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茎环法对转ZmC1基因丹参毛状根中microRNA表达分析 被引量:1
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作者 郑小宇 赵淑娟 《上海中医药大学学报》 CAS 2016年第2期82-86,共5页
目的:对转Zm C1基因丹参毛状根C1-3株系中8个microRNAs(miRNAs),即miR164b、miR166a、miR166b、miR171a、miR171b、miR172、miR394和miR397进行表达定量分析。方法:以野生型丹参毛状根为对照,采用茎环法(Stem-loop),针对每个miRNA设计3... 目的:对转Zm C1基因丹参毛状根C1-3株系中8个microRNAs(miRNAs),即miR164b、miR166a、miR166b、miR171a、miR171b、miR172、miR394和miR397进行表达定量分析。方法:以野生型丹参毛状根为对照,采用茎环法(Stem-loop),针对每个miRNA设计3条引物,包括一条特异性反转录引物、一条上游引物和一条通用反向引物。每个miRNA单独反转录,实时荧光定量PCR(q PCR)检测转基因丹参毛状根C1-3中8个miRNA的表达,实验数据用ΔΔCt法进行分析。结果:与野生型丹参毛状根相比,在转基因毛状根C1-3中8个miRNA均表现为不同程度的上调,其中miR394、miR397和miR164最为显著,分别为对照的15.14倍、7.31倍和4.82倍。结论:茎环法可以成功应用于检测丹参中miRNA的表达;C1-3中这几个miRNA转录水平上调可能与Zm C1异源表达引起的有效成分含量及形态发育表型变化相关。 展开更多
关键词 茎环法 转ZmC1基因 丹参毛状根 MIRNA 表达分析 实时荧光定量PCR
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火龙果miRNA表达分析的qRT-PCR检测体系建立 被引量:2
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作者 李阿利 杨鹍 +2 位作者 文壮 仇志浪 文晓鹏 《种子》 北大核心 2019年第3期6-10,14,共6页
基于火龙果小RNA组测序序列设计miR 396 b特异引物,采用茎环法和加尾法分别对火龙果miR 396 b进行表达分析,并对2个常用内参基因5 S和U 6的稳定性进行评价,建立火龙果miRNA表达分析的qRT-PCR检测体系。结果表明,U 6作为内参基因更稳定;... 基于火龙果小RNA组测序序列设计miR 396 b特异引物,采用茎环法和加尾法分别对火龙果miR 396 b进行表达分析,并对2个常用内参基因5 S和U 6的稳定性进行评价,建立火龙果miRNA表达分析的qRT-PCR检测体系。结果表明,U 6作为内参基因更稳定;茎环法灵敏度高、特异性强,以茎环法设计的引物检测miR 396 b在火龙果不同组织均有表达,且在火龙果幼茎受干旱(15%PEG)处理后呈下调趋势。因此,茎环法实时定量更适用于火龙果miRNA的检测。 展开更多
关键词 火龙果miRNA 茎环法 加尾法 实时定量PCR 内参基因
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bta-miR-377琼脂糖凝胶电泳条件优化 被引量:1
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作者 郝琴琴 任静 +1 位作者 成俊丽 李鹏飞 《山西农业科学》 2022年第5期709-713,共5页
bta-miR-377与下丘脑分泌的可卡因苯丙胺调节转录肽(Cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)存在靶向结合关系。为分析bta-miR-377在牛下丘脑组织中的表达情况,为后续探讨bta-miR-377与CART相互作用进而影响牛卵... bta-miR-377与下丘脑分泌的可卡因苯丙胺调节转录肽(Cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)存在靶向结合关系。为分析bta-miR-377在牛下丘脑组织中的表达情况,为后续探讨bta-miR-377与CART相互作用进而影响牛卵泡发育的作用机制奠定基础,经Trizol法提取牛下丘脑总RNA,采用茎环结构法设计特异性引物,并利用半定量RT-PCR技术克隆bta-miR-377,观察不同条件琼脂糖凝胶电泳后Marker和目的条带的分离情况,其中凝胶浓度为2.0%、2.5%;电压为100、80 V;时间为40、60、80 min;同时通过Image J软件对不同条件下获得的bta-miR-377条带进行灰度值分析,结合电泳结果确定最佳分离条件。结果显示,利用茎环结构法能够达到延长bta-miR-377片段的目的,且特异性强;凝胶浓度为2.5%、电压为80 V、时间为80 min时,bta-miR-377条带分离效果好且表达量高,该条件下条带的灰度值与其他组相比差异显著,与电泳分析结果一致,说明低浓度凝胶的分辨率低,长时间高压会导致DNA降解进而使条带弥散,而适当电压下电泳时间过短会使DNA分子无法聚集而使条带过宽,说明适宜的电泳条件是鉴定目的 miRNA表达的关键。综上可见,bta-miR-377在牛下丘脑中有表达,丰富了动物生殖生理学中下丘脑-垂体-性腺轴的内分泌调控理论。 展开更多
关键词 bta-miR-377 茎环结构法 半定量RT-PCR 琼脂糖凝胶 条件优化
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闭环式反馈控制法在亲缘外周血造血干细胞移植术后患者中的应用 被引量:4
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作者 陈雪梅 杨海丽 肖忠清 《齐鲁护理杂志》 2020年第9期1-4,共4页
目的:探讨闭环式反馈控制法在亲缘外周血造血干细胞移植术后患者中的应用效果。方法:选择2016年2月1日~2017年7月31日收治的亲缘外周血造血干细胞移植术患者38例为对照组,采用常规护理方式;选择2017年8月1日~2019年1月31日收治的亲缘外... 目的:探讨闭环式反馈控制法在亲缘外周血造血干细胞移植术后患者中的应用效果。方法:选择2016年2月1日~2017年7月31日收治的亲缘外周血造血干细胞移植术患者38例为对照组,采用常规护理方式;选择2017年8月1日~2019年1月31日收治的亲缘外周血造血干细胞移植术患者38例为观察组,采用闭环式反馈控制法;比较实施前后护理人员的护理水平,比较两组护理满意度、术后并发症发生情况、手术前后血清蛋白水平[包括血清白蛋白(ALB)、转铁蛋白(TRF)、视黄醇结合蛋白(RBP)]。结果:实施闭环式反馈控制法后,护理人员护理观念、无菌意识、专业技能、健康知识评分高于实施前(P<0.01);观察组护理满意度高于对照组(P<0.05),术后并发症的发生率低于对照组(P<0.05);术后1周,两组血清ALB、TRF水平均低于术前(P<0.05);术后1周,观察组血清RBP水平高于对照组和术前(P<0.01,P<0.05)。结论:对亲缘外周血造血干细胞移植术后患者应用闭环式反馈控制法进行护理,能显著提高护理人员的护理水平,提高患者满意度,降低并发症发生率,改善患者营养状态,值得临床推广。 展开更多
关键词 闭环式反馈控制法 造血干细胞移植 满意度
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茎环法通用探针定量检测成熟型微RNA方法的建立
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作者 周斌 黄理宾 +1 位作者 谢旭琴 李园 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2017年第3期189-192,共4页
目的 建立通用型荧光探针用于不同成熟型微RNA的定量检测.方法 基于茎环法发明者发明且目前应用最为广泛的茎环框架,采用Primer Premier 5.0软件在其茎环框架内部设计了一通用的荧光探针及不同的引物对.采用以上探针和引物对对hsa-miR-1... 目的 建立通用型荧光探针用于不同成熟型微RNA的定量检测.方法 基于茎环法发明者发明且目前应用最为广泛的茎环框架,采用Primer Premier 5.0软件在其茎环框架内部设计了一通用的荧光探针及不同的引物对.采用以上探针和引物对对hsa-miR-143-3p,hsa-miR-145-5p,hsa-miR-124-3p,hsa-miR-339-5p,hsa-miR-361-5p,hsa-miR-423-3p和hsa-miR-486-5p进行定量检测.结果 结果表明该通用型荧光探针可用于不同成熟型微RNA(hsa-miR-143-3p,hsa-miR-145-5p,hsa-miR-124-3p,hsa-miR-339-5p,hsa-miR-361-5p,hsa-miR-423-3p,hsa-miR-486-5p)的定量检测.结论该通用型探针可用于茎环法定量检微RNA,可让定量更加准确、实验成本更低.理论上该探针可以用于所有的成熟型微RNA进行荧光定量PCR检测. 展开更多
关键词 微RNAS 聚合酶链反应 荧光抗体技术 茎环法
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