摘要
目的 构建真核表达质粒PcDNA3.1（＋）-带有Vasostatin自身信号肽的Calreticulin（120～180aa）并了解其在真核细胞内的表达。方法 将带有Vasoatatin自身信号肽的Calreticulin（120～180aa）的RT-PCR产物克隆至peDNA3.1（＋）真核表达载体上，经酶切鉴定及测序分析证明构建成功后，以脂质体介导法转染真核细胞COS-7，并行Western法检测。结果 成功构建了真核表达质粒PeDNA3.1（＋）-带有Vasostatin自身信号肽的Calreticulin（120～180aa），将之转染体外的真核COS-7细胞后，在其上清液中，检测到目的蛋白质。结论 该构建的质粒可在真核细胞中表达目的蛋白质，这为基因治疗视网膜新生血管类病奠定了一定基础。
Objective To clone human vasostatin （120 - 180 aa） gene to construct the recombined plasmid pcDNA3.1 （ ＋ ）-va-sostatin （ 120 - 180 aa） and observe its expression in COS-7. Methods The recombined plasmid encoding vasostatin （ 120 - 180 aa） firstly was cloned into eukaryotic expressive vector of pcDNA3.1 （ ＋ ） to verify its successful construction by enzyme digestion and sequence analysis. Then COS-7 cells were transfected mediated by liposeme and detected by Western blotting. Results pcDNA3. 1 （ ＋ ）-vasostatin （ 120 - 180 aa） constructed successfully transfected COS-7 to detect target protein in the supernatant. Conclusions The recombined plasmid constructed could successfully express the vasostatin （ 120 - 180 aa） protein in transfected eukaryotic cells COS-7, which establish a certain foundation for gene treatment of retina neovascularisation disease.
出处
《中国老年学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期237-239,共3页
Chinese Journal of Gerontology
