摘要
目的 建立PCR－ELISA检测TB－DNA的方法学，探讨其最佳实验条件及优化组合，结合涂片法、培养法和PCR电泳法评价其临床应用价值。方法 常规PCR引物用地高辛标记，使扩增产物带有地高辛标记成分，再通过亲和素－生物素系统把生物素标记探针包被在固相聚丙乙烯微孔中，通过固相探针与TB－DNA扩增产物进行杂交与碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体反应，经NPP显色后测其A405nm值的大小，与同样操作处理的不同浓度标准菌株A值比较，推出样品中TB－DNA含量。结果 建立该法的最佳实验条件为PCR循环次数为35次，杂交温度为42℃，杂交时间为1h，探针浓度为0.2uM，包被浓度为10μg/ml。经北京胸部肿瘤结核病医院、北京胸科医院及中国人民解放军第309医院三家医院621例临床标本验证，其中结核组464例，该法检出率为57．3％（266／464），而涂片法仅为31．7％（147／464），培养法为35．8％（166／298），PCR电泳法检出率为45．7％（212／464），各法比较存在显著差异（P＜0．01）。结论 本法作为结核病的一项免疫学和分子生物学检测指标，具有较高的临床推广应用价值。
