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抗血吸虫DNA疫苗pcDNA3／SjHGPRT局部肌肉刺激与全身过敏实验 被引量：3
1
作者 蔡胜蓝 向选东 +3 位作者 汪世平 刘芬 高冬梅 彭先楚 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期528-530,共3页
目的评价日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/Sj HGPRT的安全性。方法同体左右侧自身对比法对3只家兔进行局部肌肉刺激实验,22只豚鼠随机分为4组:无菌生理盐水阴性对照组、牛血清白蛋白阳性对照组、pcDNA3/Sj HGPRT低剂量组、pcDNA3/Sj HGPRT高剂... 目的评价日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/Sj HGPRT的安全性。方法同体左右侧自身对比法对3只家兔进行局部肌肉刺激实验,22只豚鼠随机分为4组:无菌生理盐水阴性对照组、牛血清白蛋白阳性对照组、pcDNA3/Sj HGPRT低剂量组、pcDNA3/Sj HGPRT高剂量组,进行全身过敏试验。结果日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/Sj HGPRT对家兔局部肌肉刺激反应轻微,对豚鼠无全身过敏反应。结论日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/Sj HGPRT在该实验条件下安全。 展开更多
关键词 日本血吸虫 基因疫苗 pcdna3/sjhgprt 组织分布 聚合酶链反应
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日本血吸虫编码基因pcDNA3／SjHGPRT核酸疫苗在免疫宿主体内分布的观察 被引量：2
2
作者 蔡胜蓝 向选东 +3 位作者 汪世平 刘芬 高冬梅 余路新 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期174-178,共5页
目的观察日本血吸虫候选核酸疫苗pcDNA3/SjHGPRT肌肉注射后在小鼠体内的组织分布。方法将昆明小鼠随机分为3组:生理盐水对照组和pcDNA3对照组和pcDNA3/SjHGPRT实验组,实验组免疫接种剂量为150μg,各组于免疫接种后12h、1、3、6周分批处... 目的观察日本血吸虫候选核酸疫苗pcDNA3/SjHGPRT肌肉注射后在小鼠体内的组织分布。方法将昆明小鼠随机分为3组:生理盐水对照组和pcDNA3对照组和pcDNA3/SjHGPRT实验组,实验组免疫接种剂量为150μg,各组于免疫接种后12h、1、3、6周分批处死,留取全血、心、肝、脾、肺、肾及注射部位肌肉,提取各组织总DNA,PCR法检测pcD-NA3/SjHGPRT的分布。结果接种后12h即可在小鼠血液、心、肝、脾、肺、肾组织及注射部位肌肉中检测到质粒分布,接种后3周仍可在注射部位肌肉组织及个别脏器组织中检测出,至接种后6周不再检出。结论肌肉注射pcDNA3/SjH-GPRT后,可在组织中广泛分布,持续分布时间为接种后3周,随后质粒DNA不再被检出,证明其与小鼠基因组DNA整合的可能性极小。 展开更多
关键词 日本血吸虫 核酸疫苗 pcdna3/sjhgprt 组织分布 聚合酶链反应
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人可溶性白介素-1受体真核表达载体pcDNA3/sIL-1R的构建 被引量：4
3
作者 李鹏 徐艳 +2 位作者 张蕴惠 章锦才 王大章 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期140-143,共4页
目的　本研究旨在构建人可溶性白介素_1受体 (sIL_1R)真核表达载体pcDNA3 sIL_1R ,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法　将人sIL_1R基因的RT_PCR纯化产物及质粒pcDNA3 1(+)DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后 ,体外... 目的　本研究旨在构建人可溶性白介素_1受体 (sIL_1R)真核表达载体pcDNA3 sIL_1R ,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法　将人sIL_1R基因的RT_PCR纯化产物及质粒pcDNA3 1(+)DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后 ,体外连接酶切片段 ,使其定向重组 ,再将重组DNA转化E .coliCompetentCellsJM10 9,经复苏后 ,在含Ampr 的LB固体培养基上筛选出阳性克隆。结果　挑取的LB固体培养基上的 6个单菌落经酶切及测序鉴定 ,证实均为阳性克隆 ,即sIL_1R与pcDNA3 1(+)体外重组成功。结论　采用体外重组技术 ,成功地将人sIL_1RcDNA插入了真核表达载体pcDNA3 1(+) 展开更多
关键词 人可溶性白介素-1受体 真核表达载体 pcdna3 骨关节病 基因治疗
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核酸疫苗pcDNA3-γcC1诱导囊尾蚴细胞凋亡的作用 被引量：7
4
作者 孙树汉 郭瀛军 +1 位作者 陈蕊雯 杨桦 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第11期1090-1091,I002,共3页
目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。 方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞... 目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。 方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞凋亡情况。结果 :非接种组 ,且未经凋亡诱导的细胞核无凋亡所特有的阳性着色 ;经诱导或免疫接种组的细胞核均表现为极强的凋亡所特有的阳性着色。 结论 :首次观察到核酸疫苗接种后引起寄生生物细胞凋亡的现象 。 展开更多
关键词 核酸疫苗 囊尾蚴 细胞凋亡 pcdna3-γcC1
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重组质粒pcDNA3-IL-2对鸡球虫疫苗的免疫增效作用 被引量：7
5
作者 李蕴玉 张香斋 +5 位作者 贾青辉 耿田田 张召兴 丁咚 李佩国 张艳英 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期456-460,共5页
为了确定重组质粒pcDNA3-IL-2对鸡球虫疫苗的免疫增效作用,将60只14日龄雏鸡随机分成5组,分别为对照组、球虫活疫苗免疫组、球虫活疫苗免疫加50、100、150μg/只重组质粒组。分组当天进行鸡球虫病四价活疫苗免疫,1,7d分别肌肉注射重组质... 为了确定重组质粒pcDNA3-IL-2对鸡球虫疫苗的免疫增效作用,将60只14日龄雏鸡随机分成5组,分别为对照组、球虫活疫苗免疫组、球虫活疫苗免疫加50、100、150μg/只重组质粒组。分组当天进行鸡球虫病四价活疫苗免疫,1,7d分别肌肉注射重组质粒pcDNA3-IL-2。至21d时,除第1组(对照组)外,每只鸡经口灌服E.tenella卵囊8×104个。对免疫后鸡的生长性能,外周血淋巴细胞转化率,血清IFN-γ、IL-2、IgG含量以及攻虫后的抗球虫指数进行测定。结果表明,pcDNA3-IL-2重组质粒对鸡球虫疫苗免疫增效的适宜剂量为100μg/只,与第2组比较,14、21、28d的外周血淋巴细胞转化率显著提高了26.54%、27.15%和24.19%(P<0.05);血清IFN-γ含量显著提高了8.87%、14.56%和15.18%(P<0.05);血清IL-2和IgG含量分别提高了3.40%、4.09%、3.95%和12.75%、9.73%、9.87%,胸腺、法氏囊与脾脏指数分别提高了4.91%、9.27%和2.46%(P>0.05),ACI指数达180.71,提高了9.24%。 展开更多
关键词 pcdna3-IL-2重组质粒 球虫疫苗 免疫增效 抗球虫指数
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日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP的安全性评价 被引量：5
6
作者 刘芬 汪世平 +2 位作者 蔡胜蓝 余俊龙 彭先楚 《中国血吸虫病防治杂志》 CAS CSCD 2007年第1期21-23,共3页
目的评价日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP的安全性。方法同体左右侧自身对比法对3只家兔进行局部肌肉刺激实验,22只豚鼠随机分为4组:A组为无菌生理盐水阴性对照组,B组为牛血清白蛋白阳性对照组,C组为pcDNA3/SjSDISP低剂量组,D组为pcDNA... 目的评价日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP的安全性。方法同体左右侧自身对比法对3只家兔进行局部肌肉刺激实验,22只豚鼠随机分为4组:A组为无菌生理盐水阴性对照组,B组为牛血清白蛋白阳性对照组,C组为pcDNA3/SjSDISP低剂量组,D组为pcDNA3/SjSDISP高剂量组,进行全身过敏实验。结果日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP对家兔局部肌肉刺激反应轻微,对豚鼠无全身过敏反应。结论日本血吸虫DNA疫苗pcDNA3/SjSDISP在该实验条件下安全。 展开更多
关键词 日本血吸虫 pcdna3/SjSDISP DNA疫苗 安全性实验
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弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅱ.pcDNA3-HBsAg-GRA1在COS-7细胞中的表达及鉴定 被引量：5
7
作者 王丹静 舒衡平 +3 位作者 秦志强 蔡力汀 吴翔 蒋立平 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2005年第1期49-51,共3页
目的　鉴定pcDNA3 HBsAg GRA1在哺乳动物细胞内是否表达目的蛋白。 方法　提取pcDNA3 HBsAg GRA1质粒 ;体外培养COS 7细胞 ;pcDNA3 HBsAg GRA1经脂质体转染体外培养的COS 7细胞 ;取转染后的细胞培养上清进行SDS PAGE ,Western blot鉴定... 目的　鉴定pcDNA3 HBsAg GRA1在哺乳动物细胞内是否表达目的蛋白。 方法　提取pcDNA3 HBsAg GRA1质粒 ;体外培养COS 7细胞 ;pcDNA3 HBsAg GRA1经脂质体转染体外培养的COS 7细胞 ;取转染后的细胞培养上清进行SDS PAGE ,Western blot鉴定。结果　成功将pcDNA3 HBsAg GRA1转染入COS 7细胞。转染的细胞能高效表达分子为 4 7kD分泌性融合蛋白 (HBsAg GRA1)。HBsAg GRA1能同时被HBsAb阳性人血清及弓形虫免疫兔血清所识别。 结论　pcDNA3 HB sAg GRA1在体外培养的COS 7细胞中高效表达与预期分子量大小相同 ,且具有免疫学活性的融合蛋白。 展开更多
关键词 pcdna3-HBsAg—GRA1 表达 COS-7细胞 弓形虫
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猪囊尾蚴病重组DNA疫苗pcDNA3．1-TSO45W在小鼠体内诱导的体液免疫效应 被引量：3
8
作者 王媛媛 杨小迪 +5 位作者 孙新 陶志勇 常雪莲 王小莉 方强 夏惠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2014年第3期242-244,248,共4页
目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗TS045W诱导的小鼠体液免疫应答。方法碱裂解法大量制备重组质粒pcDNA3．1TS045W及对照质粒pcDNA3．1。将45只雌性昆明小鼠（4～6周）随机分为3组，每组15只。A组（生理盐水组）：每只小鼠肌肉... 目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗TS045W诱导的小鼠体液免疫应答。方法碱裂解法大量制备重组质粒pcDNA3．1TS045W及对照质粒pcDNA3．1。将45只雌性昆明小鼠（4～6周）随机分为3组，每组15只。A组（生理盐水组）：每只小鼠肌肉注射生理盐水100ul；B组（空质粒pcDNA3．1对照组）：每只小鼠肌肉注射空质粒l。0扯g；C组（重组质粒pcDNA3．1-TSO45W组）：每只小鼠肌肉注射重组质粒100肛g。分别于免疫后2、4、6、8、10周以ELISA方法检测小鼠血清免疫球蛋白IgG，IgM及IgA含量。结果pcDNA3．1-TSO45—4B免疫组小鼠血清IgG、IgM、IgA均于第4周开始升高，分别为（17．36±1．85）μg／ml、（9．25±1．78）μg／ml和（9．41±0．88）μg／ml，并分别于第8、第6、第8周达到最高，含量分别为（24．26±2．52）μg／ml、（10．69±0．52）μg／ml和（11．22±1．23）μg／ml，与空质粒对照组（B组）和生理盐水对照组（A组）比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论猪囊尾蚴保护性抗原TSO45WDNA疫苗能在小鼠体内诱导体液免疫效应。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 pcdna 3 1-TS045W 疫苗 体液免疫
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小鼠骨髓树突状细胞pcDNA3-hCEA转染疫苗的抗瘤作用 被引量：4
9
作者 黄幼田 董子明 +6 位作者 赵明耀 杨洪艳 张义国 郑智敏 马俊芬 汤黎明 陈宁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期1317-1323,共7页
目的 :将pcDNA3 -hCEA转染小鼠骨髓树突状细胞 (DCs) ,观察其诱导BALB/c小鼠对CT2 6(hCEA+ )的抗肿瘤免疫效应。方法 :采用rmGM -CSF和rmIL - 4体外诱导培养小鼠骨髓DCs;构建真核表达质粒pcDNA3 -hCEA ;并用lipofectamine将其转染DCs,制... 目的 :将pcDNA3 -hCEA转染小鼠骨髓树突状细胞 (DCs) ,观察其诱导BALB/c小鼠对CT2 6(hCEA+ )的抗肿瘤免疫效应。方法 :采用rmGM -CSF和rmIL - 4体外诱导培养小鼠骨髓DCs;构建真核表达质粒pcDNA3 -hCEA ;并用lipofectamine将其转染DCs,制备DCs(pCDNA3 -hCEA)疫苗 ;同时制备CT2 6(hCEA+ ) ;采用RT -PCR检测DCs(pCDNA3 -hCEA)中CEAmRNA的表达 ,采用放射免疫法检测DCs(pCDNA3 -hCEA)培养上清中CEA的含量 ;使用DCs(pCDNA3 -hCEA)疫苗体外诱导小鼠同种异体T淋巴细胞靶向性杀伤。采用DCs(pcDNA3 -hCEA)疫苗预防免疫BALB/c小鼠 ,观察其对于荷临界致瘤量CT2 6(hCEA+ )小鼠的抗肿瘤效应。结果 :经G41 8筛选 ,DCs(pCDNA3 -hCEA)有 1 4 %的获得率 ;RT -PCR检测表明DCs(pCDNA3 -hCEA)内CEAmRNA呈阳性表达 ;放射免疫法检测表明DCs(pCDNA3 -hCEA)能微量表达人CEA ;DCs(pCDNA3 -hCEA)能够有效诱导CEA靶向免疫杀伤。DCs(pcDNA3 -hCEA)疫苗延长荷CT2 6(hCEA+ )瘤小鼠生存期 1周至 4周。结论 :编码肿瘤抗原基因的真核表达质粒转染的树突状细胞 。 展开更多
关键词 小鼠 骨髓树突状细胞 pcdna3-hCEA 癌胚抗原 肿瘤 免疫效应 真核表达质粒
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弓形虫pcDNA3-ROP1 DNA疫苗免疫小鼠诱导体液免疫应答及保护性的初步观察 被引量：6
10
作者 李薇 刘波 丑莉莉 《北华大学学报（自然科学版）》 CAS 2008年第3期239-240,共2页
目的观察弓形虫pcDNA3-ROP1DNA疫苗免疫BALB／C小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用．方法重组质粒用生理盐水稀释后，肌注免疫BALB／C小鼠．分别于免疫后5周和10周用ELISA法测定IgG抗体滴度；免疫鼠腹腔注射弓... 目的观察弓形虫pcDNA3-ROP1DNA疫苗免疫BALB／C小鼠诱导其体内产生的体液免疫应答及抗虫感染的免疫保护作用．方法重组质粒用生理盐水稀释后，肌注免疫BALB／C小鼠．分别于免疫后5周和10周用ELISA法测定IgG抗体滴度；免疫鼠腹腔注射弓形虫速殖子攻击感染．结果经两次检测，均可测到特异性IgG抗体，且抗体的滴度随免疫时间的延长而增高；弓形虫速殖子腹腔攻击感染免疫组小鼠的平均存活时间较对照组延长，统计学有显著性差异（P〈0．01）．结论弓形虫pcDNA3-ROP1质粒DNA疫苗能诱导BALB／C小鼠产生特异性体液免疫应答及部分抗虫免疫保护作用． 展开更多
关键词 弓形虫 pcdna3-ROP1 DNA疫苗 体液免疫
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重组PcDNA3.1-hBMP-2转染骨髓基质干细胞及复合异种骨支架体外构建组织工程骨 被引量：5
11
作者 卜丽莎 李建军 +4 位作者 韩东 景元海 王宏 王玲 徐莘香 《中国骨伤》 CAS 2004年第8期449-451,共3页
目的 :构建人骨形态发生蛋白 2 (humanbonemorphogeneticprotein ,hBMP 2 )真核表达载体PcDNA3 1 hBMP 2 ,转染兔骨髓基质干细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSCs) ,种植去抗原牛松质骨(bovinecancellousbone ,BCB)支架体外构建组织工... 目的 :构建人骨形态发生蛋白 2 (humanbonemorphogeneticprotein ,hBMP 2 )真核表达载体PcDNA3 1 hBMP 2 ,转染兔骨髓基质干细胞 (bonemarrowstromalcells ,BMSCs) ,种植去抗原牛松质骨(bovinecancellousbone ,BCB)支架体外构建组织工程骨。方法 :蛋白印迹法检测转染后细胞BMP 2的表达 ,碱性磷酸酶 (ALPase)活性检测分析基因转染对细胞分化的影响。然后将转染后细胞接种到BCB支架上 ,扫描电镜观察细胞贴附、生长状况。结果 :转染后 ,BMSCs表达BMP 2 ,ALP活性明显增高。扫描电镜见转染细胞分布均匀 ,伸展良好。结论 :在脂质体介导下 ,BMP 2基因可导入细胞且稳定表达基因产物促进自身增殖分化 ,转染后细胞在支架材料上贴附生长良好 ,为进一步应用携带BMP 展开更多
关键词 转染 HBMP-2 组织工程骨 体外 骨髓基质干细胞 pcdna3 骨支架 重组 构建 目的
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生长抑素pcDNA3s/SS质粒的构建与鉴定 被引量：6
12
作者 刘建文 乐国伟 +2 位作者 施用晖 王志军 汪垣 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2002年第2期187-190,共4页
动物生长抑制激素 (Somatostatin ,SS)基因克隆至含有乙肝表面抗原的 pcDNA3s质粒载体上 ,生长抑素基因插入到乙肝表面抗原的 5′末端 ,构建生长抑素DNA疫苗 .经PCR反应扩增出含有SS和HBsAg的融合基因片段 ,并经测序证实SS基因已成功重组到
关键词 pcdna3s质粒 构建 鉴定 生长抑制 乙肝表面抗原 动物 基因克隆
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日本血吸虫真核表达质粒pcDNA3/HGPRT的构建及序列测定 被引量：2
13
作者 何卓 汪世平 +11 位作者 吕志跃 余俊龙 彭先楚 周松华 李文凯 徐绍锐 吴仕筠 曾少华 肖小芹 戴橄 车宏丽 姜孝新 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第10期833-835,共3页
目的应用基因工程技术,对日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine-guaninephosphoribosyltransferase,HGPRT)进行亚克隆,试图构建真核重组DNA质粒pcDNA3-HGPRT。方法通过筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,克隆HGPRT基因片段,... 目的应用基因工程技术,对日本血吸虫次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(hypoxanthine-guaninephosphoribosyltransferase,HGPRT)进行亚克隆,试图构建真核重组DNA质粒pcDNA3-HGPRT。方法通过筛选日本血吸虫成虫cDNA文库,克隆HGPRT基因片段,然后将目的片段亚克隆入真核表达载体pcDNA3。结果成功构建了真核重组DNA质粒pcDNA3-HGPRT,为进一步研究HGPRT的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 日本血吸虫 SIEA HGPRT 亚克隆 pcdna3
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堆型艾美耳球虫pcDNA3-3-1E重组表达质粒的免疫保护性 被引量：3
14
作者 赵月兰 王建永 +2 位作者 卢军霞 包永占 秦建华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1138-1141,共4页
将堆型艾美耳球虫保定株裂殖子3-1E基因,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA-3-1E,用碱裂解法大量提取重组表达质粒,纯化后免疫接种1周龄雏鸡。分别设高(100μg)、中(50μg)、低(25μg)3个剂量组,同时设活卵囊接种... 将堆型艾美耳球虫保定株裂殖子3-1E基因,插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pcDNA-3-1E,用碱裂解法大量提取重组表达质粒,纯化后免疫接种1周龄雏鸡。分别设高(100μg)、中(50μg)、低(25μg)3个剂量组,同时设活卵囊接种组、非免疫感染组和健康对照组。在7日龄时首免,14日龄加强免疫,1周后用2.5×105个E.acervulina保定株球虫孢子化卵囊进行攻毒试验。结果显示50μg的剂量可使试验鸡产生较强的抗球虫效果,攻虫鸡的卵囊产量下降67.67%,肠道病变记分降低66.96%,并使鸡的相对增重率达88.36%,ACI值为176.06。 展开更多
关键词 堆型艾美耳球虫 裂殖子 重组表达质粒pcdna3-3-1E 免疫
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脂质体介导下重组pcDNA3-hBMP3转染兔关节软骨细胞的条件 被引量：3
15
作者 韩一生 胡蕴玉 +1 位作者 金格乐 李松建 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第11期987-990,共4页
目的　探讨基因转移效率与 pc DNA3- h BMP3质粒及阳离子脂质体的浓度、转染时机以及细胞的种殖密度等因素的关系 ,以寻求最佳的基因转染条件 .方法　细胞密度按 2× 10 4· cm- 2 接种后 ,对细胞接种后即时、孵化 2 ,5和 7d进... 目的　探讨基因转移效率与 pc DNA3- h BMP3质粒及阳离子脂质体的浓度、转染时机以及细胞的种殖密度等因素的关系 ,以寻求最佳的基因转染条件 .方法　细胞密度按 2× 10 4· cm- 2 接种后 ,对细胞接种后即时、孵化 2 ,5和 7d进行转染效率研究 ;G418浓度每 m L DMEM分别含有 2 0 0 ,30 0 ,40 0 ,5 0 0和 6 0 0μg,探讨 G418对软骨细胞的杀伤作用 ;选择不同细胞接种密度、不同脂质体浓度和 pc DNA3- BMP3浓度 ,在细胞对数生长期且细胞融合至 70 %～ 80 %时开始做转染 ,各组软骨细胞爬片的原位杂交结果通过计算机图像分析 ,以其灰度值判定基因转染的效率 .结果　最佳期的转染时机为软骨细胞接种后在孵箱内放置 2 d转染 ,即在软骨细胞对数生长期内做转染 .G418对软骨细胞的最佳筛选浓度为 40 0 mg· L- 1 .最佳的细胞种植密度、pc DNA3- BMP3浓度和脂质体的量应分别为 2× 10 4· cm- 2 ,5 μL 和 10 μL.结论　通过本研究探索出脂质体介导下 pc DNA 3- BMP3转染兔关节软骨细胞的最佳条件 . 展开更多
关键词 软骨细胞 骨形成蛋白 基因转移 pcdna3-hBMP3 脂质体介导
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重组质粒pcDNA3-β-NGF的构建及其转染小鼠骨髓间充质干细胞生物学活性的研究 被引量：3
16
作者 毕涌 洪娟 +5 位作者 李力群 李晓莉 魏鹏 施镇江 王廷华 张旭 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期2082-2087,共6页
目的:构建人神经生长因子β亚基(β-NGF)真核表达载体,转染荧光小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)并研究其生物学活性。方法:全骨髓贴壁培养法分离、培养和纯化荧光小鼠MSCs,构建真核表达载体pcDNA3-β-NGF,并转染MSCs;免疫组织化学染色检测β... 目的:构建人神经生长因子β亚基(β-NGF)真核表达载体,转染荧光小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)并研究其生物学活性。方法:全骨髓贴壁培养法分离、培养和纯化荧光小鼠MSCs,构建真核表达载体pcDNA3-β-NGF,并转染MSCs;免疫组织化学染色检测β-NGF的表达,观察β-NGF阳性的MSCs对小鼠海马神经元生长的作用。结果:荧光小鼠MSCs可发出明亮的绿色荧光,且荧光不随培养时间延长和传代次数增加而衰减。重组质粒pcDNA3-β-NGF转染MSCs后β-NGF阳性率为(37.12±2.14)%,高于MSCs组[(2.36±0.62)%]和空白对照组[(1.43±0.76)%],差异有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3-β-NGF转染MSCs上清液培养的新生小鼠海马神经元的突起长度[(31±3)μm]较pcDNA3转染MSCs组[(23±4)μm]明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),表明β-NGF基因转染MSCs培养上清液中的产物能促进小鼠海马神经元的突起生长,具有明显的生物学活性。结论:成功构建了pcDNA3-β-NGF真核表达载体,其转染的荧光小鼠MSCs能正确、稳定表达和分泌有生物学活性的β-NGF。 展开更多
关键词 重组质粒 pcdna3-β-NGF 转染 骨髓间充质干细胞 生物学 活性
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pCDNA3-AADC真核表达载体的构建及其在原代培养骨骼肌细胞中的表达 被引量：5
17
作者 刘军 肖颂华 +2 位作者 陶恩祥 邢诒刚 梁秀龄 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期255-257,I001,共4页
目的 将人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶（AADC）基因构建于含CMV启动子的真核表达载体pCD-NA3上,并检测其在原代培养骨骼肌细胞中的表达。方法 采用分子克隆技术将经测序证实的人神经元性AADC基因片段同真核表达载体pCDNA3连接,酶切鉴... 目的 将人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶（AADC）基因构建于含CMV启动子的真核表达载体pCD-NA3上,并检测其在原代培养骨骼肌细胞中的表达。方法 采用分子克隆技术将经测序证实的人神经元性AADC基因片段同真核表达载体pCDNA3连接,酶切鉴定并筛选出正向连接重组体,并采用脂质体转染法将其导入原代培养的骨骼肌细胞,免疫印记检测该基因的表达。结果 酶切证实基因片断正向连接于pCDNA3上,并在原代骨骼肌细胞中获得表达。结论 含人类神经元AADC基因的真核表达重组体可在原代培养的骨骼肌细胞中有效的表达。 展开更多
关键词 pcdna3-AADC真核表达载体 构建 原代培养 骨骼肌细胞 芳香族氨基酸脱羧酶 免疫印记 帕金森病
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脂质体法pcDNA3-ELAC2质粒转染乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231以及前列腺癌细胞Du-145 被引量：2
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作者 宁萍 樊赛军 +3 位作者 焦旸 徐加英 胡旭东 朱巍 《海南医学院学报》 CAS 2010年第2期177-180,共4页
目的:构建稳定、高效表达ELAC2基因的乳腺癌细胞模型MCF-7/ELAC2、MDA-MB-231/ELAC2,以及前列腺癌细胞模型Du-145/ELAC2,为探索ELAC2基因的生物学功能奠定实验基础。方法:将构建pcDNA3-ELAC2的质粒采用脂质体法转染乳腺癌细胞和前列腺... 目的:构建稳定、高效表达ELAC2基因的乳腺癌细胞模型MCF-7/ELAC2、MDA-MB-231/ELAC2,以及前列腺癌细胞模型Du-145/ELAC2,为探索ELAC2基因的生物学功能奠定实验基础。方法:将构建pcDNA3-ELAC2的质粒采用脂质体法转染乳腺癌细胞和前列腺癌细胞,用RT-PCR和WesternBlot分别检测ELAC2基因在细胞中的mRNA表达和蛋白表达。结果:pcDNA3-ELAC2质粒构建成功并顺利导入乳腺癌细胞和前列腺癌细胞中,且检测到ELAC2基因的mRNA和蛋白高表达。结论:构建的pcDNA3-ELAC2重组质粒能够在转染的乳腺癌细胞和前列腺癌细胞中稳定、持续和高效地表达,为进一步研究ELAC2基因的生物学功能提供了理想的实验模型。 展开更多
关键词 脂质体 MCF-7 MDA—MB-231 ELAC2基因 pcdna3 DU-145
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弓形虫和乙型肝炎病毒混合核酸疫苗的研究Ⅰ.pcDNA3-HBsAg-GRA1真核表达质粒的构建及鉴定 被引量：3
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作者 王丹静 舒衡平 +2 位作者 蔡力汀 吴翔 蒋立平 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第2期122-125,共4页
目的　构建 pcDNA3-HBsAg -GRA1真核表达质粒 ,为提高弓形虫DNA疫苗保护性做出新的探索 ,并期望“一 / +-苗两用”。方法　采用PCR分别扩增HBsAg、GRA1;经BclⅠ、EcoRⅠ双酶切HBsAg ;EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切GRA1;BamHⅠ、XhoⅠ双酶切载体 p... 目的　构建 pcDNA3-HBsAg -GRA1真核表达质粒 ,为提高弓形虫DNA疫苗保护性做出新的探索 ,并期望“一 / +-苗两用”。方法　采用PCR分别扩增HBsAg、GRA1;经BclⅠ、EcoRⅠ双酶切HBsAg ;EcoRⅠ、XhoⅠ双酶切GRA1;BamHⅠ、XhoⅠ双酶切载体 pcDNA3 0 ;HBsAg、GRA1、pcDNA3 0双酶切纯化产物与T4DNA连接酶在 2 2℃连接过夜 ,用双酶切及双脱氧末端终止法测序鉴定重组质粒。结果　成功构建pcDNA3-HBsAg -GRA1真核表达质粒。结论　为进一步研究 pcD NA3-HBsAg -GRA1诱导的保护性免疫奠定了基础。 展开更多
关键词 弓形虫 乙型肝炎病毒 混合核酸疫苗 I.pcdna3-HBsAg—GRA1 真核表达质粒 构建 鉴定
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猪囊尾蚴病重组DNA疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的细胞免疫效应 被引量：2
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作者 王媛媛 孙新 +6 位作者 方强 胡守锋 杨小迪 张莺莺 陈兴智 王雪梅 夏惠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 2007年第4期262-265,共4页
目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的小鼠细胞免疫应答。方法将真核重组表达质粒pcDNA3.1-TSO45-4B肌注小鼠,RT-PCR方法扩增出目的条带;ELISA方法检测小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4及IFN... 目的观察基于六钩蚴期的猪囊尾蚴病基因疫苗pcDNA3.1-TSO45-4B在小鼠体内的表达及诱导的小鼠细胞免疫应答。方法将真核重组表达质粒pcDNA3.1-TSO45-4B肌注小鼠,RT-PCR方法扩增出目的条带;ELISA方法检测小鼠血清细胞因子IL-2、IL-4及IFN-γ含量。结果RT-PCR产物为单一条带,大小为456bp,与TSO45-4B大小一致。免疫小鼠第2周细胞因子含量达到较高水平,第4周达到最高水平,第8周开始下降。结论基于猪囊尾蚴保护性抗原TSO45-4B的DNA疫苗能在小鼠体内表达并有效诱导细胞免疫效应。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 pcdna 3 1-TSO45—4B 疫苗 RT—PCR 细胞免疫
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