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猪萨佩罗病毒VP4蛋白多克隆抗体制备及功能验证
1
作者 钟祖昌 李本强 +6 位作者 陶洁 程靖华 石迎 刘佩红 唐攀 焦嘉杰 刘惠莉 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第4期78-84,共7页
为深入揭示猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)致病机制,以毒株SHCM2019为研究对象,原核表达VP_(4)蛋白并制备多克隆抗体。根据VP_(4)氨基酸序列进行PSV遗传进化分析,然后将VP_(4)基因与原核表达载体连接,经诱导表达得到可溶性VP_(4... 为深入揭示猪萨佩罗病毒(porcine sapelovirus,PSV)致病机制,以毒株SHCM2019为研究对象,原核表达VP_(4)蛋白并制备多克隆抗体。根据VP_(4)氨基酸序列进行PSV遗传进化分析,然后将VP_(4)基因与原核表达载体连接,经诱导表达得到可溶性VP_(4)蛋白。纯化后的VP_(4)蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体并进行ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证其反应性。ELISA结果显示,多克隆抗体效价达1∶128000;Western blot和IFA结果表明,其能特异性识别和结合PSV,说明重组VP_(4)蛋白具有较好的免疫原性和反应原性。本研究成功表达了VP_(4)蛋白并制备了多克隆抗体,为VP_(4)蛋白功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪萨佩罗病毒 vp4蛋白 原核表达 多克隆抗体
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猪A群轮状病毒VP4单克隆抗体的制备和初步鉴定
2
作者 毛玎懿 孙波涛 +6 位作者 戴琦 李文良 李梅珍 陈艳 赵冰倩 陈婧 周斌 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第6期77-82,共6页
旨在制备一种特异性强、灵敏度高的猪A群轮状病毒(porcine rotavirus A,PoRVA)VP4单克隆抗体。本研究通过PCR扩增PoRVA分离株VP4基因的完整片段(2463 bp),构建原核表达载体pET-28a-VP4表达蛋白后制备单克隆抗体并进行鉴定。结果:重组蛋... 旨在制备一种特异性强、灵敏度高的猪A群轮状病毒(porcine rotavirus A,PoRVA)VP4单克隆抗体。本研究通过PCR扩增PoRVA分离株VP4基因的完整片段(2463 bp),构建原核表达载体pET-28a-VP4表达蛋白后制备单克隆抗体并进行鉴定。结果:重组蛋白大小在98 kDa左右,为不可溶蛋白,存在于包涵体中;经验证,猪轮状病毒阳性血清能够识别该重组蛋白,蛋白条带单一且清晰,具备良好的抗原性;蛋白纯化后,经小鼠免疫流程以及细胞融合筛选,3轮亚克隆后最终获得1株能稳定分泌抗VP4蛋白的阳性杂交瘤细胞株4B10,其轻链类型为Kappa型,重链亚型为IgG1,制备的小鼠腹水效价可达1∶3000000;在此基础上制备的单克隆抗体能特异性识别PoRV Pig/NJ/2012,具有良好反应性,可用于靶抗原的直接检测。综上,本研究制备的单克隆抗体特异性强、灵敏度高,为后续蛋白功能及病毒致病机制的研究提供了生物材料。 展开更多
关键词 猪A群轮状病毒 单克隆抗体 vp4蛋白
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一起猪轮状病毒感染的实验室诊断及VP4、VP7基因序列分析
3
作者 周锋涛 刘洋 +2 位作者 张振 刘淑华 李莲瑞 《湖南畜牧兽医》 2025年第6期27-30,共4页
为探究新疆阿克苏地区某一规模化猪场引发仔猪腹泻的病原体,采集病死仔猪肠道内容物,进行细菌分离鉴定,并采用荧光定量RT-PCR技术对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)进行病原检测。结果显示,样本中PoRV... 为探究新疆阿克苏地区某一规模化猪场引发仔猪腹泻的病原体,采集病死仔猪肠道内容物,进行细菌分离鉴定,并采用荧光定量RT-PCR技术对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)进行病原检测。结果显示,样本中PoRV检测呈阳性,提示该猪场仔猪腹泻的病原体为猪轮状病毒。设计并合成针对PoRV毒株VP4、VP7基因的特异性引物,进行RT-PCR扩增实验,并对扩增产物进行测序及同源性分析。结果表明,该毒株VP4基因序列与P[6]型参考株的核苷酸同源性为82.0%~92.3%,而VP7基因序列与G4型参考株的核苷酸同源性达到93.1%。据此判定,引发此次疫情的病原体为G4 P[6]基因型猪轮状病毒。研究为后续有效预防和控制疫情提供了重要依据。 展开更多
关键词 规模化猪场 仔猪腹泻 轮状病毒 vp4 vp7
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聚集性发热疫情相关的柯萨奇病毒A组4型VP1区基因特征分析
4
作者 尉秀霞 肖金波 +4 位作者 李敏 王祎 杨艳娜 吕若然 张勇 《病毒学报》 北大核心 2025年第5期1361-1366,共6页
本研究针对2024年6月北京经济技术开发区发生的两起聚集性发热疫情,开展了病原学鉴定和基因特征分析,旨在为该类疫情的防控提供实验室依据。研究采集了两起发热疫情中6例病例的咽拭子标本,采用实时荧光定量RT-PCR方法进行呼吸道多种病... 本研究针对2024年6月北京经济技术开发区发生的两起聚集性发热疫情,开展了病原学鉴定和基因特征分析,旨在为该类疫情的防控提供实验室依据。研究采集了两起发热疫情中6例病例的咽拭子标本,采用实时荧光定量RT-PCR方法进行呼吸道多种病原体的核酸筛查,结果显示6份标本均为肠道病毒核酸阳性。进一步通过病毒分离、分型鉴定和VP1区进化分析,确认两起疫情均是由柯萨奇病毒A组4型(Coxsackievirus A4,CVA4)感染引起,且均属于C基因型。这一结果表明,应加强肠道病毒尤其是CVA4引起的聚集性发热疫情的监测和防控工作。 展开更多
关键词 聚集性发热疫情 肠道病毒 柯萨奇病毒A组4型 C基因型 vp1区 系统发育分析
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Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒VP4兔源单克隆抗体的制备和鉴定
5
作者 孔维光 袁新婕 +2 位作者 丁广义 张环宇 徐镇 《渔业研究》 2025年第5期609-619,共11页
【目的】Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)严重危害中国草鱼(Ctenoparyngodonidel-lus)养殖业的健康发展。本研究基于单个B细胞抗体制备技术平台,结合哺乳动物表达系统,旨在制备靶向GCRV-ⅡVP4蛋白的基因工程抗体。【方法】通过构建GCRV-Ⅱ... 【目的】Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒(GCRV-Ⅱ)严重危害中国草鱼(Ctenoparyngodonidel-lus)养殖业的健康发展。本研究基于单个B细胞抗体制备技术平台,结合哺乳动物表达系统,旨在制备靶向GCRV-ⅡVP4蛋白的基因工程抗体。【方法】通过构建GCRV-ⅡVP4基因表达载体,在真核表达系统中制备重组VP4蛋白;将纯化后的重组蛋白作为免疫原多次免疫新西兰白兔,分离出脾脏单个抗原特异性记忆B细胞;随后通过聚合酶链式反应(PCR)扩增抗体可变区、恒定区基因片段,构建重组表达载体并转染HEK293F细胞进行单克隆抗体表达。最终通过酶联免疫吸附试验(ELISA)、蛋白质免疫印迹(Western blot)和免疫荧光分析(IF)评估抗体的抗原结合特性。【结果】通过对分离培养的单个B细胞上清液进行筛选,利用ELISA筛选出对VP4蛋白具有较好结合能力的三种B细胞克隆(1D5、1F9、1H1),并结合IF实验验证了其能结合病毒感染组织中的VP4抗原。进一步通过抗体重组表达获得了三株抗VP4重组单克隆抗体(1D5、1F9、1H1),其ELISA效价均达1∶128000。Westernblot分析结果显示,1D5、1F9和1H1单克隆抗体能特异性识别GCRV-YX246感染的脑细胞中65.4kDa的蛋白质条带,该分子量大小与病毒VP4蛋白理论分子量一致。IF实验结果也进一步证实1D5、1F9和1H1可特异性识别GCRV-YX246毒株感染的草鱼头肾组织切片中的病毒抗原。【结论】本研究成功制备并筛选出抗GCRV-ⅡVP4重组单克隆抗体,为GCRV-Ⅱ病毒快速诊断试剂盒的研发和VP4蛋白功能研究奠定基础。 展开更多
关键词 Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒 vp4蛋白 单个B细胞技术 单克隆抗体制备
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厦门地区A组轮状病毒VP4基因序列特征
6
作者 林建成 高立斌 +3 位作者 詹伟武 吴海明 陈曦 徐锦 《检验医学》 2025年第12期1209-1215,共7页
目的 了解厦门地区P型A组轮状病毒VP4基因序列和遗传变异特征,及其与国内外VP4基因的差异。方法 收集2021年1—12月厦门市儿童医院100例<10岁腹泻患儿轮状病毒检测阳性的粪便样本。采用巢式聚合酶链反应(PCR)进行A组轮状病毒G基因型... 目的 了解厦门地区P型A组轮状病毒VP4基因序列和遗传变异特征,及其与国内外VP4基因的差异。方法 收集2021年1—12月厦门市儿童医院100例<10岁腹泻患儿轮状病毒检测阳性的粪便样本。采用巢式聚合酶链反应(PCR)进行A组轮状病毒G基因型和P基因型分型。用一代测序技术进行A组轮状病毒VP4基因全长序列测序,用DNA Star、MEGA等生物学软件对测序后获得的基因序列进行系统进化分析和氨基酸序列比对。结果 100例腹泻患儿粪便样本G基因型主要流行株为G9型(88株),P基因型主要流行株为P[8]型(87株),G/P组合基因型主要流行株是G9P[8]型(80株)。进化树分析结果显示,厦门地方株(Amoy)与国内外其他地方株在进化树内的关联性存在不同程度的差异。氨基酸比对分析结果显示,厦门地方株(Amoy)与国内外不同地方株的氨基酸一级结构存在不同程度的变异。结论 A组轮状病毒VP4基因全长可显示毒株在中国具有快速适应和变异的能力。建议对轮状病毒的遗传变异进行持续监测。 展开更多
关键词 A组轮状病毒 vp4 基因序列 遗传变异
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G5型人A组轮状病毒LL36755株的VP4、VP6和NSP4编码基因的分子特征 被引量：9
7
作者 李丹地 段招军 +10 位作者 章青 刘娜 谢华萍 崔淑贤 靳淼 杨学梅 郑丽舒 黄灿平 匡治州 王忠山 方肇寅 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期195-201,共7页
最近在亚洲首次发现并报道了感染人的G5型人A组轮状病毒LL36755株,为进一步探讨其进化来源,克隆了G5型人A组轮状病毒LL36755株的VP4、VP6、NSP4编码基因,并分析其基因序列的分子特征。结果发现卢龙株LL36755为罕见的G5P[6]型,其VP6的亚... 最近在亚洲首次发现并报道了感染人的G5型人A组轮状病毒LL36755株,为进一步探讨其进化来源,克隆了G5型人A组轮状病毒LL36755株的VP4、VP6、NSP4编码基因,并分析其基因序列的分子特征。结果发现卢龙株LL36755为罕见的G5P[6]型,其VP6的亚群为SGⅡ型,NSP4的基因型为B型。系统进化树分析表明,卢龙株LL36755的VP7、VP4编码基因与猪来源的毒株关系密切,而VP6、NSP4编码基因与人来源的毒株紧密相联系。可以推断新的人腹泻A组轮状病毒LL36755株是猪的VP7,VP4编码基因与人的VP6,NSP4编码基因的自然重组;而且该毒株不是G5的原型,很可能是人类轮状病毒与猪轮状病毒毒株的自然重组后逐步进化而来。 展开更多
关键词 人类轮状病毒 vp4 型 vp6 NSP4 重组
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轮状病毒VP4、VP7基因的克隆与核苷酸序列分析 被引量：9
8
作者 王鹏雁 陈创夫 +3 位作者 余兴龙 徐兴然 涂长春 张高轩 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期99-103,共5页
用反转录聚合酶链式反应 (RT_PCR)技术 ,从轮状病毒感染的细胞中扩增 816bp、916bp的VP4、VP7片段中抗原表位区。通过T4DNA连接酶将其直接连接于克隆载体质粒pGEM_T上 ,转化至受体菌DH5α中。提取质粒经PCR扩增、酶切鉴定 ,证明重组质粒... 用反转录聚合酶链式反应 (RT_PCR)技术 ,从轮状病毒感染的细胞中扩增 816bp、916bp的VP4、VP7片段中抗原表位区。通过T4DNA连接酶将其直接连接于克隆载体质粒pGEM_T上 ,转化至受体菌DH5α中。提取质粒经PCR扩增、酶切鉴定 ,证明重组质粒pT_V4、PT_V7中含有轮状病毒的VP4、VP7基因片段。经核苷酸序列分析 ,表明克隆了轮状病毒主要保护性抗原VP4。 展开更多
关键词 核苷酸序列分析 轮状病毒 基因克隆 vp4 vp7
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口蹄疫病毒VP1、VP4基因核酸疫苗质粒的构建及其免疫原性 被引量：7
9
作者 王晓虎 靳玉珠 +4 位作者 范秀波 刘晔 张守峰 丁壮 扈荣良 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第2期168-171,175,共5页
目的构建口蹄疫病毒(FMDV)VP1、VP4基因核酸疫苗质粒,并研究其免疫原性。方法通过RT-PCR获得FMDVVP1、VP4基因,以真核表达载体pIRESneo为基础,构建VP1单表达以及VP1、VP4融合表达和共表达质粒。转染BHK-21细胞后,Western blot检测目的... 目的构建口蹄疫病毒(FMDV)VP1、VP4基因核酸疫苗质粒,并研究其免疫原性。方法通过RT-PCR获得FMDVVP1、VP4基因,以真核表达载体pIRESneo为基础,构建VP1单表达以及VP1、VP4融合表达和共表达质粒。转染BHK-21细胞后,Western blot检测目的蛋白的表达。将上述3种基因核酸疫苗、VP1单表达与VP4单表达联合疫苗、灭活疫苗和空载体对照免疫豚鼠,检测血清特异性抗体及中和抗体水平,并进行保护力试验。结果VP1单表达,VP1、VP4融合表达及共表达质粒经PCR及酶切鉴定,证明构建正确。各组核酸疫苗质粒均能诱导产生中和抗体,且具有一定的保护效力。VP1单表达组和联合组保护率均为28.6%;共表达组和融合表达组保护率均为42.9%;灭活疫苗组保护率为100%;空载体组保护率为0。结论口蹄疫病毒VP1与VP4共存时能发挥更好的免疫原性。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 vp1基因 vp4基因 核酸疫苗 免疫原性
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草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：12
10
作者 曾伟伟 王庆 +2 位作者 王英英 石存斌 吴淑勤 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期450-456,共7页
为了建立针对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)流行株的血清学检测方法,实验构建了能高效表达GCRV HZ08株主要衣壳蛋白VP4的重组表达载体pET32a-S6,利用纯化的VP4重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,经过克隆和筛选,获得3... 为了建立针对草鱼呼肠孤病毒(GCRV)流行株的血清学检测方法,实验构建了能高效表达GCRV HZ08株主要衣壳蛋白VP4的重组表达载体pET32a-S6,利用纯化的VP4重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0细胞融合,经过克隆和筛选,获得3株能稳定分泌抗VP4重组蛋白单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)的杂交瘤细胞,分别命名为2C2、2F3和5E5。抗体经亚型鉴定均为IgG1,轻链为κ链;间接ELISA试验证明,3株杂交瘤细胞分泌的MAb可特异性识别GCRV-HZ08,与GSRV,ISKNV,IHNV均无交叉反应。选择2C2作为腹水生产细胞株,免疫小鼠后腹水ELISA效价为1∶720 000;IFA和Western-blotting结果显示,这株杂交瘤细胞分泌的MAb能够特异性识别GCRV-HZ08病毒粒子。本实验制备的MAb具有良好的生物学特性,为GCRV流行株血清学检测方法的建立及VP4蛋白相关功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 vp4蛋白 单克隆抗体
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人轮状病毒vp4全基因原核穿梭表达质粒的构建及鉴定 被引量：8
11
作者 李世彬 李江 +4 位作者 贺志良 姜柯安 张璐渝 刘革力 马永平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第10期1126-1129,共4页
目的构建人轮状病毒(Rotavirus,RV)vp4全基因原核穿梭表达质粒,经大肠杆菌表达验证后转化入双歧杆菌。方法从pMD19-T simple-vp4质粒中扩增RV vp4全基因,克隆至pBEX载体中,构建重组表达质粒pBEX-vp4,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,... 目的构建人轮状病毒(Rotavirus,RV)vp4全基因原核穿梭表达质粒,经大肠杆菌表达验证后转化入双歧杆菌。方法从pMD19-T simple-vp4质粒中扩增RV vp4全基因,克隆至pBEX载体中,构建重组表达质粒pBEX-vp4,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定后,电转化法将重组质粒转化入双歧杆菌,提取质粒,进行PCR及双酶切鉴定。结果重组表达质粒pBEX-vp4经酶切、PCR和测序证明构建正确;在大肠杆菌BL21(DE3)中可表达相对分子质量约87 000的重组VP4蛋白,表达量较低,以包涵体形式表达,可与羊抗人轮状病毒多克隆抗体特异性结合;经PCR及双酶切鉴定,重组质粒pBEX-vp4已成功转入双歧杆菌中。结论重组表达质粒pBEX-vp4可在大肠杆菌中表达RV VP4蛋白,并可经电转化法有效地将重组表达质粒转化入双歧杆菌,为下一步在双歧杆菌中进行表达及研制基于双歧杆菌表达系统的RV重组亚单位口服活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 轮状病毒疫苗 vp4 双歧杆菌
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柯萨奇病毒A16型VP1-VP4基因克隆及其表达产物的抗原相关性分析 被引量：4
12
作者 宋远斌 何思杰 +4 位作者 余楠 陈欣欣 王斌 车小燕 曾其毅 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1713-1717,共5页
目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1-VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16... 目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1-VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16型病毒免疫兔血清及肠道病毒71型病毒免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA分析其抗原相关性及交叉反应性。结果成功构建的重组质粒pQE30a/VP1-VP4并经IPTG诱导,重组蛋白VP1-VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1-VP4可以被CVA16免疫兔血清特异识别,部分与肠道病毒71型免疫血清存在交叉反应。结论在大肠杆菌M15中高效表达出柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白,经纯化产物具有较强的抗原反应性。 展开更多
关键词 柯萨奇病毒A16型 vp1蛋白 vp2蛋白 vp3蛋白 vp4蛋白 克隆 原核表达 抗原反应性
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草鱼呼肠孤病毒HZ08株VP4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备 被引量：7
13
作者 曾伟伟 王庆 +5 位作者 张乐生 刘宝芹 刘永奎 石存斌 曾令兵 吴淑勤 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第12期1482-1485,共4页
目的原核表达、纯化草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)HZ08株VP4蛋白,并制备其多克隆抗体。方法采用PCR法扩增GCRV HZ08株S6基因部分节段,插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32a-S6,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPT... 目的原核表达、纯化草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)HZ08株VP4蛋白,并制备其多克隆抗体。方法采用PCR法扩增GCRV HZ08株S6基因部分节段,插入原核表达载体pET-32a(+),构建重组表达质粒pET-32a-S6,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。表达的重组蛋白纯化后免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体,采用间接ELISA法测定其效价,Western blot鉴定其特异性。结果重组表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;表达的目的蛋白相对分子质量约为51 000,表达量占菌体总蛋白的73%,主要以包涵体形式表达,反应原性良好;制备的多克隆抗体效价约为1∶8 000,且具有较高的特异性。结论成功制备了GCRV HZ08株VP4蛋白高效价多克隆抗体,为VP4蛋白功能的深入研究、抗原表位分析、草鱼出血病诊断方法的建立及相关基因工程疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 呼肠孤病毒 草鱼 vp4蛋白 多克隆抗体
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重叠PCR法合成轮状病毒抗原基因VP4 被引量：8
14
作者 冉丹霞 王荣荣 +2 位作者 郝亚宁 宋方洲 马永平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期118-119,124,共3页
用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得轮状病毒VP4基因。根据Genbank中鼠VP4基因的序列设计34对引物,用overlap PCR法合成VP4全基因的两个片段A、B,将A、B分别连入pMD19-T simple载体,测序结果显示,成功合成了VP4全基因。证明了... 用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得轮状病毒VP4基因。根据Genbank中鼠VP4基因的序列设计34对引物,用overlap PCR法合成VP4全基因的两个片段A、B,将A、B分别连入pMD19-T simple载体,测序结果显示,成功合成了VP4全基因。证明了重叠延伸PCR法是获得目的基因的有效方法。 展开更多
关键词 轮状病毒 vp4基因 合成 重叠延伸PCR
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表达轮状病毒VP4抗原的重组腺病毒对新生小鼠的被动免疫保护作用 被引量：8
15
作者 刘馨 张光明 +2 位作者 李鸿钊 谢天宏 孙茂盛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第1期33-36,共4页
目的探讨表达轮状病毒VP4抗原的重组腺病毒(Ad5/VP4)对新生小鼠的被动免疫保护作用。方法在293细胞上扩增表达猴轮状病毒SA11株VP4抗原的重组腺病毒并纯化。将轮状病毒抗体阴性的小鼠交配后的雌性小鼠,分别通过肌肉注射、滴鼻和口服免... 目的探讨表达轮状病毒VP4抗原的重组腺病毒(Ad5/VP4)对新生小鼠的被动免疫保护作用。方法在293细胞上扩增表达猴轮状病毒SA11株VP4抗原的重组腺病毒并纯化。将轮状病毒抗体阴性的小鼠交配后的雌性小鼠,分别通过肌肉注射、滴鼻和口服免疫纯化后的重组腺病毒,生产后第7天和第8天,用轮状病毒SA11(1·0×106PFU)口服攻击乳鼠2次,观察出现腹泻症状的乳鼠的比例,并用ELISA检测母鼠的血清以及乳鼠胃囊乳块中的轮状病毒特异性抗体。同时以含有部分E1区基因的腺病毒5型载体(Ad5)作为对照。结果经3种不同途径免疫母鼠后,在血清和乳汁中均能检测到轮状病毒VP4特异性抗体。经滴鼻免疫的母鼠喂养的乳鼠,经攻击后保护率为100%(11/11);经肌肉注射免疫的母鼠喂养的乳鼠,经攻击后保护率为30%(3/10);经口服免疫的母鼠喂养的乳鼠,经轮状病毒攻击后保护率为80%(8/10)。对照组的小鼠全部出现了腹泻症状。结论表达轮状病毒VP4抗原的重组腺病毒经滴鼻免疫母鼠后,能在乳汁中产生特异性的IgA和IgG抗体,并能保护新生小鼠对抗轮状病毒的攻击,保护率达100%。 展开更多
关键词 轮状病毒 vp4抗原 重组腺病毒 被动免疫保护
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1994～1997年广州地区轮状病毒VP7、VP4型感染的流行病学与临床特征 被引量：14
16
作者 潘瑞芳 区文玑 +5 位作者 何婉儿 梁文青 何娟 常汝虚 钱渊 张又 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期178-179,共2页
目的　了解我国南方婴幼儿轮状病毒VP7、VP4型感染性腹泻的流行及临床特征。方法　对 1994年 11月～ 1997年 10月连续 3 6个月收集 10 99例病毒性腹泻患儿粪便标本行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)检测 ,阳性者行VP7、VP4型别鉴定、临床分... 目的　了解我国南方婴幼儿轮状病毒VP7、VP4型感染性腹泻的流行及临床特征。方法　对 1994年 11月～ 1997年 10月连续 3 6个月收集 10 99例病毒性腹泻患儿粪便标本行聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)检测 ,阳性者行VP7、VP4型别鉴定、临床分析。结果　 10 99例粪便标本进行PAGE检测 ,检出轮状病毒 50 1例 ,阳性率45.6%。定型为VP7型 2 71例 ,VP7G1型 2 3 3例 ,占总数 86% ;其次为G2、G3型 ,未发现G4型。定型为VP4193例 ,VP41A型 160例 ,占总数 83 % ;其次为 1B及 2型 ,未发现 3型。高发季节为 11月至次年 2月 ,1岁内VP41A型的发病率比VP7G1型多 ,前者为 73 % ,后者为 57%。 2岁时发病率相似 ,分别为 93 .1%和 90 .1%。VP7G1型高热较其他型高 2 7% ,而VP41A型低热比例最高 (占 91% ) ,VP41A、1B绝大部分 (98%、96% ) ,伴轻度脱水。而VP7G1型中度脱水多见。VP41A型大便在 10次 /d以上。电解质紊乱情况VP7较VP4型较重。结论　1994～ 1997年广州地区轮状病毒型别集中在VP7G1及VP4A1型 ,流行季节为 11月至次年 2月 ,但病例终年不断。临床表现方面VP7G1型比VP41A型感染重 ,治疗效果理想 。 展开更多
关键词 轮状病毒 vp7型 vp4型 感染性腹泻 流行病学调查 临床特征 电泳检测 婴幼儿 1994~1997年 广州地区
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轮状病毒VP4基因和VP7基因原核表达载体的构建及表达 被引量：7
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作者 王鹏雁 陈创夫 +3 位作者 余兴龙 徐兴然 涂长春 张高轩 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2003年第1期5-10,共6页
经PCR从含有VP4基因、VP7基因片段的重组质粒 pT VP4和 pT VP7中扩增VP4、VP7基因 ,连接至 pGEM 5zf(+ )。经筛选和鉴定正确后同时酶切目的基因和表达质粒 pET 2 8a(+ ) ,连接、转化受体菌 ,经PCR、酶切和序列分析证明 ,连接向位和阅读... 经PCR从含有VP4基因、VP7基因片段的重组质粒 pT VP4和 pT VP7中扩增VP4、VP7基因 ,连接至 pGEM 5zf(+ )。经筛选和鉴定正确后同时酶切目的基因和表达质粒 pET 2 8a(+ ) ,连接、转化受体菌 ,经PCR、酶切和序列分析证明 ,连接向位和阅读框架是正确的 ,从而构建了轮状病毒保护性抗原VP4基因、VP7基因片段的原核表达载体 pET2 8a VP4、pET2 8a VP7。重组质粒转化表达菌在IPTG诱导下 ,用SDS PAGE、薄层凝胶扫描分析表达的蛋白。结果表明 ,表达的目的蛋白以包涵体的形式存在 ,蛋白的分子量分别为 37.6 9和 36 .2 0ku ,表达量占菌体总蛋白的比例分别为 17.1%和 14 .4 %。 展开更多
关键词 轮状病毒 vp4基因 vp7基因 原核表达载体 载体构建
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深圳地区2014年柯萨奇病毒A组4型VP1区基因特征分析 被引量：10
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作者 姚相杰 何雅青 +2 位作者 蔡春林 卓菲 杨贵清 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期565-568,573,共5页
目的对2014年深圳市罗湖区一起疱疹性咽峡炎疫情的病原体进行鉴定,并对鉴定的柯萨奇A4病毒（CVA4）的VP1基因进行序列测定和遗传进化特征分析。方法采集疫情中患儿的咽拭子样本8份,提取病毒核酸,利用荧光RTPCR法检测样本总肠道病毒（EV... 目的对2014年深圳市罗湖区一起疱疹性咽峡炎疫情的病原体进行鉴定,并对鉴定的柯萨奇A4病毒（CVA4）的VP1基因进行序列测定和遗传进化特征分析。方法采集疫情中患儿的咽拭子样本8份,提取病毒核酸,利用荧光RTPCR法检测样本总肠道病毒（EV）、人肠道病毒71型（EV71）、柯萨奇病毒A组16型（CVAl6）、CVA4、CVA6和CVAl0等,对CVA4阳性样本采用RT-PCR方法扩增其VP1区全长序列,并进行核苷酸序列测定和遗传进化分析。结果引起此次疱疹性咽峡炎暴发的病原体为GIB亚型的CVA4病毒。同源性分析显示,深圳2014年CVA4病毒株与云南2004年分离株（AB268278）、以及台湾2008年分离株（AB571570）核苷酸同源性达94.1%~94.8%,而与CVA4原型株HIGHPOINT同源性最低,为84.3%。在氨基酸序列上与台湾2006年分离株（AB571563）、吉林2006年分离株（JQ715709）同源性最高,达99.3%;而与山东省2006年分离株（GQ253375）同源性最低,为97.1%。相比深圳2009年分离株（HQ728260）,共有6个氨基酸突变位点：N22S,T34A,N63S,A165D,T200A和V126A;而进化树分析显示,深圳2014年CVA4病毒株虽属于CVA4的GIB亚型,但在进化走势上,已经不同于GIB亚型中其他地区早期的分离株。结论 2014年深圳地区CVA4病毒属于GIB亚型,但在VP1区变异较大。 展开更多
关键词 疱疹性咽峡炎 柯萨奇病毒A组4型 vp1序列分析 亚型
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大熊猫轮状病毒CH-1株外衣壳蛋白VP4基因的克隆与生物信息学分析 被引量：6
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作者 雷燕 颜其贵 +7 位作者 张志和 王成东 陈世界 王旭 左兰 程喻 任玉鹏 郭玲 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期575-581,共7页
利用MA-104细胞培养增殖大熊猫轮状病毒CH-1株,提取总RNA,运用RT-PCR扩增外衣壳蛋白VP4基因,将其与pMD19-T simple vector连接并转化DH5α,经PCR扩增和测序分析进行鉴定,用生物信息学软件预测其功能,并构建系统进化树。结果显示,成功获... 利用MA-104细胞培养增殖大熊猫轮状病毒CH-1株,提取总RNA,运用RT-PCR扩增外衣壳蛋白VP4基因,将其与pMD19-T simple vector连接并转化DH5α,经PCR扩增和测序分析进行鉴定,用生物信息学软件预测其功能,并构建系统进化树。结果显示,成功获得大熊猫轮状病毒VP4蛋白基因,长2 362bp,包含一个2 331bp的开放阅读框,编码776个氨基酸,测序结果在GenBank中的登录号为HQ641296。生物信息学分析表明,VP4蛋白基因编码产物分子质量为86 768.8u,理论等电点为5.56,半衰期为30h(体外哺乳类网状细胞),不稳定系数为28.64,脂肪指数为82.53,总平均亲水性为-0.265,最大疏水性为2.244,最小疏水性为-2.911;无信号肽序列;跨膜结构分析显示VP4蛋白无跨膜区,位于病毒膜外区;在VP4序列中的抗原决定簇主要位于VP4的N-末端和C-末端。预测其可能包含8个N-糖基化作用位点,15个蛋白激酶C磷酸化作用位点、15个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化作用位点、12个N-豆蔻酰化位点。系统进化分析显示,大熊猫轮状病毒的VP4基因与猪轮状病毒的VP4基因的进化距离最近。本试验成功获得大熊猫轮状病毒VP4基因,为以后研究此基因的生物学功能、建立该病毒的检测方法以及研制新型大熊猫轮状病毒基因疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 大熊猫 轮状病毒 vp4基因 克隆 生物信息学分析
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均聚物调控的PS-b-P4VP薄膜的微相分离形貌 被引量：1
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作者 朱梦冰 李志芳 +2 位作者 徐之光 张洪文 俞强 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第6期2270-2275,共6页
分别以聚丙烯酸(PAA)和聚氧化乙烯(PEO)与苯乙烯与4-乙烯基吡啶二嵌段共聚物(PS-b-P4VP)进行溶液共混并且旋涂成膜,采用原子力显微镜(AFM)研究了这两种均聚物对PS-b-P4VP薄膜微相分离形貌的调控作用。结果表明,PAA与P4VP链段之间强烈的... 分别以聚丙烯酸(PAA)和聚氧化乙烯(PEO)与苯乙烯与4-乙烯基吡啶二嵌段共聚物(PS-b-P4VP)进行溶液共混并且旋涂成膜,采用原子力显微镜(AFM)研究了这两种均聚物对PS-b-P4VP薄膜微相分离形貌的调控作用。结果表明,PAA与P4VP链段之间强烈的氢键作用使得P4VP链段对PS链段的热力学排斥作用增强,当PAA质量分数为10%时,PS分散相区以规则的柱体垂直分布于由P4VP/PAA链段相互溶解所形成的连续相基体中。对于PS-b-P4VP/PEO共混体系,共混薄膜形成了PEO/P4VP分散相以柱状形态垂直分布在以PS链段聚集区为薄膜连续相基体中的微相分离形貌,由于PS链段无法在PEO/P4VP柱状微区上方形成覆盖,导致共混薄膜表面出现许多孔洞,孔洞底部伴有PEO链段部分结晶形成的锥状突起。随PEO含量增加,孔洞直径增大,孔洞底部的锥状突起也增大。 展开更多
关键词 PS-b—P4vp PAA PEO 共混薄膜 微相分离形貌 调控作用
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