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免疫增强剂CVC1302调控体细胞高频突变的机制研究
1
作者 杜露平 鲁海燕 +6 位作者 侯立婷 于晓明 程海卫 张元鹏 陈瑾 郑其升 侯继波 《华中农业大学学报》 北大核心 2025年第1期211-216,共6页
为探究CVC1302调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变的免疫机制,本研究将4-羟基-3-硝基苯乙酰基耦联鸡卵白蛋白(NP-OVA)混合免疫增强剂CVC1302后,利用ISA206乳化获得疫苗。BALB/c小鼠分为2组,分别后腿肌肉注射NP-ISA206和NP-CVC1302-ISA... 为探究CVC1302调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变的免疫机制,本研究将4-羟基-3-硝基苯乙酰基耦联鸡卵白蛋白(NP-OVA)混合免疫增强剂CVC1302后,利用ISA206乳化获得疫苗。BALB/c小鼠分为2组,分别后腿肌肉注射NP-ISA206和NP-CVC1302-ISA206,每只50μg NP-OVA,免疫后14 d,利用流式分选获得生发中心B细胞,利用巢氏PCR扩增B细胞免疫球蛋白序列可变区VH_(186.2),Western blot检测诱导活化的胞苷脱氨酶(AID)、Pax5表达水平,β-actin作为内参,比较组间AID、Pax5表达差异;利用荧光定量PCR检测AID、Pax5基因转录水平。试验结果显示:CVC1302显著诱导生发中心B细胞免疫球蛋白序列VH186.2突变频率,试验组W33L突变频率为62.2%,而对照组仅为20.25%;CVC1302可提升AID蛋白、Pax5蛋白表达水平,其中试验组AID蛋白相对表达水平为0.72,对照组仅为0.16,试验组Pax5蛋白相对表达水平为0.62,对照组仅为0.26;CVC1302增强AID基因、Pax5基因转录水平,相较于对照组分别提高2.36、4.13倍。推断CVC1302依赖Pax5介导AID表达,调控生发中心B细胞发生体细胞高频突变。 展开更多
关键词 免疫增强剂CVC1302 体细胞高频突变 免疫机制 生发中心B细胞 胞苷脱氨酶 PAX5
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牛IgG Fc受体Ⅱ结合IgG1的Fc线性结合表位鉴定
2
作者 李青梅 杨继飞 +4 位作者 赵东 邢云瑞 范璐 郭军庆 张改平 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第5期1026-1035,共10页
旨在鉴定牛IgG Fc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)上的IgG1 Fc线性结合表位,解析IgG-Fcγ相互作用的分子基础。构建稳定表达boFcγRⅡ转染细胞,在COS-7细胞表面表达boFcγRⅡ分子,利用NS0细胞分泌表达boFcγRⅡ胞外区,以镍亲和层析从小鼠腹水中纯化b... 旨在鉴定牛IgG Fc受体Ⅱ(boFcγRⅡ)上的IgG1 Fc线性结合表位,解析IgG-Fcγ相互作用的分子基础。构建稳定表达boFcγRⅡ转染细胞,在COS-7细胞表面表达boFcγRⅡ分子,利用NS0细胞分泌表达boFcγRⅡ胞外区,以镍亲和层析从小鼠腹水中纯化boFcγRⅡ重组蛋白。设计合成boFcγRⅡ膜远端胞外域(EC2)多肽,与IgG-free牛血清白蛋白(BSA)偶联,以Dot-blot检测牛IgG1与偶联多肽的结合能力,进一步对IgG结合多肽进行截短和突变分析,鉴定Fc结合表位及其关键氨基酸残基;通过竞争ELISA和玫瑰花环抑制试验测定Fc结合多肽对牛IgG1结合的抑制作用。结果显示,boFcγRⅡ分子在COS-7转染细胞表面稳定表达,其IgG1-RBC玫瑰花环形成率达90%左右;可溶性boFcγRⅡ重组蛋白特异结合牛IgG1。^(122)FYQDRKSKIF^(131)为boFcγRⅡ特异结合牛IgG1的最短多肽,为boFcγRⅡ的Fc线性结合表位,位于受体EC2结构域C-C′环;以Ala分别替换线性表位Phe^(122)、Tyr^(123)、Arg^(126)、Lys^(127)、Ser^(128)、Lys^(129)或Phe^(131)残基均导致该Fc结合表位多肽丧失结合牛IgG的活性,表明这些残基为boFcγRⅡFc线性结合表位的关键氨基酸。Fc结合表位多肽显著抑制牛IgG1与可溶性boFcγRⅡ重组蛋白的结合,其半数抑制浓度(IC_(50))为20.05μmol/L;并有效抑制牛IgG1致敏红细胞在boFcγRⅡ转染细胞的玫瑰花环形成,其IC_(50)为80.15μmol/L。结果表明,boFcγRⅡ存在Fc结合的线性结合表位,该表位多肽具有调节细胞表面boFcγRⅡ与牛IgG1相互作用的能力,为深入理解boFcγRⅡ-IgG相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 牛IgG Fc受体 Fc结合表位 牛IgG1 合成多肽 玫瑰花环抑制
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囊素肽接枝透明质酸聚合物的制备及其免疫增强活性研究
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作者 李兰 杜露平 +5 位作者 李明举 陈瑾 张元鹏 侯立婷 秦竹 郑其升 《中国农业大学学报》 北大核心 2025年第1期172-178,共7页
为使囊素肽(Bursin,BS)更好地发挥免疫增强作用,本研究采用EDC/NHS反应,使透明质酸(Hyaluronic acid,HA)的羧基与囊素肽的氨基发生酰胺化反应,合成囊素肽接枝透明质酸聚合物(BS@HA),进一步通过傅里叶变换红外光谱鉴定聚合物的结构,通过... 为使囊素肽(Bursin,BS)更好地发挥免疫增强作用,本研究采用EDC/NHS反应,使透明质酸(Hyaluronic acid,HA)的羧基与囊素肽的氨基发生酰胺化反应,合成囊素肽接枝透明质酸聚合物(BS@HA),进一步通过傅里叶变换红外光谱鉴定聚合物的结构,通过紫外分光光度计进行定量分析,然后以卵清蛋白OVA为模式抗原,BS@HA作为免疫增强剂添加至铝胶做成疫苗,免疫小鼠,利用ELISA和流式细胞仪评价BS@HA的免疫增强作用。结果表明:1)当透明质酸、EDC、NHS和囊素肽的反应摩尔比为1∶4∶6∶0.4,加入EDC后的反应时间为2~4 h,加入NHS后的反应时间为16 h时,合成聚合物的产率可以达到95%,透明质酸的傅里叶红外光谱特征峰从1605 cm^(-1)红移到1632 cm^(-1),囊素肽成功接枝透明质酸。2)当透明质酸羧基取代率为35%左右时,囊素肽接枝透明质酸聚合物可以诱导小鼠产生更高水平的OVA特异性抗体。3)囊素肽接枝透明质酸聚合物能够诱导小鼠产生更高水平的滤泡辅助性T细胞(TFH)和生发中心B细胞(GC B细胞)。综上,囊素肽接枝透明质酸聚合物可以使囊素肽更高效地进入引流淋巴结,诱导活化更高水平的TFH和GC B细胞,促进特异性Ig G抗体的产生。本研究将丰富透明质酸在动物疫苗领域的理论研究,拓展透明质酸在动物疫苗领域的实际应用,同时为新型免疫增强剂的研制奠定基础。 展开更多
关键词 透明质酸 囊素肽 免疫增强 酰胺反应
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猪氨基肽酶N受体结合区Fc融合表达及其病毒结合活性分析
4
作者 郭宏伟 刘妍 +4 位作者 赵绪永 龚婷 马辉 刘薇 郑鸣 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第9期44-52,共9页
为了探究猪氨基肽酶N(pAPN)病毒结合受体功能区域与传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的结合活性,本试验采用重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)技术将pAPN胞外区分为5段并与Fc片段融合,构建酵母分泌表达载体pPICZαA-pAPN... 为了探究猪氨基肽酶N(pAPN)病毒结合受体功能区域与传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)的结合活性,本试验采用重叠延伸聚合酶链式反应(SOE-PCR)技术将pAPN胞外区分为5段并与Fc片段融合,构建酵母分泌表达载体pPICZαA-pAPN-Fc进行融合表达,在分子和细胞水平对比分析5个Fc融合蛋白与PEDV和TGEV结合能力及对病毒核衣壳蛋白(N)基因mRNA转录和复制的影响,筛选潜在病毒结合受体功能关键区。结果显示,pAPN1-Fc、pAPN_(2)-Fc、pAPN_(3)-Fc、pAPN_(4)-Fc和pAPN_(5)-Fc共5个融合片段均可在毕赤酵母X33中高效分泌表达,并可与pAPN兔多克隆抗体特异性结合。PEDV和TGEV结合活性酶联免疫吸附试验(ELISA)分析结果显示,pAPN_(2)-Fc、pAPN_(3)-Fc、pAPN_(4)-Fc、pAPN_(5)-Fc融合蛋白具有不同程度的PEDV和TGEV结合活性,且同种融合蛋白与TGEV的结合能力高于PEDV,其中pAPN_(2)(574~678aa)和pAPN_(3)(669~773aa)区域与病毒的结合能力较强。实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)和免疫荧光共聚焦试验结果显示,融合蛋白pAPN_(2)和pAPN_(3)-Fc抑制PEDV和TGEV N基因mRNA转录和复制的能力较强。结果表明,pAPN胞外区域574~773aa可同时结合PEDV和TGEV,并能抑制病毒N基因mRNA转录和复制能力,pAPN 574~773aa可能是PEDV和TGEV结合受体的共同关键区域。本试验结果可为PEDV和TGEV的感染机制研究及抗病毒药物设计提供理论依据。 展开更多
关键词 猪氨基肽酶N 肠道冠状病毒 Fc融合表达 病毒结合活性
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免疫增强剂CVC1302介导Tfh细胞分化机制分析
5
作者 杜露平 鲁海燕 +12 位作者 李明举 侯立婷 于晓明 程海卫 张元鹏 秦竹 李兰 张浩明 杨利 王义伟 陈瑾 郑其升 侯继波 《中国农业大学学报》 北大核心 2025年第1期179-187,共9页
为探究CVC1302调控滤泡辅助性T细胞(Tfh)分化的机制,本研究体外利用GM-CSF刺激培育小鼠骨髓树突状细胞(DC),CVC1302刺激后,分别检测IL-6、IL-21转录及表达水平;利用体外细胞共培养试验,检测Tfh、Th1、Th2和Th17分化关键转录因子Bcl-6、T... 为探究CVC1302调控滤泡辅助性T细胞(Tfh)分化的机制,本研究体外利用GM-CSF刺激培育小鼠骨髓树突状细胞(DC),CVC1302刺激后,分别检测IL-6、IL-21转录及表达水平;利用体外细胞共培养试验,检测Tfh、Th1、Th2和Th17分化关键转录因子Bcl-6、T-bet、GATA3和RORγt的转录水平,STAT3信号通路活化水平,Tfh细胞占CD4^(+)T细胞比例及STAT3信号通路抑制后反向验证Tfh细胞占CD4^(+)T细胞比例。结果表明:1)免疫增强剂CVC1302极显著促进小鼠骨髓DC分泌IL-6和IL-21。2)细胞共培养试验显示,CVC1302可显著促进STAT3磷酸化水平,表明STAT3信号通路被激活。3)利用STAT3信号通路抑制剂后,CD4^(+)T细胞分化为Tfh细胞的水平显著降低,表明CVC1302依赖STAT3信号通路激活介导初始CD4+T细胞分化为Tfh细胞。综上,本研究推断CVC1302通过促进DC分泌IL-6和IL-12,并激活STAT3信号通路介导Tfh细胞的分化,旨在为后续免疫增强剂的开发提供思路。 展开更多
关键词 CVC1302 DC STAT3 Tfh细胞
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猪XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白的制备与鉴定
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作者 杨利 杜露平 +10 位作者 侯立婷 张浩明 于晓明 李兰 乔绪稳 张元鹏 秦竹 王义伟 郑其升 陈瑾 程海卫 《中国农业大学学报》 北大核心 2025年第1期131-141,共11页
为通过将FMDV抗原靶向提呈至猪DC细胞进而提高疫苗免疫效力,本研究利用原核系统表达了猪XCR1目的蛋白,以该蛋白为免疫原免疫羊驼,提取其外周血淋巴细胞的总mRNA并反转录为cDNA,构建噬菌体展示纳米抗体文库,经过3轮亲和筛选获得猪XCR1特... 为通过将FMDV抗原靶向提呈至猪DC细胞进而提高疫苗免疫效力,本研究利用原核系统表达了猪XCR1目的蛋白,以该蛋白为免疫原免疫羊驼,提取其外周血淋巴细胞的总mRNA并反转录为cDNA,构建噬菌体展示纳米抗体文库,经过3轮亲和筛选获得猪XCR1特异性纳米抗体;利用SOE-PCR技术将该纳米抗体和猪O型FMDV特异性纳米抗体Nb205连接,构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白。结果表明:1)成功原核表达猪XCR1目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot结果显示,其相对分子量大小约35 ku,符合预期。2)羊驼血清效价为1∶64000,满足建库要求;构建的噬菌体展示文库库容量约为1.91×10^(8)CFU/mL,插入率为91.3%,多样性好;经3轮亲和筛选成功获得了纳米抗体Nb75,间接ELISA结果显示该纳米抗体能特异性与XCR1结合。3)利用SOE-PCR技术成功构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白Nb75-205;SDS-PAGE和Western blot显示,该蛋白在大肠杆菌中可溶性表达,且呈现二聚体结构,间接ELISA结果显示Nb75-205能同时与XCR1目的蛋白和FMDV抗原结合。综上,本研究采用噬菌体展示技术成功获得猪XCR1特异性纳米抗体,并构建XCR1/FMDV双特异纳米抗体融合蛋白Nb75-205,且该蛋白为天然二聚体结构,与XCR1目的蛋白和FMDV抗原均具有较好的结合活性,为进一步开展FMDV抗原的猪XCR1靶向提呈研究奠定基础。 展开更多
关键词 趋化因子受体1 双特异纳米抗体 二聚体 FMDV
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不同免疫增强剂对猫瘟疫苗免疫效力的影响
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作者 于立辉 孙小云 +5 位作者 王浩然 白瑾 王玉庆 王鹏程 陈晓月 刘金玲 《沈阳农业大学学报》 北大核心 2025年第2期63-68,共6页
[目的]猫瘟是由猫细小病毒引起的猫的传染性疾病,其主要特点是白细胞数量下降和出血性胃肠炎,具有较高的感染率和致死率,对宠物的健康造成严重威胁。疫苗接种是目前预防猫瘟最主要的方式,但疫苗的免疫效果受到多种因素的制约。免疫增强... [目的]猫瘟是由猫细小病毒引起的猫的传染性疾病,其主要特点是白细胞数量下降和出血性胃肠炎,具有较高的感染率和致死率,对宠物的健康造成严重威胁。疫苗接种是目前预防猫瘟最主要的方式,但疫苗的免疫效果受到多种因素的制约。免疫增强剂能够增强畜禽的疫苗免疫效果,探究免疫增强剂对宠物疫苗免疫效果的影响,以期为猫的免疫防治效果提供理论依据。[方法]选择幼猫作为试验对象,基于单因子试验设计方案,各试验组分别在60,81,102日龄免疫妙三多疫苗,免疫前后4d分别饲喂0.9%氯化钠生理盐水(对照组)、黄芪多糖(APC组)、脾氨肽(SAT组)和高免因子核酸制剂(NAP组),对各组幼猫IgG抗体、IFN-γ及全血细胞分类进行检测。[结果]脾氨肽和高免因子核酸制剂能够提升幼猫猫瘟抗体和INF-γ的分泌水平以及白细胞和中性粒细胞的数量,但黄芪多糖对幼猫猫瘟抗体和INF-γ的分泌水平等无显著效果;脾氨肽和高免因子核酸制剂对幼猫的红细胞、血小板、单核细胞和淋巴细胞数量也无显著提升。[结论]脾氨肽和高免因子核酸制剂能够显著提高幼猫体内部分抗体指标水平,表明这两类试剂可以提高幼猫对猫瘟的免疫效果。该研究为幼猫免疫增强剂的研究奠定初步的理论基础,为进一步研究猫瘟等疾病的有效防治积累数据,同时对于家禽和家畜常见免疫增强试剂用于增强幼猫等宠物的免疫力提供参考。 展开更多
关键词 猫瘟 免疫增强剂 抗体 脾氨肽 黄芪多糖 高免因子
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植物乳植杆菌CCFM8661对小鼠免疫的改善效果
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作者 马微微 武亚楠 +2 位作者 赵伊阳 孙杭 黄莉莉 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第13期75-82,共8页
为研究植物乳植杆菌CCFM8661对小鼠免疫力的调节作用。将60只小鼠随机分成5组,对照组、模型组、植物乳植杆菌CCFM8661低、中、高(1.5×10^(6)、1.5×10^(7)、1.5×10^(8) CFU/只)剂量组。除了对照组外,在实验前对其余各组... 为研究植物乳植杆菌CCFM8661对小鼠免疫力的调节作用。将60只小鼠随机分成5组,对照组、模型组、植物乳植杆菌CCFM8661低、中、高(1.5×10^(6)、1.5×10^(7)、1.5×10^(8) CFU/只)剂量组。除了对照组外,在实验前对其余各组通过注射环磷酰胺建立免疫抑制模型,然后使用不同剂量植物乳植杆菌CCFM8661对实验组小鼠进行灌胃。检测不同剂量植物乳植杆菌CCFM8661对小鼠体质量、免疫器官指数、细胞免疫、体液免疫、非特异性免疫的影响。结果显示,植物乳植杆菌CCFM8661能够显著提高被免疫抑制小鼠的体质量、胸腺指数、脾指数;对小鼠的细胞免疫、体液免疫和非特异性免疫都具有良好的调节作用。植物乳植杆菌CCFM8661具有增强小鼠免疫力的功能。 展开更多
关键词 植物乳植杆菌CCFM8661 免疫调节 环磷酰胺
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二重环介导等温扩增法快速检测鸭肉中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌
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作者 张林吉 贾燕 +4 位作者 任春芝 昌莉丽 孙朋 张青青 任士飞 《山东畜牧兽医》 2025年第1期1-5,共5页
为了建立二重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测体系快速检测鸭肉中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌,本研究利用沙门菌invA基因和金黄色葡萄球菌SAR0395基因设计引物,以建立单重LAMP体系为基础,对引物浓度进... 为了建立二重环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测体系快速检测鸭肉中沙门氏菌和金黄色葡萄球菌,本研究利用沙门菌invA基因和金黄色葡萄球菌SAR0395基因设计引物,以建立单重LAMP体系为基础,对引物浓度进行优化,建立二重LAMP检测体系,测定对单一菌株的特异性和灵敏度,并对两种细菌扩增产物的溶解曲线和溶解峰进行分析。结果显示,建立的单重LAMP体系分别能对沙门氏菌和金黄色葡萄球菌进行高效扩增,当沙门氏菌和金黄色葡萄球菌引物浓度比达到2.5:1时,建立的二重LAMP检测方法扩增效率最佳,建立的单重和二重LAMP检测方法对两种细菌具有较好特异性;二重LAMP对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的检测灵敏度分别为9.1×10^(1) CFU/m L和7.8×10^(1) CFU/mL,可根据扩增产物溶解曲线和溶解峰温度的不同,实现对两菌有效鉴别。与传统方法比较,二重LAMP对鸭肉类产品检测符合率为100%。结果表明,建立的二重LAMP检测方法灵敏度高、特异性强、可定性鉴定、检测周期短,可用于鸭肉中金黄色葡萄球菌和沙门氏菌的快速检测。 展开更多
关键词 环介导等温扩增 金黄色葡萄球菌 沙门氏菌 溶解曲线 快速检测
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α-甘露聚糖对保育仔猪免疫和生产性能的影响
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作者 杨公社 雷晓军 +10 位作者 刘冬霞 王西全 寻晓洁 吕妍 葛玉芳 李建民 严元宠 田国太 王昆 曹亚斌 滕江 《动物医学进展》 北大核心 2025年第4期46-52,共7页
为探究α-甘露聚糖对保育仔猪免疫力与生产性能的影响,选用保育仔猪40头,采用单因素试验设计,随机分为试验组和对照组,每组20头,公母各半。对照组饲喂保育猪饲料,试验组饲料按500 g/kg添加α-甘露聚糖饲喂至试验结束。40头受试猪于14、2... 为探究α-甘露聚糖对保育仔猪免疫力与生产性能的影响,选用保育仔猪40头,采用单因素试验设计,随机分为试验组和对照组,每组20头,公母各半。对照组饲喂保育猪饲料,试验组饲料按500 g/kg添加α-甘露聚糖饲喂至试验结束。40头受试猪于14、28、37、47日龄,分别肌肉注射猪繁殖与呼吸综合征、猪瘟、猪伪狂犬病活疫苗各1头份。试验至54日龄,每组随机抽公母仔猪各3头宰杀,采集肝、胸腺、脾等器官计算器官指数,制作组织切片,光镜检查。于75日龄每组抽样采血7头,ELISA测定3种病原的血清抗体水平。结果显示,试验组全程成活率比对照组提高5%,饲料利用率提高11.49%,试验组54日龄平均体重比对照组高3.11 kg,期末平均日增重高66.26 g,增重部分与投入品的投入产出比为1∶10.55(P<0.05)。试验组肝、胸腺、脾等器官指数均高于对照组(P<0.01)。75日龄,试验组血清抗体阳性率均高于对照组;与对照组相比,试验组肝脏肝小叶结构致密,肝板、肝索形态清晰,肝细胞核清晰,胸腺结构紧凑,发育充分。脾脏,皮质部和髓质部结构致密,白髓和红髓分界清晰,脾小结和弥散性淋巴组织发达。结果表明在保育期内饲喂α-甘露聚糖能显著改善仔猪免疫器官和内脏器官发育,提高保育猪对接种疫苗的免疫应答能力,增强疫苗的免疫效果,给后期肥育和猪的快速生长奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 α-甘露聚糖 免疫力 生长性能 保育猪
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预防化脓隐秘杆菌感染保护性抗原的筛选
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作者 徐登峰 赵自亮 +3 位作者 张素辉 杨洪保 冉智光 沈克飞 《中国生物制品学杂志》 2025年第7期776-780,共5页
目的 测定化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)已鉴定抗原和潜在抗原的免疫保护率,以期筛选出保护性抗原。方法 从化脓隐秘杆菌2012CQ-ZSH菌株基因组(GenBank:CP012649)注释的蛋白质中搜索ATP结合盒(ATP binding cassette,ABC)底物结合... 目的 测定化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)已鉴定抗原和潜在抗原的免疫保护率,以期筛选出保护性抗原。方法 从化脓隐秘杆菌2012CQ-ZSH菌株基因组(GenBank:CP012649)注释的蛋白质中搜索ATP结合盒(ATP binding cassette,ABC)底物结合蛋白(substrate-binding protein,SBP),通过BLAST分析其基因保守性和菌株分布率。将筛选出的蛋白在GST融合蛋白表达系统中表达,经Gluthathione-Sepharose 4B纯化后免疫20只雌性昆明小鼠,以注射不含重组蛋白的PBS为对照组。第2次免疫后第14天,经腹腔注射致死剂量的化脓隐秘杆菌菌株ZSH-2020[(8.9±0.4)×10^(8)CFU],记录攻击后21 d内致死小鼠数量,计算蛋白质保护率。将保护率大于80%的蛋白质判定为保护性抗原。结果 ALD74485[溶血素(pyolysin,PLO)]、ALD74170[铁结合蛋白(iron-binding protein,IBP)]、ALD74643、ALD73390、ALD73068、ALD73591、ALD73669编码基因保守且在菌株中广泛分布,制备其重组蛋白。重组PLO、IBP、ALD73390对攻毒小鼠的保护率分别为87.5%、81.25%、81.25%,高于其他蛋白的免疫保护率。结论 PLO、IBP、ALD73390是预防化脓隐秘杆菌感染的保护性抗原,由其构成的多组分疫苗可能提高化脓隐秘杆菌亚单位疫苗的有效性。 展开更多
关键词 化脓隐秘杆菌 亚单位疫苗 脂蛋白 保护性抗原
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鸡传染性贫血病疫苗研究进展 被引量：1
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作者 汪磊 梁琳 +6 位作者 罗润琪 梁瑞英 胡丹丹 司红彬 丁家波 邸文达 汤新明 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第1期341-350,共10页
鸡传染性贫血病(chicken infectious anemia, CIA)是临床上最常见的免疫抑制性传染病之一,尚无特异性治疗方法,严重威胁动物健康和养殖业的经济效益。虽然已有部分地区以活疫苗进行CIA的临床预防,但其安全性问题及病毒培养和生产效率低... 鸡传染性贫血病(chicken infectious anemia, CIA)是临床上最常见的免疫抑制性传染病之一,尚无特异性治疗方法,严重威胁动物健康和养殖业的经济效益。虽然已有部分地区以活疫苗进行CIA的临床预防,但其安全性问题及病毒培养和生产效率低是制约活疫苗推广应用的主要瓶颈。笔者从引起CIA的鸡传染性贫血病毒(Chicken infectious anemia virus, CIAV)的病原学与流行特征、传统疫苗与新型疫苗激发宿主的免疫应答特征与免疫保护力等方面进行全面分析,剖析现有疫苗的优缺点,结合新型疫苗的理论与技术优势,提出CIA高效疫苗的研发方向,为CIA疫苗的研发提供新的思路和科学依据。 展开更多
关键词 鸡传染性贫血病 鸡传染性贫血病毒(CIAV) 感染与免疫 疫苗研发
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猪CD40L的可溶性表达及其生物学活性检测 被引量：1
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作者 贺艳艳 郭慧琛 +2 位作者 孙世琪 穆素雨 敬晓棋 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第3期389-395,共7页
为探讨可溶性猪CD40L(第113—261位氨基酸)对猪外周血单核细胞(PBMC)的活化作用,将构建好的含猪CD40L基因的质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,纯化的重组CD40L蛋白偶联FITC后与PBMC进行原位杂交,同时使用荧光显微镜和流式细胞仪分析研究CD... 为探讨可溶性猪CD40L(第113—261位氨基酸)对猪外周血单核细胞(PBMC)的活化作用,将构建好的含猪CD40L基因的质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,纯化的重组CD40L蛋白偶联FITC后与PBMC进行原位杂交,同时使用荧光显微镜和流式细胞仪分析研究CD40L蛋白刺激B细胞的生物学活性。SDS-PAGE和Western-blot结果显示,表达的重组CD40L蛋白大小约14 kDa,确定最佳表达条件为16℃、D_(600 nm)值为1.1、0.5 mmol/L IPTG诱导12 h;流式细胞仪分析表明,重组CD40L蛋白能与PBMC表面的CD40蛋白分子结合,重组CD40L蛋白可以明显活化B细胞(P<0.001)。结论:CD40L具有促进B细胞活化的生物学活性,CD40L能促进免疫细胞反应,具有免疫调节作用。本研究为CD40L在重要家畜物种和人类疾病动物模型中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪CD40L 原核表达 生物学活性
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牦牛源大肠杆菌OmpA外膜蛋白的原核表达及免疫效果评价 被引量：1
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作者 章石楠 韩生义 +6 位作者 石田 李淑萍 胡国元 高瑞 田嘉琪 周雯雯 李生庆 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第3期458-465,472,共9页
用生物信息学软件将本实验室分离的Escherichia coli QML2206-1(E.coli QML2206-1)株与不同菌种的外膜蛋白A(OmpA)蛋白氨基酸序列进行同源性分析,并对OmpA蛋白进行理化性质分析、跨膜结构和信号肽预测、B细胞抗原表位预测、二级和三级... 用生物信息学软件将本实验室分离的Escherichia coli QML2206-1(E.coli QML2206-1)株与不同菌种的外膜蛋白A(OmpA)蛋白氨基酸序列进行同源性分析,并对OmpA蛋白进行理化性质分析、跨膜结构和信号肽预测、B细胞抗原表位预测、二级和三级结构预测;将OmpA基因片段与pET-32a载体连接,构建原核表达载体,在BL21(DE3)进行原核表达并优化表达条件后用镍柱亲和纯化系统进行纯化;将纯化后的重组蛋白与弗氏佐剂充分混匀后免疫小鼠,利用ELISA方法检测小鼠特异性IgG抗体水平及小鼠血清中细胞因子CD4、CD8、IL-4的表达水平,并通过小鼠攻毒保护试验评价其免疫保护效果。结果显示,OmpA蛋白为亲水性蛋白,无跨膜结构域,二级结构主要由无规则卷曲(47.98%)和α-螺旋(29.77%)构成,有12个能与B细胞产生的抗体结合的抗原表位。经原核表达成功获得相对分子质量约为55 kDa的重组蛋白OmpA,且在37℃、IPTG浓度0.0004 mol/L诱导6 h的表达量最高。重组蛋白免疫小鼠后血清特异性IgG抗体效价最高可达1∶32000;与对照组相比,免疫小鼠血清中CD4、CD8及IL-4的表达水平均有升高。用最小致死量(minimum lethal dose,MLD)、2倍最小致死量(2MLD)攻毒后小鼠存活率分别为80%、40%。结果表明,OmpA重组蛋白具有良好的抗原性和一定的免疫保护作用。该研究为下一步基于OmpA蛋白的牦牛适用性E.coli基因工程亚单位疫苗的研制提供了技术依据。 展开更多
关键词 牦牛源大肠杆菌 OmpA蛋白 原核表达 生物信息学分析 免疫保护效果
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口蹄疫病毒样颗粒诱导的小鼠FDC和Tfh的表达与分布 被引量：1
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作者 苏雅 刘佳欢 +1 位作者 张俊娟 李丽敏 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第4期648-655,共8页
为探究口蹄疫病毒样颗粒(foot-and-mouth virus-like particles,FMDV-VLPs)诱导的小鼠脾脏和淋巴结中滤泡树突状细胞(follicular dendritic cell,FDC)和滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells,Tfh)的表达及分布,将重组pCMV-HA-HBcA... 为探究口蹄疫病毒样颗粒(foot-and-mouth virus-like particles,FMDV-VLPs)诱导的小鼠脾脏和淋巴结中滤泡树突状细胞(follicular dendritic cell,FDC)和滤泡辅助性T细胞(follicular helper T cells,Tfh)的表达及分布,将重组pCMV-HA-HBcAg-VP1-VP4质粒转染CHO-K1细胞制备FMDV-VLPs,并且通过原核表达系统表达并纯化重组FMDV VP1-VP4蛋白。用FMDV-VLPs(VLP组)和重组FMDV VP1~VP4蛋白(VP1~VP4组)经颈背部皮下免疫BALB/c小鼠,同时设置PBS对照组(PBS组)。首次免疫21 d加强免疫,分别在首次免疫后7、28、42、72、102 d取脾脏、肩前淋巴结和颌下淋巴结,制备冰冻切片,利用免疫组织化学染色后观察FDC和Tfh的表达及分布情况。结果显示,VLP组的脾脏和淋巴结中FDC和Tfh的数量从第7~42天有逐渐增多的趋势,第72天开始逐渐减少至未免疫水平。结果表明,FMDV-VLPs可以诱导脾脏和淋巴结中形成生发中心(GC),且GC中FDC与Tfh数量在加强免疫后至少可以持续42 d。本研究为FMDV样颗粒诱导的B细胞免疫记忆应答机制研究提供了细胞学基础。 展开更多
关键词 病毒样颗粒 滤泡树突状细胞 滤泡辅助性T细胞 免疫组织化学
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太子参皂苷对卵清白蛋白免疫小鼠肠道应答的影响 被引量：1
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作者 陈颖清 曾丽 +8 位作者 赵佳梅 杜蓥蓥 曾靖棋 周梦圆 秦凤远 江珊 李健 潘慧青 马玉芳 《动物医学进展》 北大核心 2025年第2期130-134,共5页
为研究太子参皂苷(pseudostellaria heterophylla saponins,PHS)对模式抗原卵清白蛋白(OVA)免疫小鼠肠道免疫应答的影响,将72只雌性小鼠随机分为6组,分别为空白组(CK组)、OVA免疫对照组(OVA组)、铝佐剂对照组(OVA+Al组)、PHS低剂量组(OV... 为研究太子参皂苷(pseudostellaria heterophylla saponins,PHS)对模式抗原卵清白蛋白(OVA)免疫小鼠肠道免疫应答的影响,将72只雌性小鼠随机分为6组,分别为空白组(CK组)、OVA免疫对照组(OVA组)、铝佐剂对照组(OVA+Al组)、PHS低剂量组(OVA+PHS-L,50 mg/kg)、PHS中剂量组(OVA+PHS-M,100 mg/kg)、PHS高剂量组(OVA+PHS-H,200 mg/kg)(在第1~5天和第16~20天,除PHS各剂量组按体重灌胃相应剂量PHS外,其余各组灌胃相应体积的双蒸水;在第6天和第21天,于腹股沟处对CK组每只小鼠进行皮下注射0.2 mL/只的无菌PBS,对OVA+Al组注射含100μg OVA和200μg Alum的PBS混合液,对PHS各剂量组小鼠注射含100μg OVA的PBS溶液)。第36天处死小鼠,检测各项指标。结果显示,与OVA组相比,OVA+PHS-L组可显著提高回肠绒隐比和十二指肠单位长度内淋巴细胞个数(P<0.05),显著提升十二指肠中IL-6、空肠中sIgA和回肠中TNF-α含量(P<0.05);OVA+PHS-M组可显著提高十二指肠绒毛高度、绒隐比以及单位长度内淋巴细胞个数(P<0.05),显著提升空肠和回肠中TNF-α含量(P<0.05);OVA+PHS-H组可显著提升空肠中sIgA含量(P<0.05)。上述结果表明,PHS能在一定程度上强化肠道组织形态,调节相关免疫球蛋白和细胞因子的分泌,增强肠道黏膜免疫功能,提高小鼠对OVA的免疫应答,具有成为佐剂的潜力。 展开更多
关键词 太子参皂苷 卵清白蛋白 佐剂 肠道免疫应答
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干扰素基因刺激因子在金黄色葡萄球菌感染引起粒体功能障碍中的作用研究 被引量：1
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作者 吴斌凤 高兴 +3 位作者 孙乃岩 仇亚伟 张金秋 苗晋锋 《南京农业大学学报》 北大核心 2025年第2期410-418,共9页
[目的]本文主要探究干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon gene, STING)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染引起线粒体功能障碍的影响,为S.aureus引起的乳腺炎防控提供理论支撑。[方法]以小鼠乳腺上皮细胞系(EpH4-Ev)... [目的]本文主要探究干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon gene, STING)对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)感染引起线粒体功能障碍的影响,为S.aureus引起的乳腺炎防控提供理论支撑。[方法]以小鼠乳腺上皮细胞系(EpH4-Ev)和S.aureus(ATCC 29213)为研究对象,细胞试验分为对照组(Control、STING抑制剂C-176单独处理和线粒体分裂抑制剂Mdivi-1单独处理)、感染组(S.aureus)和2个处理组(C-176+S.aureus和Mdivi-1+S.aureus)。分别检测乳腺上皮细胞中STING通路的激活、线粒体功能相关蛋白的表达水平、线粒体DNA(mtDNA)拷贝数、线粒体活性氧(mROS)水平和线粒体膜电位(MMP)以及线粒体形态的变化等。动物试验分为对照组(C57BL/6野生型WT小鼠和C57BL/6 STING基因敲除ΔSTING小鼠)、感染组(WT+S.aureus和ΔSTING+S.aureus),分别检测肝脏组织和乳腺组织中的总抗氧化能力(total antioxidant capacity, T-AOC)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase, NAGase)和丙二醛(malondialdehyde, MDA)等生化指标。[结果]S.aureus感染乳腺上皮细胞导致STING通路激活,线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,DRP1)Ser616位点磷酸化水平升高(P<0.05),线粒体融合蛋白1(mitofusion 1,MFN1)和线粒体融合蛋白2(mitofusion 2,MFN2)表达量降低(P<0.05);而C-176和Mdivi-1处理均降低了DRP1 Ser616的磷酸化水平(P<0.01),恢复了MFN1和MFN2的表达量(P<0.05),缓解S.aureus引起的线粒体碎片化;同时,C-176和Mdivi-1处理均显著抑制S.aureus感染诱导的乳腺上皮细胞中mROS水平升高和MMP的异常下降(P<0.05),以及mtDNA拷贝数的下降(P<0.05)。此外,缺失STING基因可以恢复S.aureus感染引起的小鼠肝脏和乳腺中T-AOC水平(P<0.01),降低NAGase活性与MDA含量(P<0.05)。[结论]抑制STING可以改善S.aureus感染乳腺上皮细胞诱导的线粒体功能障碍,缺失STING基因可以缓解S.aureus感染引起小鼠肝脏和乳腺的组织损伤和氧化应激。 展开更多
关键词 奶牛乳腺炎 金黄色葡萄球菌 干扰素基因刺激因子 线粒体功能障碍
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可诱导驯化免疫的屎肠球菌分离筛选及其抗感染效果评价 被引量：1
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作者 初红 王贺 +3 位作者 贾秀文 李娜 李丰阳 雷连成 《微生物学通报》 北大核心 2025年第2期785-798,共14页
【背景】天然免疫应答作为机体的第一道免疫防御屏障,在动物抵抗病原微生物感染的初始阶段发挥着关键作用。从驯化免疫的角度,增强动物天然免疫,提高动物抗病能力是预防控制疾病的有效措施。【目的】从猪肠道菌群中筛选分离具有潜在驯... 【背景】天然免疫应答作为机体的第一道免疫防御屏障,在动物抵抗病原微生物感染的初始阶段发挥着关键作用。从驯化免疫的角度,增强动物天然免疫,提高动物抗病能力是预防控制疾病的有效措施。【目的】从猪肠道菌群中筛选分离具有潜在驯化免疫作用的细菌,为挖掘新的免疫刺激物奠定基础。【方法】从健康猪粪便中分离纯化细菌,选择大蜡螟(Galleria mellonella)幼虫驯化免疫模型用于筛选肠道共生菌,对有潜在驯化免疫功能的细菌进行16S rRNA基因序列鉴定和生长曲线的测定,并利用小鼠模型对细菌进行体内驯化效果评价。【结果】通过使用大蜡螟幼虫模型,我们筛选出了一株具有诱导驯化免疫能力的屎肠球菌(Enterococcus faecium)SC-2;通过小鼠模型进一步证实菌株SC-2预刺激可以提高小鼠外周血与肺脏中的中性粒细胞和巨噬细胞占比,显著降低猪链球菌(Streptococcus suis)感染后其主要脏器中的菌载量,显著提高小鼠存活率。【结论】屎肠球菌SC-2具有诱导驯化免疫的作用,该菌株的分离鉴定为免疫调控新成分的挖掘提供了基础。 展开更多
关键词 屎肠球菌 驯化免疫 大蜡螟 分离鉴定
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鸡肉中利巴韦林间接竞争ELISA检测方法的建立
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作者 胡骁飞 邢云瑞 +3 位作者 邢广旭 孙亚宁 王琳 张改平 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第10期2495-2498,2504,共5页
目的:建立高灵敏度的鸡肉中利巴韦林间接竞争ELISA(icELISA)检测方法。方法:基于已获得的利巴韦林单克隆抗体,采用棋盘试验确定抗原抗体最佳工作浓度,从而建立icELISA方法,并对该方法的性能进行鉴定。结果:建立的icELISA方法线性范围为0... 目的:建立高灵敏度的鸡肉中利巴韦林间接竞争ELISA(icELISA)检测方法。方法:基于已获得的利巴韦林单克隆抗体,采用棋盘试验确定抗原抗体最佳工作浓度,从而建立icELISA方法,并对该方法的性能进行鉴定。结果:建立的icELISA方法线性范围为0.44~32.71 ng/ml,IC50为3.78 ng/ml,最低检测限(LOD)为0.20 ng/ml;除了与利巴韦林特异反应外,与其他抗病毒药物均无交叉反应;样品加标回收率为91.60%~100.76%,变异系数7.29%~10.63%。结论:本研究建立了灵敏度高、特异性强的利巴韦林icELISA检测方法,可用于检测鸡肉中利巴韦林残留。 展开更多
关键词 利巴韦林 抗病毒药物 鸡肉 检测 间接竞争ELISA
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激活标志物CD69蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 徐娜 张芷盈 +4 位作者 杜星南 于黛辉 郑海学 陈霞 伍国强 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第9期1241-1247,共7页
为了评估原核表达的猪源CD69蛋白的免疫原性及其潜在的应用价值,以pET-32a(+)为原核表达载体,猪源CD69基因为目的基因,构建重组质粒pET-32a-CD69,针对大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达;通过变性、复性等方法成功纯化蛋白后,将... 为了评估原核表达的猪源CD69蛋白的免疫原性及其潜在的应用价值,以pET-32a(+)为原核表达载体,猪源CD69基因为目的基因,构建重组质粒pET-32a-CD69,针对大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达;通过变性、复性等方法成功纯化蛋白后,将纯化的CD69蛋白与佐剂按1∶1的比例混合,多次免疫雄性BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并用免疫印迹试验(Western-blot)与酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)进行鉴定。结果表明,重组的CD69以包涵体形式表达,分子质量约为35 k Da;通过ELISA测定鼠源多克隆抗体效价,结果显示效价达到1∶64 000以上;Western-blot结果表明,该多克隆抗体表现出良好的反应性和特异性。激活标志物CD69蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备,为今后我国猪产业的发展与猪相关疾病检测提供了帮助。 展开更多
关键词 CD69基因 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
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