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猫冠状病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
1
作者 刘佳佳 符建海 +4 位作者 孙亚杰 许丽文 李双双 白雪 胡博 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第1期107-114,共8页
为制备猫冠状病毒(FCoV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体,本研究利用生物信息学预测工具对FCoV N蛋白序列进行分析,并通过原核表达制备N蛋白,将蛋白纯化处理后对BALB/c小鼠实施免疫,采用细胞融合手段获得杂交瘤细胞,并经过多轮亚克隆筛选流... 为制备猫冠状病毒(FCoV)核衣壳蛋白(N)的单克隆抗体,本研究利用生物信息学预测工具对FCoV N蛋白序列进行分析,并通过原核表达制备N蛋白,将蛋白纯化处理后对BALB/c小鼠实施免疫,采用细胞融合手段获得杂交瘤细胞,并经过多轮亚克隆筛选流程成功制备单克隆抗体。通过效价测定、亚型鉴定及特异性分析等方式对该抗体进行系统性检测评估。生物信息学分析显示,N蛋白由377个氨基酸组成,理化特性分析表明其为亲水性不稳定蛋白,二级结构组成中α-螺旋占10.61%、β-转角占14.85%、无规则卷曲达74.54%;结构特征分析表明该蛋白既无典型信号肽序列,也不含跨膜结构域,但存在多个具有潜在免疫原性的B淋巴细胞表位区域。基于此,制备并获得了分子量约为67 kDa的FCoV N蛋白,并成功筛选出1株单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3A5),测定抗体效价为1∶256000,抗体亚型为IgG1型,Western blot及间接免疫荧光试验结果显示其能够与FCoV N蛋白和FCoV发生免疫反应。本研究结果为FCoV免疫学诊断、抗体药物研制提供了有力支撑。 展开更多
关键词 猫冠状病毒 N蛋白 生物信息学 原核表达 单克隆抗体
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小鼠抗猪PD-L2单克隆抗体的制备
2
作者 许晓东 唐钰冰 +2 位作者 刘玉钤 王泊皓 杨桂红 《福建农林大学学报(自然科学版)》 北大核心 2026年第1期88-97,共10页
【目的】制备猪源程序性死亡配体2(pPD-L2)蛋白特异性的单克隆抗体(mAb),用于其生物学功能研究及相关猪免疫抑制性疾病的诊断与治疗。【方法】构建pPD-L2原核表达质粒,进行目的蛋白诱导表达及纯化;将pPD-L2重组蛋白注射至小鼠中,将免疫... 【目的】制备猪源程序性死亡配体2(pPD-L2)蛋白特异性的单克隆抗体(mAb),用于其生物学功能研究及相关猪免疫抑制性疾病的诊断与治疗。【方法】构建pPD-L2原核表达质粒,进行目的蛋白诱导表达及纯化;将pPD-L2重组蛋白注射至小鼠中,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合后,采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选能稳定分泌抗猪PD-L2的阳性杂交瘤细胞。采用蛋白质免疫印迹(Western blotting)鉴定鸡脾脏、鸭脾脏、猪肺泡巨噬细胞(3D4/21)、人非小细胞肺癌细胞(A549)、非洲绿猴肾细胞(Vero)和犬肾细胞(MDCK)与pPD-L2 mAb的种属交叉反应性。采用Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)检测pPD-L2 mAb的适用性。【结果】成功获得一株能稳定分泌抗猪pPD-L2蛋白的杂交瘤细胞3C10。间接ELISA检测显示,该pPD-L2 mAb的效价高达1∶1×10^(7)。种属交叉反应性检测表明,该pPD-L2 mAb仅与猪源细胞(3D4/21)发生特异性反应,具有高度的种属特异性。Western blotting和IFA检测表明,该pPD-L2 mAb适用于检测pPD-L2蛋白的表达和定位。【结论】成功制备了一株特异性强、效价高的pPD-L2 mAb杂交瘤细胞3C10。 展开更多
关键词 猪 程序性死亡配体2 单克隆抗体 效价 特异性
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DeepSeek推动《兽医免疫学》专业课程改革的风险与对策
3
作者 张付贤 《畜牧兽医杂志》 2026年第1期140-144,共5页
DeepSeek作为先进的人工智能技术平台,在临床诊疗、疾病防控预警、科研赋能、知识更新及跨学科协作等维度对《兽医免疫学》产生积极影响,对重塑《兽医免疫学》的教育、科研与实践领域具有重要作用。同时,在智能时代,将DeepSeek等AI工具... DeepSeek作为先进的人工智能技术平台,在临床诊疗、疾病防控预警、科研赋能、知识更新及跨学科协作等维度对《兽医免疫学》产生积极影响,对重塑《兽医免疫学》的教育、科研与实践领域具有重要作用。同时,在智能时代,将DeepSeek等AI工具引入《兽医免疫学》课程改革亦面临学术诚信、伦理规范、技术安全等诸多风险。本文探讨了DeepSeek在推动《兽医免疫学》专业课程改革的潜力,并对存在的风险提出了合理应对策略,旨在为DeepSeek等AI工具在《兽医免疫学》领域的健康、可持续应用及课程改革的顺利推进提供理论依据与实践指导,最终实现技术效益最大化与教育质量的提升。 展开更多
关键词 DeepSeek 兽医免疫学 人工智能 课程改革 风险 对策
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猪传染性胃肠炎病毒羊驼重链抗体的制备及验证
4
作者 黄娜娜 刘光亮 +3 位作者 付钰广 张勇 王雪珂 黄娟 《畜牧与兽医》 北大核心 2026年第1期85-92,共8页
旨在制备针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的重链抗体(HcAb),为制备TGEV特异性纳米抗体(Nb)奠定基础。将TGEV感染ST细胞,扩繁TGEV粒子,使用蔗糖密度梯度离心法纯化TGEV抗原,将纯化的TGEV抗原与ISA206佐剂1∶1混合乳化后,免疫1只8周龄雌性羊... 旨在制备针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的重链抗体(HcAb),为制备TGEV特异性纳米抗体(Nb)奠定基础。将TGEV感染ST细胞,扩繁TGEV粒子,使用蔗糖密度梯度离心法纯化TGEV抗原,将纯化的TGEV抗原与ISA206佐剂1∶1混合乳化后,免疫1只8周龄雌性羊驼,制备抗TGEV的羊驼HcAb,利用ELISA、Western blot、间接免疫荧光试验(IFA)验证制备的HcAb。ELISA结果显示,随着免疫次数的增加,针对TGEV的HcAb水平呈上升趋势,当抗血清稀释至1∶6400时仍具有反应性;Western blot结果显示,制备的HcAb能特异性地和TGEV S1蛋白及N蛋白反应;为进一步验证HcAb的反应性,将TGEV感染ST细胞并制备蛋白和细胞样品,Western blot检测结果显示本研究制备的HcAb能与TGEV编码的4种结构蛋白(S/E/M/N)特异性结合,IFA结果显示制备的HcAb可与TGEV发生特异性结合反应。综上,本研究成功制备了抗TGEV的HcAb,为后续研究奠定基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 结构蛋白 羊驼 重链抗体
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二重环介导等温扩增法快速检测鸭肉中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌 被引量：1
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作者 张林吉 贾燕 +4 位作者 任春芝 昌莉丽 孙朋 张青青 任士飞 《山东畜牧兽医》 2025年第1期1-5,共5页
为了建立二重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测体系快速检测鸭肉中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌,本研究利用沙门菌invA基因和金黄色葡萄球菌SAR0395基因设计引物,以建立单重LAMP体系为基础,对引物浓度进... 为了建立二重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测体系快速检测鸭肉中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌,本研究利用沙门菌invA基因和金黄色葡萄球菌SAR0395基因设计引物,以建立单重LAMP体系为基础,对引物浓度进行优化,建立二重LAMP检测体系,测定对单一菌株的特异性和灵敏度,并对两种细菌扩增产物的溶解曲线和溶解峰进行分析。结果显示,建立的单重LAMP体系分别能对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌进行高效扩增,当沙门氏菌和金黄色葡萄球菌引物浓度比达到2.5:1时,建立的二重LAMP检测方法扩增效率最佳,建立的单重和二重LAMP检测方法对两种细菌具有较好特异性;二重LAMP对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的检测灵敏度分别为9.1×10^(1) CFU/m L和7.8×10^(1) CFU/mL,可根据扩增产物溶解曲线和溶解峰温度的不同,实现对两菌有效鉴别。与传统方法比较,二重LAMP对鸭肉类产品检测符合率为100%。结果表明,建立的二重LAMP检测方法灵敏度高、特异性强、可定性鉴定、检测周期短,可用于鸭肉中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的快速检测。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 金黄色葡萄球菌 沙门氏菌 溶解曲线 快速检测
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免疫增强剂CVC1302调控体细胞高频突变的机制研究
6
作者 杜露平 鲁海燕 +6 位作者 侯立婷 于晓明 程海卫 张元鹏 陈瑾 郑其升 侯继波 《华中农业大学学报》 北大核心 2025年第1期211-216,共6页
为探究CVC1302调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变的免疫机制,本研究将4-羟基-3-硝基苯乙酰基耦联鸡卵白蛋白(NP-OVA)混合免疫增强剂CVC1302后,利用ISA206乳化获得疫苗。BALB/c小鼠分为2组,分别后腿肌肉注射NP-ISA206和NP-CVC1302-ISA... 为探究CVC1302调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变的免疫机制,本研究将4-羟基-3-硝基苯乙酰基耦联鸡卵白蛋白(NP-OVA)混合免疫增强剂CVC1302后,利用ISA206乳化获得疫苗。BALB/c小鼠分为2组,分别后腿肌肉注射NP-ISA206和NP-CVC1302-ISA206,每只50μg NP-OVA,免疫后14 d,利用流式分选获得生发中心B细胞,利用巢氏PCR扩增B细胞免疫球蛋白序列可变区VH_(186.2),Western blot检测诱导活化的胞苷脱氨酶(AID)、Pax5表达水平,β-actin作为内参,比较组间AID、Pax5表达差异;利用荧光定量PCR检测AID、Pax5基因转录水平。试验结果显示:CVC1302显著诱导生发中心B细胞免疫球蛋白序列VH186.2突变频率,试验组W33L突变频率为62.2%,而对照组仅为20.25%;CVC1302可提升AID蛋白、Pax5蛋白表达水平,其中试验组AID蛋白相对表达水平为0.72,对照组仅为0.16,试验组Pax5蛋白相对表达水平为0.62,对照组仅为0.26;CVC1302增强AID基因、Pax5基因转录水平,相较于对照组分别提高2.36、4.13倍。推断CVC1302依赖Pax5介导AID表达,调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变。 展开更多
关键词 免疫增强剂CVC1302 体细胞高频突变 免疫机制 生发中心B细胞 胞苷脱氨酶 PAX5
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牛IgG Fc受体Ⅱ结合IgG1的Fc线性结合表位鉴定
7
作者 李青梅 杨继飞 +4 位作者 赵东 邢云瑞 范璐 郭军庆 张改平 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第5期1026-1035,共10页
旨在鉴定牛IgG Fc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)上的IgG1 Fc线性结合表位,解析IgG-Fcγ相互作用的分子基础。构建稳定表达boFcγRⅡ转染细胞,在COS-7细胞表面表达boFcγRⅡ分子,利用NS0细胞分泌表达boFcγRⅡ胞外区,以镍亲和层析从小鼠腹水中纯化b... 旨在鉴定牛IgG Fc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)上的IgG1 Fc线性结合表位,解析IgG-Fcγ相互作用的分子基础。构建稳定表达boFcγRⅡ转染细胞,在COS-7细胞表面表达boFcγRⅡ分子,利用NS0细胞分泌表达boFcγRⅡ胞外区,以镍亲和层析从小鼠腹水中纯化boFcγRⅡ重组蛋白。设计合成boFcγRⅡ膜远端胞外域(EC2)多肽,与IgG-free牛血清白蛋白(BSA)偶联,以Dot-blot检测牛IgG1与偶联多肽的结合能力,进一步对IgG结合多肽进行截短和突变分析,鉴定Fc结合表位及其关键氨基酸残基;通过竞争ELISA和玫瑰花环抑制试验测定Fc结合多肽对牛IgG1结合的抑制作用。结果显示,boFcγRⅡ分子在COS-7转染细胞表面稳定表达,其IgG1-RBC玫瑰花环形成率达90%左右;可溶性boFcγRⅡ重组蛋白特异结合牛IgG1。^(122)FYQDRKSKIF^(131)为boFcγRⅡ特异结合牛IgG1的最短多肽,为boFcγRⅡ的Fc线性结合表位,位于受体EC2结构域C-C′环;以Ala分别替换线性表位Phe^(122)、Tyr^(123)、Arg^(126)、Lys^(127)、Ser^(128)、Lys^(129)或Phe^(131)残基均导致该Fc结合表位多肽丧失结合牛IgG的活性,表明这些残基为boFcγRⅡFc线性结合表位的关键氨基酸。Fc结合表位多肽显著抑制牛IgG1与可溶性boFcγRⅡ重组蛋白的结合,其半数抑制浓度(IC_(50))为20.05μmol/L;并有效抑制牛IgG1致敏红细胞在boFcγRⅡ转染细胞的玫瑰花环形成,其IC_(50)为80.15μmol/L。结果表明,boFcγRⅡ存在Fc结合的线性结合表位,该表位多肽具有调节细胞表面boFcγRⅡ与牛IgG1相互作用的能力,为深入理解boFcγRⅡ-IgG相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 牛IgG Fc受体 Fc结合表位 牛IgG1 合成多肽 玫瑰花环抑制
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囊素肽接枝透明质酸聚合物的制备及其免疫增强活性研究
8
作者 李兰 杜露平 +5 位作者 李明举 陈瑾 张元鹏 侯立婷 秦竹 郑其升 《中国农业大学学报》 北大核心 2025年第1期172-178,共7页
为使囊素肽(Bursin,BS)更好地发挥免疫增强作用,本研究采用EDC/NHS反应,使透明质酸(Hyaluronic acid,HA)的羧基与囊素肽的氨基发生酰胺化反应,合成囊素肽接枝透明质酸聚合物(BS@HA),进一步通过傅里叶变换红外光谱鉴定聚合物的结构,通过... 为使囊素肽(Bursin,BS)更好地发挥免疫增强作用,本研究采用EDC/NHS反应,使透明质酸(Hyaluronic acid,HA)的羧基与囊素肽的氨基发生酰胺化反应,合成囊素肽接枝透明质酸聚合物(BS@HA),进一步通过傅里叶变换红外光谱鉴定聚合物的结构,通过紫外分光光度计进行定量分析,然后以卵清蛋白OVA为模式抗原,BS@HA作为免疫增强剂添加至铝胶做成疫苗,免疫小鼠,利用ELISA和流式细胞仪评价BS@HA的免疫增强作用。结果表明:1)当透明质酸、EDC、NHS和囊素肽的反应摩尔比为1∶4∶6∶0.4,加入EDC后的反应时间为2~4 h,加入NHS后的反应时间为16 h时,合成聚合物的产率可以达到95%,透明质酸的傅里叶红外光谱特征峰从1605 cm^(-1)红移到1632 cm^(-1),囊素肽成功接枝透明质酸。2)当透明质酸羧基取代率为35%左右时,囊素肽接枝透明质酸聚合物可以诱导小鼠产生更高水平的OVA特异性抗体。3)囊素肽接枝透明质酸聚合物能够诱导小鼠产生更高水平的滤泡辅助性T细胞(TFH)和生发中心B细胞(GC B细胞)。综上,囊素肽接枝透明质酸聚合物可以使囊素肽更高效地进入引流淋巴结,诱导活化更高水平的TFH和GC B细胞,促进特异性Ig G抗体的产生。本研究将丰富透明质酸在动物疫苗领域的理论研究,拓展透明质酸在动物疫苗领域的实际应用,同时为新型免疫增强剂的研制奠定基础。 展开更多
关键词 透明质酸 囊素肽 免疫增强 酰胺反应
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猪氨基肽酶N受体结合区Fc融合表达及其病毒结合活性分析
9
作者 郭宏伟 刘妍 +4 位作者 赵绪永 龚婷 马辉 刘薇 郑鸣 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第9期44-52,共9页
为了探究猪氨基肽酶N(pAPN)病毒结合受体功能区域与传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的结合活性,本试验采用重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)技术将pAPN胞外区分为5段并与Fc片段融合,构建酵母分泌表达载体pPICZαA-pAPN... 为了探究猪氨基肽酶N(pAPN)病毒结合受体功能区域与传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的结合活性,本试验采用重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)技术将pAPN胞外区分为5段并与Fc片段融合,构建酵母分泌表达载体pPICZαA-pAPN-Fc进行融合表达,在分子和细胞水平对比分析5个Fc融合蛋白与PEDV和TGEV结合能力及对病毒核衣壳蛋白(N)基因mRNA转录和复制的影响,筛选潜在病毒结合受体功能关键区。结果显示,pAPN1-Fc、pAPN_(2)-Fc、pAPN_(3)-Fc、pAPN_(4)-Fc和pAPN_(5)-Fc共5个融合片段均可在毕赤酵母X33中高效分泌表达,并可与pAPN兔多克隆抗体特异性结合。PEDV和TGEV结合活性酶联免疫吸附试验(ELISA)分析结果显示,pAPN_(2)-Fc、pAPN_(3)-Fc、pAPN_(4)-Fc、pAPN_(5)-Fc融合蛋白具有不同程度的PEDV和TGEV结合活性,且同种融合蛋白与TGEV的结合能力高于PEDV,其中pAPN_(2)(574~678aa)和pAPN_(3)(669~773aa)区域与病毒的结合能力较强。实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和免疫荧光共聚焦试验结果显示,融合蛋白pAPN_(2)和pAPN_(3)-Fc抑制PEDV和TGEV N基因mRNA转录和复制的能力较强。结果表明,pAPN胞外区域574~773aa可同时结合PEDV和TGEV,并能抑制病毒N基因mRNA转录和复制能力,pAPN 574~773aa可能是PEDV和TGEV结合受体的共同关键区域。本试验结果可为PEDV和TGEV的感染机制研究及抗病毒药物设计提供理论依据。 展开更多
关键词 猪氨基肽酶N 肠道冠状病毒 Fc融合表达 病毒结合活性
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PRRSV Nsp2合成肽多克隆抗体的制备及应用
10
作者 张彦兵 解艺璇 +10 位作者 李慧 肖长广 葛菲菲 刘珂 魏建超 李宗杰 邵东华 李蓓蓓 马志永 孙延鸣 邱亚峰 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第5期158-164,共7页
本研究旨在利用PRRSV Nsp2合成肽进行多克隆抗体的制备,并分析了该抗体的特性。应用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp2的抗原肽序列,并通过化学合成的方法获得抗原肽,将其与KLH载体蛋白进行偶联;随后,将偶联好的抗原肽与弗氏... 本研究旨在利用PRRSV Nsp2合成肽进行多克隆抗体的制备,并分析了该抗体的特性。应用生物信息学技术预测获得PRRSV非结构蛋白Nsp2的抗原肽序列,并通过化学合成的方法获得抗原肽,将其与KLH载体蛋白进行偶联;随后,将偶联好的抗原肽与弗氏佐剂混合,通过对新西兰大白兔进行免疫获得的血清即为针对Nsp2的多克隆抗体;最后,利用ELISA、Western blot及IFA对多克隆抗体的特性进行分析。研究结果显示:ELISA检测该多克隆抗体的效价超过10^(5);Western blot检测可以特异性检测到细胞过表达和不同毒株病毒感染的Nsp2蛋白;IFA检测分析得出,该多克隆抗体可有效地区分病毒感染和未感染的样品。此外,PRRSV Nsp2合成肽多克隆抗体还可以应用于不同毒株PRRSV感染样品的检测,这为进一步研究PRRSV Nsp2的功能提供了一个有效的工具。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 合成肽 多克隆抗体 非结构蛋白2
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免疫增强剂CVC1302介导Tfh细胞分化机制分析
11
作者 杜露平 鲁海燕 +12 位作者 李明举 侯立婷 于晓明 程海卫 张元鹏 秦竹 李兰 张浩明 杨利 王义伟 陈瑾 郑其升 侯继波 《中国农业大学学报》 北大核心 2025年第1期179-187,共9页
为探究CVC1302调控滤泡辅助性T细胞(Tfh)分化的机制,本研究体外利用GM-CSF刺激培育小鼠骨髓树突状细胞(DC),CVC1302刺激后,分别检测IL-6、IL-21转录及表达水平;利用体外细胞共培养试验,检测Tfh、Th1、Th2和Th17分化关键转录因子Bcl-6、T... 为探究CVC1302调控滤泡辅助性T细胞(Tfh)分化的机制,本研究体外利用GM-CSF刺激培育小鼠骨髓树突状细胞(DC),CVC1302刺激后,分别检测IL-6、IL-21转录及表达水平;利用体外细胞共培养试验,检测Tfh、Th1、Th2和Th17分化关键转录因子Bcl-6、T-bet、GATA3和RORγt的转录水平,STAT3信号通路活化水平,Tfh细胞占CD4^(+)T细胞比例及STAT3信号通路抑制后反向验证Tfh细胞占CD4^(+)T细胞比例。结果表明:1)免疫增强剂CVC1302极显著促进小鼠骨髓DC分泌IL-6和IL-21。2)细胞共培养试验显示,CVC1302可显著促进STAT3磷酸化水平,表明STAT3信号通路被激活。3)利用STAT3信号通路抑制剂后,CD4^(+)T细胞分化为Tfh细胞的水平显著降低,表明CVC1302依赖STAT3信号通路激活介导初始CD4+T细胞分化为Tfh细胞。综上,本研究推断CVC1302通过促进DC分泌IL-6和IL-12,并激活STAT3信号通路介导Tfh细胞的分化,旨在为后续免疫增强剂的开发提供思路。 展开更多
关键词 CVC1302 DC STAT3 Tfh细胞
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猪XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白的制备与鉴定
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作者 杨利 杜露平 +10 位作者 侯立婷 张浩明 于晓明 李兰 乔绪稳 张元鹏 秦竹 王义伟 郑其升 陈瑾 程海卫 《中国农业大学学报》 北大核心 2025年第1期131-141,共11页
为通过将FMDV抗原靶向提呈至猪DC细胞进而提高疫苗免疫效力,本研究利用原核系统表达了猪XCR1目的蛋白,以该蛋白为免疫原免疫羊驼,提取其外周血淋巴细胞的总mRNA并反转录为cDNA,构建噬菌体展示纳米抗体文库,经过3轮亲和筛选获得猪XCR1特... 为通过将FMDV抗原靶向提呈至猪DC细胞进而提高疫苗免疫效力,本研究利用原核系统表达了猪XCR1目的蛋白,以该蛋白为免疫原免疫羊驼,提取其外周血淋巴细胞的总mRNA并反转录为cDNA,构建噬菌体展示纳米抗体文库,经过3轮亲和筛选获得猪XCR1特异性纳米抗体;利用SOE-PCR技术将该纳米抗体和猪O型FMDV特异性纳米抗体Nb205连接,构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白。结果表明:1)成功原核表达猪XCR1目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot结果显示,其相对分子量大小约35 ku,符合预期。2)羊驼血清效价为1∶64000,满足建库要求;构建的噬菌体展示文库库容量约为1.91×10^(8)CFU/mL,插入率为91.3%,多样性好;经3轮亲和筛选成功获得了纳米抗体Nb75,间接ELISA结果显示该纳米抗体能特异性与XCR1结合。3)利用SOE-PCR技术成功构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白Nb75-205;SDS-PAGE和Western blot显示,该蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,且呈现二聚体结构,间接ELISA结果显示Nb75-205能同时与XCR1目的蛋白和FMDV抗原结合。综上,本研究采用噬菌体展示技术成功获得猪XCR1特异性纳米抗体,并构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白Nb75-205,且该蛋白为天然二聚体结构,与XCR1目的蛋白和FMDV抗原均具有较好的结合活性,为进一步开展FMDV抗原的猪XCR1靶向提呈研究奠定基础。 展开更多
关键词 趋化因子受体1 双特异纳米抗体 二聚体 FMDV
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不同免疫增强剂对猫瘟疫苗免疫效力的影响
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作者 于立辉 孙小云 +5 位作者 王浩然 白瑾 王玉庆 王鹏程 陈晓月 刘金玲 《沈阳农业大学学报》 北大核心 2025年第2期63-68,共6页
[目的]猫瘟是由猫细小病毒引起的猫的传染性疾病,其主要特点是白细胞数量下降和出血性胃肠炎,具有较高的感染率和致死率,对宠物的健康造成严重威胁。疫苗接种是目前预防猫瘟最主要的方式,但疫苗的免疫效果受到多种因素的制约。免疫增强... [目的]猫瘟是由猫细小病毒引起的猫的传染性疾病,其主要特点是白细胞数量下降和出血性胃肠炎,具有较高的感染率和致死率,对宠物的健康造成严重威胁。疫苗接种是目前预防猫瘟最主要的方式,但疫苗的免疫效果受到多种因素的制约。免疫增强剂能够增强畜禽的疫苗免疫效果,探究免疫增强剂对宠物疫苗免疫效果的影响,以期为猫的免疫防治效果提供理论依据。[方法]选择幼猫作为试验对象,基于单因子试验设计方案,各试验组分别在60,81,102日龄免疫妙三多疫苗,免疫前后4d分别饲喂0.9%氯化钠生理盐水(对照组)、黄芪多糖(APC组)、脾氨肽(SAT组)和高免因子核酸制剂(NAP组),对各组幼猫IgG抗体、IFN-γ及全血细胞分类进行检测。[结果]脾氨肽和高免因子核酸制剂能够提升幼猫猫瘟抗体和INF-γ的分泌水平以及白细胞和中性粒细胞的数量,但黄芪多糖对幼猫猫瘟抗体和INF-γ的分泌水平等无显著效果;脾氨肽和高免因子核酸制剂对幼猫的红细胞、血小板、单核细胞和淋巴细胞数量也无显著提升。[结论]脾氨肽和高免因子核酸制剂能够显著提高幼猫体内部分抗体指标水平,表明这两类试剂可以提高幼猫对猫瘟的免疫效果。该研究为幼猫免疫增强剂的研究奠定初步的理论基础,为进一步研究猫瘟等疾病的有效防治积累数据,同时对于家禽和家畜常见免疫增强试剂用于增强幼猫等宠物的免疫力提供参考。 展开更多
关键词 猫瘟 免疫增强剂 抗体 脾氨肽 黄芪多糖 高免因子
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植物乳植杆菌CCFM8661对小鼠免疫的改善效果
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作者 马微微 武亚楠 +2 位作者 赵伊阳 孙杭 黄莉莉 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第13期75-82,共8页
为研究植物乳植杆菌CCFM8661对小鼠免疫力的调节作用。将60只小鼠随机分成5组,对照组、模型组、植物乳植杆菌CCFM8661低、中、高(1.5×10^(6)、1.5×10^(7)、1.5×10^(8) CFU/只)剂量组。除了对照组外,在实验前对其余各组... 为研究植物乳植杆菌CCFM8661对小鼠免疫力的调节作用。将60只小鼠随机分成5组,对照组、模型组、植物乳植杆菌CCFM8661低、中、高(1.5×10^(6)、1.5×10^(7)、1.5×10^(8) CFU/只)剂量组。除了对照组外,在实验前对其余各组通过注射环磷酰胺建立免疫抑制模型,然后使用不同剂量植物乳植杆菌CCFM8661对实验组小鼠进行灌胃。检测不同剂量植物乳植杆菌CCFM8661对小鼠体质量、免疫器官指数、细胞免疫、体液免疫、非特异性免疫的影响。结果显示,植物乳植杆菌CCFM8661能够显著提高被免疫抑制小鼠的体质量、胸腺指数、脾指数;对小鼠的细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫都具有良好的调节作用。植物乳植杆菌CCFM8661具有增强小鼠免疫力的功能。 展开更多
关键词 植物乳植杆菌CCFM8661 免疫调节 环磷酰胺
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PRRSV通过代谢重编程逃避宿主免疫应答研究进展
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作者 褚贝贝 马英先 +2 位作者 王江 曾磊 明胜利 《山西农业科学》 2025年第6期20-29,共10页
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染可导致母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病以及公猪精液质量下降,对全球养猪业造成重大经济损失。该病毒具有高度变异性和免疫抑制特性,能够通过多种机制逃避宿主天然免疫应答,从而在猪群中建立持续性感染... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染可导致母猪繁殖障碍、仔猪呼吸道疾病以及公猪精液质量下降,对全球养猪业造成重大经济损失。该病毒具有高度变异性和免疫抑制特性,能够通过多种机制逃避宿主天然免疫应答,从而在猪群中建立持续性感染。这种持续感染状态不仅加大了临床防控的难度,也使得传统疫苗免疫策略面临效果不稳定的挑战。作为一种严格依赖宿主细胞完成复制过程的病毒,PRRSV本身缺乏独立的生物合成系统,其基因组的复制、转录及病毒颗粒的组装、释放等各个环节,均高度依赖宿主细胞提供的代谢资源和能量支持。近年来研究表明,病毒通过重编程宿主细胞的代谢通路,包括糖类、脂质及氨基酸代谢,以满足其复制所需能量和生物前体,这种病毒诱导的代谢重编程不仅为病毒复制营造了有利的胞内环境,同时也能调控免疫应答,实现免疫逃逸。这为理解PRRSV的致病机制提供了新视角,也为抗病毒策略的开发指明了新方向。文章系统综述了PRRSV调控宿主细胞代谢重编程的机制,重点探讨其如何通过干预糖酵解、脂质代谢及氨基酸利用,影响宿主的免疫应答,并对靶向代谢通路作为抗PRRSV策略的潜力进行展望。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 代谢重编程 免疫逃逸 糖酵解 脂质代谢 氨基酸代谢
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α-甘露聚糖对保育仔猪免疫和生产性能的影响
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作者 杨公社 雷晓军 +10 位作者 刘冬霞 王西全 寻晓洁 吕妍 葛玉芳 李建民 严元宠 田国太 王昆 曹亚斌 滕江 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期46-52,共7页
为探究α-甘露聚糖对保育仔猪免疫力与生产性能的影响,选用保育仔猪40头,采用单因素试验设计,随机分为试验组和对照组,每组20头,公母各半。对照组饲喂保育猪饲料,试验组饲料按500 g/kg添加α-甘露聚糖饲喂至试验结束。40头受试猪于14、2... 为探究α-甘露聚糖对保育仔猪免疫力与生产性能的影响,选用保育仔猪40头,采用单因素试验设计,随机分为试验组和对照组,每组20头,公母各半。对照组饲喂保育猪饲料,试验组饲料按500 g/kg添加α-甘露聚糖饲喂至试验结束。40头受试猪于14、28、37、47日龄,分别肌肉注射猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、猪伪狂犬病活疫苗各1头份。试验至54日龄,每组随机抽公母仔猪各3头宰杀,采集肝、胸腺、脾等器官计算器官指数,制作组织切片,光镜检查。于75日龄每组抽样采血7头,ELISA测定3种病原的血清抗体水平。结果显示,试验组全程成活率比对照组提高5%,饲料利用率提高11.49%,试验组54日龄平均体重比对照组高3.11 kg,期末平均日增重高66.26 g,增重部分与投入品的投入产出比为1∶10.55(P<0.05)。试验组肝、胸腺、脾等器官指数均高于对照组(P<0.01)。75日龄,试验组血清抗体阳性率均高于对照组;与对照组相比,试验组肝脏肝小叶结构致密,肝板、肝索形态清晰,肝细胞核清晰,胸腺结构紧凑,发育充分。脾脏,皮质部和髓质部结构致密,白髓和红髓分界清晰,脾小结和弥散性淋巴组织发达。结果表明在保育期内饲喂α-甘露聚糖能显著改善仔猪免疫器官和内脏器官发育,提高保育猪对接种疫苗的免疫应答能力,增强疫苗的免疫效果,给后期肥育和猪的快速生长奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 α-甘露聚糖 免疫力 生长性能 保育猪
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预防化脓隐秘杆菌感染保护性抗原的筛选
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作者 徐登峰 赵自亮 +3 位作者 张素辉 杨洪保 冉智光 沈克飞 《中国生物制品学杂志》 2025年第7期776-780,共5页
目的 测定化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)已鉴定抗原和潜在抗原的免疫保护率,以期筛选出保护性抗原。方法 从化脓隐秘杆菌2012CQ-ZSH菌株基因组(GenBank:CP012649)注释的蛋白质中搜索ATP结合盒(ATP binding cassette,ABC)底物结合... 目的 测定化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)已鉴定抗原和潜在抗原的免疫保护率,以期筛选出保护性抗原。方法 从化脓隐秘杆菌2012CQ-ZSH菌株基因组(GenBank:CP012649)注释的蛋白质中搜索ATP结合盒(ATP binding cassette,ABC)底物结合蛋白(substrate-binding protein,SBP),通过BLAST分析其基因保守性和菌株分布率。将筛选出的蛋白在GST融合蛋白表达系统中表达,经Gluthathione-Sepharose 4B纯化后免疫20只雌性昆明小鼠,以注射不含重组蛋白的PBS为对照组。第2次免疫后第14天,经腹腔注射致死剂量的化脓隐秘杆菌菌株ZSH-2020[(8.9±0.4)×10^(8)CFU],记录攻击后21 d内致死小鼠数量,计算蛋白质保护率。将保护率大于80%的蛋白质判定为保护性抗原。结果 ALD74485[溶血素(pyolysin,PLO)]、ALD74170[铁结合蛋白(iron-binding protein,IBP)]、ALD74643、ALD73390、ALD73068、ALD73591、ALD73669编码基因保守且在菌株中广泛分布,制备其重组蛋白。重组PLO、IBP、ALD73390对攻毒小鼠的保护率分别为87.5%、81.25%、81.25%,高于其他蛋白的免疫保护率。结论 PLO、IBP、ALD73390是预防化脓隐秘杆菌感染的保护性抗原,由其构成的多组分疫苗可能提高化脓隐秘杆菌亚单位疫苗的有效性。 展开更多
关键词 化脓隐秘杆菌 亚单位疫苗 脂蛋白 保护性抗原
原文传递
基于“岗位需求-前沿融合”的《动物微生物与免疫》课程内容体系重构与实践
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作者 苏日娜 姜廷波 +2 位作者 宝力朝鲁 王蕊香 于永强 《畜牧业环境》 2026年第2期179-180,共2页
《动物微生物与免疫》课程是高职院校动物医学专业的基础课程,也是学生后续深入学习其他专业课程的关键。该课程具有较强的实践性与职业性,使得“岗位需求-前沿融合”模式在其中具有较高的应用价值。对于高职院校教师而言,需提高对“岗... 《动物微生物与免疫》课程是高职院校动物医学专业的基础课程,也是学生后续深入学习其他专业课程的关键。该课程具有较强的实践性与职业性,使得“岗位需求-前沿融合”模式在其中具有较高的应用价值。对于高职院校教师而言,需提高对“岗位需求-前沿融合”模式的重视程度,做好基于该模式的《动物微生物与免疫》课程内容体系重构工作,进而提升高职院校育人质量。 展开更多
关键词 “岗位需求-前沿融合”模式 动物微生物与免疫 实践教学
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PRRSV亚单位疫苗对谱系1和谱系8毒株的免疫效力评价
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作者 张伟 李俊辉 +3 位作者 潘晓梅 毛丽萍 贺笋 翟少伦 《畜牧业环境》 2025年第24期51-56,共6页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害全球养猪业的重要疫病之一。现有PRRS弱毒疫苗的安全性和灭活疫苗的有效性不确定,使得PRRS防控仍然面临许多挑战。因此,PRRS新型疫苗是研发新方向。本研究的目的是确定PRRSV亚单位疫苗对PRRSV毒株的保护... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是危害全球养猪业的重要疫病之一。现有PRRS弱毒疫苗的安全性和灭活疫苗的有效性不确定,使得PRRS防控仍然面临许多挑战。因此,PRRS新型疫苗是研发新方向。本研究的目的是确定PRRSV亚单位疫苗对PRRSV毒株的保护作用。选择分离获得的2个谱系PRRSV毒株,即DB2(谱系1)和XJL01(谱系8),对免疫PRRSV亚单位疫苗实验猪进行攻毒,评价疫苗的攻毒保护效果。结果显示,免疫亚单位疫苗实验猪能够抵抗XJL01毒株攻击,攻毒保护率100%。免疫亚单位疫苗的猪在抵抗DB2毒株攻击时与攻毒对照组相比,保护效果不显著,主要表现为发热猪平均体温下降、临床症状总评分降低、血液中PRRS病毒载量降低。以上结果表明,PRRSV亚单位疫苗对谱系8毒株具有攻毒保护作用。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征 亚单位疫苗 谱系1 谱系8 免疫效力
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鸡传染性贫血病疫苗研究进展 被引量：1
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作者 汪磊 梁琳 +6 位作者 罗润琪 梁瑞英 胡丹丹 司红彬 丁家波 邸文达 汤新明 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期341-350,共10页
鸡传染性贫血病(chicken infectious anemia, CIA)是临床上最常见的免疫抑制性传染病之一,尚无特异性治疗方法,严重威胁动物健康和养殖业的经济效益。虽然已有部分地区以活疫苗进行CIA的临床预防,但其安全性问题及病毒培养和生产效率低... 鸡传染性贫血病(chicken infectious anemia, CIA)是临床上最常见的免疫抑制性传染病之一,尚无特异性治疗方法,严重威胁动物健康和养殖业的经济效益。虽然已有部分地区以活疫苗进行CIA的临床预防,但其安全性问题及病毒培养和生产效率低是制约活疫苗推广应用的主要瓶颈。笔者从引起CIA的鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus, CIAV)的病原学与流行特征、传统疫苗与新型疫苗激发宿主的免疫应答特征与免疫保护力等方面进行全面分析,剖析现有疫苗的优缺点,结合新型疫苗的理论与技术优势,提出CIA高效疫苗的研发方向,为CIA疫苗的研发提供新的思路和科学依据。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病 鸡传染性贫血病毒(CIAV) 感染与免疫 疫苗研发
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