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霍乱毒素B亚基展示HIV-1 gp41 MPER表位的研究
1
作者 未祥 张芝晴 +7 位作者 邵佳 黄芳 齐家龙 高双全 李少勇 李少伟 夏宁邵 顾颖 《中国生化药物杂志》 CAS 2017年第6期1-5,共5页
目的 评价霍乱毒素B亚基融合HIV-1 gp41 MPER表位的免疫效果.方法 利用霍乱毒素的B亚基（CTB）作为载体展示靶向于MPER的广谱中和抗体2F5和4E10的表位.表达纯化后的融合蛋白与弗氏佐剂混合乳化后免疫小鼠,免疫4次后对小鼠的血清进行综... 目的 评价霍乱毒素B亚基融合HIV-1 gp41 MPER表位的免疫效果.方法 利用霍乱毒素的B亚基（CTB）作为载体展示靶向于MPER的广谱中和抗体2F5和4E10的表位.表达纯化后的融合蛋白与弗氏佐剂混合乳化后免疫小鼠,免疫4次后对小鼠的血清进行综合评价.ELISA法评价融合蛋白的免疫原性;检测免疫血清中IgA类抗体分析小鼠黏膜免疫应答;对小鼠血清中的不同类型的抗体量进行分析,通过流式细胞仪检测PBMC细胞因子IFN-γ和IL-4用以分析小鼠免疫激活途径;病毒中和实验检测免疫血清对病毒感染细胞的抑制能力.结果 CTB作为载体蛋白具有很好的免疫原性,能够诱导免疫系统产生针对MPER表位的抗体,刺激小鼠产生黏膜免疫应答,诱导针对MPER表位的IgA抗体.同时,融合蛋白可以刺激机体的IgG1,IgG2a和IgG2b类抗体的产生和刺激小鼠体内的Th2类免疫途径.中和实验结果显示,CTB-4E10免疫后的血清可以抑制NL4-3病毒对细胞的感染.结论 CTB融合蛋白具有强免疫原性,可以刺激体液免疫反应,黏膜免疫反应和Th2类免疫途径,并且CTB-4E10蛋白免疫血清能够抑制NL4-3病毒感染细胞.本研究为HIV-1 gp41 MPER作为候选疫苗的探索奠定基础. 展开更多
关键词 霍乱毒素B亚基 免疫应答
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模拟HIV-1 gp41 CHR表位短肽的筛选及研究 被引量：4
2
作者 罗海波 郭海萍 +2 位作者 刘北一 朱平 富宁 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期250-252,262,共4页
目的　利用针对HIV 1跨膜蛋白gp4 1CHR序列合成肽C34的单克隆抗体 1G1筛选噬菌体 12肽库 ,旨在找寻模拟C34肽表位的序列 ,同时探索该短肽成为HIV 1gp4 1NHR与CHR结合抑制物的可能性。方法　以 1G1为钓饵蛋白对噬菌体 12肽库进行亲和筛... 目的　利用针对HIV 1跨膜蛋白gp4 1CHR序列合成肽C34的单克隆抗体 1G1筛选噬菌体 12肽库 ,旨在找寻模拟C34肽表位的序列 ,同时探索该短肽成为HIV 1gp4 1NHR与CHR结合抑制物的可能性。方法　以 1G1为钓饵蛋白对噬菌体 12肽库进行亲和筛选 ,以双夹心ELISA鉴定阳性克隆。结果　经 3轮筛选后 ,随机挑选 17个噬菌体克隆 ,其中 6个克隆与1G1显示出较强的结合活性。上述 6个阳性克隆经DNA测序 ,氨基酸序列相同 :HYEFWAWNWEAN ,其明显的疏水性质类似于C34N末端 ,特异性鉴定显示这些克隆均能够与HIV 1gp4 1N多肽结合。结论　该噬菌体克隆展示肽可模拟HIV 1gp4 1CHR多肽表位 。 展开更多
关键词 噬菌体肽库 gp41CHR表位 模拟肽 hiv-1感染 艾滋病
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HIV-1 gp41基因的分段克隆和表达 被引量：3
3
作者 赵茜 徐志凯 +7 位作者 阎岩 王海涛 吴兴安 张芳琳 刘勇 白文涛 罗雯 姜世勃 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期484-485,共2页
目的在大肠杆菌中表达HIV-1gp41N肽和C肽基因。方法用PCR方法从含HIV-1gp160基因的质粒中扩增HIV-1gp41N肽和C肽基因,重组入pGEX-4T-1载体,并亚克隆入pGEM7zf+中测定核苷酸序列,限制性酶切鉴定后进行原核表达。结果成功地扩增到HIV-1gp... 目的在大肠杆菌中表达HIV-1gp41N肽和C肽基因。方法用PCR方法从含HIV-1gp160基因的质粒中扩增HIV-1gp41N肽和C肽基因,重组入pGEX-4T-1载体,并亚克隆入pGEM7zf+中测定核苷酸序列,限制性酶切鉴定后进行原核表达。结果成功地扩增到HIV-1gp41N肽和C肽基因,酶切鉴定及测序结果与已知HIV-1亚型的gp41N肽区和C肽区基因序列一致,SDS-PAGE结果显示,表达出与预期分子量大小相同的蛋白。结论N肽和C肽基因的成功表达,为进一步研究其结构和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 hiv-1 gp41 基因扩增 原核表达
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抗HIV-1 gp41合成多肽C34单抗的制备及生物学活性 被引量：5
4
作者 郭海萍 刘北一 +2 位作者 罗海波 韩强涛 富宁 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期89-91,共3页
目的制备针对C34和C46单抗, 并以此为工具研究gp41表位,进一步 了解HIV-1包膜蛋白的作用机理和病毒的感染机制,为寻找新的治疗靶点提供抗体工具。 方法常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗C34与C46的单克隆抗体,并鉴定其 特异性位点... 目的制备针对C34和C46单抗, 并以此为工具研究gp41表位,进一步 了解HIV-1包膜蛋白的作用机理和病毒的感染机制,为寻找新的治疗靶点提供抗体工具。 方法常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗C34与C46的单克隆抗体,并鉴定其 特异性位点，还用ELISA法、MTT法及荧光分子探针技术对单抗的生物学活性进行研究。结果获得了3株抗C34单克隆抗体、2株抗C46单抗。此5个单抗均与C34结合 , 并抑制N36肽与C34肽复合物的形成；其中效价最高的1G1对H9/HIVⅢB细胞的生长有刺 激作用 ,对H9/HIVⅢB细胞和MT-2细胞的融合无明显影响。结论得到5株 可与C34反应,并可抑制C34与N36多肽结合的单抗, 其中1G1所识别的表位可能为增强性或刺激性表位。 展开更多
关键词 hiv-1 gp41 增强性表位 生物学活性 抗C34单克隆抗体 N36肽
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重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体纯化条件的优化 被引量：2
5
作者 孙静 傅晶晶 +4 位作者 霍烛 陈佩 胡云章 刘勇 郝彦玲 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第4期395-398,共4页
目的优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件。方法将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的蛋白,纯化产物经West-ernblot进行鉴定。结果... 目的优化重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件。方法将表达Gp41的大肠杆菌菌体高压匀浆破碎、洗涤分离提取包涵体,以不同pH值的低浓度变性剂溶解包涵体,稀释复性并用离子交换层析纯化目的蛋白,纯化产物经West-ernblot进行鉴定。结果以50mmol/LTris buffer、2mol/L,pH11.5尿素溶解的包涵体蛋白得到很好的溶解,目的蛋白复性得率大于40%。经纯化后,目的蛋白的纯度大于90%,且具有良好的反应原性。结论优化了重组HIV-1跨膜蛋白Gp41包涵体的纯化条件,为HIV-1Gp41抗原纯化工艺的放大提供了依据。 展开更多
关键词 hiv-1 跨膜蛋白gp41 包涵体 纯化
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HIV-1膜蛋白基因gp120和gp41的合成及在毕赤酵母中的表达 被引量：3
6
作者 洪国强 胡波 李朝霞 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期198-200,共3页
目的合成适合酵母表达的HIV-1膜蛋白gp120和gp41基因,在毕赤酵母中高效表达分泌型重组HIV-1 gp120和gp41抗原。方法选用酵母偏爱的同义密码子替换野生型gp120和gp41基因的酵母稀有密码子,采取基因搭桥法及聚合酶链反应(PCR),合成HIV-1 g... 目的合成适合酵母表达的HIV-1膜蛋白gp120和gp41基因,在毕赤酵母中高效表达分泌型重组HIV-1 gp120和gp41抗原。方法选用酵母偏爱的同义密码子替换野生型gp120和gp41基因的酵母稀有密码子,采取基因搭桥法及聚合酶链反应(PCR),合成HIV-1 gp120和gp41基因,构建分泌型重组质粒并转化毕赤酵母菌株GS115,经甲醇诱导表达HIV-1外膜糖蛋白gp120和gp41。结果DNA测序证实合成的HIV-1 gp120和gp41基因正确克隆到表达载体中;聚丙烯酰胺凝胶电泳及免疫印迹显示gp120和gp41在毕赤酵母中高效分泌表达。结论gp120和gp41合成基因在毕赤酵母表达系统高效分泌表达。 展开更多
关键词 hiv-1 gp120 gp41 合成基因 毕赤酵母
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HIV-1 gp41的酵母表面展示及表达优化 被引量：2
7
作者 向柱方 林影 +2 位作者 叶波 韩双艳 赵树进 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期684-689,共6页
以His标签检测蛋白的表达,利用酿酒酵母表面展示系统,成功地将HIV-1 gp41片段锚定在酵母表面,并检测到gp41的活性。以pMD18T-gp41为模板,通过PCR技术克隆了gp41基因,将gp41基因通过双酶切连接到载体pICAS-His上,构建了gp41酵母表面展示... 以His标签检测蛋白的表达,利用酿酒酵母表面展示系统,成功地将HIV-1 gp41片段锚定在酵母表面,并检测到gp41的活性。以pMD18T-gp41为模板,通过PCR技术克隆了gp41基因,将gp41基因通过双酶切连接到载体pICAS-His上,构建了gp41酵母表面展示载体,并将其转化至酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)MT8-1中。重组菌经培养,利用免疫荧光染色方法进行染色,显微镜观察发现重组酵母细胞表面有绿色荧光,流式细胞仪结果进一步证实gp41正确折叠展示于酵母细胞表面。采用不同浓度的葡萄糖培养基进行表达优化。当葡萄糖浓度为1%时,82.46%的酵母细胞表达了gp41抗原;随着葡萄糖浓度升高,蛋白表达受到抑制。 展开更多
关键词 酵母展示技术 hiv-1 gp41 免疫荧光染色 流式细胞仪
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HIV-1gp41 C-螺旋模拟位的筛选和鉴定 被引量：2
8
作者 刘北一 朱平 +2 位作者 韩强涛 姜世勃 富宁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期633-636,共4页
目的 :筛选可作为小分子先导化合物的HIV 1gp4 1C螺旋模拟位 ,为开发抗HIV 1早期感染的小分子药物奠定基础。方法 :以源于HIV 1gp4 1N端的肽N36为靶 ,对噬菌体环七肽库进行亲和筛选。利用ELISA鉴定噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析... 目的 :筛选可作为小分子先导化合物的HIV 1gp4 1C螺旋模拟位 ,为开发抗HIV 1早期感染的小分子药物奠定基础。方法 :以源于HIV 1gp4 1N端的肽N36为靶 ,对噬菌体环七肽库进行亲和筛选。利用ELISA鉴定噬菌体阳性克隆并对其进行DNA序列分析。结果 :3轮筛选后随机挑取 2 6个噬菌体克隆 ,ELISA鉴定表明有 16个克隆可与N36结合 ,将其中 10个克隆DNA测序并推导氨基酸序列 ,每一克隆至少含有 2个疏水氨基酸 ,其中 9个克隆均有WW ,7个克隆有WWH保守序列。挑选阳性噬菌体克隆No 8进一步鉴定 ,游离N36肽阻断No 8克隆与固相化N36结合 ,C34肽竞争抑制N36肽与No 8克隆结合 (IC50 为 12 5 μg ml)。 结论 :表达WW保守序列的肽模拟HIV 1gp4 1C螺旋与N螺旋结合 ,该结果为设计针对HIV介导融膜的抑制剂提供技术支持。 展开更多
关键词 hiv-1 gp41 N-螺旋 C-螺旋 模拟位 噬菌体肽库
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应用疏水层析纯化HIV-1跨膜蛋白gp41截短体包涵体 被引量：2
9
作者 端义坤 汪超英 +1 位作者 孙可芳 张涛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第3期166-167,共2页
目的对表达HIV-1跨膜蛋白gp41截短体包涵体进行纯化。方法将收获的表达菌体洗涤、超声波破菌、预处理后进行疏水层析。结果纯化后的gp41截短体的融合蛋白纯度达到90％,并且具有较好的抗原性和特异性。结论利用疏水层析可以将目的蛋白进... 目的对表达HIV-1跨膜蛋白gp41截短体包涵体进行纯化。方法将收获的表达菌体洗涤、超声波破菌、预处理后进行疏水层析。结果纯化后的gp41截短体的融合蛋白纯度达到90％,并且具有较好的抗原性和特异性。结论利用疏水层析可以将目的蛋白进行有效的纯化,为下一步的应用打下基础。 展开更多
关键词 人类免疫缺陷病毒1型 hiv-1 跨膜蛋白 gp41 包涵体 纯化 疏水层析
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用M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达HIV-1 gp41抗原表位 被引量：1
10
作者 冯福民 李敬云 +3 位作者 鲍作义 刘思杨 李林 庄道民 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2006年第12期2313-2315,2319,共4页
目的:探讨M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达融合蛋白的可行性。方法:以纯化的HIV-1感染者血清多克隆抗体为配体,在噬菌体展示随机十二肽库中进行生物淘洗,经ELISA鉴定阳性克隆,DNA测序,确定优势表位。将优势表位及两个优势表位的串联体... 目的:探讨M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达融合蛋白的可行性。方法:以纯化的HIV-1感染者血清多克隆抗体为配体,在噬菌体展示随机十二肽库中进行生物淘洗,经ELISA鉴定阳性克隆,DNA测序,确定优势表位。将优势表位及两个优势表位的串联体分别与M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域连接,克隆入PQE30载体进行蛋白表达,再以表达蛋白为抗原检测HIV-1感染者血清中的抗体。结果:成功筛选到位于HIV-1 gp41蛋白上的3组优势抗原表位(HGPKDAETTAIW;AAFKDNQLLRIW;AAFKDNQLTRIW),3组优势表位及表位串联体(YGPKDAETTAIW-GGGS-SCSAKFTCTTQI)在PQE30载体中实现可溶性融合表达。重组蛋白具有良好的抗原性,能与不同的HIV-1抗体阳性血清呈特异反应。结论:用M13噬菌体PⅢ蛋白Ⅰ-Ⅱ结构域表达HIV-1 gp41抗原表位是可行的。 展开更多
关键词 M13噬菌体 PⅢ蛋白 hiv-1 gp41 表位 基因表达
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HIV-1gp41核心结构模拟位的筛选与鉴定 被引量：1
11
作者 刘北一 罗海波 +2 位作者 朱平 姜世勃 富宁 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第7期461-463,472,共4页
目的 :筛选并鉴定HIV 1gp4 1核心表位。方法 :用识别HIV 1gp4 1的构象特异性单克隆抗体NC 1筛选噬菌体12肽库 ,通过夹心ELISA、NC 1特异性阻断实验、竞争抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆 ,DNA序列分析阳性克隆。结果 :经 3轮筛选 ,随机挑取 ... 目的 :筛选并鉴定HIV 1gp4 1核心表位。方法 :用识别HIV 1gp4 1的构象特异性单克隆抗体NC 1筛选噬菌体12肽库 ,通过夹心ELISA、NC 1特异性阻断实验、竞争抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆 ,DNA序列分析阳性克隆。结果 :经 3轮筛选 ,随机挑取 2 4个噬菌体克隆 ,ELISA鉴定表明有 10个克隆可与NC 1结合 ,DNA序列分析并推导氨基酸序列 ,共 5种序列 :HDVHHRWVYLLS、ITVNEWLYTSEQ、HGRSHGMFKPKR、MGPIARPHWHLN、DMYRSPRPKPDT。其中gp4 1N肽和C肽所形成的复合物可特异性阻断表达HDVHHRWVYLLS ,VNEWLYTSEQ和MGPIARPHWHLN的克隆与NC 1的结合。结论 :所得序列HDVHHR WVYLLS ,VNEWLYTSEQ及MGPIARPHWHLN模拟HIV 1gp4 1六螺旋束核心表位。 展开更多
关键词 hiv-1gp41 核心结构 模拟位 筛选 鉴定
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HIV-1囊膜糖蛋白gp41三聚体结构域基因的表达及其单克隆抗体的制备 被引量：1
12
作者 陈峥 徐志凯 +2 位作者 黄庆生 黎志东 姜世勃 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期487-489,共3页
目的 :表达HIV 1囊膜糖蛋白gp4 1三聚体结构域基因N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,并制备针对该融合蛋白的单克隆抗体 (mAb) ,为筛选抗HIV多肽及分析gp4 1表位的免疫原提供抗体工具。方法 :在BL2 1(DE3)中诱导表达N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,经mAb... 目的 :表达HIV 1囊膜糖蛋白gp4 1三聚体结构域基因N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,并制备针对该融合蛋白的单克隆抗体 (mAb) ,为筛选抗HIV多肽及分析gp4 1表位的免疫原提供抗体工具。方法 :在BL2 1(DE3)中诱导表达N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,经mAbNC 1鉴定后 ,采用小鼠腹股沟皮下NC膜免疫的方法免疫小鼠 ,并进行细胞融合、克隆化制备抗N5 1(L6 )C4 6mAb ,用ELISA法初步鉴定其特异性位点。结果 :获得了高表达的N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,并能与识别特异性空间构象的mAbNC 1反应。用该融合蛋白免疫小鼠后 ,获得了 6株抗N5 1(L6 )C4 6的mAb ,这 6株mAb均特异识别兔抗N36 (L6 )C34抗体捕获的融合蛋白 ,但不与N36或C34多肽片段反应。结论 :得到高效表达融合蛋白N5 1(L6 )C4 6 ,并呈现gp4 1核心结构空间构象。用此蛋白免疫小鼠得到 6株特异结合gp4 展开更多
关键词 hiv-1 gp41 原核表达 单克隆抗体
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基于中国HIV-1 CRF01_AE重组亚型gp41 NHR结构域亚单位疫苗的研究 被引量：2
13
作者 邵继平 姜世勃 刘叔文 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1250-1253,1257,共5页
目的:构建基于中国HIV-1 CRF01_AE重组亚型包膜糖蛋白gp41 NHR结构域N51的亚单位疫苗,并进行免疫原性研究。方法:设计4条引物,运用重叠延伸PCR方法扩增出N51Fd基因,将其插入真核表达载体pFUSE-hIgG1-Fc2,构建重组质粒pFUSE/N51Fd并进行... 目的:构建基于中国HIV-1 CRF01_AE重组亚型包膜糖蛋白gp41 NHR结构域N51的亚单位疫苗,并进行免疫原性研究。方法:设计4条引物,运用重叠延伸PCR方法扩增出N51Fd基因,将其插入真核表达载体pFUSE-hIgG1-Fc2,构建重组质粒pFUSE/N51Fd并进行序列测定。Western blot法检测N51FdFc-AE重组蛋白的表达。用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠后,ELISA法检测小鼠的抗体反应。结果:成功构建了pFUSE/N51Fd重组质粒,N51FdFc-AE重组蛋白在真核体系获得了高效表达,Western blot结果显示在相对分子质量(Mr)35 000处有目的蛋白条带。小鼠抗血清能特异性识别源于gp41 NHR的抗原,效价高达1∶102 400,平均效价为1∶51 200。结论:改造后的亚单位疫苗能有效激活机体的免疫响应,可用于HIV候选疫苗的研发。 展开更多
关键词 hiv-1 CRF01_AE病毒株 包膜糖蛋白gp41 NHR结构域 亚单位疫苗
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HIV-1gp41胞外域对新生隐球菌致人脑微血管内皮细胞骨架改变的影响 被引量：3
14
作者 龙敏 曹虹 Ambrose Jong 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期478-481,共4页
目的探讨HIV-1 gp41胞外域gp41-I90肽对新生隐球菌致人脑微血管内皮细胞骨架改变的影响。方法以人脑微血管内皮细胞作为体外血脑屏障模型,在细胞培养玻片或transwell小室上长成单层,用HIV-1 gp41-I90预处理后,再用新生隐球菌感染细胞单... 目的探讨HIV-1 gp41胞外域gp41-I90肽对新生隐球菌致人脑微血管内皮细胞骨架改变的影响。方法以人脑微血管内皮细胞作为体外血脑屏障模型,在细胞培养玻片或transwell小室上长成单层,用HIV-1 gp41-I90预处理后,再用新生隐球菌感染细胞单层,免疫荧光方法检测细胞骨架蛋白actin(肌动蛋白)和filamin(肌动蛋白连接蛋白)的形态变化,并测定gp41-I90处理的人脑微血管内皮细胞单层对辣根过氧化物酶和新生隐球菌的通过率。结果 gp41-I90能明显增强新生隐球菌所致的人脑微血管内皮细胞骨架蛋白actin和filamin的改变,actin和filamin的丝状排列扭曲,纹理稀疏;gp41-I90处理的人脑微血管内皮细胞单层通透性增强,对辣根过氧化物酶和新生隐球菌的通过率明显增加。结论 HIV-1 gp41胞外域gp41-I90肽促进新生隐球菌黏附和侵入血脑屏障,与其增强新生隐球菌所致人脑微血管内皮细胞骨架改变有关。 展开更多
关键词 hiv-1gp41 新生隐球菌 人脑微血管内皮细胞
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HIV-1 CRF07_BC gp41重组抗原在不同体系表达效率的比较 被引量：1
15
作者 王妮丹 罗振武 +3 位作者 郝彦玲 孙红岩 何彦平 邵一鸣 《中国热带医学》 CAS 2014年第4期392-395,共4页
目的获得HIV-1 CRF07_BC株gp41重组抗原表达效率最佳的体系。方法采用基因工程技术将gp41重组蛋白基因分别构建到pThioHis A,pThioHis A-1(不含标签),PBV220,PGEX-6p-1原核表达载体。转化大肠杆菌BL21和Rosetta两种宿主菌,通过IPTG诱导... 目的获得HIV-1 CRF07_BC株gp41重组抗原表达效率最佳的体系。方法采用基因工程技术将gp41重组蛋白基因分别构建到pThioHis A,pThioHis A-1(不含标签),PBV220,PGEX-6p-1原核表达载体。转化大肠杆菌BL21和Rosetta两种宿主菌,通过IPTG诱导表达并经WB鉴定。结果 4种原核表达质粒构建完成,蛋白成功表达。PGEX-6p-1表达量明显高于pThioHis A载体;而无标签载体组中,PBV220表达量优于pThioHis A-1。BL21和Rosetta宿主菌对表达体系无影响。结论 HIV-1 CRF07_BC株gp41重组抗原在大肠杆菌中以包涵体形式存在,构建在PGEX-6p-1和PBV220载体上gp41重组蛋白表达效率较高,为gp41疫苗的研究和血清学检测提供充足的抗原。 展开更多
关键词 hiv-1 CRF07_BC株 gp41重组抗原 表达
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双抗体夹心ELISA检测HIV-1 gp41抗原方法的建立 被引量：1
16
作者 于澜 徐志凯 +2 位作者 王海涛 黎志东 张芳琳 《生物技术通讯》 CAS 2006年第6期920-921,共2页
目的:建立检测HIV-1gp41抗原的双抗体夹心ELISA,并探讨其临床应用的可行性。方法:用饱和硫酸铵(SAS)纯化抗HIV-1gp41-5单克隆抗体(mAb),用HRP标记后建立双抗体夹心ELISA法,对其灵敏度及特异性进行检测,并用该方法对40份HIV-1阳性血清进... 目的:建立检测HIV-1gp41抗原的双抗体夹心ELISA,并探讨其临床应用的可行性。方法:用饱和硫酸铵(SAS)纯化抗HIV-1gp41-5单克隆抗体(mAb),用HRP标记后建立双抗体夹心ELISA法,对其灵敏度及特异性进行检测,并用该方法对40份HIV-1阳性血清进行了检测。结果:用mAbE12(5μg/mL)为包被抗体,2H6为酶标记抗体(1∶900)建立了双抗体夹心ELISA法,检测gp41-5多肽的灵敏度是100pg/mL。对HIV-1阳性血清中gp41抗原的检出率为67.5%(27/40)。结论:建立了特异性强、灵敏度良好的检测HIV-1gp41抗原的双抗体夹心ELISA法。 展开更多
关键词 hiv-1 gp41 gp41-5 单克隆抗体 双抗体夹心酶联免疫吸附试验
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抗HIV-1gp41合成多肽gp41-5单克隆抗体的制备及初步鉴定 被引量：1
17
作者 于澜 徐志凯 +4 位作者 王海涛 张芳琳 白文涛 司瑞 胡刚 《科学技术与工程》 2006年第2期127-130,共4页
制备抗HIV-1gp41合成多肽gp41-5的单克隆抗体(mAb),为筛选抗HIV-1多肽及分析gp41的抗原表位提供有用工具。常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗gp41-5多肽mAb,并用ELISA法对其特异性、抗原识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定。获得了... 制备抗HIV-1gp41合成多肽gp41-5的单克隆抗体(mAb),为筛选抗HIV-1多肽及分析gp41的抗原表位提供有用工具。常规动物免疫、细胞融合、克隆化制备抗gp41-5多肽mAb,并用ELISA法对其特异性、抗原识别表位及相对亲和力等做了初步鉴定。获得了4株抗gp41-5多肽的mAb,这4株mAb均特异识别gp41-5多肽,但不与gp41的N36或C34多肽片段反应。得到的4株mAb能特异结合gp41核心结构的空间构象。 展开更多
关键词 hiv-1 gp41 gp41-5单克隆抗体
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HIV-1 P24截短体与gp41截短体的融合蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化和鉴定 被引量：1
18
作者 陈伟 闭兰 +2 位作者 朱华松 李茜 余模松 《微生物学免疫学进展》 2001年第4期1-5,共5页
用基因重组技术将截短的HIV 1p2 4基因和gp41基因连接成嵌合基因 ,插入质粒 pGEX 4T3,构建成重组表达质粒pGEX F。将 pGEX F转化大肠杆菌BL2 1。经IPTG诱导表达 ,pGEX F在大肠杆菌BL2 1中获得了高效表达。融合蛋白P2 4 gp41经Glutathion... 用基因重组技术将截短的HIV 1p2 4基因和gp41基因连接成嵌合基因 ,插入质粒 pGEX 4T3,构建成重组表达质粒pGEX F。将 pGEX F转化大肠杆菌BL2 1。经IPTG诱导表达 ,pGEX F在大肠杆菌BL2 1中获得了高效表达。融合蛋白P2 4 gp41经Glutathione Sepharose4B亲和层析纯化后 ,用间接ELISA和免疫印迹检测HIV抗体阳性血清和正常人血清 ,P2 4 gp41只与HIV抗体阳性血清反应 ,证明获得的融合蛋白P2 4 gp41有很强的抗原特异性和免疫反应性 。 展开更多
关键词 hiv-1 P24 gp41 融合蛋白 大肠杆菌 表达 纯化 截短体 免疫诊断试剂
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HIV-1 SF_2株env基因(gp41)的克隆构建及其原核表达 被引量：1
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作者 董梅 鲁晓青 +1 位作者 陈向伟 王斌 《山西医科大学学报》 CAS 2001年第6期481-483,共3页
目的　克隆并在大肠杆菌中表达HIVgp4 1。 方法　应用PCR技术 ,纯化HIV 1SF2 株外膜蛋白env基因 (gp4 1) ,并重组入原核高效表达载体 pBV2 2 0 ,在大肠杆菌HB10 1中进行表达。 结果　SDS PAGE电泳结果表明 ,在 4 4 0 0 0处有一条蛋白表... 目的　克隆并在大肠杆菌中表达HIVgp4 1。 方法　应用PCR技术 ,纯化HIV 1SF2 株外膜蛋白env基因 (gp4 1) ,并重组入原核高效表达载体 pBV2 2 0 ,在大肠杆菌HB10 1中进行表达。 结果　SDS PAGE电泳结果表明 ,在 4 4 0 0 0处有一条蛋白表达带。Westernblot证明 ,4 4 0 0 0蛋白带可与HIV 1阳性血清发生特异性反应。结论　该重组表达 gp4 1的融合蛋白 ,可为HIV 1gp4 1。 展开更多
关键词 hiv-1SF2株 HIV包膜蛋白质gp41 PBV220 原核表达 基因 克隆 大肠杆菌
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HIV-1 gp41蛋白与其抑制剂NB-2的结合模式
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作者 王存新 丛肖静 +2 位作者 孔韧 谭建军 陈慰祖 《北京工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1118-1123,共6页
为了设计以HIV-1跨膜蛋白gp41为靶点的抑制剂,采用分子对接、分子动力学模拟及自由能计算方法研究了gp41与其抑制剂NB-2的结合模式,利用从头药物设计方法,通过改造NB-2的结构,设计了有效的gp41选择性抑制剂,并用分子对接方法评价了这些... 为了设计以HIV-1跨膜蛋白gp41为靶点的抑制剂,采用分子对接、分子动力学模拟及自由能计算方法研究了gp41与其抑制剂NB-2的结合模式,利用从头药物设计方法,通过改造NB-2的结构,设计了有效的gp41选择性抑制剂,并用分子对接方法评价了这些新化合物的结合模式和能力.从分子对接结果得到2种主要的NB-2与gp41的结合模式.分子动力学模拟和自由能计算结果表明,结合模式1优于模式2,所以模式1是比较合理的结合模式.从结合模式1出发设计了103个新的化合物,这些化合物具有已知gp41抑制剂所没有的结构特征且大部分化合物比NB-2与gp41的结合自由能低.得到的结合模式合理解释了NB-2与gp41的相互作用. 展开更多
关键词 hiv-1 gp41 抑制剂 结合模式 分子模拟 从头药物设计
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