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RNAi沉默RABGEF1基因对人卵巢癌细胞增殖的影响
1
作者 谢春英 孙顺昌 +1 位作者 黄晓东 彭运生 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第12期2809-2811,共3页
目的:探讨沉默RABGEF1基因对人卵巢癌细胞(SK-OV-3细胞)增殖的影响。方法:通过小干扰RNA技术沉默SK-OV-3细胞的RABGEF1基因表达,用实时荧光定量RT-PCR法鉴定细胞内RABGEF1基因的表达水平,培养RABGEF1基因被沉默的SK-OV-3细胞,计数不同... 目的:探讨沉默RABGEF1基因对人卵巢癌细胞(SK-OV-3细胞)增殖的影响。方法:通过小干扰RNA技术沉默SK-OV-3细胞的RABGEF1基因表达,用实时荧光定量RT-PCR法鉴定细胞内RABGEF1基因的表达水平,培养RABGEF1基因被沉默的SK-OV-3细胞,计数不同时间点的细胞数,分析RABGEF1基因对人卵巢癌细胞增殖的影响。结果:实时荧光定量RT-PCR法检测显示所构建的4个siRNA表达载体对RABGEF1基因表达的沉默率分别为52.5%、58.1%、76.2%和87.7%。将RABGEF1基因表达沉默率为87.7%的SK-OV-3细胞继续培养,计数显示细胞数目较未沉默基因减少(P<0.05)。结论:应用RNAi技术沉默RABGEF1基因可抑制SK-OV-3细胞的增殖,提示RABGEF1基因可能参与卵巢癌的发生发展。 展开更多
关键词 rabgef1基因 卵巢癌 增殖
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RABGEF1蛋白在卵巢肿瘤中的表达 被引量：1
2
作者 谢春英 孙顺昌 +1 位作者 黄晓东 彭运生 《现代检验医学杂志》 CAS 2013年第6期39-41,共3页
目的探讨RAB鸟苷酸交换因子1（RABGEFl）蛋白在卵巢恶性肿瘤、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织中的表达水平。方法应用免疫组织化学技术检测46例卵巢恶性肿瘤、21例卵巢良性肿瘤及15例正常卵巢组织中RABGEFl蛋白的表达水平。结果RABGEFl蛋... 目的探讨RAB鸟苷酸交换因子1（RABGEFl）蛋白在卵巢恶性肿瘤、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织中的表达水平。方法应用免疫组织化学技术检测46例卵巢恶性肿瘤、21例卵巢良性肿瘤及15例正常卵巢组织中RABGEFl蛋白的表达水平。结果RABGEFl蛋白在卵巢恶性肿瘤中的阳性表达率为7l_7％，在卵巢良性肿瘤中的阳性表达率为38．1％，在正常卵巢组织中未检测到RABGEFl蛋白的表达；RABGEFl蛋白在卵巢恶性肿瘤中的表达率显著高于良性肿瘤（矿一6．87，P一0．0087）。结论RABGEFl蛋白可能参与卵巢肿瘤的发生及发展，卵巢组织中RABGEFl蛋白的表达检测或许有助于卵巢肿瘤的辅助诊断。 展开更多
关键词 卵巢 肿瘤 RAB鸟苷酸交换因子1蛋白
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LUBAC介导RabGEF1的线性泛素化修饰
3
作者 黄彬 张令强 张学利 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2023年第4期749-759,共11页
目的验证RabGEF1(Rab guanine nucleotide exchange factor 1)为线性泛素化修饰的新底物。方法在pEF6/MycHis C载体中克隆人RabGEF1基因。通过免疫共沉淀(Co-IP)实验验证RabGEF1和HOIP的相互作用。利用GST-pulldown实验探索RabGEFl与HOI... 目的验证RabGEF1(Rab guanine nucleotide exchange factor 1)为线性泛素化修饰的新底物。方法在pEF6/MycHis C载体中克隆人RabGEF1基因。通过免疫共沉淀(Co-IP)实验验证RabGEF1和HOIP的相互作用。利用GST-pulldown实验探索RabGEFl与HOIP相互作用结构域。通过免疫荧光实验验证RabGEF1和HOIP的相互作用与亚细胞定位。应用体内泛素化实验检测RabGEF1的线性泛素化修饰。通过NTA-His泛素化实验进一步明确RabGEF1能够发生线性泛素化修饰。将RabGEF1的泛素化蛋白质样品进行质谱分析,根据质谱结果提示的RabGEF1泛素化位点构建赖氨酸位点突变质粒,进一步在体内泛素化实验中验证RabGEF1的线性泛素化修饰位点。结果RabGEF1与HOIP存在相互作用,且HOIP通过ZF-NEF结构域与RabGEF1发生直接相互作用。RabGEF1与HOIP共同定位于细胞质。LUBAC介导RabGEF1发生线性泛素化修饰依赖于LUBAC酶活性,RabGEF1泛素化修饰位点为K158。结论RabGEFl为线性泛素化修饰的新底物,且K158是其发生线性泛素化修饰的位点。 展开更多
关键词 rabgef1 线性泛素化修饰 LUBAC 免疫共沉淀
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融合蛋白TAT-RabGEF1原核表达载体的构建及蛋白表达 被引量：3
4
作者 方虹仪 郭娜 +1 位作者 邢纪斌 罗晨芳 《中山大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期61-67,共7页
【目的】构建PET28a-TAT-RabGEF1重组质粒载体,在E.coli Rosetta(DE3)菌株中高效表达并纯化融合蛋白,研究TAT-RabGEF1融合蛋白对肥大细胞的跨膜转导活性。【方法】以小鼠组织cDNA为模板,设计上游和下游含有限制性酶切位点和TAT序列的引... 【目的】构建PET28a-TAT-RabGEF1重组质粒载体,在E.coli Rosetta(DE3)菌株中高效表达并纯化融合蛋白,研究TAT-RabGEF1融合蛋白对肥大细胞的跨膜转导活性。【方法】以小鼠组织cDNA为模板,设计上游和下游含有限制性酶切位点和TAT序列的引物,PCR扩增目的片段TAT-RabGEF1,并通过双酶切构建PET28a-TAT-RabGEF1重组质粒载体,在E.coli Rosetta(DE3)大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,产物用亲和层析柱纯化后测量浓度及鉴定。CCK-8检测融合蛋白的细胞毒性,并用荧光显微镜及荧光分光光度计定性定量观察其对小鼠肥大细胞瘤细胞P815的转导活性。【结果】成功构建了PET28a-TAT-RabGEF1重组载体,高效表达了具有较高特异性,相对分子质量约为57 ku的融合蛋白TAT-Rab GEF1,0.1、1、10μmol/L浓度的TAT-RabGEF1蛋白对细胞无明显毒性,荧光显微镜显示1μmol/L浓度的融合蛋白TAT-RabGEF1具有快速转导进入P815细胞内的能力,且为进入细胞的饱和浓度。【结论】通过TAT-RabGEF1的原核表达和蛋白纯化分析,证实了TAT-PTD的跨膜转导活性,为研究RabGEF1在肥大细胞激活途径中的作用提供了物质基础。 展开更多
关键词 鸟嘌呤核苷酸交换因子1 TAT蛋白 融合蛋白 载体构建
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蛋白转导Rab GEF1减轻小鼠肝脏缺血再灌注所致的肺损伤
5
作者 方虹仪 程楠 +1 位作者 谢汉镔 罗晨芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期340-345,共6页
目的:探讨转录反式激活因子-Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子1(Tat-RabGEF1)融合蛋白对小鼠肝脏缺血再灌注(IR)所致肺损伤的作用及其可能的机制。方法:选用雄性C57BL/6小鼠24只,按随机数字表法分为假手术(sham)组、IR组和Tat-RabGEF1组,每组8... 目的:探讨转录反式激活因子-Rab鸟嘌呤核苷酸交换因子1(Tat-RabGEF1)融合蛋白对小鼠肝脏缺血再灌注(IR)所致肺损伤的作用及其可能的机制。方法:选用雄性C57BL/6小鼠24只,按随机数字表法分为假手术(sham)组、IR组和Tat-RabGEF1组,每组8只。采用肝脏缺血90 min再灌注4 h制备肺损伤模型,Tat-Rab-GEF1组于再灌注即刻经尾静脉注射Tat-RabGEF1 (10 mg/kg)。再灌注4 h后处死小鼠,收集支气管肺泡灌洗液(BALF),采用ELISA法检测BALF中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6 (IL-6)和白细胞介素1β(IL-1β)的含量;取肺组织进行病理学检测,测定湿/干重比、β-氨基己糖苷酶(β-Hex A)和髓过氧化物酶(MPO)水平,并采用Western blot法测定肺组织类胰蛋白酶的表达水平。结果:(1)肝缺血90 min再灌注4 h肺组织病理损伤明显,湿/干重比增高,Tat-RabGEF1尾静脉注射明显减轻肺脏病理损伤。(2)与IR组比较,Tat-RabGEF1组BALF中TNF-α、IL-6和IL-1β浓度,以及肺组织β-Hex A、MPO水平和类胰蛋白酶表达显著降低(P <0.05)。结论:体内蛋白转导Rab GEF1减轻肝IR所致的肺损伤,减少肺组织炎症反应和细胞因子水平,其机制可能与抑制肥大细胞激活有关。 展开更多
关键词 肝缺血再灌注 肺损伤 肥大细胞 Tat-rabgef1融合蛋白 炎症
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