摘要
为了建立用于检测导致猪增生性肠炎（PPE）的胞内劳森菌（Lawsonia intracellularis,LI）的荧光定量PCR方法,依据Gen Bank中登录的LI基因组asp A序列,应用分子生物学软件优化设计1对特异性引物,经PCR扩增出300 bp的目的片段。产物经回收与p MD18-T Vector连接后转化到基因工程菌DH5α中,提取重组质粒,经测序鉴定后,作为阳性模板建立SYBR-Green I荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性试验、特异性试验和重复性试验。结果显示：建立的检测方法标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,r2=0.997 9,产物TM在85.0~85.3℃之间,灵敏度为17.5个拷贝/μL,特异性和重复性较好,可用于临床PPE的诊断。本试验成功建立了检测PPE的SYBR-GreenⅠ荧光定量PCR方法,为LI的早期鉴别诊断以及PPE的致病机理研究提供了技术支持,也为PPE分子诊断试剂盒的研制奠定了技术基础。
出处
《畜牧与兽医》
北大核心
2015年第2期74-77,共4页
Animal Husbandry & Veterinary Medicine
基金
山东省科技发展计划(2012GNC11110)
