摘要
目的 构建Angiopoietin-2剪接体Ang_(2443)全长及功能结构域(CC区和FL区)的原核和真核表达质粒,并在大肠杆菌内获得高产量表达。方法 利用RT-PCR方法从人脐静脉内皮细胞中扩增获得Ang_(2443)功能结构域CC区和FL区,以剪接扩增PCR克隆全长片段,亚克隆至pET-32b(-)载体,IPTG诱导获得融合蛋白表达。凝血酶酶切后经柱层析纯化获得完全蛋白。结果 在所培养的人脐静脉内皮细胞中,Ang_(2443)是唯一表达的剪接体。以此构建了pET-CC、pET-FL和pET-Ang2三个原核和真核表达载体,并在大肠杆菌内获得高产量表达。1mM IPTG诱导表达后蛋白产量60％。凝血酶酶切完全,经柱层析纯化后获得完全蛋白。结论 成功克隆并表达了在所培养的人脐静脉内皮细胞中唯一表达的Angiopoietin-2剪接体Ang_(2443)全长及功能结构域蛋白。
出处
《中国分子心脏病学杂志》
CAS
2003年第3期131-134,共4页
Molecular Cardiology of China
