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PCR效率振荡与金纳米粒子浓度的光量子机理
1
作者 方欢欢 陈永聪 《上海大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期646-656,共11页
纳米材料在聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术中的广泛应用为改进生物医学领域的检测方法开辟了新途径.已有实验揭示了PCR效率与pM区金纳米粒子浓度间的振荡行为,其产生或与带电胶体粒子间的长程库仑作用和纳米颗粒电... 纳米材料在聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术中的广泛应用为改进生物医学领域的检测方法开辟了新途径.已有实验揭示了PCR效率与pM区金纳米粒子浓度间的振荡行为,其产生或与带电胶体粒子间的长程库仑作用和纳米颗粒电子态的量子尺寸效应相关联.通过蒙特卡洛模拟可以发现,溶液中金纳米粒子的径向分布函数随着电荷的增加逐步呈现出峰值特征,从而引发光子在溶液中瑞利散射的相干行为,影响PCR反应过程中释放光子的再利用效率.研究结果表明,振荡周期与下游反应光子的波长吻合,同时其能量与金纳米粒子费米能级附近的能级宽度相匹配.而金纳米粒子可以吸收并储存于其内部的电子态,通过再释放促进PCR上游反应进程,并通过电子的玻尔兹曼分布来弥补所需能量的不足部分.该研究有望推动PCR特有的精确探测手段在量子生物科技领域的应用. 展开更多
关键词 金纳米粒子 聚合酶链式反应 长程库仑作用 瑞利相干散射 量子尺寸效应
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应用长PCR扩增蝗虫线粒体全基因组 被引量：19
2
作者 刘念 胡婧 黄原 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期61-65,共5页
介绍了用两对长PCR引物扩增蝗虫(Acridoidea)线粒体全基因组的方法。从NCBI的核酸数据库下载得到36种已测昆虫线粒体全基因组,选取cytochromeb(Cytb)c、ytochrome oxidase subunitⅡ(COⅡ)、cytochrome oxidase subunitⅠ(COⅠ)基因的... 介绍了用两对长PCR引物扩增蝗虫(Acridoidea)线粒体全基因组的方法。从NCBI的核酸数据库下载得到36种已测昆虫线粒体全基因组,选取cytochromeb(Cytb)c、ytochrome oxidase subunitⅡ(COⅡ)、cytochrome oxidase subunitⅠ(COⅠ)基因的保守区域设计两对引物。其中引物LP03和LP04从COⅠ向Cytb扩增;引物LPCytb和LPCOⅡ从Cytb向COⅡ扩增,两对引物扩增的片段之间有大约1 kb的重叠。应用这两对引物成功扩增出10种蝗虫的线粒体基因组。考虑到在设计引物过程中所选序列在其他昆虫中的保守性,它们应能在大部分昆虫线粒体基因组扩增中发挥作用。 展开更多
关键词 长pcr 引物 蝗虫 线粒体基因组
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长PCR技术及其在动物学研究中的应用 被引量：7
3
作者 叶维萍 黄原 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期105-109,共5页
长PCR(longPCR)技术自 1 994年发明以来 ,在生命科学发展中发挥了巨大的作用。长PCR技术与常规PCR有较大的区别。本文从长PCR技术的由来、长PCR技术对模板、引物和聚合酶的特殊要求及长PCR技术反应条件等方面进行了较全面的介绍。最后... 长PCR(longPCR)技术自 1 994年发明以来 ,在生命科学发展中发挥了巨大的作用。长PCR技术与常规PCR有较大的区别。本文从长PCR技术的由来、长PCR技术对模板、引物和聚合酶的特殊要求及长PCR技术反应条件等方面进行了较全面的介绍。最后介绍了近期发展的LR IPCR(longrange inversePCR ,长反向PCR)、内切酶介导性长PCR (endonuclease mediatedlongPCR)、longRT PCR以及LDD PCR。目前此技术在动物学研究中的应用主要在基因组测序和线粒体基因组研究、病理诊断、基因差异表达、病原微生物的研究、遗传多态性分析等领域。 展开更多
关键词 长pcr(long pcr) 双聚合酶系统 辅助溶剂 基因组测序 动物学
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LA-PCR快速克隆传染性法氏囊病病毒基因组A节段全长cDNA方法的建立 被引量：4
4
作者 李建荣 宋厚辉 +4 位作者 于涟 黄耀伟 谢荣辉 周继勇 郑筱祥 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期438-441,共4页
从浙江省某鸡场暴发疑似传染性法氏囊病 (IBD)的法氏囊病料中分离到 1株致死率高达 70 %的强毒株 (IBDV-ZJ2 0 0 0 )。通过筛选 ,采用效果最理想的蛋白酶 K法从法氏囊中提取病毒基因组 RNA,经 L i Cl纯化后 ,优化各种反应参数和条件 ,... 从浙江省某鸡场暴发疑似传染性法氏囊病 (IBD)的法氏囊病料中分离到 1株致死率高达 70 %的强毒株 (IBDV-ZJ2 0 0 0 )。通过筛选 ,采用效果最理想的蛋白酶 K法从法氏囊中提取病毒基因组 RNA,经 L i Cl纯化后 ,优化各种反应参数和条件 ,建立了 L ong- accurate PCR(L A- PCR)一步直接扩增 IBDV A节段全长 c DNA的方法 ,得到一约 3.2 6 kb的片段。L A- PCR法能快速从病鸡法氏囊和细胞适应毒中扩增 A节段全长 c DNA,为研究各 IBDV毒株 A节段的结构和功能打下了基础。 展开更多
关键词 家畜病毒学 LA-pcr快速克隆 传染性法氏囊病 病毒 基因组 A节段 CDNA
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用长距PCR法构建恶性疟原虫cDNA表达文库 被引量：10
5
作者 傅作申 程远国 +7 位作者 张玉静 阮承迈 单成启 古稀波 陈知航 侯禹男 陈泽建 李英 《热带医学杂志》 CAS 2002年第3期225-229,共5页
目的　构建恶性疟原虫cDNA表达文库。方法　用Trizol试剂盒提取总RNA ,以经修饰的SMART寡聚核苷酸引物 CDSⅢ引物直接用总RNA选择性地反转录成单链cDNA ,再用长距PCR(LD)方法选择性地扩增出双链cDNA ,经蛋白酶K消化和酶切后 ,用玻璃奶... 目的　构建恶性疟原虫cDNA表达文库。方法　用Trizol试剂盒提取总RNA ,以经修饰的SMART寡聚核苷酸引物 CDSⅢ引物直接用总RNA选择性地反转录成单链cDNA ,再用长距PCR(LD)方法选择性地扩增出双链cDNA ,经蛋白酶K消化和酶切后 ,用玻璃奶试剂盒回收 2 0 0bp以上DNA片断 ,经与载体λTriplEX2连接和蛋白抽提物体外包装后 ,构建成cDNA文库并对文库进行了初步的鉴定。结果　构建了高滴度 ,高重组率的恶性疟原虫cDNA表达文库。结论　所构建的疟原虫cDNA文库适合进一步筛选抗疟原虫药物结合蛋白基因。 展开更多
关键词 恶性疟原虫 长距pcr CDNA表达文库 玻璃奶试剂
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长链PCR技术评价^(60)Co-γ射线灭活病毒的研究 被引量：5
6
作者 肖云贵 张艳宇 +5 位作者 陈明 赵晓明 马平 周锡鹏 吕丽萍 许金波 《中国输血杂志》 CAS CSCD 2006年第5期368-371,共4页
目的探讨用长链PCR技术评价60Co-γ射线辐照灭活伪狂犬病毒(pseudorabies virusPRV),后残余病毒感染性的可行性。方法针对PRV糖蛋白gD基因前后的保守区设计预计产物长短不一的5对引物,用PCR扩增经不同剂量60Co-γ射线照射后的PRV核酸,... 目的探讨用长链PCR技术评价60Co-γ射线辐照灭活伪狂犬病毒(pseudorabies virusPRV),后残余病毒感染性的可行性。方法针对PRV糖蛋白gD基因前后的保守区设计预计产物长短不一的5对引物,用PCR扩增经不同剂量60Co-γ射线照射后的PRV核酸,并同时以细胞感染法做平行对照。结果60Co-γ射线辐射对PRV核酸的破坏有剂量依赖性,随着60Co-γ射线剂量的增加,PRV核酸被破坏程度增加,剂量≥20kGy时完全被灭活。5条不同长度PCR扩增产物中,只有长片段3.9kb的检出与细胞培养结果一致。结论γ射线对PRV核酸的损伤程度随γ射线剂量增加而增大;用长链PCR(3.9kb)来评价经60Co-γ射线辐照灭活病毒后残余病毒的感染性是可行的。 展开更多
关键词 Γ射线 病毒灭活 长链pcr感染性
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几种PCR方法在克隆鸭肠炎病毒未知基因中的应用 被引量：1
7
作者 潘华奇 曹瑞兵 +4 位作者 陈溥言 刘磊 王书锦 潘光炎 胡江春 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1842-1848,共7页
以DEV基因组DNA为模板，用简并PCR、改良Targeted gene walkingPCR、改良的热不对称交错PCR和Long—PCR，获得了5350bp、11083bp和2905bp3段DEV未知基因片段，DNA序列分析发现包含9个开放阅读框，将这些序列提交GenBank分别获得的登录... 以DEV基因组DNA为模板，用简并PCR、改良Targeted gene walkingPCR、改良的热不对称交错PCR和Long—PCR，获得了5350bp、11083bp和2905bp3段DEV未知基因片段，DNA序列分析发现包含9个开放阅读框，将这些序列提交GenBank分别获得的登录号为：EF554396～EF554403。结果表明，多种PCR方法联合使用可以高效的实现对鸭肠炎病毒未知基因的克隆。 展开更多
关键词 鸭肠炎病毒 未知基因 简并pcr Targeted gene WALKING pcr 热不对称交错pcr long—pcr
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以长链PCR为基础利用融合PCR扩增乙型脑炎病毒全长cDNA 被引量：2
8
作者 李静 俞永新 +2 位作者 安琪 杨力宏 孔艳 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第12期1047-1050,1053,共5页
目的以长链PCR(Long-PCR)技术为基础,应用融合PCR方法扩增乙型脑炎病毒(JEV)全长基因组。方法根据GenBank中收录的JEV全长基因组序列设计引物,分别扩增JEVSA14-14-2株的5′和3′半长分子,在5′端上游引物中引入T7启动子核心序列。利用... 目的以长链PCR(Long-PCR)技术为基础,应用融合PCR方法扩增乙型脑炎病毒(JEV)全长基因组。方法根据GenBank中收录的JEV全长基因组序列设计引物,分别扩增JEVSA14-14-2株的5′和3′半长分子,在5′端上游引物中引入T7启动子核心序列。利用细胞培养增殖病毒,提取病毒RNA,逆转录后采用Long PCR方法得到JEV的5′和3′两个半长分子,在此基础上进行融合PCR,得到JEV全长cDNA分子,克隆入pGEMT-easy载体,酶切鉴定并测序。结果扩增出均6000bp的JEV的5′和3′两个半长分子及约11000bp的全长cDNA片段,其二级结构丰富的非编码区未发生缺失。JEV全长cDNA分子与GenBank中收录的相关毒株的的核苷酸序列同源性最高达99%,其氨基酸序列同源性最高达96.3%。其E蛋白基因与野毒株和减毒株进行比较,核苷酸序列同源性高达98%～99%,氨基酸序列也未出现较大差异。结论已获得了乙型脑炎病毒SA14-14-2株全长基因组,为进一步构建感染性克隆奠定了基础。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 全长CDNA 长链pcr 融合pcr
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登革2型病毒全长基因组的长链RT-PCR法扩增 被引量：6
9
作者 贡树基 赵卫 +3 位作者 曹虹 张文炳 周浩 陈丽丹 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期429-430,共2页
目的采用长链RT-PCR技术扩增登革2型病毒新几内亚株(NGC)全长基因组。方法根据登革2型病毒NGC株基因组全序列设计引物,在上游引物中加入Sp6 RNA聚合酶启动子核心序列,下游引物中加入ClaⅠ内切酶位点。从病毒感染的乳鼠脑中提取RNA,采用... 目的采用长链RT-PCR技术扩增登革2型病毒新几内亚株(NGC)全长基因组。方法根据登革2型病毒NGC株基因组全序列设计引物,在上游引物中加入Sp6 RNA聚合酶启动子核心序列,下游引物中加入ClaⅠ内切酶位点。从病毒感染的乳鼠脑中提取RNA,采用长链RT-PCR技术进行扩增。以获得的PCR产物为模板分别扩增3个NGC株特异的基因片段。结果长链RT-PCR法扩增出约11 kb基因片段,经PCR法证实为登革2型病毒NGC株特异序列。结论通过长链RT-PCR技术,获得了登革2型病毒NGC株全长基因组,为进一步构建感染性克隆打下基础。 展开更多
关键词 登革2型病毒 全长CDNA 长链RT—pcr
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单环刺螠线粒体基因组全序列的获得——长PCR结合鸟枪法测序 被引量：3
10
作者 申欣 吴志刚 《海洋科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期26-29,35,共5页
由于具有单基因所不可比拟的优势,线粒体基因组现已成为后生动物种群遗传和分子系统发育研究中一个重要的信息来源。本研究选取螠虫动物的代表物种——单环刺螠(Urechis unicinctus),详细阐述了利用长PCR方法扩增其线粒体DNA,获得约15 k... 由于具有单基因所不可比拟的优势,线粒体基因组现已成为后生动物种群遗传和分子系统发育研究中一个重要的信息来源。本研究选取螠虫动物的代表物种——单环刺螠(Urechis unicinctus),详细阐述了利用长PCR方法扩增其线粒体DNA,获得约15 kb的扩增产物,进而构建shotgun文库,最终成功获得单环刺螠线粒体基因组全序列的流程。本实验流程样品需求量少、设备要求低、简便快捷。 展开更多
关键词 线粒体基因组 长pcr 鸟枪法 单环刺螠(Urechis unicinctus)
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倒位PCR法检测血友病A FⅧ基因内含子22/1倒位 被引量：3
11
作者 何国平 陈玲 +5 位作者 刘雨生 童先宏 宋雅娴 周桂香 骆丽华 张颖新 《临床输血与检验》 CAS 2010年第3期197-200,共4页
目的建立血友病A(hemophilia A,HA)FⅧ基因第22内含子倒位PCR检测法,并初步应用于HA直接基因诊断。方法应用倒位PCR(inversion-PCR,I-PCR)方法对24个HA家系中所有先证者的FⅧ基因22内含子倒位进行检测,对检测阳性者的母亲进一步用上述... 目的建立血友病A(hemophilia A,HA)FⅧ基因第22内含子倒位PCR检测法,并初步应用于HA直接基因诊断。方法应用倒位PCR(inversion-PCR,I-PCR)方法对24个HA家系中所有先证者的FⅧ基因22内含子倒位进行检测,对检测阳性者的母亲进一步用上述方法行携带者诊断,并对其中1例进行羊水产前基因诊断。检测阴性者再行内含子1倒位筛查。结果 24个HA家系中,7例先证者的F基因内含子22倒位检测为阳性,阳性检出率、可诊断率分别为29.17%、100%,未发现内含子1倒位;7例内含子22倒位突变阳性患者的母亲有6例为倒位携带者,羊水诊断未发现内含子22/1倒位。结论 I-PCR法能准确地检测F基因22内含子倒位突变,可应用于HA患者及携带者FⅧ基因22内含子倒位基因诊断及产前诊断。 展开更多
关键词 倒位pcr 长链pcr 血友病A FⅧ基因内含子22/1
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长距离反向PCR技术高效扩增已知DNA片断的侧翼序列 被引量：8
12
作者 洪宇植 肖亚中 +3 位作者 房伟 童品贵 袁璟 孙芹英 《激光生物学报》 CAS CSCD 2006年第1期46-49,共4页
为解决传统反向PCR技术扩增片段短、假阳性多的不足,建立了长距离反向PCR(LD I-PCR)扩增技术:0.5μg DNA/mL的反应体系使DNA酶解片段充分自身环化连接,其产物用25 nt^30 nt的序列特异引物进行长距离PCR。结果表明该方法能特异地扩增出长... 为解决传统反向PCR技术扩增片段短、假阳性多的不足,建立了长距离反向PCR(LD I-PCR)扩增技术:0.5μg DNA/mL的反应体系使DNA酶解片段充分自身环化连接,其产物用25 nt^30 nt的序列特异引物进行长距离PCR。结果表明该方法能特异地扩增出长达16 kb的序列,在已知DNA片段的侧翼序列克隆方面具有高效、简便、特异的优点。 展开更多
关键词 长距离反向pcr 侧翼序列 漆酶基因
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长距离PCR检测重型血友病A病人凝血因子Ⅷ基因倒位 被引量：1
13
作者 丁培芳 孙汶生 +4 位作者 王勤友 刘德春 张雪芹 滕彬 申法奎 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2003年第4期390-392,共3页
为了筛查山东省重型血友病A(hemophiliaA ,HA)凝血因子Ⅷ基因倒位的患者并检出携带者 ,采用长距离DNA扩增 (LD PCR)方法 ,以 0 .6 %琼脂糖凝胶电泳技术 ,检测临床上确诊的 5 5例重型HA患者及其家系成员中是否存在凝血因子Ⅷ (FⅧ )基因... 为了筛查山东省重型血友病A(hemophiliaA ,HA)凝血因子Ⅷ基因倒位的患者并检出携带者 ,采用长距离DNA扩增 (LD PCR)方法 ,以 0 .6 %琼脂糖凝胶电泳技术 ,检测临床上确诊的 5 5例重型HA患者及其家系成员中是否存在凝血因子Ⅷ (FⅧ )基因倒位。电泳出现 11kb带 ,示凝血因子Ⅷ基因倒位 ;12kb带 ,示非倒位 ;这两条带同时出现者为凝血因子Ⅷ基因倒位携带者。结果表明 :5 5例无亲缘关系的重型HA患者中 ,发现 2 2例患者 (或家系成员 )有凝血因子Ⅷ基因倒位 ,占重型HA患者的 4 0 % ;15个家系中查出基因倒位携带者 5名。结论 :运用LD PCR技术可以准确、简便、快速地检测重型血友病A患者是否存在凝血因子Ⅷ基因倒位。 展开更多
关键词 pcr 长距离pcr 血友病A 凝血因子Ⅷ 基因倒位
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柑橘黄化脉明病毒基因组的长链RT-PCR扩增、克隆及序列分析 被引量：3
14
作者 崔甜甜 王艳娇 +3 位作者 宾羽 李中安 周常勇 宋震 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期944-952,共9页
为了建立柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)基因组长链RT-PCR扩增体系,构建其全长cDNA克隆,为深入了解CYVCV分子特性及其致病机理奠定基础。根据GenBank中CYVCV基因组序列和5′RACE扩增结果设计引物。以感染CY... 为了建立柑橘黄化脉明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)基因组长链RT-PCR扩增体系,构建其全长cDNA克隆,为深入了解CYVCV分子特性及其致病机理奠定基础。根据GenBank中CYVCV基因组序列和5′RACE扩增结果设计引物。以感染CYVCV的代代酸橙(Citrus aurantium‘Daidai’)植株总RNA为模板进行长链RT-PCR扩增,得到CYVCV全基因组cDNA,克隆至pGEM-Teasy载体,并进行序列测定与分析。结果显示,建立了一步扩增CYVCV全基因组的长链RT-PCR方法,扩增出约7.5 kb的目标片段;所获得的4个CYVCV全基因组cDNA序列与GenBank中已登录的相关毒株的核苷酸序列同源性为93%~99%。 展开更多
关键词 柑橘黄化脉明病毒 RACE 全长CDNA 长链RT-pcr
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长引物快速PCR结合核酸试纸条法可视化检测四种病原体 被引量：5
15
作者 黄欢 李朔 +1 位作者 孙丽洲 周国华 《标记免疫分析与临床》 CAS 2013年第6期436-439,共4页
目的建立一种基于病原体核酸分子的血液安全性检定方法,可视化区分血液中乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、艾滋病毒(HIV)和梅毒螺旋体(TP)。方法利用长引物PCR扩增四种病原体核酸,循环步骤由传统的三步简化为两步。将修饰有小分子抗原的... 目的建立一种基于病原体核酸分子的血液安全性检定方法,可视化区分血液中乙肝病毒(HBV)、丙肝病毒(HCV)、艾滋病毒(HIV)和梅毒螺旋体(TP)。方法利用长引物PCR扩增四种病原体核酸,循环步骤由传统的三步简化为两步。将修饰有小分子抗原的扩增产物点样于固定有相应抗体的纳米颗粒试纸条上,肉眼判读显色结果。优化了长引物PCR对于四种病原体扩增的退火和变性温度,并评价了该方法用于病原体阳参及血清样本的检测准确性。结果四种病原体核酸扩增的退火温度分别为76℃、78℃、76℃和78℃;变性温度为84℃、90℃、84℃和88℃;本方法能成功区分四种病原体的阴阳性样本,准确性高;扩增时间仅为40 min/40个循环,检测为10 min。结论该方法能够用于四种病原体核酸的可视化检测,与传统的检测方法相比,检测速度快,成本低,无需昂贵的仪器,易于广大基层医院普及。 展开更多
关键词 长引物聚合酶链反应 核酸试纸条法 病原体核酸
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日本脑炎病毒WHe株全长cDNA的长链RT-PCR法的扩增 被引量：2
16
作者 唐青海 乔宪凤 +6 位作者 马秋明 何维明 郑新民 刘西梅 安立国 颜艳 魏庆信 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2007年第8期19-23,共5页
为深入探索日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)WHe株的致病机理,并为新型疫苗研发提供技术支持,采用长链RT-PCR技术对其基因组全长cDNA进行了扩增鉴定,并对含复杂二级结构的3′末端和5′末端非编码区扩增片段进行了测序分... 为深入探索日本脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)WHe株的致病机理,并为新型疫苗研发提供技术支持,采用长链RT-PCR技术对其基因组全长cDNA进行了扩增鉴定,并对含复杂二级结构的3′末端和5′末端非编码区扩增片段进行了测序分析。扩增结果表明,扩增出的JEV WHe株基因组全长cDNA分子近11 kb大小;非编码区测序分析表明,扩增产物为WHe株所特有。提示长链RT-PCR法可用于JEV WHe株基因组全长cD-NA的扩增。 展开更多
关键词 日本脑炎病毒WHe株 全长CDNA 长链RT-pcr
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用连续长片段RT-PCR扩增HCV结构基因 被引量：1
17
作者 高健 邓小昭 +3 位作者 王永山 刁振宇 周宗安 何亮 《医学研究生学报》 CAS 2001年第z1期51-53,共3页
目的与方法 :使用连续长片段 RT- PCR,扩增 HCV的结构基因。　结果 :利用连续长片段 RT- PCR技术 ,结合热启动和两段 PCR一次扩增出长 2 .3kb的 HCV结构基因和部分调控序列 ,并用测量分子质量和限制性酶切的方法进行了鉴定。　结论 :利... 目的与方法 :使用连续长片段 RT- PCR,扩增 HCV的结构基因。　结果 :利用连续长片段 RT- PCR技术 ,结合热启动和两段 PCR一次扩增出长 2 .3kb的 HCV结构基因和部分调控序列 ,并用测量分子质量和限制性酶切的方法进行了鉴定。　结论 :利用长片段 RT- PCR可一次扩增出 C、E1、E2基因和部分 5 - N TR。 展开更多
关键词 丙肝病毒 结构基因 长RT-pcr 限制性内切酶
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螺旋通道微流控PCR芯片连续自动扩增DNA片段的研究 被引量：6
18
作者 刘金华 殷学锋 方肇伦 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2004年第1期30-34,共5页
研制了由内向外流动的螺旋通道微流控 PCR玻璃芯片 ,减少了 PCR反应液在微通道中流动时的分散和阻力 ;讨论了扩增循环数和进样速度对长片段基因扩增的影响 ,在 2 6min内成功扩增了质量浓度仅为1 0 ng/m L的 60 1 2 bpλ-DNA;通过将小孔... 研制了由内向外流动的螺旋通道微流控 PCR玻璃芯片 ,减少了 PCR反应液在微通道中流动时的分散和阻力 ;讨论了扩增循环数和进样速度对长片段基因扩增的影响 ,在 2 6min内成功扩增了质量浓度仅为1 0 ng/m L的 60 1 2 bpλ-DNA;通过将小孔径石英毛细管作为顺序注射 (SI)系统的连接管路 ,使其死体积降到 0 .3 0 μL.实现了微升级样品的自动换样、连续 PCR扩增和微通道洗涤等功能 .样品间无交叉污染 .每小时可扩增 5 0 0 bpλ-DNA试样 7个 .扩增产物片段大小和荧光强度的相对标准偏差分别为 0 .4%和 6.7% . 展开更多
关键词 螺旋通道 微流控芯片 自动扩增 DNA片段 顺序注射分析 聚合酶链反应
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长片段基因FMNL2 PCR实验的体会 被引量：3
19
作者 曾元凤 肖移生 +1 位作者 梁莉 丁彦青 《南昌大学学报（医学版）》 CAS 2013年第4期19-21,共3页
目的尝试扩增长片段FMNL2基因。方法采用巢式PCR或和降落PCR相结合的方法进行了FMNL2基因编码区全长及FMNL2-NT、-CT的扩增。结果高效、特异地扩增出FMNL2基因编码区全长及FMNL2-NT、-CT片段。结论巢式PCR或和降落PCR相结合,提高了目的... 目的尝试扩增长片段FMNL2基因。方法采用巢式PCR或和降落PCR相结合的方法进行了FMNL2基因编码区全长及FMNL2-NT、-CT的扩增。结果高效、特异地扩增出FMNL2基因编码区全长及FMNL2-NT、-CT片段。结论巢式PCR或和降落PCR相结合,提高了目的基因的扩增效率和扩增产物的特异性。 展开更多
关键词 巢式pcr 降落pcr 长片段基因 FMNL2
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利用长引物嵌套式反向PCR方法克隆雅致枝霉Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列 被引量：7
20
作者 王德培 孙伟 +3 位作者 李明春 魏东盛 张颖慧 邢来君 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期581-586,共6页
用限制酶EcoRⅠ、KpnⅠ分别对雅致枝霉As3.2806基因组DNA进行消化,而后在低浓度条件下利用T4DNA连接酶使DNA自身环化。根据已知基因序列,设计一对长度为35nt的长反向引物和两对较短的引物,以基因组连接产物为模板,通过三轮嵌套式PCR反应... 用限制酶EcoRⅠ、KpnⅠ分别对雅致枝霉As3.2806基因组DNA进行消化,而后在低浓度条件下利用T4DNA连接酶使DNA自身环化。根据已知基因序列,设计一对长度为35nt的长反向引物和两对较短的引物,以基因组连接产物为模板,通过三轮嵌套式PCR反应,获得一长度约为4kb的扩增片段。经序列测定表明得到了Δ6-脂肪酸脱氢酶基因上游序列约为1.3kb,初步序列分析显示该序列为一潜在的启动子序列。 展开更多
关键词 雅致枝霉 长引物 巢式反向pcr Δ6-脂肪酸脱氢酶
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