目的:探究多聚胞嘧啶结合蛋白2[poly(C)-binding protein 2,PCBP2]如何通过调节铁死亡参与大别班达病毒(Dabie Banda virus,DBV)感染后的致病过程及其作用机制。方法:以人单核细胞系THP-1为模型,采用qRT-PCR和Western blot技术检测DBV...目的:探究多聚胞嘧啶结合蛋白2[poly(C)-binding protein 2,PCBP2]如何通过调节铁死亡参与大别班达病毒(Dabie Banda virus,DBV)感染后的致病过程及其作用机制。方法:以人单核细胞系THP-1为模型,采用qRT-PCR和Western blot技术检测DBV感染的THP-1细胞中PCBP2的mRNA及蛋白表达水平。通过透射电镜观察病毒感染下的线粒体结构变化,在THP-1细胞中构建了慢病毒介导的PCBP2过表达和敲低稳转细胞系。FerroOrange荧光探针检测Fe^(2+)水平,2,7-二氯荧光素二乙酸酯(2,7-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测铁死亡相关溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达,以评估PCBP2调控对铁死亡的影响。使用铁死亡诱导剂(RSL3、erastin)和抑制剂(Fer-1、Lip-1)处理细胞,qRT-PCR和免疫荧光检测病毒复制水平变化,探索PCBP2是否可以通过调控铁死亡影响DBV复制。结果:在DBV感染的细胞模型中,PCBP2的mRNA和蛋白表达水平显著下调,DBV感染诱导典型铁死亡特征(线粒体嵴减少、肿胀)。通过qRT-PCR和Western blot验证,PCBP2敲低和过表达的THP-1细胞系构建成功,PCBP2敲低下调了铁死亡相关基因SLC7A11和GPX4的表达,导致ROS和Fe^(2+)水平升高;相反,PCBP2过表达使得SLC7A11和GPX4的表达水平升高,ROS和Fe^(2+)的水平降低。半数组织培养感染剂量与蛋白水平的检测进一步证实:铁死亡诱导剂可部分抵消PCBP2过表达促病毒复制的效应,铁死亡抑制剂可部分逆转PCBP2敲低抑制病毒复制的效应。结论:研究发现PCBP2可以通过维持SLC7A11/GPX4系统功能抑制铁死亡,从而限制DBV复制。这不仅阐明了PCBP2在DBV感染中的调控作用,为发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytope-nia syndrome,SFTS)的发病机制提供了新见解,同时靶向PCBP2-铁死亡通路可能成为SFTS治疗的潜在策略,为抗病毒药物的研发提供新思路。展开更多
目的检测帕金森病(PD)患者血清视锥蛋白样蛋白1(VILIP-1)、补体Clq肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)和纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)表达水平,分析三者与PD患者疾病分期、认知功能的关系。方法选取2022年3月~2024年3月监利市人民医院收治的103...目的检测帕金森病(PD)患者血清视锥蛋白样蛋白1(VILIP-1)、补体Clq肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)和纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)表达水平,分析三者与PD患者疾病分期、认知功能的关系。方法选取2022年3月~2024年3月监利市人民医院收治的103例PD患者作为研究对象(PD组),依据Hoehn-Yahr(H-Y)分级系统将PD患者分为早期组(n=48),中/晚期组(n=55);依据蒙特利尔认知评估表(MoCA)将PD患者分为认知正常组(n=38)和认知障碍组(n=65)。另随机选择同期体检健康人105例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清VILIP-1、CTRP9和FGL2表达水平;采用Logistic回归分析影响PD患者发生认知功能障碍的影响因素;采用Pearson法分析血清VILIP-1、CTRP9、FGL2水平与疾病分期、认知障碍相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清VILIP-1、CTRP9、FGL2联合检测对PD患者疾病分期、认知功能障碍的诊断价值。结果PD组血清VILIP-1(7.16±1.28ng/ml)、FGL2(94.27±12.42ng/ml)水平高于对照组(4.67±0.95ng/ml,72.15±9.68ng/ml),CTRP9(0.53±0.07pg/ml)水平低于对照组(1.02±0.14pg/ml),差异具有统计学意义(t=15.952、14.342、31.831,均P<0.001)。中/晚期组血清VILIP-1(7.86±0.95ng/ml)、FGL2(102.21±13.04ng/ml)水平高于早期组(6.36±0.81ng/ml,85.17±10.35ng/ml),CTRP9(0.46±0.08pg/ml)水平低于早期组(0.62±0.14pg/ml),差异具有统计学意义(t=8.556、7.271、7.233,均P<0.001)。与认知正常组相比,认知障碍组血清VILIP-1(7.72±1.03ng/ml vs 6.21±0.92ng/ml)、FGL2(102.54±16.53ng/ml vs 80.12±13.27ng/ml)水平及UPDRS评分(54.17±7.68分vs 50.64±7.42分),SCOPA-AUT评分(15.27±3.82分vs 12.39±3.48分)升高,CTRP9(0.47±0.09pg/ml vs 0.65±0.13pg/ml)水平降低,差异具有统计学意义(t=2.279~7.537,均P<0.05)。Logistic分析显示,UPDRS、VILIP-1、FGL2是PD患者发生认知功能障碍的危险因素(Waldχ^(2)=5.041、6.127、7.414,均P<0.05),CTRP9是PD患者发生认功能障碍的保护因素(Waldχ^(2)=5.775,P<0.05)。Pearson相关分析显示,血清VILIP-1、FGL2水平与疾病分期、认知障碍呈正相关(r=0.524~0.637,均P<0.05),血清CTRP9水平与疾病分期、认知障碍呈负相关(r=-0.501、-0.595,均P<0.001)。ROC曲线分析显示,血清VILIP-1、CTRP9、FGL2三者联合预测PD患者疾病分期的AUC优于单独检测(Z=2.625、2.568、2.251,均P<0.05);三者联合预测PD患者认知功能障碍的AUC优于单独检测(Z=2.910、2.008、2.096,均P<0.05)。结论PD患者血清VILIP-1、FGL2呈高水平,CTRP9呈低水平,且均与PD患者疾病分期、认知功能密切相关。展开更多
文摘目的:探究多聚胞嘧啶结合蛋白2[poly(C)-binding protein 2,PCBP2]如何通过调节铁死亡参与大别班达病毒(Dabie Banda virus,DBV)感染后的致病过程及其作用机制。方法:以人单核细胞系THP-1为模型,采用qRT-PCR和Western blot技术检测DBV感染的THP-1细胞中PCBP2的mRNA及蛋白表达水平。通过透射电镜观察病毒感染下的线粒体结构变化,在THP-1细胞中构建了慢病毒介导的PCBP2过表达和敲低稳转细胞系。FerroOrange荧光探针检测Fe^(2+)水平,2,7-二氯荧光素二乙酸酯(2,7-dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA)探针测定活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测铁死亡相关溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11)和谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达,以评估PCBP2调控对铁死亡的影响。使用铁死亡诱导剂(RSL3、erastin)和抑制剂(Fer-1、Lip-1)处理细胞,qRT-PCR和免疫荧光检测病毒复制水平变化,探索PCBP2是否可以通过调控铁死亡影响DBV复制。结果:在DBV感染的细胞模型中,PCBP2的mRNA和蛋白表达水平显著下调,DBV感染诱导典型铁死亡特征(线粒体嵴减少、肿胀)。通过qRT-PCR和Western blot验证,PCBP2敲低和过表达的THP-1细胞系构建成功,PCBP2敲低下调了铁死亡相关基因SLC7A11和GPX4的表达,导致ROS和Fe^(2+)水平升高;相反,PCBP2过表达使得SLC7A11和GPX4的表达水平升高,ROS和Fe^(2+)的水平降低。半数组织培养感染剂量与蛋白水平的检测进一步证实:铁死亡诱导剂可部分抵消PCBP2过表达促病毒复制的效应,铁死亡抑制剂可部分逆转PCBP2敲低抑制病毒复制的效应。结论:研究发现PCBP2可以通过维持SLC7A11/GPX4系统功能抑制铁死亡,从而限制DBV复制。这不仅阐明了PCBP2在DBV感染中的调控作用,为发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytope-nia syndrome,SFTS)的发病机制提供了新见解,同时靶向PCBP2-铁死亡通路可能成为SFTS治疗的潜在策略,为抗病毒药物的研发提供新思路。
文摘目的检测帕金森病(PD)患者血清视锥蛋白样蛋白1(VILIP-1)、补体Clq肿瘤坏死因子相关蛋白9(CTRP9)和纤维蛋白原样蛋白2(FGL2)表达水平,分析三者与PD患者疾病分期、认知功能的关系。方法选取2022年3月~2024年3月监利市人民医院收治的103例PD患者作为研究对象(PD组),依据Hoehn-Yahr(H-Y)分级系统将PD患者分为早期组(n=48),中/晚期组(n=55);依据蒙特利尔认知评估表(MoCA)将PD患者分为认知正常组(n=38)和认知障碍组(n=65)。另随机选择同期体检健康人105例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定血清VILIP-1、CTRP9和FGL2表达水平;采用Logistic回归分析影响PD患者发生认知功能障碍的影响因素;采用Pearson法分析血清VILIP-1、CTRP9、FGL2水平与疾病分期、认知障碍相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清VILIP-1、CTRP9、FGL2联合检测对PD患者疾病分期、认知功能障碍的诊断价值。结果PD组血清VILIP-1(7.16±1.28ng/ml)、FGL2(94.27±12.42ng/ml)水平高于对照组(4.67±0.95ng/ml,72.15±9.68ng/ml),CTRP9(0.53±0.07pg/ml)水平低于对照组(1.02±0.14pg/ml),差异具有统计学意义(t=15.952、14.342、31.831,均P<0.001)。中/晚期组血清VILIP-1(7.86±0.95ng/ml)、FGL2(102.21±13.04ng/ml)水平高于早期组(6.36±0.81ng/ml,85.17±10.35ng/ml),CTRP9(0.46±0.08pg/ml)水平低于早期组(0.62±0.14pg/ml),差异具有统计学意义(t=8.556、7.271、7.233,均P<0.001)。与认知正常组相比,认知障碍组血清VILIP-1(7.72±1.03ng/ml vs 6.21±0.92ng/ml)、FGL2(102.54±16.53ng/ml vs 80.12±13.27ng/ml)水平及UPDRS评分(54.17±7.68分vs 50.64±7.42分),SCOPA-AUT评分(15.27±3.82分vs 12.39±3.48分)升高,CTRP9(0.47±0.09pg/ml vs 0.65±0.13pg/ml)水平降低,差异具有统计学意义(t=2.279~7.537,均P<0.05)。Logistic分析显示,UPDRS、VILIP-1、FGL2是PD患者发生认知功能障碍的危险因素(Waldχ^(2)=5.041、6.127、7.414,均P<0.05),CTRP9是PD患者发生认功能障碍的保护因素(Waldχ^(2)=5.775,P<0.05)。Pearson相关分析显示,血清VILIP-1、FGL2水平与疾病分期、认知障碍呈正相关(r=0.524~0.637,均P<0.05),血清CTRP9水平与疾病分期、认知障碍呈负相关(r=-0.501、-0.595,均P<0.001)。ROC曲线分析显示,血清VILIP-1、CTRP9、FGL2三者联合预测PD患者疾病分期的AUC优于单独检测(Z=2.625、2.568、2.251,均P<0.05);三者联合预测PD患者认知功能障碍的AUC优于单独检测(Z=2.910、2.008、2.096,均P<0.05)。结论PD患者血清VILIP-1、FGL2呈高水平,CTRP9呈低水平,且均与PD患者疾病分期、认知功能密切相关。
