摘要
目的构建在哺乳动物细胞中表达的p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)红色荧光蛋白(RFP)融合表达载体。方法将克隆在pcDNA3上的FLAG标记的p38MAPK亚克隆到红色荧光蛋白载体pDsRed1-N1上,随后转染HeLa细胞。在荧光显微镜下观察结果。结果重组质粒经酶切、PCR和测序证明正确无误,并在HeLa细胞中得到高量表达。融合蛋白发出的红色荧光表明p38MAPK弥散分布于细胞质中,细胞核中也有一定的分布。结论成功构建了p38MAPK红色荧光蛋白融合载体,该载体能在哺乳动物细胞中进行表达,为研究p38MAPK的细胞内定位提供了一个重要的工具。
Objective To constructthe vectorthatexpresses the fusionproteinof p38mitogen-activatedproteinkinase(MAPK)andredfluorescentprotein(RFP)in mammaliancells.Methods FLAG-taggedp38MAPKin pcDNA3vectorwas subclonedintoRFPvectorpDsRed1-N1,theconstructof whichwasthentransfectedintoHeLacellsandobservedwithfluo-rescence microscope.Results Therecombinantplasmidwas verifiedby enzymedigestion,PCRandsequenceanalysis,and p38MAPK-RFPfusionproteinwashighlyexpressedinHeLacells.Fluorescencemicroscopefoundtheredfluorescencedis-tributedalloverthecytoplasmandinthenucleias well.Conclusion Theexpressionvectorforp38MAPK-RFPfusionpro-teinis successfullyconstructedandeffectiveexpressionof thisfusionproteinis achieved,whichmightbe instrumentalinthe studyof intracellularlocalizationof p38MAPK.
出处
《第一军医大学学报》
CSCD
北大核心
2002年第2期171-173,共3页
Journal of First Military Medical University
基金
国家自然科学基金重点项目(30030060)
面上项目(39800074
39870332)
国家杰出青年科学基金(39925014)
军队杰出人才基金(98J003)
广东省自然科学基金(980207)
关键词
丝裂原活化蛋白激酶
红色荧光蛋白
载体构建
基因表达
mitogen-activatedproteinkinase
redfluorescentprotein
vectorconstruction
geneexpression
