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siRNA-阳离子脂质体干粉吸入剂的制备与评价
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作者 李晓 鲁彦秀 +2 位作者 鲁克瑞 于晓钰 刘沙 《烟台大学学报(自然科学与工程版)》 2026年第1期32-41,共10页
针对KRAS靶向药物开发中传统siRNA系统递送效率低的问题,构建了基于阳离子脂质体的siRNA干粉吸入剂(siRNA-LP-DPI),通过肺部递送途径提升药物靶向性。通过系统评估冻干制剂的表观形态、粒径分布、Zeta电位及再分散性等关键参数,对保护... 针对KRAS靶向药物开发中传统siRNA系统递送效率低的问题,构建了基于阳离子脂质体的siRNA干粉吸入剂(siRNA-LP-DPI),通过肺部递送途径提升药物靶向性。通过系统评估冻干制剂的表观形态、粒径分布、Zeta电位及再分散性等关键参数,对保护剂种类、预冻温度等工艺条件进行优化。以5%甘露醇为冻干保护剂,预冻温度-80℃,干燥后获得白色蓬松粉末状siRNA-LP-DPI,其再分散性好,略有引湿性,复溶后的平均粒径为(98.66±2.61)nm,Zeta电位为(4.98±0.45)mV,展现出良好的物理稳定性。体外细胞毒性实验结果表明,与游离siRNA溶液对照组相比,siRNA-LP和siRNA-LP-DPI均能显著降低A549肿瘤细胞的活力;且冻干后对siRNA的生物活性无明显影响。细胞摄取实验进一步证实,siRNA-LP-DPI显著提高了A549细胞对siRNA的摄取效率。本研究为开发新型肺部靶向抗肿瘤疗法提供了有效的技术策略,有望为非小细胞肺癌患者提供一种高效、安全的治疗选择。 展开更多
关键词 KRAS sirna 阳离子脂质体 冷冻干燥 干粉吸入剂 非小细胞肺癌
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液-液相分离在植物miRNA与siRNA生物合成和基因沉默中的调控作用
2
作者 兰胡娇 刘建中 《生物工程学报》 北大核心 2025年第12期4706-4718,共13页
液-液相分离(liquid-liquid phase separation,LLPS)是真核细胞中调控生物分子凝聚体形成的重要机制。近年来发现LLPS在植物小RNA[small RNA,sRNA;包括微RNA(microRNA,miRNA)与小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)]的生物合成和RNA... 液-液相分离(liquid-liquid phase separation,LLPS)是真核细胞中调控生物分子凝聚体形成的重要机制。近年来发现LLPS在植物小RNA[small RNA,sRNA;包括微RNA(microRNA,miRNA)与小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)]的生物合成和RNA沉默途径中具有核心作用。本文系统总结了LLPS在植物miRNA和siRNA生成中的调控功能及其分子机制。在细胞核内,SE(SERRATE)蛋白通过其固有无序区(intrinsic disordered region,IDR)介导液-液相分离,形成切割小体(dicing bodies,D-bodies),招募DCL1(DICER-LIKE 1)、HYL1(HYPONASTIC LEAVES)、pri-miRNA(primary microRNA)以及其他蛋白,显著提高miRNA加工效率;此外,还总结了pri-miRNA的N6-甲基酰苷(N6-methyadenosine,m^(6)A)修饰在相分离与miRNA生成中的作用;在细胞质中,基因沉默抑制子3(SUPPRESSOR OF GENE SILENCING 3,SGS3)蛋白通过相分离形成siRNA小体(siRNA-bodies),富集依赖于RNA的RNA聚合酶(RNA-DEPEDENT RNA POLYMERASE,RDR6)、DCL2/4等因子,促进siRNA生成并参与抗病毒防御和发育调控,且SGS3的相分离能力受磷酸化调控。本文为理解植物RNA沉默的精密调控提供了新视角,并为开发新型抗病毒策略奠定了理论基础。 展开更多
关键词 液-液相分离 MIRNA sirna 切割小体 sirna小体 基因沉默
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基于TRPC6、Akt和PPAR的Transgelin上游调控基因siRNA筛选
3
作者 魏田力 李白虹 杨丽君 《临床和实验医学杂志》 2025年第10期1009-1012,共4页
目的基于生物信息学分析,筛选骨架蛋白Transgelin(SM22α)的上游调控基因-蛋白激酶B(Akt)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR),并通过构建过表达/敲除瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)、Akt或PPAR的小鼠足细胞系(MPC5),结合小干扰RNA... 目的基于生物信息学分析,筛选骨架蛋白Transgelin(SM22α)的上游调控基因-蛋白激酶B(Akt)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR),并通过构建过表达/敲除瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)、Akt或PPAR的小鼠足细胞系(MPC5),结合小干扰RNA(siRNA)筛选,解析其对Transgelin的调控机制。方法本研究采用小鼠足细胞系(MPC5),通过siRNA技术特异性沉默TRPC6、Akt1和PPARα基因表达,建立嘌呤霉素氨基核苷(PAN)诱导的足细胞损伤模型。实验设置空白对照组、PAN处理组、基因沉默组(siRNA-TRPC6、siRNA-Akt1、siRNA-PPARα)及阴性对照组(siRNA-NC)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测Tagln及相关基因mRNA表达水平,蛋白质印迹法分析Transgelin、TRPC6、p-Akt和PPARα蛋白表达,并通过细胞骨架染色和流式细胞术评估细胞形态和凋亡情况。结果设计15种siRNA特异性沉默4个基因Akt1、Akt2、PPARα(phospho-S12)和TRPC6的表达。qRT-PCR验证显示,GAPDH、Akt1、Akt2、PPARα和TRPC6这5对引物的扩增效率符合实验要求(效率90%~110%,R^(2)>0.99)。结论引物满足基因表达分析要求,支持后续代谢-骨架机制研究。TRPC6异常提示需结合蛋白检测或替代基因编辑技术(如CRISPRi)以排除转录后调控干扰。 展开更多
关键词 蛋白尿 TRANSGELIN 瞬时受体电位阳离子通道6 sirna筛选
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壳聚糖/透明质酸复合物纳米粒子的制备及其在siRNA递送中的应用 被引量:3
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作者 刘怀艺 黄方茜 +1 位作者 陈柏求 燕云峰 《生物工程学报》 北大核心 2025年第4期1340-1353,共14页
发展高效安全的递送载体是提高siRNA药物体内稳定性、推进siRNA药物的临床应用的关键。壳聚糖(chitosan,CS)是一类天然阳离子聚合物,在核酸药物的递送中具有巨大的应用前景。为了优化CS/siRNA纳米粒子(nanoparticles, NPs)的物理化学性... 发展高效安全的递送载体是提高siRNA药物体内稳定性、推进siRNA药物的临床应用的关键。壳聚糖(chitosan,CS)是一类天然阳离子聚合物,在核酸药物的递送中具有巨大的应用前景。为了优化CS/siRNA纳米粒子(nanoparticles, NPs)的物理化学性质,提高其siRNA递送效率,本研究在CS中加入透明质酸(hyaluronicacid,HA),通过静电作用形成稳定的复合物纳米粒子,同时利用HA对肿瘤细胞表面CD44的靶向作用,实现siRNA的高效递送。首先,系统探究了CS和HA的分子量和质量比对CS/HA NPs的物理化学性质的影响。结果显示,混合体系在HA:CS的质量比为5:5和6:4左右可以形成粒径较小、粒径分布较窄且存储稳定性较高的复合物纳米粒子。在其他条件相同的情况下,CS/HANPs的尺寸随着CS和HA分子量的提高而增大。在此基础上,选择合适的条件制备CS/HA NPs用于siRNA的递送。细胞实验结果显示,通过引入HA可以有效降低CS递送体系的细胞毒性,提高了纳米粒子的细胞摄取,相关CS/HA/siRNANPs可以沉默HeLa-Luc细胞中50%–60%荧光素酶基因。与纯CS相比,CS/HANPs可以与siRNA形成更小的纳米粒子,并由HA介导与肿瘤细胞的特异性相互作用,从而实现siRNA的高效递送。研究结果为天然高分子复合物纳米粒子的构建及siRNA递送提供了有益的参考。 展开更多
关键词 RNA干扰 壳聚糖 透明质酸 纳米粒子 sirna递送
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siRNA无载体递送研究进展
5
作者 刘珂瑶 罗应楠 +2 位作者 胡一雪 王东纳 张列峰 《南京师大学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第1期47-55,共9页
小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)作为一种能够特异性靶向基因沉默的重要分子,具有广阔的应用前景.然而,siRNA的有效递送一直是其临床应用的关键问题之一.传统的siRNA递送系统通常依赖于载体工具的辅助,但载体存在潜在的降解性... 小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)作为一种能够特异性靶向基因沉默的重要分子,具有广阔的应用前景.然而,siRNA的有效递送一直是其临床应用的关键问题之一.传统的siRNA递送系统通常依赖于载体工具的辅助,但载体存在潜在的降解性、长期毒性和免疫反应等问题,限制了其在临床中的应用.因此,无载体递送siRNA成为当前研究的热点之一.本综述旨在回顾siRNA无载体递送研究的最新进展,包括其作用机制、递送策略以及递送优势等方面. 展开更多
关键词 小干扰RNA 无载体递送 RNA干扰 修饰策略 sirna偶联物
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生物矿化的白蛋白/siRNA纳米粒的构建和胞质递送效率研究
6
作者 邹志文 吴锦慧 《中国药科大学学报》 北大核心 2025年第3期321-328,共8页
解决小干扰RNA(siRNA)载体在胞质递送效率与生物相容性之间的矛盾是推动siRNA疗法临床转化的关键。本研究使用牛血清白蛋白(BSA)和人体必需的金属离子,构建了一种生物相容性高、可完全生物降解的siRNA递送载体MnCO_(3)@BSA/Zn^(2+)/siRN... 解决小干扰RNA(siRNA)载体在胞质递送效率与生物相容性之间的矛盾是推动siRNA疗法临床转化的关键。本研究使用牛血清白蛋白(BSA)和人体必需的金属离子,构建了一种生物相容性高、可完全生物降解的siRNA递送载体MnCO_(3)@BSA/Zn^(2+)/siRNA(MRna)。该载体利用Zn^(2+)和Mn^(2+)与生物大分子(BSA和siRNA)的高亲和力,通过水相“一锅法”自组装和生物矿化反应完成了对siRNA的荷载和保护,实现了近90%的siRNA包封率。同时,MRna能够在内体环境中快速崩解使siRNA释放约55%,并通过介导“质子海绵效应”促进siRNA内体逃逸,使siRNA与溶酶体定位系数仅0.18。最终,荷载了CD47 siRNA的MRna可在mRNA和蛋白水平有效降低肿瘤细胞CD47表达,基因沉默效率达到52%,转染效果与商业试剂Lipo2000相近。本研究为siRNA递送系统的设计提供了一种更加简单、高效的策略。 展开更多
关键词 sirna Zn^(2+) Mn^(2+) BSA 自组装 生物矿化
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Bax/Bak siRNA对抑制小鼠早期胚胎凋亡的效应
7
作者 李红 曾位森 +2 位作者 罗琛 朱伟杰 邢福祺 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期647-651,670,共6页
目的:探讨Bax-小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和Bak-siRNA对小鼠胚胎发育及凋亡的效应。方法:通过对体外培养小鼠早期胚胎激光打孔,完成Bax-siRNA(Bax-siRNA组)、Bak-siRNA(Bak-siRNA组)和Bax-Bak-siRNA(Bax-Bak-siRNA联合组)... 目的:探讨Bax-小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和Bak-siRNA对小鼠胚胎发育及凋亡的效应。方法:通过对体外培养小鼠早期胚胎激光打孔,完成Bax-siRNA(Bax-siRNA组)、Bak-siRNA(Bak-siRNA组)和Bax-Bak-siRNA(Bax-Bak-siRNA联合组)的转染,并以阴性siRNA和纯水为阴性对照组和空白对照组,对确定转染效果的胚胎观察形态变化、生长发育状况及囊胚形成率,应用Hoechst 33342和碘化丙啶的方法分析各转染组小鼠早期胚胎细胞凋亡和增殖程度以及凋亡颗粒率。结果:鼠胚激光打孔后可成功转染Bax-siRNA、Bak-siRNA和Bax-Bak-siRNA。Bak-siRNA组和Bax-Bak-siRNA联合组鼠胚的囊胚形成率显著高于阴性对照组(P<0.01),而且凋亡颗粒率显著低于阴性对照组(P<0.01)。Bax-siRNA组的囊胚形成率和凋亡颗粒率与阴性对照组比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:Bak-siRNA和Bax-Bak-siRNA可以改善小鼠胚胎的囊胚形成率,减少胚胎细胞的凋亡。 展开更多
关键词 Bax-sirna Bak-sirna Bax-Bak-sirna 小鼠胚胎 囊胚形成率
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siRNA在肺损伤治疗中的研究进展
8
作者 刘福莉 胡寒冰 申捷 《复旦学报(医学版)》 北大核心 2025年第6期883-891,共9页
肺部是人体与外界环境直接接触的关键器官,极易受到多种外源性因素刺激,从而引发一系列炎症反应,并导致不同程度的组织损伤。随着基因工程技术的发展,通过RNA干扰沉默特定靶基因成为治疗肺损伤的新策略。小干扰RNA(small interfering RN... 肺部是人体与外界环境直接接触的关键器官,极易受到多种外源性因素刺激,从而引发一系列炎症反应,并导致不同程度的组织损伤。随着基因工程技术的发展,通过RNA干扰沉默特定靶基因成为治疗肺损伤的新策略。小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)是RNA干扰技术的重要部分,可通过碱基互补配对的方式与靶基因结合以抑制其表达,进而产生相应的调控作用。因特异性靶向、低生物毒性等特点,siRNA正逐渐成为治疗肺损伤等肺部疾病的理想工具。本文综述了siRNA的作用机制及其在肺损伤治疗中的应用进展与研究现状。 展开更多
关键词 肺损伤 小干扰RNA(sirna) 治疗 基因表达调控
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体外靶向筛选小鼠精子特异性PRSS37基因最适siRNA
9
作者 高斯 赵萍 +3 位作者 刘晓雅 方桂杰 任红艳 毕延震 《生物技术》 2025年第1期20-24,共5页
[目的]细胞水平靶向筛选出小鼠精子特异性PRSS37基因的最适siRNA序列。[方法]构建PRSS37过表达载体pcDNA3.1-Kozak-3×Flag-PRSS37,并将其转染至GC-2细胞,通过Western Blot检测PRSS37的异位表达。基于PRSS37序列设计并合成3对siRNA... [目的]细胞水平靶向筛选出小鼠精子特异性PRSS37基因的最适siRNA序列。[方法]构建PRSS37过表达载体pcDNA3.1-Kozak-3×Flag-PRSS37,并将其转染至GC-2细胞,通过Western Blot检测PRSS37的异位表达。基于PRSS37序列设计并合成3对siRNA序列,将PRSS37过表达载体和siRNA共转染于GC-2细胞,实时荧光定量PCR检测siRNA对PRSS37干扰效率,筛选最有效的siRNA。[结果]PRSS37过表达载体在GC-2细胞中成功表达,与对照组相比,实验组中PRSS37蛋白表达显著升高;设计合成的3对siRNA均能有效干扰PRSS37的表达,与未干扰组相比差异显著(P<0.05),其中siRNA-1干扰效率最高,干扰效率约为63%。[结论]成功实现了PRSS37在GC-2细胞中的异位表达,并在细胞水平筛选出小鼠PRSS37最适siRNA序列。 展开更多
关键词 丝氨酸蛋白酶37 表达载体 异位表达 sirna 共转染 干扰效率
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靶向MyD88基因siRNA的筛选及其对狂犬病病毒感染的影响初探
10
作者 蔡宗伶 栗朵朵 +2 位作者 谭深根 李晓宁 罗廷荣 《广西畜牧兽医》 2025年第1期1-4,共4页
为探究MyD88在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)感染中的作用,本实验针对MyD88的mRNA靶序列设计并合成3对不同的siRNA序列,利用脂质体瞬时转染BV2细胞,通过实时荧光定量PCR及Western blot检测siRNA对BV2细胞中MyD88的干扰效率。结果显示,... 为探究MyD88在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)感染中的作用,本实验针对MyD88的mRNA靶序列设计并合成3对不同的siRNA序列,利用脂质体瞬时转染BV2细胞,通过实时荧光定量PCR及Western blot检测siRNA对BV2细胞中MyD88的干扰效率。结果显示,转染24 h后,各实验组中MyD88 mRNA表达量均显著低于阴性对照组,其中siRNA-M174的效果最佳、siRNA-M587次之;将200 nM siRNA-M174、siRNA-M587转染BV2细胞24 h后,经计算,干扰效率分别为75.35%和71%,两者共转染后,干扰效率为86.5%。结果表明,本实验成功筛选出靶向MyD88基因的有效干扰序列。脂质体瞬时转染筛选出的2对siRNA于BV2细胞,RABV接种BV2细胞,通过实时荧光定量PCR及Western blot检测。接毒后转染24 h,实验组MyD88基因的mRNA表达量低于阴性对照组,MyD88蛋白及RABV的N蛋白表达量下降。本实验结果证实了MyD88基因被特异性siRNA干扰后,也影响RABV的蛋白合成,为后续MyD88与狂犬病病毒的互作研究提供实验依据。 展开更多
关键词 MYD88 sirna RNAI 狂犬病病毒
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纳米药物递送siRNA沉默Sox2对肝癌细胞增殖与凋亡的影响
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作者 赵俊杰 任明芬 《工业微生物》 2025年第6期238-241,共4页
文章探讨纳米药物递送小干扰RNA(siRNA)沉默转录因子Sox2(SRY-box transcription factor 2)对肝癌细胞的影响,评估纳米胶束的细胞内吞情况及生物安全性,检测肝癌细胞增殖率、凋亡率和细胞活性。纳米粒子在促进肿瘤细胞内吞方面具有显著... 文章探讨纳米药物递送小干扰RNA(siRNA)沉默转录因子Sox2(SRY-box transcription factor 2)对肝癌细胞的影响,评估纳米胶束的细胞内吞情况及生物安全性,检测肝癌细胞增殖率、凋亡率和细胞活性。纳米粒子在促进肿瘤细胞内吞方面具有显著优势,通过纳米粒子递送si Sox2能够有效抑制HepG2细胞增殖,显著增强其对HepG2肿瘤细胞的杀伤能力,进而有效诱导肿瘤细胞凋亡。纳米药物递送siRNA,能有效抑制Sox2基因表达,阻碍细胞增殖并诱导细胞凋亡。 展开更多
关键词 纳米药物 sirna SOX2 增殖 凋亡
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小鼠精子特异性ADAM3基因靶向siRNA的筛选研究
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作者 高斯 赵萍 +1 位作者 刘晓雅 方桂杰 《湖北工业大学学报》 2025年第5期74-78,共5页
为在细胞水平靶向筛选出小鼠精子特异性ADAM3基因的最适siRNA序列,构建ADAM3过表达载体,将其转染至GC-2细胞后,通过Western Blot检测ADAM3蛋白表达情况;同时基于ADAM3基因序列设计并合成3对siRNA序列,将ADAM3过表达载体与各siRNA共转染... 为在细胞水平靶向筛选出小鼠精子特异性ADAM3基因的最适siRNA序列,构建ADAM3过表达载体,将其转染至GC-2细胞后,通过Western Blot检测ADAM3蛋白表达情况;同时基于ADAM3基因序列设计并合成3对siRNA序列,将ADAM3过表达载体与各siRNA共转染至GC-2细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测siRNA干扰效率,筛选干扰效率最高的siRNA序列。结果显示,ADAM3过表达载体在GC-2细胞中成功表达,ADAM3蛋白表达显著升高;设计合成的3对siRNA均能有效干扰ADAM3基因的表达,与未干扰组相比差异具有统计学意义(P<0.05),其中ADAM3-siRNA-2干扰效率最高,约76.33%。实验成功实现了ADAM3基因在GC-2细胞中的异位表达,并在细胞水平筛选出干扰小鼠ADAM3基因的最适siRNA序列,为后续研究奠定了基础。 展开更多
关键词 解聚素与金属蛋白酶3 基因表达 sirna GC-2细胞 干扰效率
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基于金属有机框架的siRNA递送系统研究进展
13
作者 罗子江 赵一涵 丁娅 《药学进展》 2025年第3期198-207,共10页
小干扰RNA(si RNA)介导的RNA干扰(RNAi)技术已被广泛研究,但其临床应用仍面临挑战,包括药代动力学性质不佳、易发生酶降解、细胞摄取率低和非特异性基因沉默等问题。开发具有高沉默效率、良好生物相容性且易于功能化的si RNA递送载体,... 小干扰RNA(si RNA)介导的RNA干扰(RNAi)技术已被广泛研究,但其临床应用仍面临挑战,包括药代动力学性质不佳、易发生酶降解、细胞摄取率低和非特异性基因沉默等问题。开发具有高沉默效率、良好生物相容性且易于功能化的si RNA递送载体,对于推动si RNA疗法的临床转化至关重要。综述了一种极具潜力的非病毒载体——金属有机框架(MOF)在si RNA递送方面的最新研究进展,旨在为高效si RNA递送平台的设计提供思路与参考。 展开更多
关键词 RNAI技术 sirna递送 金属有机框架 肿瘤精准治疗 炎症疾病
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瞬时纳米沉淀法制备壳聚糖/三聚磷酸钠纳米粒子及其siRNA递送性能评价
14
作者 冯晶烨 黄文武 +2 位作者 詹青怡 燕云峰 吴澄帆 《高分子通报》 北大核心 2025年第3期460-471,共12页
RNA干扰在癌症和其他多种疾病的治疗中具有广阔的应用前景,亟需发展高效、安全的递送手段来实现RNA干扰技术的临床应用。本研究使用瞬时纳米沉淀技术,制备系列稳定的、基于壳聚糖(CS)和三聚磷酸钠(TPP)的纳米粒子,系统研究了CS浓度、分... RNA干扰在癌症和其他多种疾病的治疗中具有广阔的应用前景,亟需发展高效、安全的递送手段来实现RNA干扰技术的临床应用。本研究使用瞬时纳米沉淀技术,制备系列稳定的、基于壳聚糖(CS)和三聚磷酸钠(TPP)的纳米粒子,系统研究了CS浓度、分子量及其与TPP的质量比对CS/TPP纳米粒子的物理化学性质的影响,并初步评价了纳米粒子的基因沉默效率。结果显示,CS浓度为0.3~0.6 g/L和CS/TPP质比为1/1~4/1时,可以形成较为稳定的复合物。其中,CS浓度为0.5g/L,质量比为2/1时可得到直径为70~100 nm的稳定纳米粒子。稳定的CS/TPP纳米粒子对siRNA的负载效率为75%~90%,细胞毒性低。在2.5 ng siRNA/μL浓度下,负载siRNA的CS/TPP纳米粒子可以引起约30%的目的基因的沉默。相关结果对制备稳定的、小尺寸CS纳米粒子及其siRNA递送研究具有一定的借鉴意义。 展开更多
关键词 sirna递送 瞬时纳米沉淀法 壳聚糖 纳米粒子
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siRNA的定量方法及其在药代动力学检测中的应用 被引量:1
15
作者 侯召丽 王艳玲 +3 位作者 王雅鹃 高玉青 戴伟业 李春雷 《中国生化药物杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期491-494,共4页
siRNA作为新型药物已逐渐成为药物开发的新热点。了解siRNA在体内的吸收、分布、代谢等过程的动态变化有助于对siRNA药物进行临床前的药理、毒理及药效评价。siRNA较短,只有20~25个碱基,对其进行检测和准确定量比较困难。本文通过比较... siRNA作为新型药物已逐渐成为药物开发的新热点。了解siRNA在体内的吸收、分布、代谢等过程的动态变化有助于对siRNA药物进行临床前的药理、毒理及药效评价。siRNA较短,只有20~25个碱基,对其进行检测和准确定量比较困难。本文通过比较目前已报道的多种针对小核苷酸片段的定量方法,试图选择其中较为快捷、简单和准确的方法,并分析其在siRNA药代动力学定量中应用的可行性。 展开更多
关键词 sirna 药代动力学 sirna定量 sirna检测
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siRNA的体内递送 被引量:3
16
作者 师明磊 赵志虎 +1 位作者 王洋 陈惠鹏 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期683-688,共6页
siRNA是一种由siRNA介导的转录后基因沉默。自利用RNAi沉默目的基因获得成功以来,体内应用RNAi的研究受到高度重视。由于siRNA本身的不稳定性以及体内的复杂环境,siRNA递送的安全性与有效性成为目前关注的重点。文章就目前报道的siRNA... siRNA是一种由siRNA介导的转录后基因沉默。自利用RNAi沉默目的基因获得成功以来,体内应用RNAi的研究受到高度重视。由于siRNA本身的不稳定性以及体内的复杂环境,siRNA递送的安全性与有效性成为目前关注的重点。文章就目前报道的siRNA体内递送方式进行了综述。 展开更多
关键词 RNAI sirna sirna递送
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发夹式siRNA对hDNMT1基因表达的抑制作用 被引量:4
17
作者 郭颖 黄庆 府伟灵 《重庆医学》 CAS CSCD 2004年第8期1141-1142,共2页
目的 研究发夹式siRNA对hDNMT1基因表达的抑制作用。方法 根据hDNMT1全长cDNA序列设计和合成与其互补的发夹式siRNA序列 ,并以发夹式siRNA序列为模板经体外合成siRNA表达盒 (SECs)。SECs通过脂质体载体转染结直肠癌细胞株HCT1 1 6后 ... 目的 研究发夹式siRNA对hDNMT1基因表达的抑制作用。方法 根据hDNMT1全长cDNA序列设计和合成与其互补的发夹式siRNA序列 ,并以发夹式siRNA序列为模板经体外合成siRNA表达盒 (SECs)。SECs通过脂质体载体转染结直肠癌细胞株HCT1 1 6后 ,经半定量RT PCR法检测hDNMT1mRNA的表达水平。结果 发夹式siRNA可以特异性地抑制hDN MT1基因。结论 通过SECs产生的发夹式siRNAs可以特异性抑制hDNMT1基因的表达 ;本研究为通过构建表达发夹式siR 展开更多
关键词 hDNMT1基因 发夹式sirna sirna表达盒 RNA干扰
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乙型肝炎病毒中国流行株B2、C2基因型模型的人工构建与siRNA化合物评估
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作者 邹珂珂 张静 +2 位作者 臧超 明新 黄浩喜 《西部医学》 2025年第2期212-219,共8页
目的 为评估对中国乙型肝炎病毒(HBV)感染人群具有潜在疗效的siRNA化合物,构建一种针对中国流行株代表性HBV的细胞模型。方法 选择中国大范围流行的1 416条B2 HBV基因组序列和1 636条C2 HBV基因组序列整合构建中国HBV参考基因组。在此... 目的 为评估对中国乙型肝炎病毒(HBV)感染人群具有潜在疗效的siRNA化合物,构建一种针对中国流行株代表性HBV的细胞模型。方法 选择中国大范围流行的1 416条B2 HBV基因组序列和1 636条C2 HBV基因组序列整合构建中国HBV参考基因组。在此基础上构建中国参考HBV体外细胞评价模型,通过考察细胞中HBV DNA和细胞上清液中HBsAg、HBeAg的表达用来评估系统是否构建成功。通过该细胞模型评估得到最优siRNA化合物,进一步在HBV转基因小鼠体内中进行评估。结果 中国HBV参考基因组构建的两个细胞模型的HBV DNA和乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)均能正常表达,B2型表达值分别为50 585 copies/μL、0.55 PEIU/mL、55.88 IU/mL,C2型表达值分别为45 302 copies/μL、35.31 PEIU/mL、56.9 IU/mL。通过该体外细胞模型评估得到的化合物BPR2030以3 mg/kg单次皮下注射到HBV转基因小鼠体内,小鼠血清中HBV DNA、HBsAg、HBeAg的最大抑制活性相比自身基线分别下调1.82(log10 IU/mL)、2.55(log10 IU/mL)、0.95(log10 PEIU/mL),给药后7~35 d对HBV的抑制活性均显著优于阳性参照物(P<0.05)。结论 成功构建了中国HBV流行株代表基因型表达的细胞模型,基于该细胞模型评估后得到的siRNA化合物在转基因小鼠体内表现出对HBV病毒高效的抑制活性,表明该细胞模型稳定可靠,有利于有针对性地开发更适合中国HBV患者的基因类药物。 展开更多
关键词 sirna 中国HBV参考基因组 细胞模型 B2 C2 转基因小鼠 HBV DNA HBsAg HBEAG
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siRNA脂质纳米输送载体的研究进展 被引量:2
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作者 董文娟 周银键 梁伟 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第5期396-401,共6页
siRNA能高效且特异地阻断内源性同源基因的表达即RNA干涉(RNAi).RNAi在临床中的应用需要开发安全有效的输送系统,脂质纳米输送载体是一种具有发展潜力的siRNA输送系统.siRNA-脂质复合物的形成主要通过静电相互作用,静电作用必须足够强... siRNA能高效且特异地阻断内源性同源基因的表达即RNA干涉(RNAi).RNAi在临床中的应用需要开发安全有效的输送系统,脂质纳米输送载体是一种具有发展潜力的siRNA输送系统.siRNA-脂质复合物的形成主要通过静电相互作用,静电作用必须足够强以至于载体在运输过程中不释放siRNA,而载体到达治疗部位时,解聚释放出siRNA.载体的粒径应小于100 nm,以利于细胞的摄取和透过特定部位的血管开窗.为了减少网状内皮系统(RES)的摄取和延长载体的循环时间,载体的表面由聚乙二醇修饰.本文主要综述了构建siRNA输送载体的基本要求. 展开更多
关键词 sirna 脂质 载体 sirna输送载体
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硫酸多黏菌素E提高脂质纳米粒的siRNA递送效应用于抗肿瘤研究
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作者 孙雪如 钱磊 吴佳杨 《中南药学》 2025年第3期616-621,共6页
目的构建一种新的一体化脂质纳米粒(lipid nanoparticles,LNPs)递送系统,通过增强siRNA溶酶体逃逸,实现高效安全的siRNA递送效应,增加血管内皮生长因子(VEGF)-siRNA的抗肿瘤效应。方法采用阳离子脂质DOTAP包封硫酸多黏菌素E(colistin,C... 目的构建一种新的一体化脂质纳米粒(lipid nanoparticles,LNPs)递送系统,通过增强siRNA溶酶体逃逸,实现高效安全的siRNA递送效应,增加血管内皮生长因子(VEGF)-siRNA的抗肿瘤效应。方法采用阳离子脂质DOTAP包封硫酸多黏菌素E(colistin,COL)和siRNA得到LNPs/COL/siRNA脂质纳米粒,纳米粒度电位仪分析其粒径和Zeta电位;多功能酶标仪和高效液相色谱分别测定siRNA和COL的包封率(EE);流式细胞仪检测细胞摄入和凋亡;CCK-8法评价其安全性和细胞增殖抑制作用;共聚焦显微镜考察其对siRNA溶酶体逃逸效应,聚合酶链式反应(PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)考察其对基因和蛋白层面表达的影响。结果构建的LNPs/COL/siRNA脂质纳米粒粒径为101.8 nm,Zeta电位为7.88 mV,PDI=0.21,siRNA包封率约75%,在150 nmol·L^(-1)以下,细胞存活率为82%以上;与Free-siRNA组比较,细胞摄取约提高3倍;与LNPs/siRNA组比较,明显可以观察到具有很强的溶酶体逃逸效率,并且使VEGF-mRNA基因沉默效应提高1.3倍,VEGF蛋白表达降低;体外抗肿瘤活性结果表明,其抑制增殖作用大大增强,并且可以加大对HepG2细胞的凋亡。结论构建一体化LNPs纳米递送系统可以提升LNPs的溶酶体逃逸,增强siRNA递送效应,抑制肿瘤发展。 展开更多
关键词 脂质纳米粒 sirna递送 溶酶体逃逸 抗肿瘤
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