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非洲猪瘟病毒p72基因的纳米金探针研究 被引量:14
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作者 张鑫宇 孙怀昌 +2 位作者 刘文俊 夏晓莉 成大荣 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期55-58,共4页
对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物素标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针。PCR扩增出... 对22株发表的非洲猪瘟病毒(ASFV)p72基因序列进行比较,找出其中的高保守性区域,各设计、合成1条与保守区域互补的5′生物素标记及3′烷巯基修饰短链寡核苷酸探针,并将烷巯基修饰的探针吸附到纳米金颗粒上,制备纳米金标记探针。PCR扩增出的p72基因中的651 bp保守核酸序列,变性后与上述生物素探针及标记纳米金探针进行杂交,杂交产物加入吸附链霉亲和素的酶标板,利用亲和原理,捕获杂交产物,银染增强法对纳米金标记探针进行信号放大。结果表明:制备的纳米金探针经银染放大后,在酶标板中形成肉眼可见的黑色沉淀,可有效检测扩增出的p72基因,检测核酸浓度达到10 fmol·L-1,可用于ASFV快速诊断。 展开更多
关键词 纳米金探针 非洲猪瘟病毒 p72基因 检测 银染增强
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非洲猪瘟P72基因在Bac to Bac系统中的表达及抗原性鉴定 被引量:2
2
作者 柏丽华 侯绍华 +4 位作者 贾红 袁维峰 郭晓宇 梁欠欠 朱鸿飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第3期19-23,共5页
本研究旨在通过在Bac to Bac系统中表达非洲猪瘟病毒(ASFV)的P72基因,为进一步研究P72基因的结构、功能和免疫学特性奠定基础。本研究从含P72全长基因的菌株pGEX-6p-1-P72中扩增出P72基因全序列1941bp,将扩增的基因连接于pFastBac HTa... 本研究旨在通过在Bac to Bac系统中表达非洲猪瘟病毒(ASFV)的P72基因,为进一步研究P72基因的结构、功能和免疫学特性奠定基础。本研究从含P72全长基因的菌株pGEX-6p-1-P72中扩增出P72基因全序列1941bp,将扩增的基因连接于pFastBac HTa杆状病毒载体中,构建重组质粒pFastBac HTa-P72,转化至感受态DH10Bac中,获得重组杆粒rBac-mid-P72,再将其转染至Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。经Western blotting和夹心ELISA分析,结果表明,P72在昆虫细胞Sf9中获得正确表达,重组P72蛋白可被特异性兔抗ASFV P72血清、P72单抗识别。结果提示,Bac to Bac系统表达的P72重组蛋白特异性强、活性稳定,具有良好的抗原性,为快速诊断ASF提供良好的候选抗原。 展开更多
关键词 非洲猪瘟 p72基因 BAC to BAC 抗原性
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P53基因Arg72Pro单核苷酸多态性与青海地区人群胃癌易感性的相关性分析 被引量:5
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作者 王晓龙 张成武 +3 位作者 刘宁 马晓明 缪巍 孙伟 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期178-181,共4页
目的:探讨p53基因Arg72Pro单核苷酸多态性与青海地区人群胃癌易感性的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测青海地区84例健康对照者和123例胃癌患者中P53基因Arg72Pro的不同基因型及等位基因。结果:青... 目的:探讨p53基因Arg72Pro单核苷酸多态性与青海地区人群胃癌易感性的关系。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测青海地区84例健康对照者和123例胃癌患者中P53基因Arg72Pro的不同基因型及等位基因。结果:青海地区胃癌患者中p53基因Arg/Arg、Pro/Arg、Pro/Pro的频率分别为36.5%、47.2%和16.3%,健康对照组中的频率为21.4%、50%、28.6%,Arg/Arg基因型与在胃癌患者中明显增高,对照组和胃癌组间有明显差异(P<0.05),胃癌组中Arg/Arg基因型与在低分化腺癌及淋巴结转移组中明显增高并且存在相关性(P<0.05)。结论:p53基因Arg72Pro单核苷酸多态性与青海地区人群胃癌易感性存在相关性,携带P53基因Arg72Pro野生型纯合子(Arg/Arg)可能是青海地区发生胃癌、胃低分化腺癌及癌淋巴结转移的危险因素。 展开更多
关键词 胃癌 青海 p53基因Arg72pro 基因多态性
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湖南地区汉族人群p53基因第72位密码子多态性与宫颈鳞癌的相关性 被引量:1
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作者 眭鸿颖 周萍 +1 位作者 江宁 廖革望 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第11期2083-2086,2061,共5页
目的:探讨宫颈组织p53基因第72位密码子的多态性及分析第72位密码子的多态性与湖南地区汉族人群宫颈鳞癌的相关性。方法:采用PCR方法扩增101例正常宫颈和150例宫颈鳞癌石蜡组织p53基因第72位密码子基因,回收目的片段进行测序。采用SPSS ... 目的:探讨宫颈组织p53基因第72位密码子的多态性及分析第72位密码子的多态性与湖南地区汉族人群宫颈鳞癌的相关性。方法:采用PCR方法扩增101例正常宫颈和150例宫颈鳞癌石蜡组织p53基因第72位密码子基因,回收目的片段进行测序。采用SPSS 11.5软件分析p53基因第72位密码子的多态性。结果:p53第72位密码子基因测序结果显示,在宫颈鳞癌组织中Arg/Arg、Pro/Pro、Arg/Pro所占比例分别为40.66%、16.67%、42.67%;在正常宫颈组织中Arg/Arg、Pro/Pro、Arg/Pro所占比例分别为47.53%、7.92%、44.55%。统计学分析结果显示,Arg/Arg和Arg/Pro基因型在宫颈鳞癌和对照组中的表达差异没有统计学意义(P>0.05);Pro/Pro基因型在宫颈鳞癌组中所占比例显著高于正常宫颈组织(P<0.05)。结论:p53基因第72位密码子Pro/pro基因型是湖南地区女性发生宫颈鳞癌易感因素。 展开更多
关键词 p53基因72位密码子 多态性 宫颈癌 宫颈鳞癌
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p53基因Arg72Pro单核苷酸多态性与西北人群胃癌高发风险的相关性研究 被引量:4
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作者 张伟华 刘玉华 +1 位作者 郭凤霞 谢小冬 《卫生职业教育》 2010年第16期100-101,共2页
目的评价p53基因第72密码子单核苷酸多态性(SNP)与中国西北人群胃癌及其不同病理亚型高发风险的相关性。方法 p53基因第72密码子SNP基因分型采用PCR-RFLP法。结果共检测胃癌组胃癌病例385例及健康对照组412人,胃癌组共有弥漫型胃癌患... 目的评价p53基因第72密码子单核苷酸多态性(SNP)与中国西北人群胃癌及其不同病理亚型高发风险的相关性。方法 p53基因第72密码子SNP基因分型采用PCR-RFLP法。结果共检测胃癌组胃癌病例385例及健康对照组412人,胃癌组共有弥漫型胃癌患者305例(79.22%),肠型胃癌患者80例(20.78%)。对照组Pro/Pro、Pro/Arg以及Arg/Arg基因型的频率分别为27.18%、50.49%及22.33%;而胃癌组的分别为21.82%、45.45%和32.73%;以Pro/Pro为指示物,胃癌组尤其是弥漫型胃癌组与对照组的Arg/Arg基因型频率之间具有显著性差异,优势比(OR)分别为1.83(1.24~2.70)和2.25(1.47~3.43)。结论 p53基因第72密码子单核苷酸多态性Arg/Arg基因型与中国西北人群胃癌尤其是弥漫型胃癌的高发风险具有相关性。另外,在胃癌发病率居全国首位的西北地区,弥漫型胃癌的患病人数占显著优势,这不同于在胃癌高发区以肠型胃癌为主的一般规律。 展开更多
关键词 p53基因72密码子 单核苷酸多态性 胃癌 病理亚型
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p53基因第72密码子多态性与青海地区胃癌易感性 被引量:1
6
作者 魏桃 王学红 马臻奇 《青海医学院学报》 CAS 2014年第1期41-45,共5页
目的探讨p53基因第72密码子(Arg72Pro)单核苷酸多态性(SNP)与青海地区胃癌及其胃癌发生部位易感性的关系。方法采用TaqMan实时荧光定量PCR方法,检测胃癌患者及健康对照者外周血标本p53基因Arg72Pro多态性。结果 p53基因Arg72Pro 3种基因... 目的探讨p53基因第72密码子(Arg72Pro)单核苷酸多态性(SNP)与青海地区胃癌及其胃癌发生部位易感性的关系。方法采用TaqMan实时荧光定量PCR方法,检测胃癌患者及健康对照者外周血标本p53基因Arg72Pro多态性。结果 p53基因Arg72Pro 3种基因型Arg/Arg、Pro/Pro、Arg/Pro在胃癌组中的频率分别为21.86%、25.00%、53.14%,在对照组中分别为16.67%、31.94%、51.39%。等位基因Arg和等位基因Pro在胃癌中的频率分别为48.44%、51.56%,在对照组中分别为42.36%、57.64%。两组间基因型频率及等位基因频率分布均无统计学意义(P分别为0.59、0.32),p53基因型分布和胃癌发生的部位亦不具有相关性(P=0.74)。结论p53基因Arg72Pro多态性与青海地区胃癌易感性无明显相关,与胃癌发生部位也无明显相关性。 展开更多
关键词 p53基因72密码子 基因多态性 胃癌 青海地区
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鉴别非洲猪瘟野毒株与基因缺失株(△CD2v/MGF)三重荧光定量PCR检测方法的建立
7
作者 李梅 徐丽媛 +4 位作者 张博 谢振华 李劼 关平原 刘玉梅 《兽医导刊》 2025年第3期54-60,共7页
为建立一种鉴别非洲猪瘟野毒株与基因缺失株(△CD2v/MGF)的TaqMan探针荧光定量PCR检测方法,本研究根据非洲猪瘟病毒的p72、CD2v、MGF360_14L基因序列分别设计PCR引物和TaqMan探针,构建标准品,绘制标准曲线,并进行敏感性、特异性、重复... 为建立一种鉴别非洲猪瘟野毒株与基因缺失株(△CD2v/MGF)的TaqMan探针荧光定量PCR检测方法,本研究根据非洲猪瘟病毒的p72、CD2v、MGF360_14L基因序列分别设计PCR引物和TaqMan探针,构建标准品,绘制标准曲线,并进行敏感性、特异性、重复性试验以及样品检测。结果显示,以p72、CD2v、MGF360_14L重组质粒为标准品绘制的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数(R2)分别为1.000、0.998和0.999;p72、CD2v与MGF360_14L基因的检测下限均为5拷贝/μL;与猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型等常见混感病原不存在交叉反应,特异性强;检测3个基因重复性变异系数均小于2%;与OIE推荐的荧光定量PCR方法对比,检测样品结果符合率100%。综上,该方法检测样品灵敏、特异和准确,可鉴别非洲猪瘟野毒株与CD2v、MGF360_14L基因缺失株,可作为一种快速、灵敏、准确的检测手段应用到实际生产及疫情监测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p72基因 CD2v基因缺失 MGF360_14L基因缺失 荧光定量pCR
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P53基因密码子72多态性与大肠癌易感性的Meta分析
8
作者 王明珠 谭诗云 王军 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2015年第4期428-432,共5页
目的探讨P53基因密码子72多态性与大肠癌风险的相关性。方法全面检索Pub Med、Medline、EMbase、CBM、CNKI、万方和维普等数据库。检索时间从建库至2014年2月,收集P53基因密码子72多态性与大肠癌易感性的病例对照研究。采用Rev Man 5.2... 目的探讨P53基因密码子72多态性与大肠癌风险的相关性。方法全面检索Pub Med、Medline、EMbase、CBM、CNKI、万方和维普等数据库。检索时间从建库至2014年2月,收集P53基因密码子72多态性与大肠癌易感性的病例对照研究。采用Rev Man 5.2软件计算合并效用量OR及其95%CI。结果共纳入25个研究,其中有6 753例患者,8 562例对照者。Meta分析发现,在各遗传模型中,隐性模型PP vs AP+AA中P53基因密码子72多态性与大肠癌发生风险有明显相关性,其余基因模型中P53基因密码子72多态性与大肠癌发生风险无明显相关性。结论在PP vs AP+AA遗传模型中,P53基因密码子72多态性与大肠癌风险性显著相关。 展开更多
关键词 p53基因密码子72 基因多态性 大肠癌 META分析
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NADPH氧化酶p22phox亚基基因His72Tyr与脂联素基因启动子-11391G/A多态性的交互作用以及与大肠癌及其分化程度的关系
9
作者 张超贤 秦咏梅 +1 位作者 郭李柯 李光艳 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期77-84,共8页
【目的】探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶p22phox亚基基因His72Tyr与脂联素基因启动子-11391G/A多态性的交互作用以及与大肠癌及其分化程度的关系。【方法】选择我院2009年7月至2014年12月收治的大肠癌患者668例,分为高分化... 【目的】探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶p22phox亚基基因His72Tyr与脂联素基因启动子-11391G/A多态性的交互作用以及与大肠癌及其分化程度的关系。【方法】选择我院2009年7月至2014年12月收治的大肠癌患者668例,分为高分化组、中分化组、低分化组、未分化组各162例,以162例健康体检者作为对照组,各组在年龄、性别、民族、籍贯和生活习惯方面无显著性差异,以上述各组患者的外周血白细胞为样本,利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术分析了NADPH氧化酶p22phox亚基基因His72Tyr和脂联素基因启动子-11391G/A多态性。【结果】His72Tyr(TT)基因型和-11391G/A(AA)基因型频率分布分别为50.62%和50.00%(高分化组)、64.20%和64.81%(中分化组)、69.75%和69.75%(低分化组)、76.54%和77.16%(未分化组)及22.84%和22.84%(健康对照组),上述基因型频率在高分化组、中分化组、低分化组、未分化组组与对照组之间有统计学差异(P均<0.01)。His72Tyr(TT)基因型者患大肠癌的风险显著增加(ORa高=3.46;ORa中=6.06;ORa低=7.79;ORa未=11.02)。-11391G/A(AA)基因型者患大肠癌的风险也显著增加(ORa高=3.38;ORa中=6.22;ORa低=7.791;ORa未=11.41)。基因突变的协同分析发现His72Tyr(TT)/-11391G/A(AA)基因型者在高分化组、中分化组、低分化组、未分化组与对照组中的分布频率分别为39.51%、54.32%、59.88、67.90%和11.73%,经χ2检验有显著性差异(P<0.01)。His72Tyr(TT)/-11391G/A(AA)基因型者患大肠癌的风险显著增加(ORa高=5.72;ORa中=12.09;ORa低=16.55;ORa未=26.93)。His72Tyr(TT)和-11391G/A(AA)基因型之间存在超相乘模型的交互作用(高分化至未分化组OR1*2均大于OR1×OR2)。【结论】NADPH氧化酶p22phox亚基基因His72Tyr(TT)和脂联素基因启动子-11391G/A(AA)基因型均是大肠癌的易患因素,基因多态性的交互作用增加了大肠癌的发病风险。 展开更多
关键词 大肠癌 烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADpH)氧化酶p22phox亚基基因His72Tyr 脂联素基因启动子-11391G/A 多态现象
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p53基因第72位密码子多态性与肺癌临床病理特征及预后关系的Meta分析
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作者 徐雄 李丹 +1 位作者 徐斌 李翀 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2014年第8期711-717,共7页
目的系统评价p53基因第72位密码子的多态性与肺癌临床病理特征及预后的关系。方法计算机检索PubMed、中国知网、维普、万方等数据库,收集有关p53基因第72位密码子多态性与肺癌临床病理特征及预后关系的研究。检索时限均从各文献数据库... 目的系统评价p53基因第72位密码子的多态性与肺癌临床病理特征及预后的关系。方法计算机检索PubMed、中国知网、维普、万方等数据库,收集有关p53基因第72位密码子多态性与肺癌临床病理特征及预后关系的研究。检索时限均从各文献数据库建库时间至2013年12月20日。由2名研究者按照纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料和质量评价后,采用RevMan5.0软件进行Meta分析,计算比值比(OR)及其95%可信区间(CI)并行敏感性分析和发表偏倚评估。结果纳入11项研究,共2730例患者。Meta分析结果显示,男性患者中p53基因第72位密码子Arg/Arg或Arg/Pro表型多见,与女性患者相比,差异有统计学意义(OR=1.58,95%CI:1.04~2.40,P=0.03)。p53基因第72位密码子Pro/Pro表型在非鳞癌患者中居多,与鳞癌患者相比,差异有统计学意义(OR=0.69,95%CI:0.49~0.97,P=0.03)。而p53基因第72位密码子多态性与肺癌患者的吸烟史、临床分期、3年生存率无明显相关(P〉0.05)。结论 p53基因第72位密码子的多态性与肺癌患者的预后无明显相关。由于纳入研究的质量和数量有限,降低了本系统评价的证据强度,本系统评价的结论仅供临床研究与实践参考。 展开更多
关键词 p53基因72位密码子多态性 肺癌 预后 META分析 系统评价
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p53基因密码子72多态性与口腔癌易感性的荟萃分析
11
作者 李岚 马健波 +3 位作者 罗锦 方静怡 张睿 朱正鹏 《临床与病理杂志》 CAS 2022年第7期1727-1736,共10页
目的:运用荟萃分析方法研究肿瘤抑制因子p53基因密码子72位点多态性与口腔癌易感性的发生风险。方法:检索维普(VIP)、中国知网(CNKI)、万方、中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、Embase、WebofScience中有关p53基因密码子72位点多态... 目的:运用荟萃分析方法研究肿瘤抑制因子p53基因密码子72位点多态性与口腔癌易感性的发生风险。方法:检索维普(VIP)、中国知网(CNKI)、万方、中国生物医学文献数据库(CBM)、PubMed、Embase、WebofScience中有关p53基因密码子72位点多态性与口腔癌易感性关联研究的文献,以比值比(odds ratio,OR)和95%CI为效应指标,应用STATA 14软件和RevMan5进行荟萃分析,并对发表偏倚及敏感性分析进行检验。结果:纳入16个病例对照研究,口腔癌病例组共计2317例,正常对照组共计2933例。荟萃分析结果显示:在总人群中,p53基因密码子72位点基因多态性与口腔癌风险之间没有显著关联(Pro vs Arg OR=1.03,95%CI:0.887~1.195;Arg Pro+ProPro vs ArgArg OR=0.957,95%CI:0.847~1.081;ProPro vs ArgArg+ArgPro OR=1.082,95%CI:0.835~1.401;ProProvsArg ArgOR=1.059,95%CI:0.783~1.433;ArgProvsArg ArgOR=0.946,95%CI:0.831~1.076;ArgArg+ProProvsArgProOR=0.943,95%CI:0.842~1.055)。针对种族和对照人群来源设计的亚组分析结果也显示p53基因密码子72多态性与口腔癌风险之间没有显著相关性。结论:p53基因密码子72位点多态性与口腔癌的易感性没有直接关联,p53基因多态性可能不是口腔癌易感性的独立影响因素。 展开更多
关键词 口腔癌 p53基因密码子72 多态性 荟萃分析
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p53基因第72密码子多态性与肿瘤关系的研究 被引量:1
12
作者 魏桃 王学红 马臻奇 《医学信息(医学与计算机应用)》 2014年第14期643-643,644,共2页
p53基因是迄今发现与人类肿瘤发生相关性最高的基因之一,具有野生型和突变型两种。野生型基因在保持基因的完整性和抑制细胞恶变的过程中起着重要作用,当野生型基因发生突变时具有促肿瘤作用,大约50%的人类癌症中存在着p53基因的突变。 ... p53基因是迄今发现与人类肿瘤发生相关性最高的基因之一,具有野生型和突变型两种。野生型基因在保持基因的完整性和抑制细胞恶变的过程中起着重要作用,当野生型基因发生突变时具有促肿瘤作用,大约50%的人类癌症中存在着p53基因的突变。 p53基因具有多态性,其第72位密码子的CGC/CCC是一个常见的多态位点,研究发现p53基因第72位密码子Arg/Pro多态与多种恶性肿瘤的遗传易感性有关。 展开更多
关键词 p53基因72密码子 多态性 肿瘤
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非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:15
13
作者 黄萍 肖家勇 +6 位作者 欧阳振宇 陈盼 白雪 朱中武 孟芳 吴愈柏 唐连飞 《中国动物检疫》 CAS 2010年第11期28-30,共3页
根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)P72基因序列,设计了一对特异性引物和探针,使用含有选定检测序列的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立了非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法。结果表明:该方法的敏感性可达100个拷贝值,具有良好的... 根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)P72基因序列,设计了一对特异性引物和探针,使用含有选定检测序列的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立了非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法。结果表明:该方法的敏感性可达100个拷贝值,具有良好的敏感性和重复性。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p72基因 实时荧光定量pCR 质粒
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非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:3
14
作者 黄萍 肖家勇 +6 位作者 欧阳振宇 陈盼 白雪 朱中武 孟芳 吴愈柏 唐连飞 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第3期97-99,共3页
为了研究检测非洲猪瘟病毒的方法,试验采用GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)P72基因序列设计了1对特异性引物和探针,并使用含有选定检测序列的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立了非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法。结果表明:该方法... 为了研究检测非洲猪瘟病毒的方法,试验采用GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)P72基因序列设计了1对特异性引物和探针,并使用含有选定检测序列的重组质粒标准品绘制标准曲线,建立了非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法。结果表明:该方法的敏感性可达100个拷贝值,具有良好的敏感性和重复性。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p72基因 实时荧光定量pCR 质粒
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非洲猪瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:13
15
作者 吴亚楠 朱潇静 +4 位作者 周博伦 张博 刘晴晴 郑兰兰 魏战勇 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期888-891,896,共5页
建立一种TaqMan荧光定量PCR检测方法,用于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)保守结构蛋白P72基因的检测。参照GenBank登录的ASFV P72相关基因序列,设计合成1对特异性引物与1个TaqMan探针,通过对反应条件和反应体系进行优化... 建立一种TaqMan荧光定量PCR检测方法,用于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)保守结构蛋白P72基因的检测。参照GenBank登录的ASFV P72相关基因序列,设计合成1对特异性引物与1个TaqMan探针,通过对反应条件和反应体系进行优化,建立了快速检测ASFV的TaqMan实时荧光定量PCR方法,对该方法的灵敏性、特异性与重复性进行了验证。结果显示,该方法能有效扩增1.0×10^0~1.0×10^9拷贝/μL ASFV-P72标准质粒,建立的标准曲线呈现良好的线性关系;检测灵敏度为1.0×10^0拷贝;对猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒等病原不发生交叉反应;重复性试验结果显示变异系数(CV)小于1%。结果表明,本试验建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性,可用于临床样本中ASFV的检测,从而更好地对ASF疫情进行监测和诊断。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p72基因 TaqMan实时荧光定量pCR
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检测非洲猪瘟病毒快速EIS-qPCR方法的建立 被引量:1
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作者 金帅帅 孙亚娟 +4 位作者 刘喜东 金辉 赵红日 尹锐 李影 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1099-1106,共8页
为满足对非洲猪瘟病毒(ASFV)的早期、超快速、精准基因检测的市场需求,本研究根据ASFV的p72基因保守区和猪内源性内标(endogenous internal standard,EIS)cytb基因序列设计双重qPCR的引物和探针,并在反应体系中加入UNG酶防污染系统,建... 为满足对非洲猪瘟病毒(ASFV)的早期、超快速、精准基因检测的市场需求,本研究根据ASFV的p72基因保守区和猪内源性内标(endogenous internal standard,EIS)cytb基因序列设计双重qPCR的引物和探针,并在反应体系中加入UNG酶防污染系统,建立了用于检测ASFV的快速、高灵敏EIS-qPCR方法。结果显示,该方法时间短,可在30 min内完成ASFV的qPCR检测;灵敏度高,最低检测限为4.12拷贝/μL;特异性强,对ASFV p72基因呈现特异性扩增,对猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)均无扩增;重复性好,变异系数(Cv)小于2%;防污染能力强,可有效消除低剂量气溶胶污染产生的假阳性扩增。146例临床样本的检测结果与商业化ASFV检测试剂盒检测结果比较,符合率为100%。本研究建立的EIS-qPCR技术与现有同类技术相比,具有检测更快速、灵敏度更高等特点,适合ASFV感染早期的快速诊断,可为非洲猪瘟的监测和疫情的精准防控提供可靠的技术支撑。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 荧光定量pCR p72基因
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非洲猪瘟病毒锁核酸探针荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 李艳 郭怡德 +9 位作者 勾红潮 卞志标 孙铭飞 蔡汝健 宋帅 蒋智勇 楚品品 徐民生 杨东霞 李春玲 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期208-212,230,共6页
根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)P72基因核苷酸序列设计特异性引物和锁核酸(locked nucleic acid,LNA)-TaqMan探针,建立了基于P72基因的LNA-TaqMan探针的ASFV荧光定量PCR方法。结果显示,所建立的LNA-TaqMan探针荧光定... 根据非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)P72基因核苷酸序列设计特异性引物和锁核酸(locked nucleic acid,LNA)-TaqMan探针,建立了基于P72基因的LNA-TaqMan探针的ASFV荧光定量PCR方法。结果显示,所建立的LNA-TaqMan探针荧光定量PCR方法具有较高的灵敏度,最低检测限为3.9拷贝/μL,且与猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒及猪圆环病毒2型等多种病原不存在交叉反应;该方法的重复性良好,批内和批间变异系数均小于1%;56份临床样品的检测结果与OIE推荐的qPCR方法检测结果一致,符合率为100%。结果表明,本试验所建立的ASFV LNA-TaqMan探针荧光定量PCR方法敏感性、特异性和重复性良好,为ASFV检测提供了一种新的技术选择。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p72基因 LNA-TaqMan探针荧光定量pCR
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非洲猪瘟病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:16
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作者 贾云飞 赵福杰 +3 位作者 朱静静 王超群 吴亚楠 魏战勇 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期69-73,80,共6页
为了建立非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)快速、敏感的检测方法,根据GenBank中登录的中国流行株ASFV-SY18的P 72基因,建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,并对所建立方法的灵敏性、特异性与重复性进行了验证。结... 为了建立非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)快速、敏感的检测方法,根据GenBank中登录的中国流行株ASFV-SY18的P 72基因,建立了SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,并对所建立方法的灵敏性、特异性与重复性进行了验证。结果显示,所建立的非洲猪瘟病毒SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法能有效扩增1.0~1.0×109 copies·μL-1的ASFV标准质粒,建立的标准曲线呈现良好的线性关系;检测灵敏度为1.0 copies·μL-1;对猪流行性腹泻病毒、猪δ冠状病毒、高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病毒等病原不发生交叉反应,具有很好的特异性;重复性试验结果显示变异系数小于1%,重复性良好。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p 72基因 实时荧光定量pCR 检测
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p53基因第72密码子多态性与部分中国人瘢痕疙瘩关系的研究 被引量:8
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作者 严笠 吕晓岩 +4 位作者 王春梅 曹蕊 尹艳花 贾春实 庄强 《中华整形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期428-430,共3页
目的 探讨p53基因第72密码子多态性分布与部分中国人瘢痕疙瘩易发性的关系。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态方法,检测60例瘢痕疙瘩组织和102例非瘢痕体质健康对照血液标本的p53基因第72密码子的基因型分布。结果 瘢痕疙瘩... 目的 探讨p53基因第72密码子多态性分布与部分中国人瘢痕疙瘩易发性的关系。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态方法,检测60例瘢痕疙瘩组织和102例非瘢痕体质健康对照血液标本的p53基因第72密码子的基因型分布。结果 瘢痕疙瘩与非瘢痕体质患者血液标本p53基因第72密码子多态性分布无统计学意义(χ^2=2.910,P=0.233);两组Arg和Pro等位基因分布频率也无统计学意义(χ^2=0.882,P=0.348);中、日两国健康人群和瘢痕疙瘩人群的p53基因第72密码子多态性分布无统计学意义(χ^2=3.942,P=0.139;χ^2=3.260,P=0.196);对于肩背部瘢痕疙瘩,与Pro/Pro基因型相比,Arg/Arg基因型具有统计学意义(P〈0.01)。结论 与非瘢痕体质患者相比,p53基因codon72部位多态性分布与中国部分人群瘢痕疙瘩发生无明显关系;但与其它基因型比较,Arg/Arg基因型可能对肩背部瘢痕疙瘩的形成具有影响,尚需进一步的研究调查p53基因codon72的多态性与不同部位瘢痕疙瘩发生的关系。 展开更多
关键词 瘢痕疙瘩 p53基因72密码子 限制性片段长度多态性分析 聚合酶链反应
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非洲猪瘟病毒LNA引物PCR检测方法的建立及优化 被引量:1
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作者 李艳 张煜轩 +8 位作者 楚品品 蒋智勇 席振军 蔡汝健 勾红潮 张昆丽 宋帅 卞志标 李春玲 《中国农学通报》 2021年第29期107-113,共7页
为了建立一种便捷、快速且精准的非洲猪瘟病毒的检测方法,本研究根据GenBank中公布的ASFV p72基因序列,设计了一对特异性引物,并对引物中的适当碱基进行锁核酸修饰,通过优化退火温度、引物浓度,建立了非洲猪瘟病毒的锁核酸修饰引物PCR... 为了建立一种便捷、快速且精准的非洲猪瘟病毒的检测方法,本研究根据GenBank中公布的ASFV p72基因序列,设计了一对特异性引物,并对引物中的适当碱基进行锁核酸修饰,通过优化退火温度、引物浓度,建立了非洲猪瘟病毒的锁核酸修饰引物PCR检测方法。结果表明,该方法具有良好的敏感性和特异性,检测灵敏度可以达到3×101copies/uL,比常规引物PCR方法的灵敏度提高了100倍,比real-time PCR方法的灵敏度提高了10倍,对猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒等病原基因组均无扩增,特异性良好。72份临床样品的检测结果与OIE推荐的qPCR方法检测结果一致,符合率为100%。本研究成功建立了非洲猪瘟病毒的LNA引物PCR检测方法,方法的特异性强、敏感性高,操作简单,为非洲猪瘟病毒的检测提供了一种新的、更加敏感的检测技术。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 p72基因 LNA引物 pCR检测方法
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