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实时PCR定量分析体内基因转染效率的可行性
1
作者 高春记 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期132-136,共5页
为了探索实时PCR技术评价基因转染效率的可行性 ,利用克隆PCR检测逆转录病毒载体介导的neo基因导入原代成肌细胞的转染效率 ,同时行实时PCR检测 ,对二者结果进行对比分析 ;利用线性扩增介导的PCR(LAM PCR)技术和逆转录病毒 5′LTR插入... 为了探索实时PCR技术评价基因转染效率的可行性 ,利用克隆PCR检测逆转录病毒载体介导的neo基因导入原代成肌细胞的转染效率 ,同时行实时PCR检测 ,对二者结果进行对比分析 ;利用线性扩增介导的PCR(LAM PCR)技术和逆转录病毒 5′LTR插入细胞基因组位点的分析 ,确定单细胞内基因转染的拷贝数。结果显示 :①在低转染率的情况下 (<36 % )二者的结果相近 ,但是在高转染率情况下二者的结果差别明显 ;②逆转录病毒载体介导的转染 ,在原代成肌细胞中为单拷贝基因导入基因组内。结论 :实时PCR可以比较精确地估计体内病毒载体介导的基因转染效率 ;而在体外由于多为高转染率 。 展开更多
关键词 实时pcr定量分析 基因转染效率 克隆 逆转录病毒载体 生物医学
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系列PCR方法检测淋巴细胞白血病克隆性基因重排的选择应用
2
作者 徐兵 周淑芸 孙竞 《第一军医大学学报》 CSCD 1996年第4期300-302,共3页
以１次、半巢式及多重ＰＣＲ方法扩增５８例淋巴细胞白血病ＩｇＨ及ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ克隆性基因重排。结果显示：多重ＰＣＲ和１次ＰＣＲ的敏感度为１０￣（－４）～１０￣（－５）水平；半巢式ＰＣＲ敏感度可达１０￣（－５）～１０... 以１次、半巢式及多重ＰＣＲ方法扩增５８例淋巴细胞白血病ＩｇＨ及ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ克隆性基因重排。结果显示：多重ＰＣＲ和１次ＰＣＲ的敏感度为１０￣（－４）～１０￣（－５）水平；半巢式ＰＣＲ敏感度可达１０￣（－５）～１０￣（－６）水平。ＩｇＨ和ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ重排阳性率为６７．２％和６２．０％；半巢式ＰＣＲ检测ＩｇＨ重排阳性率为７０．７％。上述结果表明：多重ＰＣＲ可同时检测两对目的基因，适于初治病例检测，而对缓解病例的检测则需采用敏感度较高的半巢式ＰＣＲ方法。 展开更多
关键词 多聚合酶链反应 白血病 克隆性 基因重排
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复合水产养殖环境中气单胞菌耐药性及其同源性分析 被引量：8
3
作者 黄玉萍 邓玉婷 +4 位作者 姜兰 谭爱萍 吴雅丽 王伟利 罗理 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期777-785,共9页
从广东省佛山市4个不同畜禽-鱼复合养殖场采集分离猪/鸭源、鱼源、水源、泥源气单胞菌(Aeromonas)共57株,通过K-B药敏纸片法,测定其对8类24种药物的敏感性;提取基因组DNA,进行肠杆菌基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)及脉冲场凝胶电泳(PFGE)... 从广东省佛山市4个不同畜禽-鱼复合养殖场采集分离猪/鸭源、鱼源、水源、泥源气单胞菌(Aeromonas)共57株,通过K-B药敏纸片法,测定其对8类24种药物的敏感性;提取基因组DNA,进行肠杆菌基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)及脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型。57株气单胞菌对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、利福平具有较高耐药率;不同菌株间存在耐药谱差异。57株气单胞菌通过ERIC-PCR分型,可分为24个基因型;采用PFGE分型可分为46个簇。两种分型方法均发现来源于同一养殖场的菌株存在相同或相似图谱的分离株,并且有相似的耐药谱,提示此为同一克隆株。实验结果表明,ERIC-PCR及PFGE分子分型技术均适用于气单胞菌的相关性分析及其耐药性克隆传播追踪;复合水产养殖环境有可能有利于耐药菌从畜禽向水产养殖环境转移。本研究通过对不同来源气单胞菌进行耐药性分析及溯源追踪,旨在为规范畜禽-鱼复合养殖模式用药及建立健康的水产养殖模式提供参考。 展开更多
关键词 气单胞菌 复合养殖 耐药性 PFGE ERIC-pcr 克隆传播
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部队医院多药耐药鲍氏不动杆菌主要流行克隆谱系的分析 被引量：3
4
作者 董喆 丁志平 +2 位作者 徐雅萍 闫中强 沈定霞 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第24期5118-5121,共4页
目的了解我国部队医院中多药耐药鲍氏不动杆菌的主要流行克隆谱系,揭示分子流行的趋势。方法基于鲍氏不动杆菌的靶标基因ompA、csuE和blaOXA-51-like设计2组特异性引物,并建立了基于序列分型的多重PCR方法;进一步选用该方法鉴定多药耐... 目的了解我国部队医院中多药耐药鲍氏不动杆菌的主要流行克隆谱系,揭示分子流行的趋势。方法基于鲍氏不动杆菌的靶标基因ompA、csuE和blaOXA-51-like设计2组特异性引物,并建立了基于序列分型的多重PCR方法;进一步选用该方法鉴定多药耐药鲍氏不动杆菌的主要流行克隆谱系。结果分离自我国6所部队医院的194株多药耐药鲍氏不动杆菌以Group 1序列型为主,所占的比例高达73.7%;除了Group 1序列型外,还发现了属于Group4、Group5、Group8、Group9、Group10序列型的菌株。结论我国部队医院的流行克隆谱系与欧洲克隆谱系Ⅱ具有高度的同源性;该实验研究中未发现属于Group 2和Group3的菌株,说明在我国部队医院中还未发现存在有属于欧洲克隆谱系Ⅰ和Ⅲ的菌株。 展开更多
关键词 多药耐药鲍氏不动杆菌 克隆谱系 多重聚合酶链反应 基于序列分型
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AML-M2a诱导TCR VβT细胞的克隆性增殖和细胞毒作用 被引量：1
5
作者 陈少华 李扬秋 +4 位作者 杨力建 黄梅娟 韩素芳 罗更新 陈盛亭 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第3期195-199,共5页
目的:了解急性髓性白血病(AML)M2a细胞诱导的体外增殖T细胞的特异性杀伤作用和克隆性增殖情况。方 法:利用肿瘤细胞-T淋巴细胞混合培养方法(MLTC),分别收集3例经AML-M2a细胞体外诱导不同扩增时间的健康人T细 胞,利用LDH释放方法分析其... 目的:了解急性髓性白血病(AML)M2a细胞诱导的体外增殖T细胞的特异性杀伤作用和克隆性增殖情况。方 法:利用肿瘤细胞-T淋巴细胞混合培养方法(MLTC),分别收集3例经AML-M2a细胞体外诱导不同扩增时间的健康人T细 胞,利用LDH释放方法分析其特异性细胞毒作用,同时利用RT-PCR和基因扫描方法分析经AML-M2a细胞诱导前后T细胞 的24个TCR Vβ亚家族基因的表达和克隆性情况。结果:在培养第12天和第21天时,1例AML-M2a细胞诱导的3例健康人 T细胞对该诱导细胞的平均杀伤率分别为39.88±7.79％和62.14±9.79％,而对AML-M2a患者和健康人外周血T细胞均无 杀伤作用。TCR Vβ谱系分析发现诱导后3例健康人T细胞均出现Vβ16的克隆性增殖。结论:AML-M2a细胞可诱导健康人 T细胞成为具有克隆性增殖的特异性CTL,并以Vβ16的克隆性增殖为主。 展开更多
关键词 AML—M2a RT—pcr MLTC 基因扫描 克隆性增殖
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类风湿关节炎小鼠关节浸润的T细胞克隆型分析 被引量：1
6
作者 赵文明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期132-133,136,共3页
目的 :对一种自发性类风湿关节炎 (RA)小鼠 (SKG小鼠 )四肢足关节浸润的T细胞克隆型进行分析 ,以了解T细胞克隆型与RA的关系。方法 :采用RT PCR与单链构象多态性分析 (SSCP)相结合的方法。结果 :在SKG小鼠的四肢足关节Vβ2和Vβ8 2T细... 目的 :对一种自发性类风湿关节炎 (RA)小鼠 (SKG小鼠 )四肢足关节浸润的T细胞克隆型进行分析 ,以了解T细胞克隆型与RA的关系。方法 :采用RT PCR与单链构象多态性分析 (SSCP)相结合的方法。结果 :在SKG小鼠的四肢足关节Vβ2和Vβ8 2T细胞克隆型的一致率比较高 (分别为 6 8 1%和 5 9 2 % ) ,并且在被检测的所有小鼠的四肢足关节中都具有一致的Vβ2和Vβ8 2克隆型 (10 0 % )。DNA测序表明在SSCP中显示的来源于不同关节样品的共同的DNA带是相同的T细胞克隆型。T细胞转移试验表明关节聚集的T细胞克隆与RA的病变形成有关。结论 :TCR为Vβ2和Vβ8 2的T细胞可能在SKG小鼠的RA中具有重要作用。 展开更多
关键词 T细胞受体 T细胞克隆型 类风湿关节炎 RT-pcr SSCP
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bcr-abl多肽诱导健康人外周血αβ^+T细胞克隆性增殖
7
作者 李闯 杨力建 +1 位作者 陈少华 李扬秋 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期54-57,共4页
目的分析bcr-abl多肽诱导健康人外周血T细胞TCR Vα和TCR Vβ基因选用和克隆性增殖情况,了解bcr-abl多肽相关的αβ+T细胞克隆。方法利用T细胞液体培养法,应用bcr-abl多肽(KQSSKALQR)联合IL-2+抗CD3单抗+抗CD28单抗体外诱导T细胞(HLA-A0... 目的分析bcr-abl多肽诱导健康人外周血T细胞TCR Vα和TCR Vβ基因选用和克隆性增殖情况,了解bcr-abl多肽相关的αβ+T细胞克隆。方法利用T细胞液体培养法,应用bcr-abl多肽(KQSSKALQR)联合IL-2+抗CD3单抗+抗CD28单抗体外诱导T细胞(HLA-A0201限制性)扩增,同时设不含多肽诱导为对照组。收集诱导后第10、18天的细胞,RT-PCR-基因扫描分析其TCR Vα和Vβ基因谱系变化特点。结果①诱导前健康成年供者的PBMCs可检测到20个TCR Vα亚家族(其中Vα6、Vα14、Vα16亚家族呈寡克隆性)和22个TCR Vβ亚家族(其中Vβ21亚家族呈寡克隆性);②与诱导前相比,TCR Vα亚家族数目无明显变化,诱导第10、18天对照组中TCR Vα亚家族均表达21个亚家族,实验组中分别检测到22、18个TCR Vα亚家族;而TCR Vβ亚家族在诱导后则明显减少,诱导第10、18天对照组中分别检测到15、12个TCR Vβ亚家族,实验组中分别检测到13、11个TCR Vβ亚家族;③bcr-abl多肽诱导后,TCR Vα11呈克隆性增殖趋势,Vβ22和Vβ24亚家族T细胞由多克隆性演变为寡克隆性增殖趋势。结论获得bcr-abl多肽诱导的特定正常αβ+T细胞(HLA-A0201限制性)克隆性增殖,这些选择性增殖的T细胞可能是具有针对bcr-abl抗原特异的T细胞。 展开更多
关键词 T淋巴细胞 受体 抗原 T细胞 α-β 基因扫描 克隆性
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原发性皮肤T细胞淋巴瘤外周血克隆性T细胞的检测与研究 被引量：3
8
作者 王平 邱丙森 +2 位作者 陈明华 高红阳 单易非 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第3期156-158,共3页
为了解原发性皮肤Ｔ细胞淋巴瘤（ＰＣＴＣＬ）外周血中克隆性Ｔ细胞的存在及其与临床疗效的相关性，分别对２５例ＰＣＴＣＬ患者经重组α干扰素治疗前后的外周血标本，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，以通用引物扩增Ｔ细胞受体（ＴＣ... 为了解原发性皮肤Ｔ细胞淋巴瘤（ＰＣＴＣＬ）外周血中克隆性Ｔ细胞的存在及其与临床疗效的相关性，分别对２５例ＰＣＴＣＬ患者经重组α干扰素治疗前后的外周血标本，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法，以通用引物扩增Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ链编码基因中Ｖ（可变区）Ｊ（连接区）的结合序列，检测代表克隆性Ｔ细胞分子标志的ＴＣＲ基因重排（ＧＲ）。结果发现，２５例ＰＣＴＣＬ外周血样品中，１７例见克隆性Ｔ细胞（示ＴＣＲＧＲ），经有效治疗后减至３例，治疗前后克隆性Ｔ细胞的检出率具显著性差异。说明克隆性Ｔ细胞在ＰＣＴＣＬ外周血中常见，外周血中克隆性Ｔ细胞的动态监测对ＰＣＴＣＬ临床疗效的判定有辅助作用。 展开更多
关键词 T细胞淋巴瘤 克隆性T细胞 皮肤肿瘤 pcr
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沙生植物-大赖草克隆多样性 被引量：1
9
作者 蔡小霞 吾买尔夏提.塔汉 代培红 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期330-338,共9页
为了解大赖草在沙漠中种群结构维持稳定的机制,以便更有效地保护和利用其野生植物资源,本试验利用ISSR标记技术对两个典型生境(沙地及沙丘)的大赖草种群的克隆多样性及克隆结构进行了初步研究。NTSYS分析表明:(1)两个种群(共170个样本)... 为了解大赖草在沙漠中种群结构维持稳定的机制,以便更有效地保护和利用其野生植物资源,本试验利用ISSR标记技术对两个典型生境(沙地及沙丘)的大赖草种群的克隆多样性及克隆结构进行了初步研究。NTSYS分析表明:(1)两个种群(共170个样本)均为多克隆种群,共包含98个基因型,且均为局限基因型,群体间的克隆分化较大;(2)大赖草的克隆多样性较高,Simpson指数(D)平均为0.882,基因型比率(PD)平均为0.562,其中克隆多样性表现为HBX>HBN,大赖草能够以根状茎进行克隆繁殖,而保持较高的克隆多样性,这主要与该物种兼性克隆繁殖及多克隆起源有关;(3)两个居群的克隆结构也有明显差异,HBX种群(生长在沙本文地)的克隆生长空间格局表现为游击型,而HBN种群(生长在沙丘)的克隆结构则表现为密集型,这可能是由于大赖草适应异质性生境;(4)进一步对影响大赖草克隆多样性的因素进行了分析,并提出了保护策略。 展开更多
关键词 沙生植物 大赖草 ISSR-pcr 克隆结构 克隆多样性
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