摘要
利用正交试验设计法，从引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度、Mg^2＋浓度和dNTP浓度4种因素3个水平，对山茱萸ISSR—PCR反应体系进行优化分析，并在此基础上对模板DNA浓度、PCR反应过程中的退火温度进行梯度检测．结果表明，20弘LISSR—PCR反应体系中各因素的最佳浓度分别为：1×PC Rbuffer、150μmol／LdNTP、1．0μmaol／L引物、2．5mmol／L Mg^2＋和2．0U TaqDNA聚合酶，最佳模板DNA浓度为20-80ng，引物UBC835的最佳退火温度为57．2℃．
The orthogonal design was used to optimize the ISSR-PCR amplification system of Cornus officinalis in four factors （the concentration of dNTP, Primers, Mg^2＋ and Taq DNA polyrnerase） at three levels respectively. Then, based on the optimal ISSR-PCR amplification system, the concentration of template DNA and annealing temperature were proposed by gradient PCR. The results showed that 1 x PCR buffer, 150μmol/L dNTP, 1.0 μmol/L primer,2.5mmol/L Mg^2＋ , 2.0 U Taq DNA polyrnerase and 20- 80 ng template DNA in a total volume of 20 μL were suitable for ISSR-PCR amplification system of Comus officinalis. The optimal annealing temperature for primer UBC835 is 57.2℃.
出处
《陕西师范大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期80-84,共5页
Journal of Shaanxi Normal University：Natural Science Edition
基金
国家“十一五”科技支撑计划项目(2006BAI06A12-04)
陕西省科技计划项目(2006K16-G2(3))
关键词
生物技术
山茱萸
正交优化
biotechnology
Comus officinalis Sieb. et Zucc.
orthogonal optimization
