目的建立新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留数字微滴PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法并进行验证,为新型冠状病毒mRNA疫苗的质量控制提供技术支持。方法以不同质粒共有DNA序列复制子为靶基因,设计特异性引物和探针,建立新型冠状病...目的建立新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留数字微滴PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法并进行验证,为新型冠状病毒mRNA疫苗的质量控制提供技术支持。方法以不同质粒共有DNA序列复制子为靶基因,设计特异性引物和探针,建立新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留ddPCR检测方法,并进行线性范围、重复性、准确度、中间精密度、耐用性、检测限、定量限、专属性验证;用建立的方法检测不同企业、不同变异株新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留。结果选择58℃为建立的ddPCR法的最优退火温度。检测拷贝数在19~4729 copies/μL范围内,线性良好,R^(2)=0.9999;重复性变异系数(coefficient of variation,CV)<10%;准确度回收率在99%121%之间,CV<10%;中间精密度和耐用性CV均<10%;建立的方法检测限为9 copies/μL,定量限为26 copies/μL,专属性良好。4家不同企业、不同变异株新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留CV均≤15%,回收率在79%138%之间。结论建立的新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留ddPCR检测方法灵敏度高、稳定性好、专属性强、准确度高,适用于新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留量检测。展开更多
无细胞蛋白合成系统(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种体外蛋白质合成的高效平台,与体内蛋白合成系统相比,它突破了活细胞的限制,使蛋白合成反应可以在试管中进行,具有灵活、高效、可控性强的特点。近几年来,合成生物学领域新...无细胞蛋白合成系统(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种体外蛋白质合成的高效平台,与体内蛋白合成系统相比,它突破了活细胞的限制,使蛋白合成反应可以在试管中进行,具有灵活、高效、可控性强的特点。近几年来,合成生物学领域新技术的涌现推动了CFPS系统的快速发展,尤其在细胞提取物和模板DNA方面。细胞提取物和模板DNA是CFPS系统中不可或缺的重要组成,很大程度上决定了无细胞反应的效率和成本。本文综述了CFPS系统中细胞提取物和模板DNA方面的研究进展,主要介绍了最近新开发的细胞提取物系统的特点和应用前景,以及质粒DNA模板和线性DNA模板的研究进展。展开更多
文摘目的建立新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留数字微滴PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法并进行验证,为新型冠状病毒mRNA疫苗的质量控制提供技术支持。方法以不同质粒共有DNA序列复制子为靶基因,设计特异性引物和探针,建立新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留ddPCR检测方法,并进行线性范围、重复性、准确度、中间精密度、耐用性、检测限、定量限、专属性验证;用建立的方法检测不同企业、不同变异株新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留。结果选择58℃为建立的ddPCR法的最优退火温度。检测拷贝数在19~4729 copies/μL范围内,线性良好,R^(2)=0.9999;重复性变异系数(coefficient of variation,CV)<10%;准确度回收率在99%121%之间,CV<10%;中间精密度和耐用性CV均<10%;建立的方法检测限为9 copies/μL,定量限为26 copies/μL,专属性良好。4家不同企业、不同变异株新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留CV均≤15%,回收率在79%138%之间。结论建立的新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留ddPCR检测方法灵敏度高、稳定性好、专属性强、准确度高,适用于新型冠状病毒mRNA疫苗模板DNA残留量检测。
文摘无细胞蛋白合成系统(cell-free protein synthesis,CFPS)是一种体外蛋白质合成的高效平台,与体内蛋白合成系统相比,它突破了活细胞的限制,使蛋白合成反应可以在试管中进行,具有灵活、高效、可控性强的特点。近几年来,合成生物学领域新技术的涌现推动了CFPS系统的快速发展,尤其在细胞提取物和模板DNA方面。细胞提取物和模板DNA是CFPS系统中不可或缺的重要组成,很大程度上决定了无细胞反应的效率和成本。本文综述了CFPS系统中细胞提取物和模板DNA方面的研究进展,主要介绍了最近新开发的细胞提取物系统的特点和应用前景,以及质粒DNA模板和线性DNA模板的研究进展。
