农杆菌介导rolC基因转化烟草植株的研究 被引量：14

1

作者 章镇 孙爱君 +1 位作者 房经贵 盛炳成 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期25-29,共5页

通过根癌农杆菌介导手段 ,将来自发根农杆菌的rolC基因转化到烟草 (Nicotianatabacum )植株的基因组 ,并借助GUS组织化学法 ,PCR扩增法和Southern杂交进行了鉴定证实。rolC基因改变转基因烟草植株某些性状的特点 ,如植株高度变矮、花冠... 通过根癌农杆菌介导手段 ,将来自发根农杆菌的rolC基因转化到烟草 (Nicotianatabacum )植株的基因组 ,并借助GUS组织化学法 ,PCR扩增法和Southern杂交进行了鉴定证实。rolC基因改变转基因烟草植株某些性状的特点 ,如植株高度变矮、花冠变小、雄蕊变短等 。 展开更多

关键词 烟草 rolc基因 基因转化 农杆菌介导 转基因植株

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超声波辅助农杆菌介导八棱海棠转rolC基因 被引量：8

2

作者 丛郁 王三红 +2 位作者 王红霞 姚泉洪 章镇 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期659-663,共5页

应用超声波辅助农杆菌介导法,对八棱海棠进行rolC基因转化,以期提高转化效率并获得转基因植株。利用gus基因瞬间表达的方法研究了超声波处理时间、处理时期和农杆菌悬浮液中乙酰丁香酮(As)浓度对rolC基因转化率的影响。结果表明,叶盘在D... 应用超声波辅助农杆菌介导法,对八棱海棠进行rolC基因转化,以期提高转化效率并获得转基因植株。利用gus基因瞬间表达的方法研究了超声波处理时间、处理时期和农杆菌悬浮液中乙酰丁香酮(As)浓度对rolC基因转化率的影响。结果表明,叶盘在D600nm为0．6且含有75 mg／L As的农杆菌悬浮液中侵染2 min后,用功率为100 W的超声波处理30 s,再浸泡2．5 min,然后放到再生培养基上共培养3 d,能获得最佳的gus基因瞬间表达率。最佳处理条件下转化683枚八棱海棠叶片,共得到138个抗性愈伤组织和15株抗性苗,转化率为2．2％。GUS染色、PCR及Southern blotting检测结果显示,有12个八棱海棠株系的基因组中整合了完整的外源rolC基因。 展开更多

关键词 八棱海棠 超声波辅助农杆菌转化 rolc基因

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rolC基因对转Ri质粒三倍体毛白杨的遗传转化 被引量：6

3

作者 苏彦苹 刘兴菊 +2 位作者 周怀军 杨敏生 梁海永 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2007年第5期57-61,共5页

通过对Ri质粒转化三倍体毛白杨植株转入rolC基因,使外源基因rolC在植物体内形成多拷贝,从而对rolC基因表达产生干扰,而减少Ri质粒转化三倍体毛白杨造成的不良形态变异。本研究建立了转Ri质粒三倍体毛白杨的叶片再生体系,筛选出叶片再生... 通过对Ri质粒转化三倍体毛白杨植株转入rolC基因,使外源基因rolC在植物体内形成多拷贝,从而对rolC基因表达产生干扰,而减少Ri质粒转化三倍体毛白杨造成的不良形态变异。本研究建立了转Ri质粒三倍体毛白杨的叶片再生体系,筛选出叶片再生的最佳培养基为:MS+6-BA 1.0 mg.L-1+NAA 0.05 mg.L-1;确定了卡那霉素(Km)和抑菌抗生素头孢噻肟钠(CTX)的临界浓度为30 mg.L-1和400 mg.L-1;采用农杆菌介导的叶盘法,将rolC基因转入经发根农杆菌Ri质粒30148转化的三倍体毛白杨植株中,获得了18个Km抗性系,对其中14个株系进行了PCR检测,表明rolC基因已整合进再生植株中。与转Ri质粒三倍体毛白杨和未转基因三倍体毛白杨相比,部分转Ri质粒三倍体毛白杨在转rolC基因后发生了形态特征变异,比如部分无性系的叶片由原来的皱缩变为平展,部分无性系的茎由原来的直立变为弯曲,侧枝增多,节间距明显缩短。 展开更多

关键词 rolc基因 转化 形态变异

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转rolC基因八棱海棠组培苗生物学特性的研究 被引量：3

4

作者 丛郁 孙爱君 +1 位作者 姚泉洪 章镇 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期2563-2569,共7页

目的通过研究转rolC基因八棱海棠不同株系的转基因拷贝数,在转录水平上的表达丰度,以及转基因组培苗的生物学特性,为进一步深入阐明rolC基因在八棱海棠中的表达机制和培育优良的苹果砧木奠定理论基础。方法以通过gus染色和PCR检测的3个... 目的通过研究转rolC基因八棱海棠不同株系的转基因拷贝数,在转录水平上的表达丰度,以及转基因组培苗的生物学特性,为进一步深入阐明rolC基因在八棱海棠中的表达机制和培育优良的苹果砧木奠定理论基础。方法以通过gus染色和PCR检测的3个转rolC基因八棱海棠株系组培苗为试材。Southern杂交鉴定rolC基因整合拷贝数。Northern杂交鉴定rolC基因在转录水平上的表达丰度。调查转基因植株组培苗在含有不同种类和浓度的植物生长调节剂的培养基上茎段增殖、叶片再生、生根能力等生物学特性;将生根后的组培苗进行炼苗,移入温室4个月后,研究株高、节间数、节间长度、叶面积等生物学特性。结果Southern杂交结果表明,rolC基因分别整合进入3个八棱海棠株系基因组,其中株系20a和33a分别获得了1个rolC基因拷贝,株系20b获得了2个rolC基因拷贝。Northern杂交结果表明,3个转基因株系中的rolC基因均在转录水平上得到了表达,且该基因在单拷贝株系的表达丰度高于双拷贝株系。转基因组培苗生物学特性研究结果表明:(1)3个转rolC基因八棱海棠株系茎段增殖系数、叶片再生率、生根所需外源激素浓度均显著低于对照植株,单拷贝株系的以上指标亦显著低于双拷贝株系。(2)3个转基因八棱海棠株系组培苗平均生根数显著高于转基因株系,双拷贝株系显著低于单拷贝株系;根长情况正好相反;对照植株根粗和转基因株系根粗之间均无显著差异。(3)3个转基因八棱海棠株系的株高、节间长度、节间数、叶面积均显著小于对照植株。其中单拷贝株系显著小于双拷贝株系。结论rolC基因整合进入3个八棱海棠转基因株系基因组,并分别在转录水平上得到表达。外源rolC基因的表达导致转基因植株体内内源激素含量和植株形态学的改变,且rolC基因的整合拷贝数对它的表达有一定的影响。 展开更多

关键词 八棱海棠(Malus ROBUSTA Rehd.) rolc基因 拷贝数 组培苗 生物学特性

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RolC基因的克隆及细胞分裂素在烟草中的过量表达 被引量：2

5

作者 贾燕涛 麻密 +2 位作者 屈贵平 潜忠兴 林忠平 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 1998年第3期211-215,共5页

用ＰＣＲ方法从发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）１６０１质粒中扩增出ｒｏｌＣ基因，并构建ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动下的ｒｏｌＣ基因表达质粒ｐＣａＲ。以农杆菌介导的叶盘法，分别对野生型烟草（Ｎｉ... 用ＰＣＲ方法从发根农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）１６０１质粒中扩增出ｒｏｌＣ基因，并构建ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动下的ｒｏｌＣ基因表达质粒ｐＣａＲ。以农杆菌介导的叶盘法，分别对野生型烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．ｃｖ．Ｗ３８）和已经异戊烯基转移酶基因（ｉｐｔ）转化的烟草进行了转化。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和ＲＮＡＤｏｔｂｌｏｔ分析表明，ｒｏｌＣ基因已转入烟草植株，并且可以正常表达。观察发现，经ｐＣａＲ转化的烟草，其形态特征与细胞分裂素过量表达时植株表现出的特征一致。用ＥＬＩＳＡ方法测定转基因烟草植株中激素含量，结果显示，单独转ｒｏｌＣ基因烟草和转ｒｏｌＣ和ｉｐｔ两个基因的烟草，细胞分裂素水平有不同程度的提高。转基因烟草表现多芽、节间距缩短等特征。 展开更多

关键词 rolc 细胞分裂素 烟草

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发根农杆菌rolC基因的克隆及序列分析 被引量：1

6

作者 刘兴菊 梁海永 +1 位作者 杨敏生 周怀军 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2007年第2期72-75,共4页

以发根农杆菌30148为材料,设计了rolC基因的特异性引物,应用PCR技术,扩增出了正确序列的rolC基因585 bp片段,并利用pUCm-T载体对此片段进行了克隆,并进行了序列分析。所克隆rolC基因与已发表的序列相比较,核苷酸序列的同源性达到100%,... 以发根农杆菌30148为材料,设计了rolC基因的特异性引物,应用PCR技术,扩增出了正确序列的rolC基因585 bp片段,并利用pUCm-T载体对此片段进行了克隆,并进行了序列分析。所克隆rolC基因与已发表的序列相比较,核苷酸序列的同源性达到100%,但另一个克隆中部分碱基发生了改变,同源性达到99%。 展开更多

关键词 RI质粒 rolc基因 克隆

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Ri质粒的快速提取及rolC基因的克隆

7

作者 李昌禹 马海琴 +1 位作者 赵寿经 臧埔 《特产研究》 2003年第2期2-4,8,共4页

介绍Ri质粒的快速提取方法,提取的质粒可用于目的基因的扩增,应用rolC基因的特异性引物,扩增出了正确序列的rolC基因0.87kb片段,并利用pGEM—T载体对此片段进行了克隆。

关键词 RI质粒 快速提取 rolc基因 基因克隆 pGEM-T载体

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rolC基因对颠茄托品烷生物碱合成的影响 被引量：4

8

作者 路星星 谭艾娟 +5 位作者 周浩 敖雯雯 吕世明 满建民 张明生 强玮 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期533-540,共8页

发根农杆菌浸染植物后产生的发根可合成高水平次生代谢产物,这种代谢增强作用是由rol基因诱导激发的,因此可利用rol基因提高颠茄中托品烷生物碱(tropane alkaloids,TAs)的合成能力。本研究以颠茄为实验材料,将发根农杆菌pRiA4质粒上的r... 发根农杆菌浸染植物后产生的发根可合成高水平次生代谢产物,这种代谢增强作用是由rol基因诱导激发的,因此可利用rol基因提高颠茄中托品烷生物碱(tropane alkaloids,TAs)的合成能力。本研究以颠茄为实验材料,将发根农杆菌pRiA4质粒上的rolC基因通过CaMV35S启动子驱动,导入颠茄中超表达。分析转基因颠茄的表型、TAs含量以及TAs合成途径关键酶基因转录表达水平表化。结果表明,转基因颠茄表现出根系发达、雄性不育、雄蕊柱长高于雌蕊、提前开花、节间缩短、花小且多、腋芽和侧芽增多、顶端优势下降和叶片狭长等表型;转基因颠茄的TAs含量均显著高于对照,莨菪碱、山莨菪碱和东莨菪碱含量最高可达对照的2.58、3.59和15.77倍;TAs合成途径中的3个关键酶基因腐胺N-甲基转移酶(PMT)、托品酮还原酶I(TRⅠ)和莨菪碱6-β-羟化酶(H6H)的表达量与对照相比表达上调。以上研究表明rolC基因通过上调颠茄TAs合成关键酶基因的表达提高了颠茄中TAs的合成能力,为利用rolC基因进行高TAs含量的颠茄分子育种奠定了基础。 展开更多

关键词 颠茄 rolc基因 莨菪碱 东莨菪碱 山莨菪碱

原文传递

诱导人参发根的rolC基因植物表达载体构建及其在人参中的表达 被引量：5

9

作者 赵寿经 李昌禹 +3 位作者 骆晓佩 钱延春 战文宗 孙琳 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 2004年第9期58-62,共5页

根据Slightom等RiA4TL DNA序列分析结果 ,设计了一对引物 ,以Ri 质粒DNA为模板 ,利用PCR方法对rolC基因进行了扩增。利用pGEM T载体对rolC基因进行了克隆和测序。结果 ,克隆的DNA片段序列与报道的ORF1 2阅读框内的rolC序列一致。将pGEM ... 根据Slightom等RiA4TL DNA序列分析结果 ,设计了一对引物 ,以Ri 质粒DNA为模板 ,利用PCR方法对rolC基因进行了扩增。利用pGEM T载体对rolC基因进行了克隆和测序。结果 ,克隆的DNA片段序列与报道的ORF1 2阅读框内的rolC序列一致。将pGEM T rolC用限制性内切酶SacI酶切 ,与经SmaI酶切CIAP去磷酸化的pUC1 9质粒重组 ,经蓝白斑筛选得到正向重组的pUC1 9 rolC。再用Xbal SacI双酶切pUC1 9 rolC与pBI1 2 1 ,将rolC基因定向克隆到具有CaMV35S启动子的pBI1 2 1表达质粒上 ,构建成植物表达载体pBI rolC。用pBI rolC转化农杆菌LBA440 4构建成的LBA440 4 (pBI rolC)工程菌转化人参子叶 ,获得发根的表达。经PCR扩增分子检测 ,证明rolC基因确已整合到人参发根基因组中。经对转化的人参发根中单体皂苷含量测定 ,发现发根中含有所检测的 7种人参单体皂苷 ,总皂苷含量达 1 8 5 5mg g。 展开更多

关键词 C基因 人参 发根 UC 皂苷 表达 栽体 酶切 子叶 粒重

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Ri质粒的快速提取及rolC基因的克隆 被引量：4

10

作者 李昌禹 马海琴 +1 位作者 赵寿经 臧埔 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期263-265,共3页

介绍了1种Ri质粒的快速提取方法,提取的质粒可用于目的基因的扩增,应用rolC基因的特异性引物,扩增出了正确序列的rolC基因0 87kb片段,并利用pGEM-T载体对此片段进行了克隆。

关键词 RI质粒 快速提取方法 roIC基因 基因克隆

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rolc基因对开花的影响 被引量：1

11

作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第3期11-11,共1页

日本筑波大学生物科学系教授原田宏、副教授镰田博、栗冈百合子发现Ri质粒的rolc基因与多年生草本植物的开花提早、花数增加和开花期延长特性有关。这对观赏花卉的培育可能有用。7月21日在名古屋召开的植物组织培养学会上报告了这个发... 日本筑波大学生物科学系教授原田宏、副教授镰田博、栗冈百合子发现Ri质粒的rolc基因与多年生草本植物的开花提早、花数增加和开花期延长特性有关。这对观赏花卉的培育可能有用。7月21日在名古屋召开的植物组织培养学会上报告了这个发现。此发现也许能促进“试管苗”的发展。镰田通过强化rolc的活性,发现其对植物的影响,在花椰菜花叶病毒(CaMV)的35S启动子的下端连接这种基因片段的cDNA,构建新质粒。以根癌土壤杆菌为载体导入菊苣和颠茄。通过DNA印迹杂交法确认了基因的导入。 展开更多

关键词 植物组织培养 根癌土壤杆菌 CaMV 日本筑波大学 花椰菜花叶病毒 基因片段 生物科学 rolc 启动子 百合子

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超声波直接转导外源基因转化八棱海棠的技术研究 被引量：3

12

作者 丛郁 渠慎春 +2 位作者 乔玉山 姚泉洪 章镇 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期42-46,共5页

应用超声波直接转导法,对八棱海棠进行rolC基因转化,同时,利用gus基因瞬间表达的方法研究了超声波处理时间、处理功率和转化缓冲液中二甲基亚砜(DMSO)对rolC基因转化率的影响。结果表明:当DMSO为5%(体积分数)时,用80 W功率处理20 min,... 应用超声波直接转导法,对八棱海棠进行rolC基因转化,同时,利用gus基因瞬间表达的方法研究了超声波处理时间、处理功率和转化缓冲液中二甲基亚砜(DMSO)对rolC基因转化率的影响。结果表明:当DMSO为5%(体积分数)时,用80 W功率处理20 min,能够获得最佳的转化效果。在超声波最佳处理条件下转化486个八棱海棠叶片,共得到237个抗性愈伤组织和9株抗性苗,转化率为1.85%。GUS染色、PCR及Southern blotting检测结果显示,有8个八棱海棠株系的基因组中整合了完整的外源rolC基因。 展开更多

关键词 八棱海棠 超声波转化 rolc基因

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人参发根的诱导及其分子检测 被引量：3

13

作者 郜玉钢 孙卓 +4 位作者 臧埔 王南 赵春琳 李璠瑛 张连学 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2010年第17期8970-8972,共3页

[目的]探讨发根农杆菌诱导人参发根分子机理。[方法]用发根农杆菌A4菌株感染3年生人参根外植体,在无激素的MS培养基上诱导人参发根,并对其进行分子检测,考察rolB和rolC基因是否转化并整合到人参基因组中。[结果]成功获得了人参发根,该... [目的]探讨发根农杆菌诱导人参发根分子机理。[方法]用发根农杆菌A4菌株感染3年生人参根外植体,在无激素的MS培养基上诱导人参发根,并对其进行分子检测,考察rolB和rolC基因是否转化并整合到人参基因组中。[结果]成功获得了人参发根,该发根在固体和液体培养基上得到了很好的继代;从人参发根DNA中检测到rolB和rolC基因,与已发表发根农杆菌质粒相应的核苷酸序列的同源性达到99%。[结论]发根农杆菌质粒的rolB和rolC基因已转化并整合到人参基因组中,是人参发根产生的分子机理。 展开更多

关键词 人参 发根 诱导 ROLB基因 rolc基因

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影响人参发根中皂甙含量基因的定位及其克隆 被引量：4

14

作者 赵寿经 李昌禹 +2 位作者 臧埔 马海琴 杨振堂 《特产研究》 2001年第4期1-6,共6页

通过发根农杆菌与人参外植体共培养 ,在人参根外植体上用直接接菌方法 ,诱导出人参发根。Southern点杂交证明 :本研究获得的人参发根确已被Ri质粒的T DNA所转化 ,并被整合到人参发根DNA上。根据Slightom等RiA4TL DNA序列分析结果 ,利用... 通过发根农杆菌与人参外植体共培养 ,在人参根外植体上用直接接菌方法 ,诱导出人参发根。Southern点杂交证明 :本研究获得的人参发根确已被Ri质粒的T DNA所转化 ,并被整合到人参发根DNA上。根据Slightom等RiA4TL DNA序列分析结果 ,利用PCR方法从人参发根中扩增并克隆了影响人参皂甙合成基因rolC。 展开更多

关键词 人参皂甙 T-DNA SOUTHERN杂交 roIC基因克隆 发根农杆菌 人参 rolc基因定位

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发根农杆菌转化新疆紫草的PCR检测及序列分析

15

作者 芦韦华 陈永芳 +3 位作者 代宁波 李翠芳 郝爱花 王芳 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期63-66,共4页

以发根农杆菌MSU440菌株转化的新疆紫草毛状根为材料,设计了rolC基因的特异性引物,应用PCR技术,扩增得到了600 bp左右的特异性核苷酸片段。进行双向测序分析,扩增的基因序列全长626 bp,含rolC基因的编码区540 bp,编码180个氨基酸组成的... 以发根农杆菌MSU440菌株转化的新疆紫草毛状根为材料,设计了rolC基因的特异性引物,应用PCR技术,扩增得到了600 bp左右的特异性核苷酸片段。进行双向测序分析,扩增的基因序列全长626 bp,含rolC基因的编码区540 bp,编码180个氨基酸组成的蛋白。正向测序rolC基因与GENEBENK已发表的序列相比较,核苷酸序列的同源性达到100%,氨基酸同源性高达100%;反向测序中,同源性达到97%。证实并确认了新疆紫草毛状根的真实性,为进一步利用新疆紫草毛状根生产次生代谢产物研究奠定了物质基础。 展开更多

关键词 新疆紫草 发根农杆菌 rolc基因 序列分析

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农村妇女能力开发在发展贵州草地畜牧业标准化中的作用

16

作者 沈晓蓉 《贵州农业科学》 CAS 2006年第3期80-84,共5页

着眼于农业从传统方式向现代农业演变的历史性进程,采用实证分析方法,具体分析了贵州省农村妇女的普遍性别特点及其在草地畜牧业标准化中的重要作用,指出进一步加强对贵州农村妇女能力这一人力资源的开发,不但对发展草地畜牧业标准化本... 着眼于农业从传统方式向现代农业演变的历史性进程,采用实证分析方法,具体分析了贵州省农村妇女的普遍性别特点及其在草地畜牧业标准化中的重要作用,指出进一步加强对贵州农村妇女能力这一人力资源的开发,不但对发展草地畜牧业标准化本身,而且对于发挥农村妇女的巨大潜力,促进贫困山区的开发式脱贫,推动贵州省现代农业发展进程,都具有十分重要的意义。最后就如何加强农村妇女能力开发,以及要注重创新对这一特殊群体的培训方式等方面提出了建议。 展开更多

关键词 农村妇女 草地畜牧业 标准化 作用 贵州

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