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PNPase调控线粒体microRNA对线粒体DNA的保护作用 被引量：1
1
作者 李力力 游扬 +1 位作者 周源 凌贤龙 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期780-784,共5页
目的探讨抑制PNPase表达对线粒体microRNA（MitomiRs）表达的影响以及对线粒体DNA的保护作用。方法以人肝癌细胞SK-Hepl、HepG2和人骨肉瘤细胞U2OS为研究对象，用带绿色荧光蛋白的（greenfluorescentprotein，GFP）PNPaseshRNA慢病毒转... 目的探讨抑制PNPase表达对线粒体microRNA（MitomiRs）表达的影响以及对线粒体DNA的保护作用。方法以人肝癌细胞SK-Hepl、HepG2和人骨肉瘤细胞U2OS为研究对象，用带绿色荧光蛋白的（greenfluorescentprotein，GFP）PNPaseshRNA慢病毒转染细胞，采用Westernblot方法检测PNPase表达。分离细胞线粒体、提取线粒体RNA、microRNA芯片检测下调PNPase前后线粒体microRNA（MitomiRs）种类的变化；Q—PCR检测mtDNA损伤频率、ELISA方法检测线粒体8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）。结果激光共聚焦显微镜观察显示，SK—Hepl、HepG2和U20S细胞转染空载体病毒及PNPaseshRNA慢病毒转染后12～24h可见明显的绿色荧光。当MOI（转染复数）=20时，3种细胞的慢病毒转染效率达80％以上。连续观察2周，转染效率仍维持在70％～80％。Westernblot检测结果显示PNPaseshRNA组细胞PNPase蛋白表达低于正常对照组及阴性对照组。microRNA芯片显示：PNPaseshRNA后目的细胞MitomiRs表达谱发生明显变化，miR．30c-2—3p、miR-494、miR-1273g-3p、miR-4443表达上调，而miR-324—3p、miR-574—5p、miR-371b-5p、miR-6068、miR-21—5p表达下调。Q—PCR检测显示PNPaseshRNA组细胞mtDNA损伤频率减少。ELISA结果显示PNPaseshRNA组线粒体8-OHdG含量下降。结论抑制肿瘤细胞线粒体PNPase表达可导致MitomiRs表达谱发生变化，同时，肿瘤细胞mtDNA损伤减少，提示MitomiRs可能参与了mtDNA复制的调控。 展开更多
关键词 pnpase 线粒体 MitomiRs 氧化损伤
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绿脓杆菌RNA降解蛋白PNPase与RNaseE表达纯化及相互作用
2
作者 方葆 沈国森 郭珍 《浙江临床医学》 2017年第12期2319-2321,共3页
目的RNA降解复合体是RNA在生物体内更新的主要工具。PNPase通过3’到5’核酸外切酶降解RNA，RNaseE参与其调控。通过对绿脓杆菌RNA降解蛋PNPase与RNaseE进行克隆表达纯化，并获取复合物蛋白，进而揭示PNPase与RNaseE对绿脓杆菌RNA的降... 目的RNA降解复合体是RNA在生物体内更新的主要工具。PNPase通过3’到5’核酸外切酶降解RNA，RNaseE参与其调控。通过对绿脓杆菌RNA降解蛋PNPase与RNaseE进行克隆表达纯化，并获取复合物蛋白，进而揭示PNPase与RNaseE对绿脓杆菌RNA的降解机制。方法对PNPase与RNaseE基因序列进行PCR扩增，构建重组质粒，分别转入E．coliB L21中表达，应用镍离子亲和层析，离子亲和层析和分子筛纯化目的蛋PNPase与RNaseE；通过Pull-down方法验证PNPase和RNaseE的相互作用。结果成功克隆、表达、纯化绿脓杆菌PNPase与RNaseE蛋白，并通过Pull-down获得大量PNPase-RNaseE复合物。结论PNPase与RNaseE蛋白能相互作用并形成PNPase-RNaseE复合物。 展开更多
关键词 pnpase RNASE E 蛋白表达纯化 相互作用
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固定化多核苷酸磷酸化酶的特性研究 被引量：1
3
作者 邱树毅 彭志英 郭勇 《贵州工学院学报》 CAS 1992年第3期84-87,83,共5页
对用聚丙烯酰胺凝胶,制备的固定化多核苷酸磷酸化酶与游离酶的特性比较表明:在以CDP为底物时,游离酶的km=6.4×10^(-3)M,而固定化酶的km(表观)=9.14×10^(-3)M,比游离酶增大,固定化酶的最适温度范围扩宽,稳定性提高。
关键词 聚丙烯酰胺 凝胶 固定化 pnpase
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核苷磷酸化酶的工程菌构建
4
作者 段佩玲 王振宇 刘国生 《郑州铁路职业技术学院学报》 2022年第4期60-62,67,共4页
使用PCR扩增技术对来源于AEM0812菌株的核苷磷酸化酶基因进行扩增。利用克隆载体pD18-T进行连接,构建重组质粒pMD18-T-deoD,再将其导入Escherichia coli DH5α菌体内,克隆目的基因。利用表达载体pET-28a与目的基因构建重组质粒pET-28a-d... 使用PCR扩增技术对来源于AEM0812菌株的核苷磷酸化酶基因进行扩增。利用克隆载体pD18-T进行连接,构建重组质粒pMD18-T-deoD,再将其导入Escherichia coli DH5α菌体内,克隆目的基因。利用表达载体pET-28a与目的基因构建重组质粒pET-28a-deoD,导入E.coli BL21(DE3)菌体内,获得工程菌E.coli(deoD)。利用IPTG进行诱导表达,采用SDS-PAGE方法检测到在大约27 KD处出现了明显的蛋白条带,其分子量与已知的嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)的分子量(25.82 KD)一致,这表明在E.coli(deoD)中成功表达出deoD基因,同时表明成功构建了嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)工程菌。 展开更多
关键词 嘌呤核苷磷酸化酶(pnpase)表达 工程菌 基因克隆与表达
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甜菜碱对枯草芽孢杆菌合成利巴韦林的影响 被引量：3
5
作者 邢晨光 赵希景 +1 位作者 谢希贤 陈宁 《天津科技大学学报》 CAS 2009年第4期14-17,共4页
以枯草芽孢杆菌TM903为供试菌株,采用摇瓶分批补料发酵的培养方式,考察了甜菜碱添加量对枯草芽孢杆菌合成利巴韦林及其合成途径中嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)活力的影响.结果表明,初始培养基添加0.7.g/L的甜菜碱,发酵36 h后每间隔3 h流加0... 以枯草芽孢杆菌TM903为供试菌株,采用摇瓶分批补料发酵的培养方式,考察了甜菜碱添加量对枯草芽孢杆菌合成利巴韦林及其合成途径中嘌呤核苷磷酸化酶(PNPase)活力的影响.结果表明,初始培养基添加0.7.g/L的甜菜碱,发酵36 h后每间隔3 h流加0.1 g/L甜菜碱,可显著提高PNPase的相对酶活,并且使利巴韦林的产量达4.21.g/L,比未添加前提高了47.2%. 展开更多
关键词 利巴韦林 嘌呤核苷磷酸化酶 枯草芽胞杆菌 甜菜碱
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从大肠杆菌第二次提取高比活多核苷酸磷酸化酶
6
作者 江克光 沈贡民 +1 位作者 李革芳 何有裕 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 1997年第6期310-311,共2页
为提高多核苷酸磷酸化酶的收率，对原有提取工艺进行改进，将大肠杆菌经破壁后离心所丢弃的沉淀，再次破壁抽提。结果表明，第二次提取的酶比活比第一次的要高；杂蛋白明显少于第一次，且收率也高5％左右。
关键词 大肠杆菌 提取 pnpase 聚肌胞
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relA基因在重组大肠杆菌BL21合成嘌呤核苷磷酸化酶作用研究 被引量：1
7
作者 段纪甫 高黎荣 +2 位作者 李江 付水林 宫衡 《工业微生物》 CAS CSCD 2014年第3期30-34,共5页
利用Red同源重组技术敲除大肠杆菌BL21中relA基因,获得△relA突变株。进一步研究表明在LB复合培养中relA基因对大肠杆菌的生长几乎没有明显影响,但是对其重组蛋白的合成有着较大的影响:降低了25%。结果表明,relA基因在大肠杆菌表达重组... 利用Red同源重组技术敲除大肠杆菌BL21中relA基因,获得△relA突变株。进一步研究表明在LB复合培养中relA基因对大肠杆菌的生长几乎没有明显影响,但是对其重组蛋白的合成有着较大的影响:降低了25%。结果表明,relA基因在大肠杆菌表达重组蛋白方面有着较重要的作用。 展开更多
关键词 大肠杆菌 RED重组 relA基因 嘌呤核苷磷酸化酶
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微生物发酵法生产利巴韦林的研究进展
8
作者 戴艳 李琴 盛清 《科学教育》 2011年第5期80-82,共3页
利巴韦林是高效的广谱抗病毒药物。文章对它的理化性质和应用,合成原理以及生产方式进行了概述。重点则介绍了发酵法合成利巴韦林的原理、现状以及对发酵过程优化的一些研究。最后对发酵法合成利巴韦林的前景做了展望。
关键词 利巴韦林 发酵法 核苷磷酸酶 鸟苷
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