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题名变异链球菌RgpAc基因敲除突变株的构建
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作者
谢苗苗
吴补领
闫文娟
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机构
南方医科大学南方医院.南方医科大学口腔医学院
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出处
《牙体牙髓牙周病学杂志》
CAS
北大核心
2013年第6期380-383,共4页
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基金
国家自然科学基金项目(30672327
81100747)
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文摘
目的:构建变异链球菌RgpAc基因敲除突变株,为进一步研究变异链球菌RgpAc基因功能做准备。方法:通过PCR扩增RgpAc基因上下游序列,分别插入到pFW5载体的2个多克隆酶切位点中,获得重组质粒。采用同源重组的方式将重组质粒转化到变异链球菌UA159中,获得RgpAc基因敲除突变株。结果:聚合酶链式反应(PCR)显示,突变株RgpAc基因已被载体完全替换。结论:成功构建变异链球菌RgpAc基因敲除突变株。
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关键词
变异链球菌
RgpAc
pfw5载体
同源重组
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Keywords
streptococcus mutans
RgpAc
pfw5 vector
homologous recombination
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分类号
R780.2
[医药卫生—口腔医学]
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题名变异链球菌hit基因缺陷菌株的构建
被引量：2
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作者
赖扬帆
王鹏
乔里
刘中静
叶朝阳
梁燕
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机构
贵州医科大学附属口腔医院牙体牙髓科
贵州医科大学附属医院临床医学研究中心
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出处
《口腔疾病防治》
2021年第12期801-808,共8页
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基金
贵州省科学技术基金项目(ZK[2021]438)
贵州省卫生健康委科学技术基金项目(gzwjkj2019⁃1⁃172)。
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文摘
目的构建hit基因缺陷型变异链球菌株并验证其细胞周期调控的功能。方法从变异链球菌株ATCC25175中提取基因组DNA,采用PCR扩增技术,将hit基因上下游片段克隆到pFW5质粒(壮观霉素抗性)上以构建重组质粒;利用该菌株天然遗传转化机制,将线性化重组质粒转入由其感受刺激多肽(competence stimulating peptide,CSP)刺激产生变异链球菌感受态中,进行同源重组;再通过壮观霉素抗性筛选,结合PCR产物电泳和Sanger法测序,筛选鉴定hit基因缺陷型变异链球菌株;最后在BHI培养基中培养,检测其生长速率。结果从ATCC25175变异链球菌基因组DNA中,克隆hit基因上游约856 bp、下游约519 bp片段到pFW5质粒的两个多克隆位点区间(MCS⁃I和MCS⁃II),经双酶切和PCR测序鉴定,得到重组质粒pFW5_hit_Up_Down。线性化该重组质粒,转入由CSP刺激产生变链感受态中进行同源重组;再通过壮观霉素BHI培养基多次抗性筛选,hit基因片段的PCR产物电泳和Sanger测序筛选出hit基因缺陷变异链球菌株,该缺陷菌株较其亲本菌株生长更快速(P<0.001)。结论获得具有遗传性状hit基因缺陷变异链球菌株,hit基因产物调控变异链球菌生长周期。
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关键词
变异链球菌
hit基因
pfw5质粒
天然遗传转化
同源重组
hit基因缺陷突变菌株
细菌生长
周期调控
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Keywords
Streptococcus mutans
hit gene
pfw5 vector
natural genetic transformation
homologous recom⁃bination
hit⁃deficient mutant strain
cell growth
cell⁃cycle regulation
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分类号
R78
[医药卫生—口腔医学]
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