摘要
应用比浊法、可溶性蛋白百分比、夹心ＥＬＩＳＡ及变性与非变性ＳＤＳＰＡＧＥ等方法来评价猪带绦虫六钩蚴重组抗原的不同复性条件。透析法复性，透析液为含２ｍｏｌ／Ｌ尿素，１６０μｍｏｌ／ＬＰＥＧ４０００，１．０ｍｍｏｌ／Ｌ０．１ｍｍｏｌ／ＬＧＳＨＧＳＳＧ的ｐＨ９．０的ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲液，蛋白浓度为２～５ｍｇ／ｍＬ，以静置缓慢透析为佳，上述条件任意缺一或快速透析，则免疫活性下降，二聚体、多聚体明显增加；稀释法复性，复性液为上述透析液，蛋白浓度０．１ｍｇ／ｍＬ，以分步缓慢稀释为佳。透析法复性与稀释法复性最佳条件的实验结果无显著差别。透析法复性的重组蛋白进行Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６ＦＦ分子筛凝胶层析，出现２个主峰，收集有免疫活性的第１峰进行ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析，用含５０ｇ／ＬＮａＣｌ、ｐＨ９．０的ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲液洗脱，亦出现２个主峰，收集有免疫活性的第１峰。ＳＤＳＰＡＧＥ显示该峰为单一蛋白条带，蛋白纯度大于９０％。夹心ＥＬＩＳＡ检测免疫活性，每１ｍｇ蛋白的效价大于６×１０５。
出处
《中国兽医科技》
CSCD
1999年第8期13-15,共3页
Chinese Journal of Veterinary Science and Technology
