家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV)对蚕丝业的危害极大。该病毒的多角体蛋白编码基因polyhedrin(polh)能够在病毒感染极晚期超高水平表达,并在细胞核内形成包涵体,多角体蛋白转运到宿主细胞核中的详细机制...家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV)对蚕丝业的危害极大。该病毒的多角体蛋白编码基因polyhedrin(polh)能够在病毒感染极晚期超高水平表达,并在细胞核内形成包涵体,多角体蛋白转运到宿主细胞核中的详细机制目前未知。为阐明病毒蛋白的入核机制,本研究通过分子克隆、免疫共沉淀(co-immunoprecipitation, CO-IP)、免疫荧光等方法,详细分析了多角体蛋白(polyhedrin, Polh)的表达规律,并进一步揭示了宿主蛋白importin α通过蛋白互作的方式参与多角体蛋白的入核转运,为进一步深入阐明包括Polh在内的诸多杆状病毒入核蛋白的入核机制提供了参考。展开更多
由家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV)感染导致的家蚕血液型脓病给蚕桑产业造成巨大损失,然而BmNPV与宿主的互作机制至今仍然不明晰。前期的研究发现,BmNPC2可显著促进BmNPV感染,BmNPC2蛋白能够直接与BmNPV...由家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV)感染导致的家蚕血液型脓病给蚕桑产业造成巨大损失,然而BmNPV与宿主的互作机制至今仍然不明晰。前期的研究发现,BmNPC2可显著促进BmNPV感染,BmNPC2蛋白能够直接与BmNPV的囊膜蛋白GP64互作,敲除BmNPC2影响病毒粒子在晚期内体中的膜融合效率。为了鉴定BmNPC2蛋白与病毒囊膜蛋白GP64的互作关键位点,首先通过同源建模以及酵母双杂交试验,筛选出BmNPC2蛋白与囊膜蛋白GP64互作的2个关键区段。随后,将这两个区段位点的氨基酸进行逐个突变,酵母双杂交试验结果表明N95、D97、P105为关键互作位点。在敲除BmNPC2基因的BmE细胞中回补突变3个关键位点的BmNPC2蛋白后,细胞中BmNPV的病毒相对载量显著低于回补野生型BmNPC2蛋白组。以上结果表明,BmNPC2的这3个关键位点的突变显著减弱了BmNPV的感染能力,这些结果将为进一步解析BmNPV侵染家蚕的分子机制提供参考。展开更多
转录因子Jun是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路下游重要的响应因子,可参与细胞生长、死亡和免疫反应等多种生命活动的调节。但对其在家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm-NPV)...转录因子Jun是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路下游重要的响应因子,可参与细胞生长、死亡和免疫反应等多种生命活动的调节。但对其在家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm-NPV)侵染的家蚕细胞中的表达调控机制尚鲜见报道。为了深入探究BmJun在病毒侵染过程中对下游靶基因的调控作用,本研究采用ChIP-seq技术对家蚕BmN细胞中BmJun富集的DNA片段展开分析并进行鉴定。ChIP-seq结果发现大量的结合峰,除了坐落在基因间区外,还在基因启动子区有富集,并且在转录起始位点上下游1000 bp处的reads计数密度较大,暗示BmJun具有调控下游基因的作用。GO功能富集分析显示,BmJun结合的基因涉及组织器官发育、细胞质膜成分、信号受体活性、分子传感器活性、跨膜信号受体活性等功能。KEGG信号通路富集结果显示,BmJun结合相关基因在Wnt信号通路、昆虫激素合成、细胞色素P450对外源性药物的代谢作用、视黄醇新陈代谢、Hippo信号通路、黑色素生成、不饱和脂肪酸的生物合成、cAMP信号通路、mTOR信号通路、凋亡等通路有显著富集。最后,经过筛选获得并鉴定了BmJun在宿主基因组上结合的靶基因,根据已报道的Jun功能分析了BmJun的下游调控网络。研究结果将为BmNPV侵染期间家蚕转录因子BmJun参与调控相关功能的深入研究提供新参考。展开更多
文摘由家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV)感染导致的家蚕血液型脓病给蚕桑产业造成巨大损失,然而BmNPV与宿主的互作机制至今仍然不明晰。前期的研究发现,BmNPC2可显著促进BmNPV感染,BmNPC2蛋白能够直接与BmNPV的囊膜蛋白GP64互作,敲除BmNPC2影响病毒粒子在晚期内体中的膜融合效率。为了鉴定BmNPC2蛋白与病毒囊膜蛋白GP64的互作关键位点,首先通过同源建模以及酵母双杂交试验,筛选出BmNPC2蛋白与囊膜蛋白GP64互作的2个关键区段。随后,将这两个区段位点的氨基酸进行逐个突变,酵母双杂交试验结果表明N95、D97、P105为关键互作位点。在敲除BmNPC2基因的BmE细胞中回补突变3个关键位点的BmNPC2蛋白后,细胞中BmNPV的病毒相对载量显著低于回补野生型BmNPC2蛋白组。以上结果表明,BmNPC2的这3个关键位点的突变显著减弱了BmNPV的感染能力,这些结果将为进一步解析BmNPV侵染家蚕的分子机制提供参考。
文摘转录因子Jun是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路下游重要的响应因子,可参与细胞生长、死亡和免疫反应等多种生命活动的调节。但对其在家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,Bm-NPV)侵染的家蚕细胞中的表达调控机制尚鲜见报道。为了深入探究BmJun在病毒侵染过程中对下游靶基因的调控作用,本研究采用ChIP-seq技术对家蚕BmN细胞中BmJun富集的DNA片段展开分析并进行鉴定。ChIP-seq结果发现大量的结合峰,除了坐落在基因间区外,还在基因启动子区有富集,并且在转录起始位点上下游1000 bp处的reads计数密度较大,暗示BmJun具有调控下游基因的作用。GO功能富集分析显示,BmJun结合的基因涉及组织器官发育、细胞质膜成分、信号受体活性、分子传感器活性、跨膜信号受体活性等功能。KEGG信号通路富集结果显示,BmJun结合相关基因在Wnt信号通路、昆虫激素合成、细胞色素P450对外源性药物的代谢作用、视黄醇新陈代谢、Hippo信号通路、黑色素生成、不饱和脂肪酸的生物合成、cAMP信号通路、mTOR信号通路、凋亡等通路有显著富集。最后,经过筛选获得并鉴定了BmJun在宿主基因组上结合的靶基因,根据已报道的Jun功能分析了BmJun的下游调控网络。研究结果将为BmNPV侵染期间家蚕转录因子BmJun参与调控相关功能的深入研究提供新参考。
