摘要
用三聚氰胺半抗原(MEL)与异硫氰酸荧光素乙二胺(EDF)反应合成了荧光示踪物MEL-EDF,示踪物与三聚氰胺抗体反应得到稳定的单试剂免疫复合物,考察了其结合动力学和置换动力学过程,建立了一种三聚氰胺单试剂荧光偏振免疫分析方法(SR-FPIA).该方法的检出限(LOD)为3.2 ng/mL,半抑制浓度(IC50)为157.1 ng/mL,检测范围(IC20～IC80)为12.2～1012.4 ng/mL,能够满足国家标准和国际食品法典委员会(CAC)对于食品中三聚氰胺最高残留限量的检测要求.整个检测过程在15 min内完成,并且单试剂免疫复合物在4℃下至少可稳定保存30 d以上.本研究对开发三聚氰胺新型免疫检测方法具有重要意义.
Fluorescence-labeled melamine tracer （MEL-EDF） was synthesized via the reaction of melamine hapten （ MEL ） with 1 - （ 2-aminoethyl ） -3 - （ 3＇, 6 ＇-dihydroxy-3 -oxo-3 H-spiro [ isobenzofuran-1,9 ＇-xanthene ] -5- yl） thiourea（EDF）. The tracer was then incubated with the antibody to prepare the single reagent immunocom- plex, and both the binding and displacement kinetics were evaluated to obtain the equilibration time. Finally, a single reagent fluorescence polarization immunoassay （SR-FPIA） was developed to measure melamine. The SR-FPIA method demonstrated a detection limit （LOD） of 3.2 ng/mL, a 50% inhibition value （ IC50 ） of 157.1 ng/mL and a working range（ IC20-IC80 ） of 12.2-1012. 4 ng/mL. The results indicated the proposed method can meet the detection requirement for the maximum residue level of melamine set by Chinese govern- ment and Codex Alimentarius Commission（CAC）. The detection could be finished within 15 min, and the ob- tained single reagent immunocomplex was stable for more than 30 days at 4 ℃. This work will benefit to fur- ther development of SR-FPIA kit for melamine.
出处
《高等学校化学学报》
SCIE
EI
CAS
CSCD
北大核心
2013年第1期67-71,共5页
Chemical Journal of Chinese Universities
基金
国家农业部行业公益项目(批准号:201003008-08)
高等学校博士学科点专项科研基金优先发展领域项目(批准号:20114404130002)
广州市科技计划项目(批准号:12C12101663)
广东省高等学校成果转化项目(批准号:cgzhzd1005)资助
关键词
单试剂荧光偏振免疫分析
示踪物
三聚氰胺
Single-reagent fluorescence polarization immunoassay
Tracer
Melamine
