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The phosphoethanolamine transferase PetL of Pasteurella multocida is associated with colistin resistance
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作者 Jie Yang Lin Lin +6 位作者 Haixin Bi Congcong Shi Qingjie Lv Lin Hua Huanchun Chen Bin Wu Zhong Peng 《Animal Diseases》 2025年第1期33-42,共10页
The rapid emergence and spread of colistin-resistant gram-negative bacteria has raised worldwide public health concerns,and phosphoethanolamine(PEtn)transferase modification-mediated colistin resistance has been widel... The rapid emergence and spread of colistin-resistant gram-negative bacteria has raised worldwide public health concerns,and phosphoethanolamine(PEtn)transferase modification-mediated colistin resistance has been widely documented in multiple gram-negative bacterial species.However,whether such a mechanism exists in the zoonotic pathogen Pasteurella multocida is still unknown.Recently,a novel PEtn transferase,PetL,was identified in P.multo-cida,but whether it is associated with colistin resistance remains to be elucidated.In this study,we found that PetL in P.multocida(PetL^(PM))exhibited structural characteristics similar to those of the mobile-colistin-resistant(MCR)protein and the PEtn transferase characterized in Neisseria meningitidis.The transformation of petLPM into E.coli or K.pneumoniae changed the phenotype of several tested strains from colistin sensitive to colistin resistant.Deletion of this gene decreased the colistin minimum inhibitory concentration(MIC)of P.multocida by 64-fold.Our extensive analysis by MALDI-TOF-MS demonstrated that PetLPM participated in the modification of bacterial lipopolysaccharide(LPS)-lipid A.Deletion of petL^(PM) led to an increase in membrane charge but a decrease in cell-surface hydrophobicity and cell permeability in P.multocida.The present study is the first to report the presence of PEtn transferase-mediated colistin resistance in the zoonotic pathogen P.multocida. 展开更多
关键词 Antimicrobial resistance COLISTIN Pasteurella multocida Phosphoethanolamine transferase Lipid A
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Field Assessment of the Level of Protection Conferred by a Newly Prepared Combined Inactivated Vaccine against E. coli and P. multocida in Rabbit in Egypt
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作者 Eman M. El Rawy Wafaa S. Abd El-Moneim +5 位作者 Fatma M. Gad Fatma F. Ibrahim Fatma El Zahraa Gamal Abeer Mwafy Manar F. Seioudy Selim S. Salama 《World Journal of Vaccines》 CAS 2024年第2期43-56,共14页
Pasteurellosis is the most prevalent, extremely contagious bacterial disease among domestic rabbits and is considered the leading cause of deaths in rabbits, resulting in enormous economic losses to the rabbit industr... Pasteurellosis is the most prevalent, extremely contagious bacterial disease among domestic rabbits and is considered the leading cause of deaths in rabbits, resulting in enormous economic losses to the rabbit industry. Screening for bacterial agents causing mortalities in rabbits revealed the presence of Enterobacteriacae species in approximately 42% of studied cases, with E. coli the most commonly isolated organism. The present study was designed to evaluate the immune response of rabbits vaccinated with a locally prepared, combined inactivated vaccine of Pasteurella multocida and E. coli, adjuvanated with Montanide ISA70. A total of 370 rabbits, aged 2 - 3 weeks, were divided into four groups: (G1) vaccinated with a polyvalent P. multocida vaccine, (G2) vaccinated with a polyvalent E. coli vaccine, (G3) vaccinated with a combined inactivated Montanide ISA70 vaccine of P. multocida and E. coli, and (G4) kept as a non-vaccinated control group. All rabbits received two doses of 0.5 ml of the prepared vaccines, administered one month apart, and were then challenged with virulent strains of P. multocida and E. coli three weeks after the second vaccination. The prepared vaccines were evaluated by determining humoral immunity using indirect haemagglutination (IHA) test and ELISA. The potency of the vaccines was assessed through challenge and determination of LD50. Experimental findings on the prepared polyvalent combined inactivated P. multocida and E. coli vaccine indicated that it is a potent vaccine, producing the highest antibody titers and a 90% protection rate against challenges with virulent strains of P. multocida type A, D2, and E. coli types O157, O151 and O125. Thus, this vaccine is promising in addressing both P. multocida and E. coli problems in rabbits, farms, providing significant protection, and we recommend its commercial production to help rabbit producers control these two major bacterial infections. 展开更多
关键词 P. multocida E. coli Vaccine ELISA Challenge Test Rabbit Protection
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兔源A型多杀性巴氏杆菌Pm3和Pm6的致病性和基因组特征分析
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作者 王锦祥 苏进博 +5 位作者 付环茹 孙世坤 高承芳 陈冬金 桑雷 谢喜平 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第5期2340-2352,共13页
旨在探究多杀性巴氏杆菌致病性的分子基础。本试验测定了兔源A型多杀性巴氏杆菌Pm3株和Pm6株的致病性,并进一步对其进行全基因组测序和比较基因组学分析。攻毒试验结果显示,Pm3和Pm6滴鼻攻毒后不仅能使试验兔产生严重的化脓性胸膜肺炎,... 旨在探究多杀性巴氏杆菌致病性的分子基础。本试验测定了兔源A型多杀性巴氏杆菌Pm3株和Pm6株的致病性,并进一步对其进行全基因组测序和比较基因组学分析。攻毒试验结果显示,Pm3和Pm6滴鼻攻毒后不仅能使试验兔产生严重的化脓性胸膜肺炎,还能导致试验兔的高死亡率。比较基因组学分析结果显示,Pm3和Pm6的基因组都比兔源低毒力多杀性巴氏杆菌s4株和AH09株的大。与s4和AH09相比,在Pm3和Pm6的基因组中鉴定到约120个具有重要生物学功能的特有基因,且有约100个这些特有基因也存在于兔源强毒力多杀性巴氏杆菌的基因组中。此外,不同动物源多杀性巴氏杆菌基因L3型脂多糖核心寡糖外核合成酶基因natC和gatF的序列存在多态性,但兔源菌株(除SD11、CIRMBP-0873和CIRMBP-0884外)的这两个基因序列却完全一致,表现出一定的宿主特异性。Pm3和Pm6均为强毒力菌株。在Pm3和Pm6基因组中鉴定到的存在于兔源强毒力菌株基因组中但不存在于兔源低毒力菌株基因组中的基因可能在Pm3和Pm6的致病过程中发挥重要作用。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 致病性 全基因组测序 比较基因组学
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1株山羊源D型多杀性巴氏杆菌的全基因组测序及生物学特性分析
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作者 张振兴 陈珍 +5 位作者 陈巧玲 程逸文 陈思 满初日嘎 杜丽 王凤阳 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期167-176,共10页
多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是一种常见致病菌,可以引起多种禽类、家畜、野生动物,甚至人类的感染。本实验室先前从患病海南黑山羊组织中分离出1株D型Pm。为进一步了解该菌株的基因组特征,明确其毒力相关基因和遗传进化... 多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是一种常见致病菌,可以引起多种禽类、家畜、野生动物,甚至人类的感染。本实验室先前从患病海南黑山羊组织中分离出1株D型Pm。为进一步了解该菌株的基因组特征,明确其毒力相关基因和遗传进化关系。为Pm感染疾病的预防和临床治疗提供参考。将该菌株命名为“Pm HN01”株,使用SMRT技术和Illumina测序技术相结合的方法进行全基因组测序。使用生物信息学、PCR鉴定和系统进化树等方法对Pm HN01株的基因组特征、毒力相关基因和遗传进化关系进行分析。将测序后的基因组信息提交至NCBI,获得登录号CP037861。Pm HN01株与其他巴氏杆菌具有相似的基因组谱,大小为2349898 bp,GC含量为40.25%,预测到2401个编码基因。在GO、KEGG和COG分析中分别有1651、2227和1912个基因注释。在PHI、VFDB和T3SS分析中,分别有121、43和84个基因注释。此外,选取23个毒力基因引物对其进行PCR鉴定,结果发现Pm HN01株含有exbB、exbD、tbpA、toxA、fimA等12个毒力基因,同北京和新疆等国内菌株的进化关系最近,同美国、瑞士、丹麦等国外菌株的进化关系最远。本研究首次获得了山羊源D型Pm HN01株的完整基因组信息,为Pm的基因组数据库增添了材料,丰富了Pm的宿主类型。进一步完善了Pm HN01株的毒力基因和系统进化信息,为后续Pm的流行区域和致病性研究提供了理论参考。 展开更多
关键词 D型多杀性巴氏杆菌 基因组测序 毒力相关基因 系统进化树分析
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4株兔源荚膜血清F型多杀性巴氏杆菌的生物学特性
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作者 王彦红 胡沁楠 +4 位作者 杨跃飞 周雯 赵一宁 陈新延 候照峰 《畜牧与兽医》 北大核心 2025年第11期69-75,共7页
为了研究兔源多杀性巴氏杆菌的生物学特性,对2013—2021年期间4例送检的病死兔肺脏组织分离细菌,用PCR检测多杀性巴氏杆菌特异性基因kmt、荚膜血清型、多位点序列分型(MLST)、18种毒力基因,并对分离菌进行致病性和药物敏感试验。结果:... 为了研究兔源多杀性巴氏杆菌的生物学特性,对2013—2021年期间4例送检的病死兔肺脏组织分离细菌,用PCR检测多杀性巴氏杆菌特异性基因kmt、荚膜血清型、多位点序列分型(MLST)、18种毒力基因,并对分离菌进行致病性和药物敏感试验。结果:从兔肺组织分离出4株细菌,分别命名为P1、P2、P3和P4;经PCR鉴定,4株分离菌kmt基因阳性,荚膜血清型均为F型;MLST分型显示4株分离菌的序列型(ST)分别为3、74、74和67;4株菌均含有毒力基因Hgb A和RpoB,均无Tox A、PfhA、Tbp A和P6;致病性试验显示4株分离菌株均导致小鼠和SPF鸡的死亡;药敏结果表明4株分离菌对头孢哌酮-舒巴坦、头孢曲松和诺氟沙星等药物敏感,而部分菌株对多西环素、氟苯尼考等药物耐药。研究表明,4株分离株均为F型多杀性巴氏杆菌,隶属不同ST型,具有明显的致病性。本研究为兔巴氏杆菌病的防控提供了科学依据。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 多位点序列分型 毒力基因
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多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)保护性抗原片段的筛选及免疫效果的评估 被引量:2
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作者 庞碧寒 姚文敬 +4 位作者 王怡涤 关丽君 薛云 张俊峰 赵战勤 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第3期278-285,共8页
为筛选产毒多杀性巴氏杆菌(T+Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)的结构和功能区将其分为N端3个片段(rPMT-N1和rPMT-N2a、rPMT-N2b)和C端5个片段(rPMT-C3、rPMTC4、rPMT-C5、rPMT-C6及rPMT-C7),利用原核... 为筛选产毒多杀性巴氏杆菌(T+Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)的结构和功能区将其分为N端3个片段(rPMT-N1和rPMT-N2a、rPMT-N2b)和C端5个片段(rPMT-C3、rPMTC4、rPMT-C5、rPMT-C6及rPMT-C7),利用原核表达系统表达这8个片段,采用His6标签蛋白纯化试剂盒纯化各重组蛋白,经SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达及纯化效果后,通过Image J软件计算各重组蛋白的表达量,进一步采用western blot检测各重组蛋白的反应原性。SDS-PAGE结果显示,分别获得了34 ku、62 ku、67 ku、70 ku、64 ku、102 ku、36 ku、60 ku的重组蛋白,其中rPMT-N2a、rPMT-N2b、rPMT-C5和rPMT-C7以可溶性和包涵体两种形式表达,另外4个重组蛋白均以包涵体形式表达,纯化后在上述各位置处分别出现较单一的目的条带,且各蛋白的表达量占菌体总蛋白的8.44%~35.77%。Western blot结果显示,8个重组蛋白均可与猪源T+Pm TPM-6株的猪阳性血清发生特异性反应,均具有一定的反应原性,其中rPMT-N1、rPMT-N2a、rPMT-N2b、rPMT-C5的反应原性较强。基于此,采用ISA201佐剂制备这4种重组蛋白的亚单位疫苗,间隔20 d对小鼠经皮下注射免疫(50μg/只)两次,观察并记录各组小鼠的临床症状及死亡数,评估该疫苗对小鼠的安全性。首免后35 d(二免后14 d)对各组小鼠分别以10 LD_(100)和30 LD_(100)的天然粗提PMT(cPMT)对小鼠攻毒,评估4种亚单位疫苗(rPMT-N1、rPMT-N2a、rPMT-N2b及rPMT-C5)对小鼠的免疫保护效力。安全性试验结果显示,免疫后21 d rPMT-N2a组小鼠的死亡率为2/24,rPMT-N2b组小鼠的死亡率为6/24,其余各组小鼠均无异常。ELISA结果显示,二免后各疫苗组小鼠的几何平均抗体效价分别升至1:1552、1:18820、1:1351和1:6208,表明各重组蛋白均能诱导免疫小鼠产生良好的体液免疫反应。攻毒结果显示,对照组小鼠在两种剂量的cPMT攻毒后均出现相应症状并均在24h内全部死亡,部分亚单位疫苗免疫组小鼠也出现不同程度的发病及死亡,但发病及死亡时间较对照组延长。以10LD_(100)的cPMT攻毒后,上述各疫苗对小鼠的免疫保护率分别为87.5%、100%、37.5%和100%;以30 LD_(100)的cPMT攻毒后,各疫苗对小鼠的免疫保护率分别为50%、85.7%、0和75%。本研究表明,rPMT-N2a、rPMT-C5具有作为T+Pm亚单位疫苗优势保护性抗原的潜力,该结果为后期T+Pm亚单位疫苗的研发奠定基础。 展开更多
关键词 产毒多杀性巴氏杆菌 toxA 多杀性巴氏杆菌毒素 重组蛋白 亚单位疫苗
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牛源溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定 被引量:1
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作者 于凡淞 赵梦莹 +4 位作者 熊丽雯 郭爱珍 陈颖钰 胡长敏 陈建国 《微生物学通报》 北大核心 2025年第3期1281-1294,共14页
【背景】牛呼吸疾病综合征(bovine respiratory disease complex,BRDC)是由多病原和多因素互作引起的以支气管肺炎为主的牛呼吸系统疾病。引起BRDC的细菌性病原主要有溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)、多杀性巴氏杆菌(Pasteu... 【背景】牛呼吸疾病综合征(bovine respiratory disease complex,BRDC)是由多病原和多因素互作引起的以支气管肺炎为主的牛呼吸系统疾病。引起BRDC的细菌性病原主要有溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)、睡觉嗜组织菌(Histophilus somni,Hs)等。【目的】了解我国引起BRDC相关的Mh、Pm分布和血清型种类。【方法】自2022年7月到2024年1月间,通过PCR技术对来自河南、湖南、湖北、浙江、安徽、山东、宁夏、甘肃、贵州、黑龙江、内蒙古等16个地区的54个牧场共698头牛的698份样本(鼻拭子359份、气管拭子321份,肺脏组织18份)进行溶血性曼氏杆菌及多杀性巴氏杆菌的检测,对阳性样品进行细菌分离和血清型鉴定。【结果】溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌检测为阳性的样本量分别为15/698和72/698,阳性检出率分别为2.15%(95%CI:1.2%-3.5%)及10.32%(95%CI:8.2%-12.8%),二者混合感染有5/698份,阳性率为0.72%(95%CI:0.2%-1.7%)。PCR检测后进一步对阳性样品进行细菌分离,共获得8株溶血性曼氏杆菌,其中A1型1株,A2型3株,A6型4株,多位点序列分型(multi locus sequence typing,MLST)结果为ST1型5株(5/8),均为血清型A1和A6型;ST2型3株(3/8),为血清型A2型;21株多杀性巴氏杆菌,其中A:L3型17株,A:L6型4株,MLST分型结果为ST1型和ST7型,ST1型17株(17/21),均为A:L3型;ST7型4株(4/21)为A:L6型。【结论】通过对部分地区具有呼吸道症状的病牛进行细菌分离鉴定,对牛呼吸疾病综合征主要致病的细菌性病原进行分型以及生物学特性分析,确定了病原流行的优势血清型、毒力基因和耐药基因等,为相关疫苗的制备提供了基础,为防控该病提供了理论依据。 展开更多
关键词 牛呼吸疾病综合征 溶血性曼氏杆菌 多杀性巴氏杆菌 细菌分离 PCR鉴定
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牛多杀性巴氏杆菌OmpA抗原间接ELISA方法的建立 被引量:1
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作者 王润清 孙航 +4 位作者 孙雨 李歌 李琦 侯晓林 阚威 《中国动物检疫》 2025年第2期87-94,共8页
为建立一种快速检测牛多杀性巴氏杆菌的方法,分析多杀性巴氏杆菌OmpA序列信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pET32a载体上,构建相应的重组质粒pET32a-OmpA;将重组质粒转化... 为建立一种快速检测牛多杀性巴氏杆菌的方法,分析多杀性巴氏杆菌OmpA序列信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pET32a载体上,构建相应的重组质粒pET32a-OmpA;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞株中,经扩大培养成功诱导表达出了纯度较高的包涵体OmpA蛋白,将OmpA重组蛋白作为诊断抗原,经反应条件优化建立了间接ELISA抗体检测方法。经试验验证,该方法对其他相关的牛类病原无交叉反应,阳性血清稀释度为1:256时仍呈阳性,组内与组间变异系数均低于10%。结果表明,该方法特异性与敏感性较好,且具有良好的重复性与稳定性。本研究为进一步开发成熟的牛多杀性巴氏杆菌抗体检测试剂盒奠定基础。 展开更多
关键词 牛多杀性巴氏杆菌 OmpA蛋白 原核表达 蛋白纯化 ELISA
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1株牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及全基因组测序分析 被引量:1
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作者 王亚平 王世兴 +2 位作者 樊曦雯 孔晓佳 王真 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第4期668-677,共10页
采集一病牛鼻咽拭子和组织病料,并进行细菌分离纯化、16S rRNA基因扩增、荚膜血清型分型、毒力基因检测和分离株全基因组测序。结果显示,经细菌分离纯化、生化试验及PCR鉴定发现1株A型多杀性巴氏杆菌菌株,命名为“Pm WZ01”株;毒力基因... 采集一病牛鼻咽拭子和组织病料,并进行细菌分离纯化、16S rRNA基因扩增、荚膜血清型分型、毒力基因检测和分离株全基因组测序。结果显示,经细菌分离纯化、生化试验及PCR鉴定发现1株A型多杀性巴氏杆菌菌株,命名为“Pm WZ01”株;毒力基因扩增发现Pm WZ01基因组含有tadD、nanH、ompA、exbB、exbD、fur基因;基因组测序获得Pm WZ01株全基因组大小为2 383 021 bp,GC含量为40.28%;含有56个tRNA、19个rRNA;155个假基因,3个基因岛,5个前噬菌体,55个碳水化合物活性酶基因;CARD注释分析发现1个PBP3抗性基因和2个EF-Tu抗性基因;VFDB和PHI-base注释分析发现582个毒力因子相关基因及888个表型突变基因。系统进化树分析发现Pm WZ01菌株与中国长春Pm-3菌株(CP014618.1)、英国P1933菌株(CP132898.1)以及中国湖北HB01菌株(CP006976.1)属于同一分支,进化关系最近。本研究完成了1株A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定以及生物学特性和全基因组测序分析,为牛源A型多杀性巴氏杆菌病的防控研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 牛源 全基因组测序 耐药性 毒力
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一株兔源F型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及全基因组测序分析
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作者 刘兆辉 任永军 +8 位作者 陈弟诗 岳勤 丁碧荷 王印 罗燕 姚学萍 袁定胜 杨泽晓 益西卓玛 《微生物学通报》 北大核心 2025年第8期3855-3868,共14页
【背景】多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)是引起畜禽巴氏杆菌病的主要致病菌,能够感染多种动物,导致严重疾病,严重影响我国畜牧业的健康发展。近些年来,随着我国养兔业的快速发展,兔巴氏杆菌病已经成为养兔业疫病防控的一种重要... 【背景】多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)是引起畜禽巴氏杆菌病的主要致病菌,能够感染多种动物,导致严重疾病,严重影响我国畜牧业的健康发展。近些年来,随着我国养兔业的快速发展,兔巴氏杆菌病已经成为养兔业疫病防控的一种重要细菌病。【目的】确定四川某兔场送检病死兔的病因及其病原菌的基因组学特征。【方法】采用常规微生物学实验技术对送检的病死兔进行细菌分离和纯化,观察其培养特性,进行生化试验、PCR鉴定、荚膜血清型检测和药敏试验,并对分离的菌株进行全基因组测序和分析。【结果】从病死兔中分离出1株革兰氏阴性短杆菌,最终鉴定为F型多杀性巴氏杆菌,命名为PmLZH01,基因组序列上传NMDC数据库(编号:NMDC60198555)。药敏试验显示分离菌株Pm LZH01对万古霉素、阿莫西林和林可霉素耐药,对青霉素、庆大霉素、头孢噻肟、卡那霉素、环丙沙星、四环素、氟苯尼考、氯霉素等药物敏感。全基因组测序分析显示该分离菌株基因组为2378810 bp,G+C含量为40.32%,预测到2231个编码基因,包括了97个毒力相关基因和20个针对11类药物的抗药基因。【结论】通过微生物实验技术分离鉴定到1株F型多杀性巴氏杆菌并进行了其基因组学测序分析,再次证实兔巴氏杆菌病病原血清型的多样性,为兔巴氏杆菌感染的诊断和防控提供了科学参考,也为进一步了解F型Pm毒力和耐药机制奠定了基础。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 基因组 F型
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浙江省猪源多杀性巴氏杆菌的血清型分型、毒力因子及耐药性分析
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作者 许怡臻 袁秀芳 +8 位作者 徐丽华 余斌 苏菲 叶十一 孙洪超 陈怡洁 陈巧丹 张晖 李军星 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第7期1378-1387,共10页
采用形态学筛选和聚合酶链式反应(PCR)从2010-2024年浙江省猪场送检的鼻拭子和肺脏组织样品中分离鉴定出119个多杀性巴氏杆菌临床分离株。用PCR技术和纸片琼脂扩散法(K-B)对分离的多杀性巴氏杆菌进行荚膜血清型分型、脂多糖血清型分型... 采用形态学筛选和聚合酶链式反应(PCR)从2010-2024年浙江省猪场送检的鼻拭子和肺脏组织样品中分离鉴定出119个多杀性巴氏杆菌临床分离株。用PCR技术和纸片琼脂扩散法(K-B)对分离的多杀性巴氏杆菌进行荚膜血清型分型、脂多糖血清型分型、毒力因子检测及耐药性分析。结果显示,荚膜血清型中A型有64株(占53.7%)、D型有54株(占45.3%)、F型有1株(占0.9%);脂多糖血清型中L1型有10株(占8.4%)、L3型有20株(占16.8%)、L6型有86株(占72.2%)、未定型有3株(占2.6%)。对10种毒力基因的扩增结果显示,毒力基因hgbA、hgbB和fimA的检出率在86.0%以上,toxA的检出率为8.4%,而毒力基因tbpA并未检出;不同毒力基因在不同荚膜血清型的分布情况和检出率也存在差异,pfhA只在荚膜血清A和F型中检出,在D型中并未发现;黏附素tadD在A型的检出率(92.2%)明显高于D型的检出率(9.3%),相反,黏附素hsf-1在D型的检出率(90.7%)明显高于A型的检出率(20.3%)。耐药性分析发现,多杀性巴氏杆菌对阿莫西林、氨苄西林、头孢类、强力霉素、氟苯尼考和环丙沙星等抗菌药物表现出较高的敏感性;对林可霉素、复方新诺明、庆大霉素及阿米卡星等抗菌药物的耐药性较强,多重耐药菌株有54株(78.3%)。综上,荚膜血清型以A和D型为主,脂多糖血清型以L6型为主,部分毒力基因在不同血清型间的分布差异较大,多重耐药菌株比例较高,为本病的防控提供了参考。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 分离鉴定 血清型分型 毒力因子 耐药性
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内蒙古地区牛呼吸道感染的主要病原菌及支原体分离鉴定及耐药性和毒力基因检测
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作者 尹凯雯 毛伟 +9 位作者 曹金山 孙月 董海燕 韩凯凡 王博 李培锋 张志丹 樊宏亮 郭宇 赵红霞 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第3期1328-1341,共14页
【目的】了解内蒙古地区某规模化牧场牛呼吸道疾病主要致病菌及支原体的感染情况、耐药性及毒力基因携带情况,为该牧场牛呼吸道疾病的防治提供用药依据。【方法】采集死亡牛的肺脏组织进行病原菌分离培养、生化鉴定、16S rRNA基因测序、... 【目的】了解内蒙古地区某规模化牧场牛呼吸道疾病主要致病菌及支原体的感染情况、耐药性及毒力基因携带情况,为该牧场牛呼吸道疾病的防治提供用药依据。【方法】采集死亡牛的肺脏组织进行病原菌分离培养、生化鉴定、16S rRNA基因测序、PCR鉴定、药敏试验、耐药基因及毒力基因检测等。【结果】分离得到在TSA平板上显示圆润、灰白色、透明或半透明菌落,特异性基因及血清型基因扩增符合A型多杀性巴氏杆菌、A6型溶血性曼氏杆菌预期条带的细菌各1株;在PPLO固体培养基出现肉眼可观察的小气泡,镜检呈煎蛋样,特异性基因扩增符合预期条带的牛支原体1株。16S rRNA测序比对结果发现,3种病原体分别与多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌和牛支原体相似性在99%以上。耐药性及毒力基因检测结果显示,多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌对氧氟沙星高度敏感,对卡那霉素、阿米卡星、庆大霉素等抗菌药物敏感;多杀性巴氏杆菌携带strA、strB、tetA、tetB、qnrA、bla ROB耐药基因,携带exbB、exbD、ompA、psl等22种毒力基因;溶血性曼氏杆菌携带strA、strB耐药基因,携带gcp、gs60、lktC、tbpB 4种毒力基因;牛支原体对链霉素、红霉素、克林霉素耐药,对环丙沙星、阿米卡星和卡那霉素中介,对庆大霉素、氧氟沙星、恩诺沙星、四环素敏感,携带strA、strB、mph、msr-E耐药基因,携带VspX、VspY2、VpmA、P81毒力基因。【结论】该牧场病死牛呼吸道疾病为多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌及牛支原体混合感染所致,且分离菌株携带多种毒力基因,建议临床中治疗牛呼吸道疾病使用氧氟沙星作为主要治疗抗菌药物,不建议使用红霉素、克林霉素等抗菌药物。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 溶血性曼氏杆菌 牛支原体 分离鉴定 耐药性 毒力基因
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1例种鹅鸭瘟病毒与多杀性巴氏杆菌混合感染的诊断及病原鉴定
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作者 吴鹏 袁阳 +6 位作者 杨芸芸 冯轶 王艳 杨颖 陈江凤 姜海波 文明 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第5期2253-2265,共13页
【目的】确定贵州某种鹅场种鹅发病死亡的病因,为种鹅多病原混合感染的防治提供参考。【方法】对发病灰鹅进行临床症状及剖检观察、组织切片观察、细菌分离培养鉴定和6种水禽常见病毒(鸭瘟病毒(DPV)、鸭圆环病毒(DuCV)、禽流感病毒(AIV... 【目的】确定贵州某种鹅场种鹅发病死亡的病因,为种鹅多病原混合感染的防治提供参考。【方法】对发病灰鹅进行临床症状及剖检观察、组织切片观察、细菌分离培养鉴定和6种水禽常见病毒(鸭瘟病毒(DPV)、鸭圆环病毒(DuCV)、禽流感病毒(AIV)、鹅细小病毒(GPV)、鸭病毒性肝炎病毒(DHV)和禽坦布苏病毒(TMUV))PCR检测,进一步对病原菌进行相似性分析、荚膜血清型鉴定、药敏试验和致病性试验及分离病毒的致病性检测。【结果】发病灰鹅头颈肿大,肝脏表面出现灰黄色坏死灶,心脏及肺脏表面有出血点。组织切片结果显示,发病灰鹅肝脏、肺脏和肾脏均出现明显病变。分离菌株菌落呈灰白色、表面光滑的露滴状;革兰染色见红色短杆状阴性菌;瑞氏染色见两极浓染的球杆菌。生化试验结果显示,分离菌株葡萄糖、果糖、甘露醇和麦芽糖等反应为阳性。PCR检测及16S rRNA基因鉴定结果显示,分离菌株扩增出大小为460 bp的多杀性巴氏杆菌特异性基因Kmt1,且与NCBI中巴氏杆菌参考菌株16S rRNA基因序列相似性为98.6%~99.3%,鉴定其为多杀性巴氏杆菌。经血清型鉴定,分离株为A型荚膜血清型多杀性巴氏杆菌。分离菌株对诺氟沙星、庆大霉素和庆大霉素等敏感,对万古霉素中度敏感;将多杀性巴氏杆菌分离株接种小鼠,测得最小致死量(MLD)<5 CFU。病毒PCR检测及测序比对分析显示,发病灰鹅为鸭瘟病毒(DPV)感染,且DPV分离株与NCBI DPV参考株UL 6基因序列相似性为98.9%~100%;经鸭胚盲传3代,尿囊液PCR检测出DPV;鸭胚成纤维细胞(DEF)接种DPV,9 h后DEF缩圆,24 h后贴壁的DEF脱落或形成合胞体;经测定,DPV分离株的半数组织培养感染剂量(TCID 50)为2.88×10^(-9)/0.1 mL。【结论】本研究最终诊断发病灰鹅为DPV与多杀性巴氏杆菌混合感染,并分离得到1株毒力较强的A型荚膜血清型多杀性巴氏杆菌与1株毒力较强的DPV,本研究结果可为多杀性巴氏杆菌与DPV感染水禽引起的疾病的防治、病原学调查和多联疫苗等提供科学依据和技术支持。 展开更多
关键词 A型多杀性巴氏杆菌 鸭瘟病毒 分离鉴定 病原特性
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多杀性巴氏杆菌OmpH蛋白间接ELISA方法的建立
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作者 王润清 孙航 +4 位作者 阚威 李歌 李琦 侯晓林 孙雨 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第4期492-499,共8页
本试验在大肠杆菌原核表达系统中诱导出了多杀性巴氏杆菌OmpH抗原,建立了一种牛多杀性巴氏杆菌抗体ELISA检测方法。本试验分析了OmpH序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连... 本试验在大肠杆菌原核表达系统中诱导出了多杀性巴氏杆菌OmpH抗原,建立了一种牛多杀性巴氏杆菌抗体ELISA检测方法。本试验分析了OmpH序列的信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接pET32a载体上,并构建相应的重组质粒pET32a-OmpH,将重组质粒转化进大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞株中,扩大培养并成功诱导表达出了纯度较高的包涵体OmpH蛋白,大小约为57 kDa,蛋白纯度约为94%,且OmpH重组蛋白与其他疫病抗体无非特异性交叉。将纯化后的pET32a-OmpH重组蛋白作为包被抗原,建立了间接ELISA检测方法,该方法特异性强,对其他牛类病原无交叉反应,且其组内与组间变异系数均低于10%,具有良好的稳定性与重复性。本研究为进一步开发成熟的多杀性巴氏杆菌抗体检测试剂盒奠定了基础。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 OmpH蛋白 原核表达 蛋白纯化 ELISA
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牛多杀性巴氏杆菌交叉免疫保护性抗原蛋白PmCQ2-5175的筛选及效果评价
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作者 熊盼 黄艳澜 +5 位作者 刘思渝 杨柳 赵光夫 李能章 何芳 彭远义 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第5期963-970,共8页
A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是引起牛肺炎等呼吸系统疾病的重要病原菌,严重制约我国养牛业的健康发展。目前,主要通过疫苗接种预防该病,但由于Pm血清型众多,导致疫苗交叉免疫保护作用较差。因此,研发具有交叉保护作用... A型多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)是引起牛肺炎等呼吸系统疾病的重要病原菌,严重制约我国养牛业的健康发展。目前,主要通过疫苗接种预防该病,但由于Pm血清型众多,导致疫苗交叉免疫保护作用较差。因此,研发具有交叉保护作用的疫苗对防控Pm感染具有重要意义。本课题组前期研究发现,PmCQ2Δcra对A、B、F等不同荚膜血清型菌株(PmA、PmB、PmF)均具有良好的免疫保护作用。转录组学测序分析结果提示,PmCQ2Δcra良好的交叉免疫保护作用可能与细菌表面保护性抗原的高表达有关。因此,本研究通过生物信息分析筛选并表达了4个假定免疫保护性抗原蛋白PmCQ2-5175、PmCQ2-6290、PmCQ2-0275和PmCQ2-2640,结果显示,这些假定抗原制备的亚单位疫苗对PmA感染小鼠的保护效力分别为62.5%、25%、12.5%和10%。其中,保护性最佳的单组分抗原疫苗PmCQ2-5175对PmB感染小鼠具有75%的交叉保护作用。此外,本研究筛选的PmCQ2-5175蛋白保护性优于已报道的Pm抗原蛋白plpE,且融合表达蛋白PmCQ2-5175-plpE对PmA的保护性优于单一蛋白。本研究为开发具有交叉免疫保护作用的Pm亚单位疫苗提供了重要的抗原靶标。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 免疫保护 重组蛋白 小鼠
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三叶青多糖对巴氏杆菌灭活疫苗佐剂作用的研究
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作者 向秋菊 崔雪梅 +8 位作者 虞乐 罗艳芳 黄叶娥 季权安 石团员 胡子喆 宋厚辉 鲍国连 刘燕 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第8期839-845,874,共8页
为研究三叶青多糖(THP)作为佐剂对巴氏杆菌(Pm)灭活疫苗诱导小鼠免疫应答的影响,本研究将96只ICR雌性小鼠随机均分为4组:空白组(BC组)、Pm灭活疫苗组(Pm),含铝胶佐剂Pm疫苗组(Alum-Pm)、含THP佐剂的Pm疫苗组(THP-Pm),分别免疫相应疫苗两... 为研究三叶青多糖(THP)作为佐剂对巴氏杆菌(Pm)灭活疫苗诱导小鼠免疫应答的影响,本研究将96只ICR雌性小鼠随机均分为4组:空白组(BC组)、Pm灭活疫苗组(Pm),含铝胶佐剂Pm疫苗组(Alum-Pm)、含THP佐剂的Pm疫苗组(THP-Pm),分别免疫相应疫苗两次,每次间隔两周。采用ELISA方法分别检测小鼠二免后7 d、14 d、21 d、28 d、35 d和42 d时血清IgG抗体水平,以及二免后28 d血清IgG1、IgG2a抗体亚类水平,以及Th1型(INF-γ)、Th2型(IL-4、IL-5)和Th17型(IL-17)细胞因子水平。结果显示,与Alum-Pm组相比,THP-Pm组小鼠血清中IgG抗体水平在二免后14 d和28 d显著升高(P<0.05),于28 d达到峰值,且THP-Pm组小鼠血清中IgG1和IgG2a抗体亚类水平显著高于其它各组(P<0.05)。与BC组相比,THP-Pm组小鼠血清IFN-γ和IL-17细胞因子分泌水平显著升高(P<0.05),IL-4和IL-5极显著升高(P<0.01、P<0.001);与Pm组相比,THP-Pm组小鼠血清IFN-γ和IL-5细胞因子的分泌水平显著升高(P<0.05),细胞因子IL-4的分泌水平极显著升高(P<0.01);与Alum-Pm组相比,仅IL-4的分泌水平显著升高(P<0.05)。二免后28 d取各组小鼠脾脏,制备脾淋巴细胞悬液,采用CCK-8法检测各组小鼠淋巴细胞增殖水平,采用荧光定量PCR(qPCR)检测淋巴细胞中T-bet和GATA-3基因的相对转录水平,采用流式细胞术检测淋巴细胞中CD4^(+)与CD8^(+)T淋巴细胞亚群的比值。CCK-8法检测结果显示,分别经灭活的Pm和LPS刺激后,THP-Pm组小鼠淋巴细胞的增殖水平极显著高于其余各组(P<0.01、P<0.001、P<0.0001),经ConA刺激后THP-Pm组小鼠淋巴细胞的增殖水平极显著高于BC组和Pm组(P<0.01)。qPCR检测结果显示,经Pm刺激后,THP-Pm组小鼠淋巴细胞T-bet mRNA的相对转录水平极显著高于BC组(P<0.0001)和Pm组(P<0.001),显著高于Alum-Pm组(P<0.01);THP-Pm组小鼠淋巴细胞GATA-3 mRNA的相对转录水平极显著高于BC组(P<0.001),显著高于Pm组和Alum-Pm组(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与Pm组相比,THP-Pm组小鼠淋巴细胞CD4^(+)/CD8^(+)T淋巴细胞的比值显著升高(P<0.05)。二免后49 d通过攻毒试验检测免疫不同佐剂的Pm疫苗对小鼠的保护作用,结果显示,攻毒后10 d内BC组、Pm组、Alum-Pm组、THP-Pm组小鼠的存活率分别为0、33.3%、66.7%、83.3%,其中THP-Pm组小鼠的存活率极显著高于BC组和Pm组(P<0.01)。本研究首次证实THP佐剂可显著增强Pm灭活疫苗的免疫保护效果,为THP作为新型疫苗佐剂的开发与应用提供了重要参考依据。 展开更多
关键词 三叶青多糖 巴氏杆菌 灭活疫苗 佐剂 免疫保护
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多杀性巴氏杆菌感染小鼠肝脏转录组分析
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作者 黄惠娴 陈巧玲 +5 位作者 王雪梅 蒋俊明 刘志勇 陈思 王凤阳 杜丽 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期177-187,共11页
本试验旨在探究多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)感染小鼠肝脏组织的转录组变化情况,筛选Pm感染后参与免疫反应的相关基因及信号通路。采用腹腔注射法构建Pm(HN01株)感染小鼠动物模型,收集感染组和对照组新鲜肝脏组织,提取总RN... 本试验旨在探究多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)感染小鼠肝脏组织的转录组变化情况,筛选Pm感染后参与免疫反应的相关基因及信号通路。采用腹腔注射法构建Pm(HN01株)感染小鼠动物模型,收集感染组和对照组新鲜肝脏组织,提取总RNA进行转录组测序,筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs)进行功能富集分析,采用qRT-PCR对测序数据进行验证。(结果)转录组测序分析结果显示,共获得5710个DEGs(Fold Change≥1.5且P<0.05),其中2968个DEGs上调,2742个DEGs下调。GO功能注释结果显示,免疫相关的GO terms包括肿瘤坏死因子的细胞反应、白细胞介素1的细胞反应、正向调控炎症反应等;KEGG富集分析结果显示,DEGs在MAPK信号通路、TNF信号通路和补体与凝血级联激活通路等免疫相关通路中显著富集。qRT-PCR验证结果表明,随机选取的S100A9、IL1RN、LCN2、CD14、CXCL1、S100A8、JUNB、TNFRSF1A、CD63、C3共10个DEGs变化趋势与转录组测序结果一致。本研究表明,肝脏在防御Pm入侵中通过激活补体与凝血级联激活通路和TNF信号通路参与免疫应答反应,为进一步研究Pm与宿主之间相互作用的分子机制奠定理论基础。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 转录组 肝脏 TNF信号通路
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鸭源巴氏杆菌的分离鉴定及致病性研究
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作者 刘丹 冯雅婷 +4 位作者 陈宗超 朱敏 郭容 王桂军 于圣青 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第1期67-74,共8页
本研究对广东省4个养殖场分离的疑似多杀性巴氏杆菌20株,通过细菌形态学观察、PCR鉴定、生化试验共鉴定出17株多杀性巴氏杆菌,并对其进行血清型分型、药敏检测、毒力基因检测以及致病性试验。结果显示:17株分离菌均为荚膜A型巴氏杆菌;14... 本研究对广东省4个养殖场分离的疑似多杀性巴氏杆菌20株,通过细菌形态学观察、PCR鉴定、生化试验共鉴定出17株多杀性巴氏杆菌,并对其进行血清型分型、药敏检测、毒力基因检测以及致病性试验。结果显示:17株分离菌均为荚膜A型巴氏杆菌;14/17株分离菌对多粘菌素B敏感,敏感率高达82%,17株分离菌对新霉素、丁胺卡那、头孢噻肟和呋喃唑酮4种药物的耐药率达80%以上;对17株菌均检测到其中的13个毒力基因;PM-3毒力最强,4个菌可以引起半数试验动物死亡。本研究表明从广东省4个养鸭场分离的菌株致病性强,且表现多重的严重耐药性。研究结果为预防控制鸭源巴氏杆菌提供参考依据。 展开更多
关键词 鸭源巴氏杆菌 分离 鉴定 耐药性 致病性
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三十四株猪源多杀性巴氏杆菌的分型及耐药性分析
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作者 马彩萍 祝瑶 +10 位作者 刘红道 周光斌 许秋 林龙华 柴霁芸 侯杰 孙宏飞 杜素素 范翠龙 夏利宁 张万江 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第8期4074-4085,共12页
旨在了解我国猪源多杀性巴氏杆菌(Pm)的流行特征和耐药情况。本研究对来自黑龙江、辽宁、吉林、内蒙古、陕西、宁夏、河南的病死猪脏器进行细菌分离培养,经16S rRNA测序和kmt基因鉴定,利用荚膜分型、脂多糖基因型分型、多位点序列分型(M... 旨在了解我国猪源多杀性巴氏杆菌(Pm)的流行特征和耐药情况。本研究对来自黑龙江、辽宁、吉林、内蒙古、陕西、宁夏、河南的病死猪脏器进行细菌分离培养,经16S rRNA测序和kmt基因鉴定,利用荚膜分型、脂多糖基因型分型、多位点序列分型(MLST)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)等方法对Pm进行分型;通过微量肉汤稀释法分析Pm对8种抗生素的敏感性;通过Illumina PE 150对细菌全基因组测序,采用ResFinder数据库分析细菌的耐药基因,最后通过小鼠致病性试验确定分离菌株的毒力。结果显示,分离菌在血平板上形成表面光滑、湿润、中央微凸、半透明的菌落;革兰染色可见呈红色、球状或短杆状的细菌;共获得34株Pm,荚膜A型19株(占55.88%),荚膜D型14株(占41.18%)和荚膜F型1株(2.94%);脂多糖基因型L3有8株,脂多糖基因型L6有26株。MLST分析得到8个MLST型,ST11为优势基因型,占比为35.29%。可将Pm分为21个PFGE谱型,菌株间具有明显的多样性。耐药性结果显示,34株Pm对多黏菌素B、四环素、氟苯尼考、氯霉素、头孢噻呋、环丙沙星、卡那霉素的耐药率分别为38.23%、35.29%、23.53%、14.71%、11.76%、8.82%、2.94%,对庆大霉素不耐药;耐药基因检测结果显示,18株Pm携带9种耐药基因,分别为tet(B)、tet(C)、tet(L)、floR、aadA14、sul2、aph(6)-Id、aph(3″)-Ib和aph(3′)-Ia。Pm荚膜A型菌株毒力强于荚膜D型菌株,经腹腔注射31.5 CFU·mL^(-1) PmA1菌株后的试验组小鼠死亡率为100%。综上表明,34株猪源Pm中流行血清型为荚膜A型和D型,MLST型为ST11,荚膜A型菌株毒力较荚膜D型菌株强,且PFGE分型表明菌株间存在多样性,本研究为多杀性巴氏杆菌病的疫苗研发及防治提供了理论依据。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 荚膜分型 MLST分型 PFGE 耐药性
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牛支原体、多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌三重qPCR方法的建立与流行病学调查
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作者 马彦颖 高磊 +6 位作者 宫枫举 吴雨伦 李旭雯 张志 孙学强 潘子豪 姚火春 《微生物学报》 北大核心 2025年第9期4198-4210,共13页
【目的】建立牛支原体(Mycoplasma bovis)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,P.m)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,M.h)的三重qPCR检测方法,并开展规模化奶牛养殖场牛呼吸道疾病综合征(bovine respiratory disease compl... 【目的】建立牛支原体(Mycoplasma bovis)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,P.m)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,M.h)的三重qPCR检测方法,并开展规模化奶牛养殖场牛呼吸道疾病综合征(bovine respiratory disease complex,BRDC)的流行病学调查。【方法】以实验室分离鉴定后纯化的菌株制备敏感性质控样品;选取国内主要流行株的保守基因,分别以牛支原体的uvrC基因、多杀性巴氏杆菌的Kmt1基因和溶血性曼氏杆菌的lktD基因作为靶标,建立多重探针和引物体系,优化反应体系参数,构建三重qPCR方法。验证该方法的敏感性、重复性和特异性,并与细菌分离鉴定方法进行符合率验证。利用该方法对1252份临床疑似BRDC的样本进行病原学检测,分析病原的流行特征和时空分布特征。【结果】三重qPCR方法的标准曲线R2值分别为0.9986、0.9946和0.9986;牛支原体、多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌的最低检出量分别为2.50×10^(3)、1.26×10^(3)和7.50×10^(2) CFU/mL。批内和批间变异系数均小于2%,仅3种菌的敏感性质控样品出现特异性扩增曲线。符合率试验结果显示,牛支原体、多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌与细菌分离鉴定方法的符合率分别为100.00%、98.40%和97.60%。流行病学调查显示,BRDC细菌性病原总阳性率为75.9%[95%confidence interval(CI),73.4%−78.3%],其中混合感染占比48.8%,冬季为高发期,北方地区阳性率显著高于南方(P<0.001)。【结论】本研究建立的三重qPCR方法具有良好的特异性、稳定性和重复性,为我国BRDC主要病原的一步法检测提供了候选方案。本研究还分析了BRDC细菌病原的协同感染特征及地理-季节分布规律,为精准防控策略的制定提供了参考。 展开更多
关键词 牛支原体 多杀性巴氏杆菌 溶血性曼氏杆菌 流行病学调查 多重qPCR
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