双孢蘑菇原生质体制备条件的优化 被引量：12

1

作者 孙溪 郭成金 《天津师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2006年第4期32-35,共4页

采用L16(45)正交分析方法,对双孢蘑菇原生质体制备工艺进行了优化.试验结果表明,最佳制备条件是取菌龄7 d的液体菌丝体,以2.5%溶壁酶+7%蜗牛酶为组合,0.6 mol/L NaCl作为渗透压稳定剂,在30℃条件下,酶解3 h,原生质体产率为2.34×108... 采用L16(45)正交分析方法,对双孢蘑菇原生质体制备工艺进行了优化.试验结果表明,最佳制备条件是取菌龄7 d的液体菌丝体,以2.5%溶壁酶+7%蜗牛酶为组合,0.6 mol/L NaCl作为渗透压稳定剂,在30℃条件下,酶解3 h,原生质体产率为2.34×108个/mL.本研究可为双孢蘑菇原生质体的融合及转基因研究提供理论依据. 展开更多

关键词 双孢蘑菇 原生质体 正交分析法 产率

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一种快速高效的水稻原生质体制备和转化方法的建立 被引量：18

2

作者 段炼 钱君 +1 位作者 郭小雨 朱英 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期351-357,共7页

在模式植物拟南芥中,原生质体瞬时表达技术已被广泛地应用到功能基因组学的研究中,但水稻原生质体因其制备过程相对繁琐,转化效率偏低,尚未在基因功能研究中获得广泛应用。本研究在拟南芥原生质体制备和转化的基础之上,对水稻原生质体... 在模式植物拟南芥中,原生质体瞬时表达技术已被广泛地应用到功能基因组学的研究中,但水稻原生质体因其制备过程相对繁琐,转化效率偏低,尚未在基因功能研究中获得广泛应用。本研究在拟南芥原生质体制备和转化的基础之上,对水稻原生质体的制备和转化方法进行改良优化。以水稻幼茎为起始材料,采用纤维素酶R-10和果胶酶R-10,对水稻组织进行消化并利用蔗糖密度梯度自沉降的方法分离原生质体,获得了高纯度的原生质体。对质粒转化原生质体时的转化方法、转化时间及质粒浓度进行探索,在缩短原生质体分离时间的同时,大大提高了转化效率。用较少量的质粒DNA即可获得外源基因在原生质体内高效的表达,且转化效率可达70%。我们建立的这种快速有效的水稻原生质体制备和转化方法,可为水稻功能基因组学研究提供技术支持。 展开更多

关键词 水稻 原生质体 自沉降法

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不同灭活方法在原生质体融合选育米曲霉菌株中应用的研究 被引量：2

3

作者 唐洁 车振明 +1 位作者 李明元 罗海 《中国调味品》 CAS 北大核心 2010年第9期65-69,共5页

实验选取生长速度快的米曲霉菌株AS3.951和产酶活力高的米曲霉菌株CICC2339为对象菌,通过探讨紫外、微波、超声波-热三种不同的物理灭活方法进行米曲霉的原生质体融合,并比较不同方法灭活后进行原生质体融合所得米曲霉融合菌株的性状。... 实验选取生长速度快的米曲霉菌株AS3.951和产酶活力高的米曲霉菌株CICC2339为对象菌,通过探讨紫外、微波、超声波-热三种不同的物理灭活方法进行米曲霉的原生质体融合,并比较不同方法灭活后进行原生质体融合所得米曲霉融合菌株的性状。结果表明,AS3.951采用紫外灭活、CICC2339采用超声波-热灭活时其融合率最高为6.69%,以此方式筛选得到的融合菌株AC126、AC171产酶能力均高于产酶活力高的亲本菌株CICC2339,且遗传稳定。 展开更多

关键词 原生质体 灭活方法 米曲霉 研究

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烟草种间叶肉原生质体融合方法的研究 被引量：2

4

作者 陈名红 陈毅坚 +1 位作者 李天飞 吴渝生 《云南民族大学学报（自然科学版）》 CAS 2006年第3期230-234,共5页

利用PEG法、高Ca2+高pH法和PEG-高Ca2+高pH法等三种原生质体融合方法,对普通烟草K326和黄花烟草叶肉原生质体进行融合,结果表明,PEG-高Ca2+高pH法的有效融合率最高,融合效果最好.并同时对影响烟草叶肉原生质体融合的其它因素进行了研究... 利用PEG法、高Ca2+高pH法和PEG-高Ca2+高pH法等三种原生质体融合方法,对普通烟草K326和黄花烟草叶肉原生质体进行融合,结果表明,PEG-高Ca2+高pH法的有效融合率最高,融合效果最好.并同时对影响烟草叶肉原生质体融合的其它因素进行了研究和探讨. 展开更多

关键词 普通烟草 黄花烟草 原生质体 融合方法

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高粱原生质体的制备及转化方法研究 被引量：9

5

作者 谢鑫 蒋君梅 +1 位作者 王勇 任明见 《种子》 北大核心 2019年第8期43-46,共4页

以高粱幼苗为材料,利用1%的纤维素酶Cellulose R10和0.75%的果胶酶Macerozyme R10处理高粱幼茎,对比不同的酶解时间,发现酶解7h原生质体浓度最高、质量最佳。以经过氯化铯密度梯度离心法获得的高纯度质粒对获得的原生质体进行转化,用激... 以高粱幼苗为材料,利用1%的纤维素酶Cellulose R10和0.75%的果胶酶Macerozyme R10处理高粱幼茎,对比不同的酶解时间,发现酶解7h原生质体浓度最高、质量最佳。以经过氯化铯密度梯度离心法获得的高纯度质粒对获得的原生质体进行转化,用激光共聚焦进行荧光观察,结果显示,GFP和YFP在全细胞表达。本研究首次建立了高粱以高粱幼茎为材料的原生质体制备及转化体系,其方法简单、高效,可以用于高粱基因功能研究。 展开更多

关键词 高粱 原生质体制备 转化方法

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番茄灰霉病生防融合子基因组DNA提取方法的研究 被引量：2

6

作者 张蓓蓓 吕淑霞 +3 位作者 林英 马镝 张少斌 肖冰 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第5期32-34,共3页

以番茄灰霉病生防菌株木霉T-23和链霉菌A的融合子为实验材料,在SDS-CrAB法、改进CTAB法和氯化苄法的基础上加以改进,比较和研究了真菌融合子基因组DNA的提取,找到了一种快速、高效的基因组DNA提取方法,为进一步对融合子进行生防机制和... 以番茄灰霉病生防菌株木霉T-23和链霉菌A的融合子为实验材料,在SDS-CrAB法、改进CTAB法和氯化苄法的基础上加以改进,比较和研究了真菌融合子基因组DNA的提取,找到了一种快速、高效的基因组DNA提取方法,为进一步对融合子进行生防机制和分子生物学水平的研究提供基础。结果表明SDS-CTAB法提取的基因组DNA OD_(260)/OD_(280)为1．909,DNA浓度约为42．0ng/μL,可以满足分子生物学实验的需要。并将提取的基因组DNA直接用于PCR扩增,得到了多态性的RAPD图谱。 展开更多

关键词 基因组DNA 提取方法 融合子 木霉

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枯草芽孢杆菌突变株IA857高效转化方法的研究 被引量：1

7

作者 牛福星 于晶晶 +3 位作者 汤宏赤 刘金平 滕昆 韦宇拓 《广西科学》 CAS 2014年第2期119-123,共5页

【目的】研究比较枯草芽孢杆菌突变株IA857高效转化的最优方法。【方法】以质粒pHCMC04(大小为8089bp)转化突变型枯草芽孢杆菌IA857,分别用电转化法、原生质体法、电击法诱导的原生质体法、Spizizen低盐环境感受态转化法(简称S法)、低... 【目的】研究比较枯草芽孢杆菌突变株IA857高效转化的最优方法。【方法】以质粒pHCMC04(大小为8089bp)转化突变型枯草芽孢杆菌IA857,分别用电转化法、原生质体法、电击法诱导的原生质体法、Spizizen低盐环境感受态转化法(简称S法)、低盐环境形成饥饿感受态法及其改良方案在其它突变菌株的试验方法(简称C法)进行实验,通过比较优化得出最优转化方法。【结果】采用S法转化枯草芽孢杆菌突变株IA857,质粒加入量为70ng时,转化后直接摇床培养1h转化率最高达到1.2×104 CFU/μg DNA,可以满足枯草芽孢杆菌高效转化的要求。【结论】得出了枯草芽孢杆菌突变株IA857最优转化方法并提出转化枯草芽孢杆菌的基本框架。 展开更多

关键词 枯草芽孢杆菌 转化 电击法 原生质体法 低盐环境 感受态

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不同培养条件对拟南芥根细胞膜片钳记录的影响 被引量：3

8

作者 张国增 安国勇 宋纯鹏 《植物学通报》 CSCD 北大核心 2005年第1期27-31,共5页

本文以沙培养法、蛭石培养法、土培养法、水培养法和MS培养基等不同的方法培养拟南芥(Arabidopsisthaliana),分析了不同培养方法对根生长发育的影响,并分别分离根的原生质体。在膜片钳记录中对不同来源的根原生质体状态进行了比较。结... 本文以沙培养法、蛭石培养法、土培养法、水培养法和MS培养基等不同的方法培养拟南芥(Arabidopsisthaliana),分析了不同培养方法对根生长发育的影响,并分别分离根的原生质体。在膜片钳记录中对不同来源的根原生质体状态进行了比较。结果表明,土培养法分离的原生质体最适于膜片钳记录。 展开更多

关键词 培养法 膜片钳 影响 长发 记录 分离 发育 土培 原生质体 MS培养基

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聚乙二醇法诱导烟草原生质体融合的条件优化 被引量：4

9

作者 聂琼 杨川龙 +2 位作者 徐如宏 黄锡才 刘仁祥 《山地农业生物学报》 2012年第4期288-292,共5页

采用聚乙二醇(PEG)法诱导烟草原生质体融合,对融合时PEG的浓度、用量、融合时间及融合温度进行优化,以期得到一种融合率较高的方法。结果表明:以40%的PEG融合的二元融合率最高;PEG与原生质体悬浮液体积比为3∶5,在0.5～0.6 mol/L甘露醇... 采用聚乙二醇(PEG)法诱导烟草原生质体融合,对融合时PEG的浓度、用量、融合时间及融合温度进行优化,以期得到一种融合率较高的方法。结果表明:以40%的PEG融合的二元融合率最高;PEG与原生质体悬浮液体积比为3∶5,在0.5～0.6 mol/L甘露醇为渗透压时,25～30℃下融合20～25 min的融合效果最佳,融合率始终保持在20%左右,甚至可达25%。 展开更多

关键词 烟草 原生质体 聚乙二醇法 融合

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以交配型基因为主要标记的香菇菌种鉴定新方法 被引量：9

10

作者 谭琦 潘迎捷 +7 位作者 陈明杰 汪昭月 贺冬梅 冯志勇 严培兰 郭倩 凌霞芬 詹才新 《食用菌学报》 1998年第3期6-11,共6页

在香菇交配型基因研究的基础上,提出以交配型基因为主要标记的香菇菌种鉴定新方法。这一方法以香菇性亲合性理论为基础,以交配型基因的等位性和多型性为依据,以标准菌株原生质体单核体的两种亲本交配型为遗传标记,以待测菌株的原生质体... 在香菇交配型基因研究的基础上,提出以交配型基因为主要标记的香菇菌种鉴定新方法。这一方法以香菇性亲合性理论为基础,以交配型基因的等位性和多型性为依据,以标准菌株原生质体单核体的两种亲本交配型为遗传标记,以待测菌株的原生质体单核体为材料。该方法中使用的原生质体方法和交配型测定方法都是相当成熟的技术,操作方便、可靠。 展开更多

关键词 香菇 交配型 基因 菌种 鉴定方法

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真菌完整染色体DNA的几种不同制备方法 被引量：1

11

作者 杨建明 冯爱萍 +1 位作者 陈明杰 潘迎捷 《食用菌学报》 2003年第2期55-59,共5页

系统地介绍了目前用于真菌电泳核型分析的真菌完整染色体DNA的 7种制备方法 ,并讨论了各种方法在真菌中应用的优缺点 ,为真菌电泳核型分析提供技术基础。

关键词 真菌 完整染色体DNA 制备方法 电泳核型分析

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微生物原生质体融合技术研究进展 被引量：16

12

作者 王春平 韦强 +3 位作者 鲍国连 刘燕 邵泽香 季权安 《动物医学进展》 CSCD 2008年第5期64-67,共4页

原生质体融合技术在遗传学、动植物远缘杂交育种、生物学、免疫学、兽医学以及医药、食品、农业等方面都有广泛的应用价值,文章就原生质体制备、再生及其融合过程中的影响因素做了综述,另外还对原生质体融合方法和融合子的筛选方法进行... 原生质体融合技术在遗传学、动植物远缘杂交育种、生物学、免疫学、兽医学以及医药、食品、农业等方面都有广泛的应用价值,文章就原生质体制备、再生及其融合过程中的影响因素做了综述,另外还对原生质体融合方法和融合子的筛选方法进行了比较,为选择适宜有效的诱导融合方法和筛选方法提供依据。 展开更多

关键词 原生质体融合 影响因素 融合方法 筛选方法

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霍山石斛原生质体制备条件初探 被引量：3

13

作者 张传海 吴亭亭 《皖西学院学报》 2006年第5期63-65,共3页

本实验采用机械法和酶解法对霍山石斛原生质体的分离条件进行研究。结果表明,机械法制备霍山石斛原生质体,得率很低。正交试验法优选出的酶解法最佳组合条件为:纤维素酶1.5%+果胶酶1.5%+离析酶1.0%的酶液组合(溶于0.6mol/L的甘露醇),pH... 本实验采用机械法和酶解法对霍山石斛原生质体的分离条件进行研究。结果表明,机械法制备霍山石斛原生质体,得率很低。正交试验法优选出的酶解法最佳组合条件为:纤维素酶1.5%+果胶酶1.5%+离析酶1.0%的酶液组合(溶于0.6mol/L的甘露醇),pH值5.4,28℃温育18 h。 展开更多

关键词 霍山石斛 原生质体 机械法 酶解法

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番茄煤霉病生防融合子基因组RAPD分析鉴定 被引量：1

14

作者 张蓓蓓 吕淑霞 肖冰 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期35-39,共5页

RAPD分子标记以其快速、简便等优点,克服了传统的标记手段和形态分类学的缺点,在亲本和杂交种的鉴别以及在基因克隆与分离和遗传图谱的建立等研究中都起着重要的作用。以番茄煤霉病生防菌株木霉菌T-23和链霉菌A的融合子为实验材料,比较... RAPD分子标记以其快速、简便等优点,克服了传统的标记手段和形态分类学的缺点,在亲本和杂交种的鉴别以及在基因克隆与分离和遗传图谱的建立等研究中都起着重要的作用。以番茄煤霉病生防菌株木霉菌T-23和链霉菌A的融合子为实验材料,比较和研究了真菌融合子基因组DNA的提取。并用20个随机引物对亲本及其融合子进行RAPD分析。结果表明,SDS-CTAB法提取的基因组DNAOD260/OD280为1.909,DNA浓度约为42.0 ng/μL,可以满足分子生物学实验的需要;融合子是双亲融合的产物,但从双亲获得的遗传信息不等,融合子在DNA水平上更接近链霉菌。 展开更多

关键词 RAPD分析 融合子 基因组DNA提取 木霉菌

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坛紫菜和拟线形紫菜的原生质体融合及培养 被引量：4

15

作者 陈昌生 《台湾海峡》 CAS CSCD 1993年第2期180-184,T001,共6页

应用PEG 法和电融合法进行了坛紫菜和拟线形紫菜的原生质体融合试验,探讨了PEG 的浓度、处理时间以及洗涤液种类与融合的关系。结果表明,PEG 法的融合率为4.9%～10.2%,电融合率高达32.3%。融合细胞经诱导长成多细胞团的愈伤组织,从愈伤... 应用PEG 法和电融合法进行了坛紫菜和拟线形紫菜的原生质体融合试验,探讨了PEG 的浓度、处理时间以及洗涤液种类与融合的关系。结果表明,PEG 法的融合率为4.9%～10.2%,电融合率高达32.3%。融合细胞经诱导长成多细胞团的愈伤组织,从愈伤组织上升出小紫菜。 展开更多

关键词 紫菜 原生质体 PEG融合 培养

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S-3307培养方法和培养基成分对大麦叶肉原生质体培养的影响 被引量：2

16

作者 赵颖 梁海曼 《上海农业学报》 CSCD 1993年第3期15-21,共7页

试验结果表明:3 ppm S-3307浸种40min可以提高叶肉原生质体的稳定性。培养方法以琼脂糖小块培养法最好,液体浅层培养法次之,看护培养又次之。原生质体的接种密度以0.5～1.0X 10⁶个/ml为好。原生质体进入培养后... 试验结果表明:3 ppm S-3307浸种40min可以提高叶肉原生质体的稳定性。培养方法以琼脂糖小块培养法最好,液体浅层培养法次之,看护培养又次之。原生质体的接种密度以0.5～1.0X 10⁶个/ml为好。原生质体进入培养后宜当天即加液。基本培养基KPR优于D₂。培养基中添加0.25m tool/L腐胺或lmg/L亚精胺均不利于原生质体的细胞分裂。添加3mg/L IAA可促进细胞分裂,但不能延缓后期细胞死亡进程。添加250mg/L CH略可促进细胞分裂,延缓后期细胞死亡进程。添加1％BSA和lm mol谷胱甘肽可促进细胞分裂并能延缓细胞死亡2～3d,但异常分裂增多。 展开更多

关键词 大麦 叶肉 原生质体 培养方法

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影响决明无菌苗子叶原生质体分离和培养因素的研究(英文) 被引量：5

17

作者 周延清 张根发 贾敬芬 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期334-338,共5页

以决明(Cassia obtusi folia)无菌苗子叶为材料,对酶组合、无菌苗日龄,植物激素组合和培养方法对其原生质体的分离和培养的影响进行了研究。结果表明:用3％的纤维素酶和0.2％Pectinase Y-23的酶组合处理决明无菌苗子叶块8小时可以高效... 以决明(Cassia obtusi folia)无菌苗子叶为材料,对酶组合、无菌苗日龄,植物激素组合和培养方法对其原生质体的分离和培养的影响进行了研究。结果表明:用3％的纤维素酶和0.2％Pectinase Y-23的酶组合处理决明无菌苗子叶块8小时可以高效分离出有活力的原生质体;约14日龄的决明无菌苗子叶比较适合于原生质体的分离;适当浓度的2,4-D 有利于原生质体的分离。促进原生质体分裂的理想的植物激素组合为0.4 mg/L 2,4-D,1.0 mg/L NAA and 0.1 mg/L KT;漂浮培养法最有利于原生质体的分裂和发育。找出了适合于决明无菌苗子叶原生质体的分离和培养的酶组合、植物激索组合、有效培养方法和决明无菌苗子叶日龄。这为有效地从决明无菌苗子叶原生质体再生植株奠定了基础。 展开更多

关键词 决明 原生质体培养 酶组合 日龄 培养方法 植物激素

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响应面法优化平菇单核原生质体的制备及再生技术 被引量：1

18

作者 孔维丽 崔筱 +5 位作者 刘芹 袁瑞奇 段亚魁 康源春 孔维威 张玉亭 《天津农业科学》 CAS 2019年第12期5-10,14,共7页

为了提高平菇原生质体融合育种效率,本研究通过构建基于原生质体产量及单核原生质体再生率的响应面模型,优化平菇原生质体制备体系。以平菇菌株黑平16-1为试材,分别通过单因素试验考察菌丝菌龄(3~6 d)、酶液浓度(0.5%~2.0%)、酶解温度(2... 为了提高平菇原生质体融合育种效率,本研究通过构建基于原生质体产量及单核原生质体再生率的响应面模型,优化平菇原生质体制备体系。以平菇菌株黑平16-1为试材,分别通过单因素试验考察菌丝菌龄(3~6 d)、酶液浓度(0.5%~2.0%)、酶解温度(28~34℃)和酶解时间(3~6 h)对原生质体制备及再生率的影响,并在单因素试验基础上,设计4因素3水平的响应面试验,建立各因素与响应值(原生质体产量和单核原生质体再生率)之间的数学模型,确定原生质体制备及单核原生质体再生的最佳提取工艺。结果表明,最佳提取工艺为菌龄4 d、酶液浓度1.51%、酶解温度28.3℃、酶解时间3.7 h,在此条件下平菇原生质体产量和单核原生质体再生率分别为(2.25±0.21)×10^7个·mL^-1和(6.80±0.42)%,与模型预测值接近(2.27×10^7个·mL^-1和6.83%),方程拟合度良好,该方法适用于对平菇原生质体的制备及单核原生质体再生条件的参数优化。 展开更多

关键词 响应面法 平菇 原生质体产量 单核原生质体再生率 参数优化

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金钗石斛原生质体的制备与融合 被引量：1

19

作者 徐德林 储士润 +4 位作者 潘胤池 郑明辉 钱刚 陈芳 李林 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2016年第8期935-944,共10页

以金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)再生苗的幼嫩叶片为实验材料,以原生质体活力率为评价指标,用正交试验设计对原生质体制备过程中的纤维素酶浓度、果胶酶浓度、离析酶浓度和酶解时间四个关键因素进行最佳组合筛选,发现当纤维素酶为... 以金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)再生苗的幼嫩叶片为实验材料,以原生质体活力率为评价指标,用正交试验设计对原生质体制备过程中的纤维素酶浓度、果胶酶浓度、离析酶浓度和酶解时间四个关键因素进行最佳组合筛选,发现当纤维素酶为9.5 mg/m L、果胶酶为5.0 mg/m L、离析酶为6.0 mg/m L、酶解时间为3.0 h的组合条件下,制备的原生质体活力率最高,为94.42%。在此基础上,采用高钙高pH值结合PEG4000诱导法进行原生质体融合研究,以高活力的赤水和瑞丽金钗石斛原生质体为材料,以异核体融合率为评价指标,用响应面法优化设计对原生质体融合过程中的PEG浓度、CaCl_2浓度、pH和融合时间四个因素进行最佳组合筛选,发现当PEG4000浓度为38.41%、CaCl_2浓度为0.44 mol/L、pH为9.26、融合时间为28.87 min的组合条件下,异核体融合率达到最高,为0.924%。同时,响应面法分析还发现,PEG浓度和CaCl_2浓度之间、PEG浓度和pH之间、CaCl_2浓度和融合时间两个因素共同对异核体融合率有显著影响。此外,响应面分析还发现,当pH为9.26时,PEG浓度、CaCl_2浓度和融合时间的值在一定范围内变化并不会显著影响异核体融合率的值,数值均维持在0.94%左右。该研究完善了金钗石斛原生质体制备和融合的技术体系,为金钗石斛种质资源的保护、拓展和新品种选育提供了实验材料,为其他近缘物种的相关研究提供了实验参考。 展开更多

关键词 金钗石斛 原生质体制备 原生质体融合 正交试验法 响应面法

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香菇交配型基因的遗传研究 Ⅰ一种交配型基因测定的新方法 被引量：5

20

作者 潘迎捷 陈明杰 +2 位作者 贺冬梅 冯志勇 汪昭月 《食用菌学报》 1996年第4期1-3,共3页

本文建立了一种香菇交配型基因测定的新方法——原生质单核体系本交配到极性标记法.用这一方法不仅成功地分离和鉴定出不同香菇菌株的四种标准交配型基因,还有效地区分出亲本型和重用型两种交配型基因类型。这一技术为深入开展异宗结合... 本文建立了一种香菇交配型基因测定的新方法——原生质单核体系本交配到极性标记法.用这一方法不仅成功地分离和鉴定出不同香菇菌株的四种标准交配型基因,还有效地区分出亲本型和重用型两种交配型基因类型。这一技术为深入开展异宗结合食用菌的遗传研究提供了一个重要的工具。 展开更多

关键词 交配型基因 测定 原生质单核体 亲本 香菇

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