牛磺酸对缺氧培养下视网膜神经节细胞株RGC-5的保护效应 被引量：2

1

作者 陈卡 刘凤瑾 +5 位作者 糜漫天 舒芙蓉 王建 冉莉 李明 易龙 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第5期832-834,867,共4页

目的:观察牛磺酸(Taurine)对缺氧(Hypoxia)条件下大鼠视网膜神经节细胞株RGC-5存活的影响。方法:将RGC-5置于缺氧条件(5%O2,5%CO2,90%N2)下培养12h、24h和48h,观察不同浓度牛磺酸(0.01mM、0.1mM和1mM)对RGC-5形态、乳酸脱氢酶(Lactatede... 目的:观察牛磺酸(Taurine)对缺氧(Hypoxia)条件下大鼠视网膜神经节细胞株RGC-5存活的影响。方法:将RGC-5置于缺氧条件(5%O2,5%CO2,90%N2)下培养12h、24h和48h,观察不同浓度牛磺酸(0.01mM、0.1mM和1mM)对RGC-5形态、乳酸脱氢酶(Lactatedehydrogenase,LDH)释放率以及细胞凋亡的影响。结果:RGC-5经缺氧处理后部分细胞皱缩、变圆和脱落,LDH释放率升高,其中12h,24h和48hLDH释放率分别为(11.57±2.08)%,(17.76±3.96)%和(46.95±6.70)%,而牛磺酸处理组LDH释放率均降低,其中0.1mM牛磺酸作用最显著,12h,24h和48h缺氧后LDH释放率分别为(7.76±2.00)%,(9.14±2.99)%和(27.15±5.14)%;RGC-5缺氧24h后凋亡细胞显著增加(16.20±2.82)%,而0.1mM牛磺酸处理组凋亡率较低(8.90±1.54)%。结论:牛磺酸对缺氧条件下RGC-5具有明显的保护作用。 展开更多

关键词 牛磺酸 缺氧 rgc-5

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转基因视网膜神经节细胞系RGC-5的研究进展 被引量：6

2

作者 杜秀娟 刘金华 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2006年第5期553-556,共4页

为研究青光眼性视网膜神经节细胞(RGCs)损害的细胞和分子机制,多种细胞培养模型已经建立,但是转基因的视网膜神经节细胞RGC-5细胞系在国内未见报道。RGC-5细胞系是应用鼠视网膜细胞通过转染技术建立的,除了其形态和电生理特性与RGCs有... 为研究青光眼性视网膜神经节细胞(RGCs)损害的细胞和分子机制,多种细胞培养模型已经建立,但是转基因的视网膜神经节细胞RGC-5细胞系在国内未见报道。RGC-5细胞系是应用鼠视网膜细胞通过转染技术建立的,除了其形态和电生理特性与RGCs有所不同外,细胞的生长条件以及细胞膜或者细胞内表达的物质与RGCs一致。应用RGC-5细胞系已经建立了多种凋亡模型,研究发现这些模型的细胞在凋亡时的基因变化以及对神经保护剂的反应都与RGCs一致。因此加强对RGC-5的研究和应用,对进一步阐明RGCs的损伤和保护机制将非常有意义。现就这个细胞系的建立及已做的相关研究做一综述。 展开更多

关键词 rgc-5细胞系 转基因视网膜神经节细胞 细胞培养 视神经保护

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Etoposide经由caspase依赖途径诱导RGC-5细胞凋亡 被引量：1

3

作者 李光宇 范斌 李亚萍 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2008年第8期598-601,共4页

目的研究etoposide诱导视网膜神经节细胞RGC-5细胞死亡的分子机制。方法建立etoposide诱导的RGC-5细胞死亡模型,应用APOPercentageTM及原位TUNEL染色确定RGC-5细胞的死亡方式,并进而利用Westernblot检测细胞内活化caspase-3及PARP-1的... 目的研究etoposide诱导视网膜神经节细胞RGC-5细胞死亡的分子机制。方法建立etoposide诱导的RGC-5细胞死亡模型,应用APOPercentageTM及原位TUNEL染色确定RGC-5细胞的死亡方式,并进而利用Westernblot检测细胞内活化caspase-3及PARP-1的变化情况,并通过广谱caspase抑制剂间接证明是否有caspase依赖途径的激活。结果相对高浓度的etoposide(1～10μmol/L)可以迅速降低RGC-5细胞的活性并诱导死亡;APOPercentageTM及原位TUNEL染色确定etoposide是以凋亡的方式诱导RGC-5细胞死亡;Westernblot显示etoposide诱导后的RGC-5细胞中caspase-3被激活并伴有PARP-1的降解片段出现;广谱caspase抑制剂Z-VAD-fmk可以保护etoposide诱导的RGC-5细胞,提高细胞活性。结论Etoposide经由caspase依赖途径诱导RGC-5细胞凋亡。 展开更多

关键词 视网膜神经节细胞 rgc-5细胞 ETOPOSIDE 细胞凋亡 caspase依赖途径

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Staurosporine诱导RGC-5细胞分化作用的研究

4

作者 李光宇 范斌 +1 位作者 李亚萍 崔极哲 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2008年第10期721-725,共5页

目的观察Staurosporine是否可以诱导视网膜神经节细胞-5(RGC-5)的分化。方法正常培养RGC-5细胞,应用500nmol/L Staurosporine诱导RGC-5细胞分化,并在诱导后不同时间段连续观察细胞形态的变化。应用免疫荧光检测视网膜神经节细胞(RGCs)... 目的观察Staurosporine是否可以诱导视网膜神经节细胞-5(RGC-5)的分化。方法正常培养RGC-5细胞,应用500nmol/L Staurosporine诱导RGC-5细胞分化,并在诱导后不同时间段连续观察细胞形态的变化。应用免疫荧光检测视网膜神经节细胞(RGCs)阳性标志因子Thy-1和Brn-3的表达,应用Western Blot、RT-PCR分别定量检测诱导分化后RGC-5细胞中的Thy-1和Brn-3蛋白表达及mRNA的转录情况。结果应用500nmol/L Staurosporine诱导后的RGC-5形态上表现出增生停止,胞体周围纤长轴突生长,轴突末端可见类似突触结构。500nmol/L Staurosporine可以诱导RGC-5细胞中RGCs阳性标志因子Thy-1和Brn-3转录及表达上调。结论500nmol/L Staurosporine可以有效地诱导RGC-5细胞向成熟RGCs分化。 展开更多

关键词 rgc-5细胞 STAUROSPORINE 细胞分化 THY-1 Brn-3

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绿原酸对H2O2致小鼠RGC-5细胞损伤的保护作用 被引量：6

5

作者 姜逸 胡娜 +4 位作者 袁琳 林敏 钟霄毓 陆敏 陆雄 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2672-2676,共5页

目的探究绿原酸是否通过调控自噬相关蛋白LC3、p62恢复H_(2)O_(2)致小鼠RGC⁃5细胞损伤所抑制的细胞自噬的保护作用。方法体外培养小鼠视网膜神经节细胞系RGC⁃5,采用H_(2)O_(2)间接模拟高血糖代谢状态导致的氧化应激,给予不同浓度绿原酸... 目的探究绿原酸是否通过调控自噬相关蛋白LC3、p62恢复H_(2)O_(2)致小鼠RGC⁃5细胞损伤所抑制的细胞自噬的保护作用。方法体外培养小鼠视网膜神经节细胞系RGC⁃5,采用H_(2)O_(2)间接模拟高血糖代谢状态导致的氧化应激,给予不同浓度绿原酸处理,随后采用MTT法检测细胞活性,Hochest染色观察细胞数,透射电子显微镜观察细胞超微结构,Western blot法检测自噬关键蛋白LC3、p62表达。结果与正常组比较,模型组RGC⁃5细胞活性降低(P<0.01),细胞数减少(P<0.01),线粒体和内质网肿胀变性,LC3⁃Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值降低(P<0.01),p62蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,绿原酸给药浓度在25~100μmol/L范围内呈剂量依赖性地增加细胞活性和细胞数,且100μmol/L浓度效果最佳(P<0.01),细胞内形成自噬泡,LC3⁃Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值升高(P<0.01),p62蛋白表达降低(P<0.01)。结论绿原酸可以通过上调LC3⁃Ⅱ/Ⅰ蛋白表达比值,促进p62蛋白消耗,促进自噬泡形成,降解H_(2)O_(2)破坏的细胞器从而恢复RGC⁃5细胞活性。 展开更多

关键词 绿原酸 糖尿病视网膜病变 rgc-5 自噬

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应激下β淀粉样蛋白在RGC-5细胞的表达

6

作者 何媛 张纯涛 《中国伤残医学》 2013年第2期34-36,共3页

目的:Aβ(β-Amyloid)在RGC应激损伤中起重要作用,但是其具体的产生过程、在细胞内的存在形式以及损伤机制都尚未明确,该机制的阐明有助于为临床视神经保护提供新的治疗靶点。本研究初步检测Aβ在氧化应激条件下在RGC-5细胞内的表达。方... 目的:Aβ(β-Amyloid)在RGC应激损伤中起重要作用,但是其具体的产生过程、在细胞内的存在形式以及损伤机制都尚未明确,该机制的阐明有助于为临床视神经保护提供新的治疗靶点。本研究初步检测Aβ在氧化应激条件下在RGC-5细胞内的表达。方法:传代培养RGC-5细胞系,采用免疫荧光方法检测不同浓度H2O2对RGC-5细胞内Aβ水平产生的影响。结果:随着H2O2浓度的增加,RGC-5细胞密度降低、细胞死亡率增加,Aβ表达增强。结论:Aβ蛋白在氧化应激条件下可能参与了RGC-5细胞的损伤。 展开更多

关键词 氧化应激 Β淀粉样蛋白 rgc-5细胞 表达

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在低氧损伤中牛磺酸对视网膜神经节转化细胞RGC-5抗氧化作用的研究 被引量：2

7

作者 刘凤瑾 陈卡 +1 位作者 糜漫天 舒芙蓉 《现代生物医学进展》 CAS 2009年第11期2083-2086,共4页

目的:观察低氧(Hypoxia,Hyp)对大鼠视网膜神经节转化细胞(retinaganglioncell-5,RGC-5)氧化应激损伤的影响及牛磺酸(Taurine,Tau)的防护效应。方法:将RGC-5置于低氧条件(5%O2,5%CO2,90%N)2,加入不同浓度的牛磺酸(0.05mM、0.1mM、0.5mM、... 目的:观察低氧(Hypoxia,Hyp)对大鼠视网膜神经节转化细胞(retinaganglioncell-5,RGC-5)氧化应激损伤的影响及牛磺酸(Taurine,Tau)的防护效应。方法:将RGC-5置于低氧条件(5%O2,5%CO2,90%N)2,加入不同浓度的牛磺酸(0.05mM、0.1mM、0.5mM、1mM)预处理后培养12h,24h和48h,使用MTT法检测细胞活力,并通过对NO、GSH、MDA等指标的检测,观察牛磺酸对RGC-5的保护效应。结果:低氧处理后RGC-5细胞活力明显降低(P<0.05),牛磺酸处理组细胞活力明显高于低氧组,其中0.1mM牛磺酸组作用最为显著(P<0.05);低氧组与常氧组比较,RGC-5的NO、GSH含量明显降低(P<0.05),而MDA含量显著升高(P<0.05);牛磺酸处理组与低氧组比较,RGC-5细胞GSH,NO的含量显著升高(P<0.05),而MDA的含量显著降低(P<0.05)。结论:牛磺酸能有效增强低氧损伤中RGC-5细胞的活力,其机制可能与牛磺酸可以提高其抗氧化能力有关。 展开更多

关键词 牛磺酸 低氧 rgc-5 抗氧化作用

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益气明目颗粒含药血清对氯化钴诱导缺氧损伤RGC-5细胞的保护作用 被引量：2

8

作者 陈文黎 陈强 +4 位作者 魏宇娇 孙志超 倘孟莹 陈爽 张丽霞 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期521-525,共5页

目的观察益气明目颗粒含药血清对氯化钴(CoCl2)诱导缺氧损伤小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)的保护作用。方法采用CoCl2构建RGC-5缺氧损伤模型,分别用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,生物透射电镜观察细胞超微结构改变,... 目的观察益气明目颗粒含药血清对氯化钴(CoCl2)诱导缺氧损伤小鼠视网膜神经节细胞(RGC-5)的保护作用。方法采用CoCl2构建RGC-5缺氧损伤模型,分别用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,生物透射电镜观察细胞超微结构改变,试剂盒检测细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)含量的变化,RT-PCR检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、半胱天冬酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤因子相关x蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)相关mRNA表达水平。结果不同浓度含药血清组细胞存活率均高于缺氧模型组(P<0.05,P<0.01),且2.5%、5%含药血清组细胞存活率显著高于同浓度空白血清组(P<0.05),抑制细胞凋亡,减轻细胞超微结构损伤,提高细胞GSH-Px和SOD水平(P<0.01);与模型组相比,2.5%、5%浓度含药血清能够下调细胞HIF-1α、Caspase-3、Bax的表达(P<0.05,P<0.01),升高Bcl-2的表达(P<0.01)。结论益气明目颗粒含药血清能够通过抗氧化应激作用减轻CoCl2诱导的RGC-5缺氧损伤。 展开更多

关键词 益气明目颗粒 青光眼 rgc-5 缺氧 细胞凋亡

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ATP与P2X_7受体在Müller细胞激活导致视网膜神经节细胞株RGC-5凋亡中的作用研究 被引量：2

9

作者 薛博 季敏 管怀进 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期182-188,共7页

目的 :探讨Müller细胞胶质化激活对RGC-5细胞的影响及ATP与P2X7受体在其中的相关作用。方法:纯化培养Müller细胞、RGC-5细胞株,免疫荧光进行细胞鉴定,并观察加入DHPG后Müller细胞的GFAP表达情况。荧光素酶法检测加入DHPG... 目的 :探讨Müller细胞胶质化激活对RGC-5细胞的影响及ATP与P2X7受体在其中的相关作用。方法:纯化培养Müller细胞、RGC-5细胞株,免疫荧光进行细胞鉴定,并观察加入DHPG后Müller细胞的GFAP表达情况。荧光素酶法检测加入DHPG后Müller细胞外ATP的含量变化;DHPG刺激后的培养液作为条件培养基加入RGC-5细胞株(RGC-5预先使用MPEP及MPMQ处理2 h),TUNEL法检测RGC-5凋亡情况,预先加入P2X7受体阻断剂亮蓝G(brilliant blue G,BBG)后检测RGC-5的凋亡情况。同时使用Western blot检测抗凋亡蛋白及促凋亡蛋白Bcl-2和Bax的变化情况。免疫荧光及Western blot检测RGC-5上P2X7受体的表达变化。结果:DHPG激活Müller细胞后可以导致细胞外ATP的增加;激活的Müller细胞条件培养基(conditioned medium,CM)可以导致RGC-5凋亡的明显增加。而BBG可以抑制RGC-5凋亡的增加,同时Western blot也显示与对照组相比CM显著降低RGC-5细胞上的Bcl-2蛋白水平,但增加了Bax的蛋白表达,而当预先加入BBG后再用CM处理则呈现相反的结果。另外Western blot及免疫荧光显示加入条件培养基后RGC-5细胞的P2X7受体蛋白表达增加。结论:Müller细胞的激活可以导致RGC-5细胞的凋亡,该现象可能与Müller细胞激活引起的ATP释放增加及RGC-5上P2X7受体有关。 展开更多

关键词 Müller细胞激活 P2X7受体 ATP 凋亡 rgc-5

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人参皂苷Rb1对H_2O_2损伤RGC-5细胞的保护作用及机制探讨 被引量：1

10

作者 李颖 张秀丽 汪卓 《山东医药》 CAS 2014年第47期5-8,共4页

目的观察人参皂苷Rb1对H2O2损伤RGC-5细胞的保护作用,并探讨其机制。方法采用MTT方法检测人参皂苷Rb1对H2O2损伤RGC-5的细胞活力的影响,试剂盒方法检测SOD活性、GSH含量,免疫荧光化学染色法检测碘化丙啶(PI)、Caspase-3、Ca2+。结果 A、... 目的观察人参皂苷Rb1对H2O2损伤RGC-5细胞的保护作用,并探讨其机制。方法采用MTT方法检测人参皂苷Rb1对H2O2损伤RGC-5的细胞活力的影响,试剂盒方法检测SOD活性、GSH含量,免疫荧光化学染色法检测碘化丙啶(PI)、Caspase-3、Ca2+。结果 A、B、C、D、E组在490 nm处检测细胞活力分别为0.266±0.038、0.299±0.025、0.314±0.014、0.222±0.031、0.391±0.041,A、B、C、E组与D组比较,P均<0.05。空白对照组、人参皂苷Rb1组、H2O2损伤组SOD活性分别为19.88±0.12、17.12±0.32、15.47±0.21,人参皂苷Rb1组、空白对照组分别与H2O2损伤组比较,P均<0.05。空白对照组、人参皂苷Rb1组、H2O2损伤组GSH含量分别为15.67±0.18、14.98±0.25、13.71±0.31,人参皂苷Rb1组、空白对照组分别与H2O2损伤组比较,P均<0.05。空白对照组、人参皂苷Rb1组、H2O2损伤组Caspase-3阳性率分别为12%±0.25%、57%±0.47%、28%±0.18%,PI染色阳性率分别为16%±0.25%、18%±0.45%、32%±0.56%,Ca2+荧光染色阳性率分别为8%±0.11%,31%±1.20%,19%±0.34%,人参皂苷Rb1组与H2O2损伤组比较,P均<0.05。结论人参皂苷Rb1能够拮抗H2O2对RGC-5细胞的氧化损伤,其机制可能为提高SOD活性、GSH含量,降低Caspase-3表达,减少Ca2+水平。 展开更多

关键词 人参皂苷RB1 过氧化氢 rgc-5细胞 CASPASE-3蛋白 碘化丙啶

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VEGF-B通过ERK1/2信号通路对RGC-5细胞缺氧损伤的保护作用 被引量：1

11

作者 刘玉洁 牟莉 李明新 《泰山医学院学报》 CAS 2015年第9期961-966,共6页

目的探讨血管内皮生长因子B(vascular endothelial growth factor-B,VEGF-B)对氯化钴(cobalt chloride hexahydrate,Co Cl2)诱导的大鼠视网膜神经节细胞株(retinal ganglion cells-5,RGC-5)缺氧损伤的保护作用及其机制。方法 Co Cl2孵育... 目的探讨血管内皮生长因子B(vascular endothelial growth factor-B,VEGF-B)对氯化钴(cobalt chloride hexahydrate,Co Cl2)诱导的大鼠视网膜神经节细胞株(retinal ganglion cells-5,RGC-5)缺氧损伤的保护作用及其机制。方法 Co Cl2孵育RGC-5细胞24h诱导缺氧模型。将RGC-5细胞分为正常组、缺氧组、VEGF-B+缺氧组、PD98059(ERK1/2阻滞剂,PD)+VEGF-B+缺氧组。倒置显微镜观察细胞的形态变化;CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞仪Annexin V-APC/7-AAD双染色法检测细胞凋亡率;Western Blot检测蛋白Bcl-2、Bax及ERK1/2、pERK1/2表达水平。结果 1缺氧使细胞皱缩变小变圆,正常组及药物组细胞体积大有突起。2与正常组相比,缺氧使细胞存活率减低;与缺氧组相比,药物组细胞存活率均升高。3与正常组相比,缺氧组正常细胞率下降、细胞凋亡率升高;与缺氧组相比,药物组正常细胞率升高、细胞凋亡率下降。4与正常组相比,缺氧组Bcl-2、Bcl-2/Bax比值降低,Bax增多;与缺氧组相比,药物组Bcl-2、Bcl-2/Bax比值增高,Bax减少。四组总ERK1/2表达量不变,pERK1/2表达量缺氧组较正常组增多,VEGF-B+缺氧组较缺氧组表达量高,PD+VEGF-B+缺氧组较VEGF-B+缺氧组减少。结论 VEGF-B部分通过ERK1/2信号通路增加Bcl-2表达,降低Bax表达从而抑制Co Cl2诱导的RGC-5细胞凋亡。 展开更多

关键词 VEGF-B rgc-5细胞株 缺氧损伤 凋亡 ERK1/2信号通路

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理肺散提取物乙酸乙酯层的化学成分及其对RGC-5细胞损伤的保护作用研究

12

作者 王钰君 尹国平 +2 位作者 胡昌华 曾令高 熊有明 《中国药业》 2024年第3期1-6,共6页

目的分析理肺散提取物乙酸乙酯层的化学成分,并探讨其对RGC-5细胞损伤的保护作用。方法采用硅胶柱、MCI柱等柱色谱技术对理肺散提取物乙酸乙酯层进行分离,采用制备型高效液相色谱进行纯化,利用核磁共振法对化合物进行结构鉴定,采用CCK-... 目的分析理肺散提取物乙酸乙酯层的化学成分,并探讨其对RGC-5细胞损伤的保护作用。方法采用硅胶柱、MCI柱等柱色谱技术对理肺散提取物乙酸乙酯层进行分离,采用制备型高效液相色谱进行纯化,利用核磁共振法对化合物进行结构鉴定,采用CCK-8法检测化合物对丙泊酚诱导的RGC-5细胞损伤的保护作用。结果共分离鉴定出15个化合物,分别为capsaicin(化合物1)、homodihydrocapsaicinⅠ(化合物2)、secoisolariciresinol(化合物3)、lariciresinol(化合物4)、dehydrodiconiferyl alcohol(化合物5)、cleomiscosin A(化合物6)、curcasinlignan B(化合物7)、syringaresinol(化合物8)、oleanolic acid(化合物9)、ursolic acid(化合物10)、methyl 4-benzoyloxy-3-methoxybenzeneacetate(化合物11)、(R)-6-methyl-4,6-bis(4-methylpent-3-enyl)cyclohexa-1,3-dienecarbaldehyde(化合物12)、2-hydroxy-1-methoxy-anthraquinone(化合物13)、isoscopoletin(化合物14)、1H-indole-3-carboxaldehyde(化合物15)。化合物1,4,6-8对丙泊酚诱导的RGC-5细胞损伤具有一定保护作用,其中化合物4、化合物7活性最强,分别使RGC-5细胞的活力提升了15.89%和13.09%。结论化合物1-7为首次从耳草属中分离发现,化合物9-10,13为首次从理肺散中分离发现。化合物4、化合物7对丙泊酚诱导的RGC-5细胞损伤显示出较好的保护作用。 展开更多

关键词 理肺散 耳草属 化学成分 rgc-5细胞损伤 保护作用

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注射用血栓通冻干粉对氧化应激导致的RGC-5细胞凋亡的保护作用

13

作者 马丹 孔宁 《广东微量元素科学》 CAS 2016年第2期43-45,共3页

目的观察注射用血栓通冻干粉是否对氧化应激导致的RGC-5细胞凋亡有保护作用。方法采用过氧化氢制备氧化应激损伤模型。分为4个组,分别为空白对照组、0.5 mg血栓通观察组,2 mg血栓通观察组,10 mg血栓通观察组,利用上述浓度培育RGC-5细胞2... 目的观察注射用血栓通冻干粉是否对氧化应激导致的RGC-5细胞凋亡有保护作用。方法采用过氧化氢制备氧化应激损伤模型。分为4个组,分别为空白对照组、0.5 mg血栓通观察组,2 mg血栓通观察组,10 mg血栓通观察组,利用上述浓度培育RGC-5细胞24 h后利用400μm浓度的过氧化氢制备氧化应激模型。随后MTT法观察细胞凋亡情况。结果经过不同浓度注射用血栓通培育后的细胞,凋亡率明显下降,各组间的差异有统计学意义(P<0.05)。结论注射用血栓通对氧化应激损伤导致的RGC-5细胞凋亡有保护作用。 展开更多

关键词 血栓通 rgc-5细胞 氧化应激 凋亡

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人参皂甙Rgl激活RGC-5细胞Akt信号通路拮抗谷氨酸兴奋毒性的实验研究 被引量：4

14

作者 郭小东 刘洁 +2 位作者 胡文 王育君 杨虹瑜 《中国实用眼科杂志》 CSCD 北大核心 2013年第8期1072-1076,共5页

目的探讨人参皂苷Rgl对谷氨酸毒性损伤大鼠视网膜神经节细胞株RGC-5的保护作用及信号通路。方法建立RGC-5谷氨酸兴奋毒损伤模型，人参皂苷Rgl预处理后，MTF法观察RGCs的存活率，AnnexinV／PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡，RT—PCR检测各... 目的探讨人参皂苷Rgl对谷氨酸毒性损伤大鼠视网膜神经节细胞株RGC-5的保护作用及信号通路。方法建立RGC-5谷氨酸兴奋毒损伤模型，人参皂苷Rgl预处理后，MTF法观察RGCs的存活率，AnnexinV／PI染色流式细胞仪检测细胞凋亡，RT—PCR检测各组蛋白激酶B（Akt）mRNA表达，免疫印迹法观察Rgl预处理对Akt蛋白表达的影响。结果Glu组细胞吸光度值减少，细胞存活率为（41．9±5．4）％，与正常对照和Rgl处理组比较存活率的差异有统计学意义（P〈0．05）；Rgl处理组细胞的吸光度值比Glu组上升，细胞存活率提高到（68．2±4．7）％；Glu组坏死和凋亡晚期细胞率为（32．8±5．1）％，早期凋亡率为（29．4±2．1）％；Rgl组坏死和凋亡晚期细胞率为（9．2±1．1）％，早期凋亡率为（16．5±2．8）％，差异有统计学意义（P〈0．05）；Rgl处理组AktmRNA和蛋白表达水平均高于Glu和正常对照组。结论人参皂苷Rgl可通过激活RGC-5细胞内Akt信号通路对抗谷氨酸引起兴奋毒性作用，实现保护作用。 展开更多

关键词 人参皂甙RG1 视网膜神经节细胞-5 谷氨酸毒性作用 蛋白激酶B

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miR-182在多氯联苯(PCB_(1254))暴露后视网膜神经节细胞内的表达及意义 被引量：2

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作者 张晓倩 张昕 +3 位作者 李楠 池霞 郭锡熔 童梅玲 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期35-39,共5页

目的:研究多氯联苯(polychlorinated biphenyls,PCBs)PCB1254引起视网膜神经节细胞毒性作用的可能机制。方法:分别配制浓度为0.125、0.250、0.500、1.000 mg/L的PCB1254对RGC-5细胞进行暴露处理,并设立空白对照及0.01%甲醇对照组,测定... 目的:研究多氯联苯(polychlorinated biphenyls,PCBs)PCB1254引起视网膜神经节细胞毒性作用的可能机制。方法:分别配制浓度为0.125、0.250、0.500、1.000 mg/L的PCB1254对RGC-5细胞进行暴露处理,并设立空白对照及0.01%甲醇对照组,测定细胞内miR-182表达水平;利用miR-182类似物或抑制剂转染RGC-5细胞,使miR-182上调或下调,分别检测细胞凋亡、细胞增殖功能和细胞周期;使用0.5、1.0 mg/L的PCB1254刺激RGC-5细胞,再转染miR-182类似物,分别检测细胞凋亡、细胞增殖功能。结果:随着PCB1254浓度的增高,RGC-5细胞内miR-182的表达逐渐被抑制,当浓度≥0.5 mg/L时,与对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。在RGC-5细胞内沉默miR-182可导致Caspase-3活性增高(P<0.05),表明miR-182沉默促进细胞凋亡;CCK-8法显示miR-182沉默会导致RGC-5细胞活力降低(P<0.05),表明miR-182沉默会抑制细胞增殖;Mi R-182沉默对RGC-5细胞周期无显著影响(P>0.05)。使用miR-182类似物干预0.5、1.0 mg/L PCB1254暴露后的RGC-5细胞,发现细胞内Caspase-3活性下降(P<0.05)、细胞活力增加(P<0.05),表明miR-182可改善PCB1254对RGC-5细胞凋亡及增殖功能的影响。结论:PCB1254可能通过抑制miR-182的表达来影响RGC-5细胞的增殖和凋亡,进而导致视功能损害。 展开更多

关键词 多氯联苯 PCB1254 miR-182 rgc-5细胞 细胞增殖 细胞凋亡

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二氢睾酮对大鼠视网膜神经节细胞-5神经突起再生及RhoA和神经突蛋白表达的影响 被引量：1

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作者 杨秀丽 邓宗勇 李平华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第2期207-211,共5页

目的探讨二氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)对损伤后大鼠视网膜神经节细胞-5(retinal ganglion cell-5,RGC-5)神经突起再生及RhoA和神经突蛋白(neuritin)表达的影响。方法 RGC-5经十字孢碱诱导分化后,将细胞分为正常对照组、模型组[用... 目的探讨二氢睾酮(dihydrotestosterone,DHT)对损伤后大鼠视网膜神经节细胞-5(retinal ganglion cell-5,RGC-5)神经突起再生及RhoA和神经突蛋白(neuritin)表达的影响。方法 RGC-5经十字孢碱诱导分化后,将细胞分为正常对照组、模型组[用连二亚硫酸钠(Na2S2O4)制备大鼠RGC-5神经突起氧糖剥夺/复氧损伤模型]和DHT干预组(终浓度分别为1、10、100 nmol/L),采用MTT比色法测定各组细胞的存活率;显微镜下观察神经突起长度和数量;RT-PCR和Western blot法分别检测RGC-5中RhoA和Neuritin基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平。结果与模型组比较,10和100 nmol/L DHT干预组及正常对照组的细胞存活率和神经突起数量均明显上升(P均<0.05);1、10和100 nmol/L DHT干预组及正常对照组的神经突起长度、Neuritin基因mRNA转录水平和蛋白表达量均明显增加(P均<0.05),RhoA基因mRNA转录水平及蛋白表达量均明显减少(P均<0.05)。结论 RhoA和Neuritin可能是影响RGC-5神经突起再生的重要因子,DHT可能通过调节RhoA和Neuritin的表达,从而发挥神经保护作用。 展开更多

关键词 二氢睾酮 视网膜神经节细胞-5 神经突起 RHOA 神经突蛋白

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青光安颗粒剂对高眼压大鼠及谷氨酸诱导损伤的视网膜神经节细胞-5凋亡的影响 被引量：1

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作者 时健 王紫艳 +3 位作者 刘倩宏 陈立浩 吴凯 姚小磊 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期2507-2512,共6页

目的:观察青光安颗粒剂对高眼压模型大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的凋亡及其含药血清对谷氨酸诱导损伤的RGC-5凋亡的作用。方法:取SD大鼠60只分为正常组、模型组、青光安组。采用巩膜上静脉烧灼的方法建立慢性高眼压模型,造模后测量各组... 目的:观察青光安颗粒剂对高眼压模型大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)的凋亡及其含药血清对谷氨酸诱导损伤的RGC-5凋亡的作用。方法:取SD大鼠60只分为正常组、模型组、青光安组。采用巩膜上静脉烧灼的方法建立慢性高眼压模型,造模后测量各组眼压,3个月后成模,取各组大鼠视网膜行TUNEL法检测RGCs凋亡情况。取RGC-5分为5组:空白血清组(A组)、谷氨酸模型组(B组)、青光安含药血清组(C组)、3-MA阻断剂组(D组)以及青光安含药血清+3-MA组(E组)。通过细胞培养后,除A组以外,其余组均中加入谷氨酸模拟青光眼损伤视神经。采用生物显微镜观察细胞形态,ELISA检测细胞外培养液LDH含量,Western blot检测Cyt C、Caspase-3的蛋白表达情况,以及流式细胞仪检测RGC-5凋亡变化。结果:TUNEL检测显示模型组视网膜各层形态均发生改变,视网膜全层厚度减少,神经节细胞个数明显减少;青光安组少量凋亡细胞存在于RGCs。流式细胞仪检测显示,与A组比较,E组显著抑制细胞凋亡(P<0.05)。Western Blot显示,与A组比较,Cyt C、Caspase-3在其他4组中表达均显著升高(P<0.05);与B组比较,C组和E组中Cyt C、Caspase-3表达水平均显著降低(P<0.05)。ELISA检测显示,与A组比较,C组和E组中LDH含量显著下降(P<0.05)。结论:青光安能够通过减少LDH的释放,减少RGC-5受损程度,并抑制Cyt C的释放从而抑制Caspase-3的激活,逆转了由谷氨酸诱导RGC-5细胞所致的细胞凋亡。 展开更多

关键词 青光安颗粒剂 视网膜神经节细胞-5 乳酸脱氢酶 细胞色素C 胱天蛋白酶3 青光眼 细胞凋亡 谷氯酸

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基于TFEB-溶酶体途径探讨滋阴明目地黄汤对视网膜缺血再灌注损伤的保护作用及机制

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作者 李维 谭谈 黄凌飞 《湖南中医杂志》 2025年第10期158-164,182,共8页

目的:基于转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)-溶酶体途径探讨滋阴明目地黄汤抑制视网膜神经节细胞-5(retinal ganglion cell-5,RGC-5)细胞铁死亡的分子机制。方法:诱导建立视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion i... 目的:基于转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)-溶酶体途径探讨滋阴明目地黄汤抑制视网膜神经节细胞-5(retinal ganglion cell-5,RGC-5)细胞铁死亡的分子机制。方法:诱导建立视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia-reperfusion injury, RIRI)细胞模型,分别给予TFEB干扰RNA质粒(transcriptionfactor EB siRNA Plasmid, si-TFEB)、滋阴明目地黄汤含药血清、滋阴明目地黄汤含药血清+TFEB重组腺病毒载体(recombinant adenovirus vector expressing transcription factor EB,Ad-TFEB)干预。采用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐比色[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]法、细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞存活率及增殖活性,蛋白质免疫印迹(Western Blot, WB)检测TFEB溶酶体及溶酶体相关膜蛋白1(lysosome-associated membrane protein 1,LAMP-1)、铁死亡谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)和胱氨酸/谷氨酸反向转运体(cystine/glutamate antiporter, xCT)表达;酶联免疫吸附测定(Enzyme-Linked Immunosorbent, ELISA)检测二价铁离子(Fe2+)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)水平。结果:与滋阴明目地黄汤含药血清+Ad-TFEB组及模型组相比,滋阴明目地黄汤药物组及TFEB沉默组RGC-5细胞存活率及细胞增殖活性增高(P<0.05),GPX4、xCT蛋白表达增高(P<0.05),TFEB溶酶体、LAMP-1的表达降低(P<0.05),Fe2+、MDA含量降低(P<0.01),GSH含量升高(P<0.01)。结论:滋阴明目地黄汤可通过调控TFEB-溶酶体途径、抑制RGC-5细胞铁死亡对RIRI发挥保护作用。 展开更多

关键词 视网膜缺血再灌注损伤 滋阴明目地黄汤 TFEB-溶酶体途径 铁死亡 rgc-5细胞 体外研究

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叶黄素抑制叔丁基过氧化氢诱导的视网膜神经节细胞凋亡 被引量：4

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作者 张婵娟 赵佳仪 +5 位作者 黄翠芹 李勤 王珍 甘丹卉 朱丽红 陆大祥 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1043-1050,共8页

目的:观察叶黄素(lutein)对叔丁基过氧化氢(t-BHP)处理的视网膜神经节细胞(RGC-5细胞系)的保护效应并探讨其作用机制。方法:用免疫荧光染色检测视网膜神经节特异性蛋白Brn-3和神经微管结合蛋白MAP-2的表达来鉴定RGC-5细胞;将RGC-5细胞... 目的:观察叶黄素(lutein)对叔丁基过氧化氢(t-BHP)处理的视网膜神经节细胞(RGC-5细胞系)的保护效应并探讨其作用机制。方法:用免疫荧光染色检测视网膜神经节特异性蛋白Brn-3和神经微管结合蛋白MAP-2的表达来鉴定RGC-5细胞;将RGC-5细胞随机分为对照组、t-BHP处理组、t-BHP和lutein共同处理组、lutein处理组,培养24 h,MTT实验检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡;免疫细胞化学技术检测caspase-3蛋白的活化情况;Western blot检测Bcl-2/Bax、cleaved caspase-3、JNK和c-Jun蛋白的变化。结果:MTT实验和流式细胞检测结果显示,lutein能提高t-BHP处理的RGC-5细胞的活力,并降低t-BHP诱导的RGC-5细胞凋亡;免疫荧光结果显示lutein能抑制t-BHP诱导的caspase-3的活化;与对照组比较,t-BHP处理后RGC-5细胞抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调(P<0.05),Bax/Bcl-2比率升高,cleaved caspase-3表达上调(P<0.05),JNK和c-Jun蛋白的磷酸化水平增加(P<0.05),t-BHP的上述作用可被lutein部分逆转。结论:Lutein能够降低t-BHP诱导的RGC-5细胞凋亡,其机制与其上调Bcl-2的表达、抑制caspase-3的活化并降低JNK和c-Jun蛋白的磷酸化有关。 展开更多

关键词 叔丁基过氧化氢 叶黄素 rgc-5细胞系 细胞凋亡

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PARP-1在光诱导视网膜神经节细胞凋亡中的作用

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作者 李光宇 范斌 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2008年第11期805-809,共5页

目的研究核酶PARP-1在光诱导的视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡中的作用。方法应用1000 Lux光诱导视网膜神经节细胞-5(RGC-5)光损伤模型;利用MTT、APOPercentageTM实验及原位TUNEL确定光诱导RGC-5细胞死亡的模式;通过半定量RT-PCR和Western ... 目的研究核酶PARP-1在光诱导的视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡中的作用。方法应用1000 Lux光诱导视网膜神经节细胞-5(RGC-5)光损伤模型;利用MTT、APOPercentageTM实验及原位TUNEL确定光诱导RGC-5细胞死亡的模式;通过半定量RT-PCR和Western blot方法评估光对RGC-5细胞中核酶PARP-1表达的影响;探讨PARP-1抑制剂尼克酰胺和NU1025对光损伤中RGC-5细胞的保护作用。结果1000 Lux光以时间依赖的方式降低体外培养的RGC-5细胞活性,光暴露4d明显诱导RGC-5细胞凋亡。RGC-5细胞光损伤导致核酶PARP-1转录和表达的上调(F=224.59,P<0.01,n=12,ANOVA,Dunnett t test),PARP-1抑制剂尼克酰胺和NU1025显著提高细胞活性(F=312.87,P<0.01,n=12,ANOVA,Dunnett t test)。结论1000 Lux光可以诱导体外培养的RGC-5细胞凋亡,核酶PARP-1在该细胞凋亡分子机制中起重要作用。 展开更多

关键词 光损伤 细胞凋亡 视网膜神经节细胞 rgc-5细胞 PARP-1

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