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茎-环RT-PCR法定量miRNA-421的引物设计 被引量：7
1
作者 赵丽 杨洋 温传俊 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期83-88,共6页
本研究旨在通过茎-环RT-PCR法,建立有效定量miRNA-421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA-421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释... 本研究旨在通过茎-环RT-PCR法,建立有效定量miRNA-421的PCR方法,探讨该方法在定量检测miRNA方面的应用价值.利用miRBase数据库获得miRNA-421的成熟序列.设计3条miRNA-421特异性反转录引物,Q-PCR上游引物及通用下游引物.通过10倍梯度稀释RNA后特异性反转录,RT-PCR分析不同引物互相配对PCR的扩增曲线及熔融曲线,鉴定出特异性好、扩增效率高的引物.为进一步鉴定引物的有效性,过表达miRNA-421,用鉴定的成熟引物定量扩增.利用茎-环RT-PCR法设计、鉴定出miRNA-421引物:421RT7、F19,且这对引物特异性好、扩增效率高.通过设计引物组合,茎-环RT-PCR法能够很好地用于miRNA定量分析,并具有准确、快速、节约成本的优点. 展开更多
关键词 茎-环RT-PCR mirna-421 引物设计
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HCG11靶向miRNA-421调控宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的研究 被引量：5
2
作者 刘秀玲 陈新宇 +2 位作者 王志红 李静 贺全勤 《癌症进展》 2020年第1期30-34,38,共6页
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)HCG11对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常子宫内膜上皮细胞ESC以及宫颈癌细胞HeLa和Siha细胞中HCG11的表达水平。转染pcDNA3.1-H... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)HCG11对宫颈癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响及作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测正常子宫内膜上皮细胞ESC以及宫颈癌细胞HeLa和Siha细胞中HCG11的表达水平。转染pcDNA3.1-HCG11或anti-miRNA-421至HeLa细胞,构建过表达HCG11或抑制miRNA-421表达的HeLa细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(BAX)、基质金属蛋白酶2(MMP2)和上皮钙黏素(E-cadherin)蛋白表达水平。结果与ESC细胞相比,HeLa和Siha细胞中HCG11表达水平明显降低(P﹤0.01)。过表达HCG11或抑制miRNA-421表达可使HeLa细胞光密度(OD)值明显降低,凋亡率明显升高,迁移和侵袭数明显减少,cyclin D1、Bcl-2和MMP2蛋白表达降低,P21、BAX和E-cadherin蛋白表达升高(P﹤0.05)。miRNA-421过表达逆转了过表达HCG11对HeLa细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭及相关蛋白表达的影响。结论HCG11靶向负调控miRNA-421表达,抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移,并诱导其凋亡。 展开更多
关键词 宫颈癌 HCG11 mirna-421 增殖 凋亡 侵袭 迁移
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hsa-miR-421的靶基因预测及生物信息学分析
3
作者 蔡林锐 蔡艺煌 +1 位作者 汪芝宇 张慧莲 《吉林医学》 2025年第8期1787-1793,共7页
目的:探讨hsa-miR-421的靶基因预测与相关生物信息学在肿瘤疾病中的生物学功能、信号传导通路及其所发挥的分子调控机制。方法:利用在线数据库分析hsa-miR-421的碱基序列、基因位点及序列保守性,研究其在人体不同疾病中的表达情况,并预... 目的:探讨hsa-miR-421的靶基因预测与相关生物信息学在肿瘤疾病中的生物学功能、信号传导通路及其所发挥的分子调控机制。方法:利用在线数据库分析hsa-miR-421的碱基序列、基因位点及序列保守性,研究其在人体不同疾病中的表达情况,并预测hsa-miR-421的靶向调控基因。随后进行GO功能注释分析、KEGG通路富集分析,并构建蛋白互作(PPI)网络及关键(hub)基因筛选。结果:hsa-miR-421成熟序列在多物种间高度保守。获得的508个靶基因存在于RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的调控、DNA模板转录的调控、蛋白质结合等分子功能,并富集于糖尿病并发症中的AGE-RAGE信号通路、神经营养因子信号通路、泛素介导的蛋白水解等信号通路。基于hsa-miR-421靶基因集合的PPI网络构建与度中心性(Degree Centrality)值筛选出排名前十位的hub基因(SRSF1、HNRNPA2B1、HNRNPA1、TRAF6、SMAD2、MAPK14、CDC42、MAPK9、PRKACB、NRAS)。结论:hsa-miR-421通过调控靶基因广泛参与到人类生命活动和疾病发生发展等过程。 展开更多
关键词 头颈部鳞状细胞癌 hsa-miR-421 靶基因 MIRNA 生物信息学
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miR-421和miR-196b-3p在胃癌癌前病变和早期胃癌诊断中的潜在价值 被引量：5
4
作者 王文怡 余静恬 甘程 《检验医学与临床》 2024年第6期726-732,共7页
目的研究血浆miR-421和miR-196b-3p作为诊断胃癌癌前病变和早期胃癌新型潜在生物标志物的临床意义。方法(1)发现集:于2018年12月1日至12月31日采集早期胃癌患者(早期胃癌组)、癌前病变患者(癌前病变组)和健康志愿者(NC组)的血浆标本各3... 目的研究血浆miR-421和miR-196b-3p作为诊断胃癌癌前病变和早期胃癌新型潜在生物标志物的临床意义。方法(1)发现集:于2018年12月1日至12月31日采集早期胃癌患者(早期胃癌组)、癌前病变患者(癌前病变组)和健康志愿者(NC组)的血浆标本各3例,用作miRNA微阵列分析。借用TCGA数据证实候选miRNA在癌症组织中的表达。(2)验证集:于2019年1月1日至2023年1月1日共采集90例胃癌患者(胃癌组)、89例癌前病变患者(癌前病变组)和45例健康志愿者(NC组)的血浆标本。通过定量实时聚合酶链反应测定候选miRNA水平。比较各组候选miRNA及常规肿瘤标志物[铁蛋白、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、CA211、CA50、CA125、CA199、CA153、CA242、CA724]水平;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析比较候选miRNA与常规肿瘤标志物的诊断价值。结果(1)发现集:通过miRNA微阵列筛选,与NC组相比,miR-421和miR-196b-3p水平在早期胃癌组和癌前病变组明显上调(P<0.05)。TCGA数据证实,与正常胃黏膜相比,miR-421在胃癌组织中呈高表达(P<0.001)。(2)验证集:与NC组相比,癌前病变组和胃癌组血浆miR-421、miR-196b-3p水平明显上调(P<0.05),且胃癌组血浆miR-421、miR-196b-3p水平高于癌前病变组(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血浆miR-421对胃癌的诊断价值最高,曲线下面积(AUC)为0.931(95%CI:0.889~0.972),高于CEA、CA125、CA199、CA724、CA211、CA50诊断胃癌的AUC(P<0.05);miR-196b-3p诊断胃癌的AUC[0.804(95%CI:0.733~0.875)]也高于CEA、CA125、CA199和CA724诊断胃癌的AUC(P<0.05);miR-421和miR-196b-3p也可用于早期胃癌诊断,AUC分别为0.942(95%CI:0.886~0.997)和0.809(95%CI:0.708~0.910);血浆miR-421和miR-196b-3p诊断癌前病变的AUC分别为0.788(95%CI:0.714~0.863)和0.648(0.556~0.741),miR-421诊断癌前病变的AUC均高于miR-196b-3p、铁蛋白、CA50诊断癌前病变的AUC(P<0.05)。血浆miR-421和miR-196b-3p在胃癌Ⅰ期病例中的水平与Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ期相比,差异无统计学意义(P>0.05),但在胃癌发病早期(Ⅰ~Ⅱ期)的水平明显高于NC组和癌前病变组(P<0.05)。结论血浆miR-421和miR-196b-3p在早期胃癌患者中过表达,有希望成为诊断癌前病变和早期胃癌的新型生物标志物。 展开更多
关键词 早期诊断 癌前病变 miR-421 miR-196b-3p miRNA微阵列 胃癌
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肾癌与MicroRNA-421相对表达量之间的相关性 被引量：2
5
作者 韩从华 崔龙 《实用癌症杂志》 2016年第9期1406-1407,1411,共3页
目的观察肾细胞癌的临床流行病学特征,探讨MicroRNA-421与肾癌之间的相关性。方法回顾性分析109例肾癌患者的临床病例资料。结果 miR-421表达水平与肾癌的病理类型、病理分级、分化程度、TNM分期、淋巴结转移有显著相关性(P<0.05),... 目的观察肾细胞癌的临床流行病学特征,探讨MicroRNA-421与肾癌之间的相关性。方法回顾性分析109例肾癌患者的临床病例资料。结果 miR-421表达水平与肾癌的病理类型、病理分级、分化程度、TNM分期、淋巴结转移有显著相关性(P<0.05),与患者性别、年龄及肿瘤侵犯程度无显著相关性(P>0.05)。结论 miR-421对不同程度的肾癌具有良好的判断效果,可作为不同病理期肾癌的潜在诊断标准。 展开更多
关键词 肾肿瘤 肾细胞 癌 预后 mirna-421
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lncRNA FGD5-AS1靶向miR-421对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响 被引量：4
6
作者 孟晓京 刘亚军 项宁 《山东医药》 CAS 2021年第16期30-34,共5页
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1与微小RNA-421(miR-421)的靶向调控关系及其对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法利用H/R诱导心肌细胞H9C2损伤,采用实时荧光定量PCR检测lncRNAFGD5-AS1和miR-421表达。在心肌细胞中转... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1与微小RNA-421(miR-421)的靶向调控关系及其对缺氧/复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响。方法利用H/R诱导心肌细胞H9C2损伤,采用实时荧光定量PCR检测lncRNAFGD5-AS1和miR-421表达。在心肌细胞中转染pcDNA-FGD5-AS1、anti-miR-421,或共转染pcDNAFGD5-AS1和miR-421,之后进行H/R损伤。采用试剂盒评估丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,流式细胞术分析凋亡率,Westernblotting法测定B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。生物信息学预测与双荧光素酶报告实验验证lncRNAFGD5-AS1对miR-421的靶向调控。结果缺氧/复氧使心肌细胞中lncRNAFGD5-AS1表达、SOD活性、GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达减少,并使miR-421表达、MDA含量、凋亡率、Bax蛋白表达增多(P均<0.05)。lncRNAFGD5-AS1过表达降低缺氧/复氧诱导的心肌细胞的MDA含量、凋亡率、Bax蛋白表达,提高SOD活性、GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达(P均<0.05),抑制miR-421表达与其效果相同。lncRNAFGD5-AS1靶向调控miR-421的表达。共转染pcDNA-FGD5-AS1和miR-421提高缺氧/复氧诱导的心肌细胞的MDA含量、凋亡率、Bax蛋白表达,降低SOD活性、GSH-Px活性、Bcl-2蛋白表达(P均<0.05)。结论在缺氧/复氧诱导的心肌细胞中,lncRNAFGD5-AS1通过靶向miR-421,减轻细胞氧化应激,并抑制其凋亡,从而减轻缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤。 展开更多
关键词 缺氧/复氧 心肌细胞 长链非编码RNAFGD5-AS1 微小RNA-421 细胞凋亡 氧化应激
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