摘要
为了对杜仲种质资源的遗传多样性研究奠定理论和技术基础,采用正交试验设计和单因素分析,建立并优化了杜仲的SSR-PCR反应体系。结果表明,杜仲SSR-PCR最适反应体系为正反向引物(10μmol.L-1)各0.2μL,Taq DNA聚合酶(5 U.μL-1)0.1μL,dNTP(10 mmol.L-1)0.2μL,模板DNA(5～10 ng.μL-1)1.0μL,Mg2+(25 mmol.L-1)0.6μL,10×PCR缓冲液1.0μL,HPLC超纯水6.7μL,总体积10.0μL。同时筛选出了3对多态性有效引物,研究结果证明了微卫星引物在不同物种间的通用性受物种间亲缘关系远近的影响,并初步揭示了杜仲的遗传多样性,表明了微卫星标记在遗传多样性研究上的优越性。
To provide theoretic and technical support for molecular assessment of genetic diversity in germplasm resources of Eucommia ulmoides, simple sequence repeat-polymerase chain reaction （SSR-PCR） system was established through orthogonal test and optimized through single factor experiment. The results showed that the optimal SSR-PCR reaction system was a volume of 10.0 μL containing forward and reversed-primer （10 μmol＇L-1） 0.2 pL, respectively, Taq DNA polymerase （5 U.μ-1） 0.1 μL, dNTP （10 mmol.L-1） 0.2 μL, DNA （5-10 ng-μL-1 ） 1.0 μL, Mg〉 （25 mmol.L-1） 0.6 μL, 10 x PCR buffer 1.0 μL and HPLC water 6.7 μL. Three SSR poly morphic primer pairs were selected. The results proved the limited transferability of SSR primers between dittantly related species, revealed the genetic diversity of E. ulmoides preliminarily, and exhibited the advantages of SSRs for the investization of enetic diversity.
出处
《安徽农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期387-392,共6页
Journal of Anhui Agricultural University
基金
安徽高校省级自然科学重点项目(KJ2011A115)资助
