摘要
利用分子生物学方法，构建了大肠杆菌分枝杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）穿梭表达质粒ｐＢＣＧ２１００，研究了编码日本血吸虫中国大陆株谷胱甘肽Ｓ转移酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＧＳＴ）抗原基因在卡介苗（ＢａｃｉｌｕｓＣａｌｍｅｔｅＧｕｅｒｉｎ，ＢＣＧ）中的表达。以含人结核杆菌热休克蛋白（Ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ，ｈｓｐ）７０基因全长序列的质粒ｐＭＴ７０为模板，扩增出ｈｓｐ７０启动子，测序选出无错配的启动子，将其定向克隆入Ｅ．ｃｏｌｉＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ穿梭质粒ｐＢＣＧ２０００中，构建成Ｅ．ｃｏｌｉＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ穿梭表达质粒ｐＢＣＧ２１００。再将编码ＧＳＴ的ｃＤＮＡ按正确的阅读框顺序，克隆到ｐＢＣＧ２１００中ｈｓｐ７０启动子的下游，得到分枝杆菌表达质粒ｐＢＣＧＧＳＴ。将ｐＢＣＧＧＳＴ电转化入ＢＣＧ中，筛选出重组ＢＣＧ疫苗，经热诱导后所表达的重组ＧＳＴ（ｒＧＳＴ）抗原，为可溶性蛋白，经纯化后，在ＳＤＳＰＡＧＥ上分子量为２６ｋＤ处可见明显的表达蛋白带，其表达量占ＢＣＧ菌体总蛋白的１３％。Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ提示ｒＧＳＴ能与?
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
1999年第2期225-229,共5页
Chinese Journal of Biotechnology
基金
总理基金
国家自然科学基金
