摘要
目的探讨中间段向5'端延长的方法在cDNA末端快速扩增技术(RACE)中的应用。方法通过多序列比对找到目的基因保守区,利用保守区设计兼并引物,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出中间段;根据得到的中间序列设计巢式引物,利用3'RACE得到3'端;利用保守区设计兼并引物通过中间段向5'端延伸技术缩短中间段至5'端的距离;根据5'端延伸得到的核酸序列设计巢式引物,利用5'RACE延伸得到5'端。结果利用目的基因保守区设计兼并引物,通过RT-PCR扩增出长度为345bp的中间段核苷酸序列;根据得到的中间序列设计巢式引物,利用3'RACE技术得到长度为1300bp的核苷酸序列;利用保守区设计兼并引物,通过中间段向5'端延伸,缩短中间段至5'端的距离得到长度为1067bp核苷酸序列;根据5'端延伸得到的核酸序列设计巢式引物,利用5'RACE得到长度为1384bp核苷酸序列。结论通过RT-PCR技术顺利得到中间段,通过3'RACE顺利延伸到3'端,利用中间段延长和5'RACE顺利延伸到5'端。为利用RACE技术过程中遇到类似问题的研究者提供一种思路和方法。
出处
《实验室检测》
2025年第13期100-102,共3页
Laboratory Testing
