HPLC法测定rhNDPK-a酶活性 被引量：2

1

作者 钱垂文 王一飞 +2 位作者 罗勇 张美英 熊盛 《中国卫生检验杂志》 CAS 2005年第4期390-391,共2页

目的:研究不同反应体系对NDPK酶活性测定结果的影响。方法:分别以(UTP+ADP)和(ATP+UDP)作为反应底物,加入自制的rhNDPK-A蛋白,以100mmol/L磷酸二氢钾、20mmol/L乙酸、5mmol/L四丁基溴化铵,pH 5 0作为流动相A液, A液+25%乙腈作为B液,等... 目的:研究不同反应体系对NDPK酶活性测定结果的影响。方法:分别以(UTP+ADP)和(ATP+UDP)作为反应底物,加入自制的rhNDPK-A蛋白,以100mmol/L磷酸二氢钾、20mmol/L乙酸、5mmol/L四丁基溴化铵,pH 5 0作为流动相A液, A液+25%乙腈作为B液,等梯度混合,C18柱,柱温25℃,流速1 0ml/min,检测波长254nm。结果:以(UTP+ADP)和(ATP+UDP)作为反应底物测定的酶比活分别为210U/mg、860U/mg。结论:不同反应体系对HPLC法测定NDPK酶活性有显著差异。 展开更多

关键词 HPLC法 rhndpk-a 酶活性 ndpk-a蛋白 mol/L 四丁基溴化铵 反应体系 磷酸二氢钾 测定结果 C18柱 检测波长 流动相 min 底物 A液 mg

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Nm23-H1/NDPK-A基因在大肠杆菌中的高效表达及产物纯化的研究 被引量：19

2

作者 侯宇 赵利淦 +5 位作者 张美英 何丽容 边六交 张玲 杨瑞仪 林剑 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第6期655-660,共6页

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增人二磷酸核苷激酶Ａ亚基（ＮＤＰＫ－Ａ）基因，即ｎｍ２３－Ｈ１／ＮＤＰＫ－Ｋ基因的编码序列，经序列分析后，定向克隆于表达质粒载体ｐＢＶ２２０，在大肠杆菌ＤＨ５α中高效表达出重组人ＮＤＰ... 利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增人二磷酸核苷激酶Ａ亚基（ＮＤＰＫ－Ａ）基因，即ｎｍ２３－Ｈ１／ＮＤＰＫ－Ｋ基因的编码序列，经序列分析后，定向克隆于表达质粒载体ｐＢＶ２２０，在大肠杆菌ＤＨ５α中高效表达出重组人ＮＤＰＫ－Ａ．表达产物为可溶性的非融合蛋白，占菌体总蛋白４２％．斑点ＥＬＩＳＡ法鉴定表明表达产物与ＮＤＰＫ－Ａ标准抗血清呈阳性反应．以ＤＥＡＥ纤维素弱阴离子交换层析、ＣｉｂａｃｒｏｎＢｌｕｅ染料亲和层析结合高效液相排阻色谱技术纯化ｒＮＤＰＫ－Ａ，得纯度为９６．７％的目标蛋白．以反相高效液相色谱法进行酶活性分析，表明纯化的ｒＮＤＰＫ－Ａ能催化ＡＴＰ＋ＵＤＰ＝ＡＤＰ＋ＵＴＰ的反应，比活性为８００Ｕ／ｍｇ蛋白． 展开更多

关键词 Nm23-H1/ndpk-a 基因表达 分离纯化

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重组人Nm23-H1/NDPK-A蛋白抗血清的制备与鉴定 被引量：4

3

作者 王一飞 李海燕 +3 位作者 刘洁生 张美英 黄立 钱垂文 《中国卫生检验杂志》 CAS 2003年第1期22-23,共2页

[目的 ]通过实验 ,制备出NDPK -A蛋白的抗血清 ,为国内NDPK -A的诊断试剂盒的研究开发提供基础条件。[方法 ]重组人肿瘤转移相关蛋白Nm2 3 -H1/NDPK -A蛋白经Macro -prepDEAE阴离子交换柱层析和CibacronBlue亲和层析 ,得到了电泳纯的NDP... [目的 ]通过实验 ,制备出NDPK -A蛋白的抗血清 ,为国内NDPK -A的诊断试剂盒的研究开发提供基础条件。[方法 ]重组人肿瘤转移相关蛋白Nm2 3 -H1/NDPK -A蛋白经Macro -prepDEAE阴离子交换柱层析和CibacronBlue亲和层析 ,得到了电泳纯的NDPK -A蛋白 ,以此制备抗原 ,免疫新西兰纯种兔 ,进而得到NDPK -A蛋白的抗血清。 [结果 ]ELISA法检测所制备的抗体的反应效价为 :1:40 0— 80 0。 [结论 ]westernblot试验结果证实 ,该抗血清具备较好的特异性 ,能与NDPK -A蛋白发生反应 ,可应用于NDPK -A蛋白的实验检测利临床检测。 展开更多

关键词 重组人Nm23-H1/ndpk-a蛋白 抗血清 制备 鉴定 WESTERN印迹

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NDPK-A过表达对膀胱癌细胞株T24增殖和超微结构的影响 被引量：1

4

作者 袁茵 鲁欣 《广东医学》 CAS 北大核心 2015年第18期2769-2772,共4页

目的探讨NDPK-A过表达对人膀胱癌细胞株T24增殖能力和超微结构的影响。方法通过脂质体转染和G418筛选,建立稳定表达外源NDPK-A的T24细胞株,免疫细胞化学法检测细胞内NDPK-A表达,MTT法测定细胞增殖能力,透射电镜观察细胞的线粒体超微形... 目的探讨NDPK-A过表达对人膀胱癌细胞株T24增殖能力和超微结构的影响。方法通过脂质体转染和G418筛选,建立稳定表达外源NDPK-A的T24细胞株,免疫细胞化学法检测细胞内NDPK-A表达,MTT法测定细胞增殖能力,透射电镜观察细胞的线粒体超微形态。结果 NDPK-A过表达对T24细胞的增殖有抑制作用,引起了T24细胞内线粒体的固缩、内嵴变形,或发生肿胀和内部空洞化。结论 NDPK-A对膀胱癌细胞T24的线粒体有破坏作用,可能通过抑制细胞的新陈代谢而抑制其增殖。 展开更多

关键词 膀胱癌 ndpk-a 线粒体 超微结构 增殖抑制

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三种检测NDPK-A的ELISA方法的比较选择及初步应用

5

作者 李冰 李雪玲 +1 位作者 张美英 王一飞 《中国卫生检验杂志》 CAS 2004年第3期308-309,共2页

〔目的〕建立有效的检测NDPK -A的ELISA方法 ,为国内多种血液肿瘤的预后试剂盒的开发提供实验依据。〔方法〕通过间接、双单抗夹心、单抗 -多抗夹心三种ELISA方法 ,检测NDPK -A含量 ;通过比较确定最佳方法 ,并从灵敏度、精确度对最佳方... 〔目的〕建立有效的检测NDPK -A的ELISA方法 ,为国内多种血液肿瘤的预后试剂盒的开发提供实验依据。〔方法〕通过间接、双单抗夹心、单抗 -多抗夹心三种ELISA方法 ,检测NDPK -A含量 ;通过比较确定最佳方法 ,并从灵敏度、精确度对最佳方法进行考核 ;将该法初步应用于检测HL60细胞冻融液中NDPK -A含量。〔结果〕确定单抗 -多抗夹心ELISA为三种方法中最佳 ,检测下限为 0 5 7μg/L ;平均批内变异系数 (CV)为 6 2 8% ,平均批间CV为 8 5 8% ;NDPK-A的含量随着细胞浓度的增高而增高 ,浓度为 1× 10 7个 /ml细胞冻融液中NDPK -A的含量为 5 5 6μg L。〔结论〕应用单抗 -多抗夹心ELISA方法能够达到临床检测人血浆中NDPK -A含量的要求。 展开更多

关键词 ndpk-a ELISA HL60 基因 肿瘤转移 多克隆抗体

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胃癌中nm23-h1/NDPK-A蛋白的表达 被引量：2

6

作者 朱峰 祁小平 +3 位作者 刘福坤 黎介寿 汪志明 富小志 《江苏医药》 CAS CSCD 2000年第7期509-511,共3页

目的　探讨nm2 3 h1与胃癌之间的关系。方法　对 5 8例外科切除胃癌标本的肿瘤原发灶和淋巴结转移灶进行nm2 3 h1/NDPK A免疫组化染色 ,并用计算机图象分析仪测定其着色的灰度。结果　T1N1 2 M0 组肿瘤原发灶与T1N0 M0 组肿瘤灶之间存... 目的　探讨nm2 3 h1与胃癌之间的关系。方法　对 5 8例外科切除胃癌标本的肿瘤原发灶和淋巴结转移灶进行nm2 3 h1/NDPK A免疫组化染色 ,并用计算机图象分析仪测定其着色的灰度。结果　T1N1 2 M0 组肿瘤原发灶与T1N0 M0 组肿瘤灶之间存在显著差异 (P <0 0 5 ) ,T1N1 2 M0 组淋巴结转移灶较T1N0 M0 组肿瘤灶下调非常显著 (P <0 0 1)。T1N0 M0 组与T2 3 N0 M0 组肿瘤灶的nm2 3 h1/NDPK A蛋白表达水平之间无明显差异 (P >0 0 5 )。结论　nm2 3 h1/NDPK A蛋白表达水平与胃癌淋巴结转移程度呈负相关 。 展开更多

关键词 胃癌 NM23-H1 图象分析 ndpk-a蛋白 表达

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GST-NDPK-A融合蛋白的原核表达及体外互作蛋白的检测

7

作者 吕芬 刘忠 +6 位作者 银兴峰 赵振岭 陈妙娟 张嘉萱 陈伟 钱垂文 熊盛 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期137-143,共7页

旨在了解核苷二磷酸激酶A(NDPK-A)的功能,通过GST-Pull down技术寻找与其存在体外相互作用的蛋白。以含有目的片段的质粒pBV-NDPK-A为模板,扩增出相应的目的基因片段,将其插入带有GST标签的原核表达载体pGEX-4T-2,构建重组表达质粒。双... 旨在了解核苷二磷酸激酶A(NDPK-A)的功能,通过GST-Pull down技术寻找与其存在体外相互作用的蛋白。以含有目的片段的质粒pBV-NDPK-A为模板,扩增出相应的目的基因片段,将其插入带有GST标签的原核表达载体pGEX-4T-2,构建重组表达质粒。双酶切及测序鉴定正确后,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导,Glutathione Sepharose 4B亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳及Western blot确定融合蛋白的表达,并与高表达细胞系A549孵育,进行GST-Pull down试验,并通过LC-MS/MS质谱鉴定体外与NDPK-A相互作用的蛋白。结果显示,成功构建GST-NDPK-A的原核表达载体;在大肠杆菌BL21中诱导表达出可溶性融合蛋白;经Glutathione Sepharose 4B纯化后,获得了有生物活性的GST-NDPK-A融合蛋白,GST-Pull down试验和质谱鉴定结果发现NDPK-A与Fussel-18、Rrp12体外存在相互作用。 展开更多

关键词 ndpk-a Fussel-18 Rrp12 表达纯化 相互作用

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rNM23-H1/NDPK-A中试纯化工艺研究 被引量：7

8

作者 钱垂文 罗勇 +2 位作者 张美英 林锋 王一飞 《生物技术》 CAS CSCD 2002年第1期23-24,共2页

为比较 3种DEAE填料对rNM2 3-H1/NDPK -A的纯化效果 ,利用同一批中试发酵样品在相同的条件下进行离子交换层析 ,分别收集P0 2 和P1 0 两个洗脱峰。通过对洗脱峰中蛋白质含量、目标蛋白相对含量以及酶比活的测定 ,计算得出MatrexCellufi... 为比较 3种DEAE填料对rNM2 3-H1/NDPK -A的纯化效果 ,利用同一批中试发酵样品在相同的条件下进行离子交换层析 ,分别收集P0 2 和P1 0 两个洗脱峰。通过对洗脱峰中蛋白质含量、目标蛋白相对含量以及酶比活的测定 ,计算得出MatrexCellufineA - 2 0 0 ,DEAESephadexA - 2 5 ,Macro -PrepDEAESupport三种填料相对应的NDPK -A得率及纯化倍数分别为 74 5 %、40 8%、92 6 %、,2 4、1 9、3 1倍。综合分析表明Macro -PrepDEAESupport填料对rNM2 3-H1/NDPK -A的纯化效果最好。 展开更多

关键词 rNM23-H1/ndpk-a 填料 纯化工艺 目标蛋白 抑癌基因

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多种肿瘤细胞表面超微结构的原子力显微镜观察及药物对细胞膜表面超微结构影响的初步研究 被引量：19

9

作者 陈勇 蔡继业 +1 位作者 邢少璟 张美英 《电子显微学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期100-104,共5页

本文应用原子力显微镜对人胃癌SGC790 1、人肝癌HepG2、人肺癌AFTC A 1、人乳腺癌MCF_7_R和人肺腺癌A5 49等肿瘤细胞膜表面进行了超微结构的形态学观察和比较。并研究了Nm2 3 H1 NDPK A蛋白对人肺腺癌A5 49等细胞膜表面超微结构的影响... 本文应用原子力显微镜对人胃癌SGC790 1、人肝癌HepG2、人肺癌AFTC A 1、人乳腺癌MCF_7_R和人肺腺癌A5 49等肿瘤细胞膜表面进行了超微结构的形态学观察和比较。并研究了Nm2 3 H1 NDPK A蛋白对人肺腺癌A5 49等细胞膜表面超微结构的影响。发现不同肿瘤细胞膜表面超微结构存在较大的差异 ,药物处理和对照组A5 49细胞膜的表面超微结构也存在较大差异 ,药物处理的A5 49细胞膜表面出现大量的疤痕状集聚物 ,而药物处理的其它几种肿瘤细胞膜表面未发现明显的变化。说明原子力显微镜具有发展为一种观察和鉴别某些细胞的有力工具的潜力 ,并有可能应用于病理学或药理学研究 ,但在这些研究中这种技术只能作为一种辅助手段。 展开更多

关键词 肿瘤细胞 超微结构 原子力显微镜 Nm23-Hl/ndpk-a蛋白 药物处理 分辨力

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nm23-H1与人卵巢癌转移及预后的关系 被引量：1

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作者 周晓宁 陈晓东 罗敏 《广东医学》 CAS CSCD 2001年第12期1114-1115,共2页

目的 探讨人卵巢癌组织中ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达水平与卵巢癌病理组织学类型、转移倾向及患者预后的相关性。方法 分别采用原位杂交及免疫组化方法检测４１例人卵巢癌标本中 ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ及其编码蛋白 ＮＤＰＫ－Ａ的表达... 目的 探讨人卵巢癌组织中ｎｍ２３－Ｈ１基因的表达水平与卵巢癌病理组织学类型、转移倾向及患者预后的相关性。方法 分别采用原位杂交及免疫组化方法检测４１例人卵巢癌标本中 ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ及其编码蛋白 ＮＤＰＫ－Ａ的表达水平。结果 ｎｍ２３－Ｈ１ ｍＲＮＡ及其编码蛋白 ＮＤＰＫ－Ａ在卵巢癌组织中的表达水平与卵巢癌的病理组织学类型无关（Ｐ＞０．０５），与卵巢癌转移倾向呈负相关（Ｐ＜０．０５；Ｐ＜０．０１），在原发灶中的表达水平明显高于转移灶（Ｐ＜０．０１），与卵巢癌患者预后呈正相关（Ｐ＜０.０５）。在被测卵巢癌标本中，ｎｍ２３－Ｈ１ｍＲＮＡ与ＮＤＰＫ－Ａ两者间的表达水平具有正相关性。结论ｎｍ２３－Ｈ１基因在人卵巢癌的扩散转移过程中发挥抑制作用，它在卵巢癌组织中的表达水平可作为判断患者预后的重要指标。 展开更多

关键词 卵巢肿瘤 NM23-H1 mRNA ndpk-a 原位杂交 免疫组织化学 卵巢癌 肿瘤转移

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简讯

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《检验医学与临床》 CAS 2009年第8期619-619,共1页

关键词 妊娠肝内胆汁淤积症 简讯 ndpk-a 撰写论文 评选活动 诊断试剂盒 综合征诊断 编辑部

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