摘要
目的:研究人乳头瘤病毒(HPV)的主要衣壳蛋白L1和主要的转化蛋白E7的融合基因在原核细胞中的表达,为研制HPV16L1E7疫苗和诊断试剂盒提供依据。方法:采用聚合酶链反应(PCR)以重组质粒pUC19L1E7为模板扩增HPV16L1E7基因片段,克隆至载体pMD18-T中,并用限制性内切酶将HPV16L1E7基因切下,克隆至原核表达质粒pQE30中,经IPTG诱导表达,再使用SDS-PAGE和蛋白印迹检测其抗原性和表达水平。结果:HPV16L1E7融合蛋白能被抗HPV16L1抗体识别,分子量为66KD,经IPTG诱导4h后,表达的HPV16L1E7融合蛋白占菌体总蛋白量的25%以上。结论:成功构建的表达载体pOE30-L1E7可在原核表达细胞中高效表达,且表达出的HPV16L1E7融合蛋白具有反应活性,可与HPV16抗体发生反应。
Objective:To study the expression of fusion protein of HPV16capsid protein L1and transforming protein E7in E.coli.Methods :HPV16L1E7DNA fragment was amplified by poly-merase chain reaction from recombinant pUC19L1E7,the fragment was then cloned into the pMD18-T.After being digested by BglⅡ,the HPV16L1E7was inserted into the expression vector pQE30,and was transformed into E.coli M15.The recombinant vector was induced by IPTG to express the fusion protein.The antigenicity of HPV16L1E7and the expression level were detected by Western blot.Re -sults:The expression protein could reactivate the anti-L1linear epitope antibody.Conclusion:The HPV16L1E7fusion gene can express the L1E7fusion protein in E.coli sucessfully and at high level,the L1E7takes up above25%of total cell protein.
出处
《山东大学学报（医学版）》
CAS
2003年第2期112-115,共4页
Journal of Shandong University:Health Sciences
基金
国家自然科学基金(39870739)
山东省卫生厅科研基金
山东大学青年基金资助课题
关键词
乳头状瘤病毒
人
克隆
分子
大肠杆菌
基因表达
Papillomavirus,human
Clone,molecular
Escherichia coli
Gene expression
