,共4页
目的通过研究溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠结肠组织中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达随时间变化的关系,探讨Toll样受体家族在UC致病机制中的作用。方法 60只BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予处理,第2组予5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液自由饮用7 ... 目的通过研究溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠结肠组织中TLR2、TLR3、TLR5和TLR9的表达随时间变化的关系,探讨Toll样受体家族在UC致病机制中的作用。方法 60只BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予处理,第2组予5%葡聚糖硫酸钠(DSS)溶液自由饮用7 d造模,第3组予5%DSS溶液自由饮用14 d造模。取各组小鼠的结肠标本,用RT-PCR和Western blotting的方法半定量检测TLR2、TLR3、TLR5、TLR9的表达。结果①正常小鼠结肠中无TLR2、TLR3、TLR5和TLR9表达;②造模7 d小鼠结肠中无TLR3和TLR5表达,而TLR2和TLR9出现明显表达;③造模14 d小鼠结肠中仍然无TLR3和TLR5表达,而TLR2和TLR9的表达则继续增加。结论 TLR2和TLR9可能参与了溃疡性结肠炎的致病机制,而TLR3和TLR5可能未参与UC的致病机制。 展开更多
关键词 TLR2 TLR3 tlr5 TLR9 溃疡性结肠炎 致病机制
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TLR2、TLR4、TLR5和TLR9在小鼠Hp感染模型中的表达 被引量：4
7
作者 刘翔 林漫鹏 +1 位作者 吕建忠 林虹 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第13期2327-2329,共3页
目的:研究BALB/c小鼠在幽门螺杆菌(Hp)感染前后和用抗生素治疗后胃黏膜组织中Toll样受体(TLR)2、TLR4、TLR5、TLR9、IL-1β的表达,探讨Toll样受体家族在Hp感染机制中的作用。方法:60只BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予处理(正常组),第2... 目的:研究BALB/c小鼠在幽门螺杆菌(Hp)感染前后和用抗生素治疗后胃黏膜组织中Toll样受体(TLR)2、TLR4、TLR5、TLR9、IL-1β的表达,探讨Toll样受体家族在Hp感染机制中的作用。方法:60只BALB/c小鼠随机分为3组,第1组不予处理(正常组),第2组予感染Hp(Hp感染组),第3组感染Hp后予抗生素治疗(抗生素治疗组)。RT-PCR和Western blotting法半定量检测小鼠胃内TLR2、TLR4、TLR5、TLR9、IL-1β的表达,Giemsa染色切片计数Hp定植数量,HE染色切片判断黏膜炎症水平。结果:(1)TLR5、TLR9在各组小鼠胃黏膜组织中均无表达。(2)TLR2在Hp感染组胃黏膜组织中表达(PCR:0.13±0.025;Western:1.32±0.27)高于抗生素治疗组(PCR:0.04±0.011;Western:0.43±0.08),正常组无表达。(3)TLR4在Hp感染组胃黏膜组织中表达(PCR:0.22±0.051;Western:0.72±0.17)高于抗生素治疗组(PCR:0.06±0.009;Western:0.21±0.04),正常组无表达。(4)IL-1β在Hp感染组胃黏膜组织中有表达(PCR:0.27±0.038;Western:0.58±0.14),抗生素治疗组和正常组无表达。结论:TLR2、TLR4可能参与了Hp的致病机制,TLR5、TLR9可能未参与Hp的致病机制。 展开更多
关键词 螺杆菌 幽门 TLR2 TLR4 tlr5 TLR9 IL-1Β
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云芝糖肽对人PBMC中TLR5信号通路调控机制的研究 被引量：3
8
作者 陈楚 王静 +3 位作者 杨惠洁 顾颖 余爽 鲍依稀 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期217-220,共4页
目的:研究云芝糖肽(PSP)对人外周血单个核细胞(PBMC)中TLR5信号通路的调控作用,探索PSP对Toll样通路的免疫调节机制。方法:体外分离、培养人PBMC,分为对照组和PSP处理组,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术对PSP处理人PBMC前后,PBMC中的TLR... 目的:研究云芝糖肽(PSP)对人外周血单个核细胞(PBMC)中TLR5信号通路的调控作用,探索PSP对Toll样通路的免疫调节机制。方法:体外分离、培养人PBMC,分为对照组和PSP处理组,采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)技术对PSP处理人PBMC前后,PBMC中的TLR5信号通路中相关基因的表达差异情况进行定量分析。结果:PSP处理的实验组与对照组相比较,TLR5信号通路中的TLR5、IRAK4、TRAF6、IRF5和NF-κB基因的表达水平均显著增高(P<0.05),但AP-1基因的表达降低(P<0.05)。结论:PSP对PBMC中TLR通路的调控可能主要通过NF-κB和IRF5调控终端效应因子来发挥免疫调节作用,这些为进一步探讨PSP的免疫调节作用机理提供了实验依据。 展开更多
关键词 云芝糖肽 tlr5 免疫调节 实时荧光定量PCR
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不同乳腺癌细胞系中TLR5和NLRC4受体的表达和定位 被引量：3
9
作者 李伟 卓召振 +4 位作者 骆姝琳 任凌雁 陈琨 刘水和 袁军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期1761-1764,1768,共5页
目的:探究TLR5和NLRC4受体在不同乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和MDA-MB-435中的表达和定位情况,并探讨重组鞭毛素蛋白对乳腺癌细胞TLR5受体的激活情况。方法:利用Real-time PCR法检测MDA-MB-231、MCF-7和MDA-MB-435细胞TLR5和NLRC4 m... 目的:探究TLR5和NLRC4受体在不同乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF-7和MDA-MB-435中的表达和定位情况,并探讨重组鞭毛素蛋白对乳腺癌细胞TLR5受体的激活情况。方法:利用Real-time PCR法检测MDA-MB-231、MCF-7和MDA-MB-435细胞TLR5和NLRC4 mRNA表达水平,用流式细胞仪检测MDA-MB-231、MCF-7细胞TLR5受体的表达和定位。纯化重组鞭毛素蛋白即全长鞭毛素蛋白Fli C(同时激活TLR5和NLRC4两条通路)、Fli CΔ90-97(不能激活TLR5通路)、FliCL3A(不能激活NLRC4通路)、Fli CΔ90-97:L3A(两条通路都不激活)。用1μg/ml重组鞭毛素蛋白刺激MCF-7细胞,12 h后,ELISA法检测IL-8的分泌。结果:MCF-7细胞TLR5 mRNA表达水平最高,约是MDA-MB-435细胞的1 700倍,MDA-MB-231细胞TLR5表达水平是MDA-MB-435的约200倍。TLR5在MCF-7细胞浆和胞膜上均有表达,而MDA-MB-231细胞只在胞浆中表达。激活TLR5通路的Fli C和Fli C-L3A能够刺激MCF-7细胞分泌IL-8,而不激活TLR5通路的Fli CΔ90-97和Fli CΔ90-97:L3A则不能。结论:不同乳腺癌细胞系都表达TLR5和NLRC4,但是表达部位和表达水平不同。MCF-7细胞TLR5和NLRC4表达高于其他乳腺癌细胞系。乳腺癌细胞系表面的TLR5受体可以被鞭毛素蛋白激活,为进一步探讨TLR5通路的激活在乳腺癌细胞增殖中的作用提供实验基础。 展开更多
关键词 乳腺癌细胞系 tlr5 NLRC4
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TLR5基因多态性与幽门螺旋杆菌感染的关联性 被引量：6
10
作者 高芳 卫星如 +3 位作者 马立聪 田旭阳 党彤 贾彦彬 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1350-1352,共3页
目的:采用标记单核苷酸多态性(Tag-single nucleotide polymorphism,Tag-SNP)途径,探讨TLR5基因多态性与幽门螺旋杆菌感染的关联性。方法:在281例研究样本中,采用TaqMan法对4个Tag-SNP进行基因分型;使用Haploview软件构建单体型,同时运... 目的:采用标记单核苷酸多态性(Tag-single nucleotide polymorphism,Tag-SNP)途径,探讨TLR5基因多态性与幽门螺旋杆菌感染的关联性。方法:在281例研究样本中,采用TaqMan法对4个Tag-SNP进行基因分型;使用Haploview软件构建单体型,同时运用非条件性Logistic回归计算比值比(odds ratios,OR)及其95%可信区间(confidence intervals,CI),评估各等位基因、基因型及单体型与幽门螺旋杆菌感染的关系。结果:包头地区汉族人群中TLR5 rs17163737与幽门螺旋杆菌感染相关联,相对于携带等位基因G的人群,携带等位基因T的人群幽门螺旋杆菌感染的风险可提高1.578倍(T vs.G:OR=1.578,95%CI=1.069~2.330);与携带GG基因型的人群比较,TT基因型携带者幽门螺旋杆菌感染的风险增高(TT vs. GG:OR=3.336,95%CI=1.024~9.244);其余SNP位点均与幽门螺旋杆菌感染无关联(P>0.05)。同时,TLR5基因rs34270714-rs5744174-rs851139-rs17163737之间存在强连锁不平衡,构成单体型区域;单体型分析结果显示各单体型与幽门螺旋杆菌感染没有关联(P>0.05)。结论:TLR5 rs17163737基因多态性可能在幽门螺旋杆菌感染中发挥了一定作用。 展开更多
关键词 tlr5 基因多态性 幽门螺旋杆菌感染
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TLR5在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义 被引量：3
11
作者 周辉 陈建华 +5 位作者 罗永忠 肖玲 易青 易辉煌 李芳 钟美佐 《肿瘤药学》 CAS 2014年第2期121-125,共5页
目的探讨Toll样受体5(Toll like receptor 5,TLR5)在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化法检测和比较109例NSCLC组织及60例癌旁正常肺组织中TLR5蛋白的表达,并分析NSCLC组织中TLR... 目的探讨Toll样受体5(Toll like receptor 5,TLR5)在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及临床意义。方法应用免疫组化法检测和比较109例NSCLC组织及60例癌旁正常肺组织中TLR5蛋白的表达,并分析NSCLC组织中TLR5的表达与患者年龄、性别、吸烟史、组织学类型、淋巴结转移以及分化程度的关系。结果 NSCLC组织中TLR5蛋白的阳性表达率为65.1%(71/109),显著高于癌旁正常肺组织的16.7%(10/60),差异有统计学意义(P<0.001)。NSCLC组织中TLR5蛋白阳性表达率与NSCLC患者的组织学分型及吸烟史有显著相关性(P<0.05)。结论 TLR5蛋白在NSCLC组织中的表达增加,可能在NSCLC的发生发展中起重要作用。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 tlr5 表达 临床意义 tlr5
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基于TLR5-NF-κB通路筛选四物汤中的活性成分 被引量：3
12
作者 王小彦 马增春 +6 位作者 陈忠斌 邢雅玲 邵帅 王宇光 路晓钦 董志 高月 《解放军药学学报》 CAS 2012年第3期196-199,共4页
目的基于TLR5-NF-κB通路建立报告基因系统筛选四物汤中的有效成分。方法利用脂质体转染试剂Li-pofectin 2000将含有hTLR5基因和NF-κB Luc报告基因的质粒转染入人胚肾细胞(HEK293细胞),加入药物刺激后再检测细胞荧光素酶表达水平,筛选... 目的基于TLR5-NF-κB通路建立报告基因系统筛选四物汤中的有效成分。方法利用脂质体转染试剂Li-pofectin 2000将含有hTLR5基因和NF-κB Luc报告基因的质粒转染入人胚肾细胞(HEK293细胞),加入药物刺激后再检测细胞荧光素酶表达水平,筛选出能够激活TLR5受体及其下游NF-κB通路的有效成分。结果果糖、腺嘌呤能够显著激活此通路,且随果糖、腺嘌呤作用浓度的增加对细胞膜表面TLR5受体及其下游的NF-κB通路激活作用也随之增强,叶酸、东莨菪内酯、芍药苷、盐酸川芎嗪、β-谷甾醇、阿魏酸也能一定程度激活此通路。结论通过TLR5受体介导NF-κB通路激活剂筛选模型,筛选出四物汤内果糖、腺嘌呤、芍药苷、盐酸川芎嗪、叶酸、东莨菪内酯、β-谷甾醇、阿魏酸8种单体在一定浓度范围内能够激活TLR5受体及其下游的NF-κB通路。 展开更多
关键词 tlr5 NF-ΚB 报告基因 四物汤 果糖 腺嘌呤
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TLR5在不同非小细胞肺癌细胞株的表达及其活化机制的初步探讨 被引量：5
13
作者 周辉 罗媚 +5 位作者 文亦戈 马安迪 罗永忠 易青 陈建华 肖玲 《中国肺癌杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期8-15,共8页
背景与目的已有的研究表明:Toll样受体5(toll-like receptor 5,TLR5)在肿瘤起始和发展中发挥重要作用。我们前期研究发现,TLR5在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中高表达,但其在NSCLC高表达后的信号通路活化情况的... 背景与目的已有的研究表明:Toll样受体5(toll-like receptor 5,TLR5)在肿瘤起始和发展中发挥重要作用。我们前期研究发现,TLR5在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中高表达,但其在NSCLC高表达后的信号通路活化情况的研究并不多见。本研究旨在探讨TLR5在不同NSCLC细胞株上的表达,及其在NSCLC细胞中活化的机制。方法用免疫荧光、RT-PCR和Western blot方法检测TLR5在三种不同NSCLC细胞株中的表达。分别用0μg/m L、0.01μg/m L、0.1μg/m L、1μg/m L、5μg/m L、10μg/m L的鞭毛蛋白刺激,用NF-κB荧光素酶报告基因质粒瞬时转染后,检测细胞内NF-κB荧光素酶的活性。选择TLR5表达最高的SPC-A-1细胞株为实验对象,选择0.1μg/m L的鞭毛蛋白,分别用0μg/m L、0.01μg/m L、0.1μg/m L、1μg/m L、10μg/m L的TLR5抗体抑制通路活化,检测细胞内NF-κB荧光素酶的活性,验证TLR5活化通路。构建TLR5-sh RNA,转染SPC-A-1细胞48 h后,以0.1μg/m L浓度鞭毛蛋白分别刺激SPC-A-1细胞及转染的SPC-A-1细胞,在刺激0 min、10 min、30 min、60 min,用Western blot方法比较TLR5信号通路因子p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK、IKBα、ERK1/2的变化。结果 TLR5在肺腺癌细胞株SPC-A-1中呈高表达,且主要表达在细胞膜上。三种细胞株中SPC-A-1细胞NF-κB荧光素酶的活性最高,呈浓度依赖性,0.1μg/m L鞭毛蛋白即可明显增强NF-κB荧光素酶的活性(P<0.05);而SPC-A-1细胞内NF-κB荧光素酶的活性可被TLR5抗体抑制,与TLR5抗体浓度负相关(P<0.05)。与0 min相比较,SPC-A-1细胞内p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK水平在鞭毛蛋白刺激10 min即明显增高,30 min达到高峰,60 min开始下降(P<0.05),且与10 min和60 min组相比,p-IKBα、p-ERK1/2、p-JNK水平在30 min增高(P<0.05);而IKBα、ERK1/2的水平无明显变化(P>0.05)。以适合浓度鞭毛蛋白刺激转染的SPC-A-1细胞,p-IKBα、p-JNK蛋白均未检出,IKBα、ERK1/2蛋白的水平无明显变化(P>0.05),p-ERK1/2蛋白水平随着时间延长明显增高(P<0.05)。结论外源性配体鞭毛蛋白可激活NSCLC细胞株TLR5蛋白,启动下游信号通路,可能与NSCLC的发生发展有关。 展开更多
关键词 肺肿瘤 tlr5 鞭毛蛋白 信号通路
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半滑舌鳎TLR5S三种剪切型基因的克隆与表达分析 被引量：1
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作者 张文婷 向晋松 +4 位作者 李海龙 张宁 董忠典 高峰涛 陈松林 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期10-20,共11页
Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)是TLRs家族成员之一,可分为跨膜型TLR5M和鱼类特有的可溶型TLR5S,它们可以识别致病菌表面的鞭毛蛋白并协同作用激活免疫反应。为了研究半滑舌鳎受到病原感染后TLR5S参与免疫反应的作用,本研究使... Toll样受体5(Toll-like receptor 5,TLR5)是TLRs家族成员之一,可分为跨膜型TLR5M和鱼类特有的可溶型TLR5S,它们可以识别致病菌表面的鞭毛蛋白并协同作用激活免疫反应。为了研究半滑舌鳎受到病原感染后TLR5S参与免疫反应的作用,本研究使用RACE技术获得了半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)TLR5S全长c DNA序列。TLR5S c DNA有3种剪切型:Cs.TLR5S x1,Cs.TLR5S x2和Cs.TLR5S x3。这3种剪切型的相同区域为308 bp 5′非编码区(5′UTR)和1701 bp开放阅读框(ORF),不同的3′UTR分别为138 bp、364 bp和637 bp。Cs.TLR5S共编码567个氨基酸,预测编码蛋白质分子量为64.03 k D,等电点为8.49。氨基酸多重序列比对结果显示,Cs.TLR5S氨基酸序列与其他脊椎动物TLR5S氨基酸序列具有较高的相似性,其中与牙鲆相似度高达61%,表明Cs.TLR5S在进化上的具有一定的保守性。Real-time PCR结果表明该基因在半滑舌鳎的不同组织均有表达,其中在肝的表达量最高,在脾的表达量最低。此外,检测Cs.TLR5S 3′端的不同剪切型在肝、脾、头肾、小肠中的表达,结果显示Cs.TLR5S x3只在肝中高表达,而Cs.TLR5S x1则在肝和小肠中都有中等程度表达。鳗弧菌(Vibrio anguillarum)感染半滑舌鳎实验表明,注射菌液6 h后,Cs.TLR5S基因在肾、小肠、肝和脾4个组织中的表达量都有显著上升;注射鳗弧菌48 h后,以上4种组织中表达量均呈现降低的变化。上述实验结果说明,Cs.TLR5S基因可能参与了半滑舌鳎抗弧菌感染的免疫反应。 展开更多
关键词 半滑舌鳎 tlr5S 鳗弧菌 基因克隆 表达
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猪TLR5基因定点突变表达载体构建 被引量：1
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作者 李海涛 陈月婵 +3 位作者 牛艳春 李朋 刘娣 杨秀芹 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期11-15,共5页
TLR5特异识别细菌鞭毛蛋白,在机体免疫反应中发挥重要作用,人TLR5基因突变能影响蛋白功能并与一些疾病的易感性密切相关。研究采用RT-PCR方法克隆了猪TLR5基因的全长编码区;采用PCR介导的定点突变技术得到该基因137(G/A)和1205(C/T)位... TLR5特异识别细菌鞭毛蛋白,在机体免疫反应中发挥重要作用,人TLR5基因突变能影响蛋白功能并与一些疾病的易感性密切相关。研究采用RT-PCR方法克隆了猪TLR5基因的全长编码区;采用PCR介导的定点突变技术得到该基因137(G/A)和1205(C/T)位点突变的两个变异体;以pcDNA3.1+为载体成功构建野生型(TLR5-WT-pcDNA3.1+)和突变型(TLR5-G137A-pcDNA3.1+和TLR5-C1205T-pcDNA3.1+)真核表达重组质粒。研究结果可为下一步细胞水平上的突变功能分析提供基础。 展开更多
关键词 猪 tlr5 定点突变 真核表达载体
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激活TLR5和NLRC4通路的重组鞭毛素蛋白对不同乳腺癌细胞系增殖的抑制作用 被引量：1
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作者 李伟 卓召振 +1 位作者 李荣辉 袁军 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期869-872,共4页
目的:探究激活TLR5和NLRC4通路的重组鞭毛素蛋白对不同乳腺癌细胞系增殖的抑制作用。方法:表达和纯化重组鞭毛素蛋白即全长鞭毛素蛋白Fli C(同时激活TLR5和NLRC4两条通路)、Fli CΔ90-97(不能激活TLR5通路)、Fli C-L3A(不能激活NLRC4通... 目的:探究激活TLR5和NLRC4通路的重组鞭毛素蛋白对不同乳腺癌细胞系增殖的抑制作用。方法:表达和纯化重组鞭毛素蛋白即全长鞭毛素蛋白Fli C(同时激活TLR5和NLRC4两条通路)、Fli CΔ90-97(不能激活TLR5通路)、Fli C-L3A(不能激活NLRC4通路)和Fli CΔ90-97:L3A(两条通路都不激活)。用不同浓度的重组鞭毛素蛋白刺激MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞,72 h后,利用CCK8法检测其对肿瘤细胞增殖的影响,并计算抑制率。软琼脂形成实验:每孔细胞数为1 000个MCF-7细胞铺于6孔板中,重组鞭毛素蛋白浓度为1μg/ml,培养14 d后,结晶紫染色,显微镜下计数克隆数,计算克隆形成率。结果:四种鞭毛素蛋白在0.1μg/ml的浓度刺激下,对MCF-7细胞的抑制率达到30%,Fli CΔ90-97对MCF-7的抑制作用是剂量依赖的。在1μg/ml时单独激活TLR5的Fli C-L3A鞭毛素蛋白的抑制率高于全长的Fli C和单独激活NLRC4的Fli CΔ90-97。Fli CΔ90-97:L3A也对MCF-7细胞有抑制作用。四种鞭毛素蛋白对MDA-MB-231细胞在加转染试剂之后才表现出抑制效应。结论:鞭毛素蛋白可以抑制乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231细胞的增殖,其机制可能是由于分别激活胞膜和胞内的除TLR5和NLRC4以外的其他通路。 展开更多
关键词 鞭毛素蛋白 tlr5 NLRC4 乳腺癌细胞
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鲤鱼外周血白细胞TLR5M全长cDNA克隆及序列分析 被引量：1
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作者 孙真 贾生美 +7 位作者 冯祥汝 陈义龙 翟新新 沈雪飞 张俊辉 王文东 杨振国 卢强 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第9期41-45,共5页
本试验以鲤鱼TLR5M的EST序列为基础进行5'-RACE试验,获得了其cDNA的全长序列。结果表明,该序列共3182 bp,包含38 bp的5'端非编码区,486 bp的3'端非编码区,1个2658 bp的开放阅读框(ORF),共编码885个氨基酸。序列同源性比对... 本试验以鲤鱼TLR5M的EST序列为基础进行5'-RACE试验,获得了其cDNA的全长序列。结果表明,该序列共3182 bp,包含38 bp的5'端非编码区,486 bp的3'端非编码区,1个2658 bp的开放阅读框(ORF),共编码885个氨基酸。序列同源性比对结果表明,该序列与麦瑞加拉鲮鱼TLR5基因同源性高达84.46%。 展开更多
关键词 鲤鱼 tlr5M 克隆 序列分析
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细菌感染对斑马鱼TLR5表达的影响研究 被引量：3
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作者 欧阳蒲月 黄智璇 《化学与生物工程》 CAS 2013年第4期41-43,共3页
Toll样受体家族(TLRs)在天然免疫中发挥着重要作用。用杀鲑气单胞菌(革兰氏阴性菌)和金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性菌)分别感染斑马鱼后,检测了斑马鱼TLR5表达的变化。结果表明,具有鞭毛的杀鲑气单胞菌和不具有鞭毛的金黄色葡萄球菌均可以... Toll样受体家族(TLRs)在天然免疫中发挥着重要作用。用杀鲑气单胞菌(革兰氏阴性菌)和金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性菌)分别感染斑马鱼后,检测了斑马鱼TLR5表达的变化。结果表明,具有鞭毛的杀鲑气单胞菌和不具有鞭毛的金黄色葡萄球菌均可以诱导TLR5表达的上调。认为具有鞭毛的杀鲑气单胞菌可以直接激活TLR5通路,而不具有鞭毛的金黄色葡萄球菌可能是先激活了TLRs的其它通路后再诱导TLR5表达的上调,从而推断TLR5是斑马鱼天然免疫的核心。 展开更多
关键词 tlr5 斑马鱼 杀鲑气单胞菌 金黄色葡萄球菌 Toll样受体家族(TLRs)
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民猪、长白猪TLR5基因变异的比较分析 被引量：1
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作者 杨秀芹 牛艳春 +1 位作者 李海涛 刘娣 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第5期60-61,共2页
为了进一步研究Toll样受体5(TLR5)基因与疾病抗性/易感性的关系,试验以抗病性具有明显差异的民猪和长白猪为试验材料,采用PCR产物直接测序的方法,比较分析TLR5基因的变异情况。结果表明:猪TLR5 c.834 T>G点突变在2个品种间的分布具... 为了进一步研究Toll样受体5(TLR5)基因与疾病抗性/易感性的关系,试验以抗病性具有明显差异的民猪和长白猪为试验材料,采用PCR产物直接测序的方法,比较分析TLR5基因的变异情况。结果表明:猪TLR5 c.834 T>G点突变在2个品种间的分布具有极显著差异(P<0.01),民猪以G为优势等位基因,长白猪以T为优势等位基因,在该群体中没有发现GG纯合体。TLR5 c.834 T>G点突变很可能与民猪抗病性强有关。 展开更多
关键词 民猪 长白猪 Toll样受体5(tlr5)基因 基因变异
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芍药苷通过抑制TLR5表达及T细胞活化减轻葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠溃疡性结肠炎 被引量：12
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作者 王小静 罗霞 +3 位作者 赵忠正 罗爽 陈津岩 周联 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期673-679,共7页
目的探究芍药苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用及其机制。方法将C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、600 mg/(kg·d)美沙拉嗪处理组、(12.5、25、50)mg/(kg·d)芍药苷处理组,每组10只。除正常组外,... 目的探究芍药苷对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用及其机制。方法将C57BL/6雄性小鼠随机分为正常组、模型组、600 mg/(kg·d)美沙拉嗪处理组、(12.5、25、50)mg/(kg·d)芍药苷处理组,每组10只。除正常组外,其他组给予30 g/L DSS溶液造模5 d,同时连续灌胃给药10 d,正常组与模型组给予等量的蒸馏水。每天观察小鼠体质量、粪便性状和便血情况,评分并计算疾病活动指数(DAI);HE染色观察结肠组织变化,ELISA检测血清鞭毛蛋白(flagellin)抗体、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;Western blot法检测小鼠结肠组织Toll样受体5(TLR5)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κBp65(NF-κBp65)蛋白水平;流式细胞术检测肠系膜淋巴结的淋巴细胞活化情况。结果与正常组相比,模型组小鼠DAI评分显著升高,结肠长度明显缩短;黏膜上皮、肠腺等结构消失;血清中鞭毛蛋白抗体、IL-6和TNF-α含量升高;结肠组织TLR5、MyD88、NF-κBp65蛋白表达明显增加;肠系膜淋巴结T淋巴细胞活化增加。与模型组比较,美沙拉嗪与各剂量芍药苷组的上述症状均得到缓解。结论芍药苷通过抑制TLR5的表达以及T细胞活化,减轻小鼠溃疡性结肠炎。 展开更多
关键词 芍药苷 溃疡性结肠炎 Toll样受体5(tlr5) 核因子κBp65(NF-κBp65) T细胞活化
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