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干扰转录因子StMYB90-like对彩色马铃薯花青素合成的影响 被引量:1
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作者 潘阳 王立春 +5 位作者 付学鹏 田国奎 王海艳 李凤云 庞泽 李明雪 《中国瓜菜》 北大核心 2025年第10期56-60,共5页
为明确转录因子StMYB90-like在花青素合成代谢中的调控机制,以彩色马铃薯黑金刚为研究对象,基于前期生物信息学筛选的转录因子StMYB90-like,通过干扰载体构建、遗传转化、荧光定量分析、花青素含量的测定,对转基因马铃薯进行检测和分析... 为明确转录因子StMYB90-like在花青素合成代谢中的调控机制,以彩色马铃薯黑金刚为研究对象,基于前期生物信息学筛选的转录因子StMYB90-like,通过干扰载体构建、遗传转化、荧光定量分析、花青素含量的测定,对转基因马铃薯进行检测和分析。结果表明,干扰彩色马铃薯黑金刚中转录因子StMYB90-like的表达后,其自身表达量显著降低,且马铃薯叶片中的花青素含量极显著降低了47.94%,马铃薯块茎颜色变浅,马铃薯块茎中的花青素含量显著降低了9.79%。说明转录因子StMYB90-like能够正向调控彩色马铃薯中花青素的合成,推测其可能通过上调花青素生物合成相关结构基因的方式调控马铃薯花青素的合成和积累。 展开更多
关键词 彩色马铃薯 花青素 遗传转化 转录因子 StMYB90-like
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菊花CmMYB15-like基因抗旱性功能鉴定 被引量:1
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作者 史志坤 张怡雪 +3 位作者 宋子燕 张开明 李永华 李菲 《植物遗传资源学报》 北大核心 2025年第2期369-379,共11页
菊花(Chrysanthemum morifolium)具有重要的观赏与经济价值,干旱会降低其产量和品质,造成巨大经济损失。挖掘菊花中的抗旱基因,培育抗旱品种是解决上述问题的重要手段。MYB转录因子参与植物生长发育和响应非生物胁迫。本研究在拟南芥中... 菊花(Chrysanthemum morifolium)具有重要的观赏与经济价值,干旱会降低其产量和品质,造成巨大经济损失。挖掘菊花中的抗旱基因,培育抗旱品种是解决上述问题的重要手段。MYB转录因子参与植物生长发育和响应非生物胁迫。本研究在拟南芥中异源表达菊花CmMYB15-like基因,通过观察干旱胁迫后的表型变化,测定相对含水量、丙二醛含量、可溶性糖含量、超氧化物歧化酶活性、木质素含量等指标,探究该基因的抗旱性功能。结果显示,过表达CmMYB15-like拟南芥的存活率、相对含水量、超氧化物歧化酶活性、可溶性糖含量较野生型显著升高,丙二醛含量较野生型显著下降;幼苗主根长度及侧根数目较野生型显著升高。此外,AtPAL2、AtPAL4、At4CL1等木质素合成相关基因表达显著上调,木质素含量显著提高。这些结果表明,CmMYB15-like参与拟南芥干旱胁迫反应,为菊花抗旱基因资源筛选和品种培育提供一定理论依据。 展开更多
关键词 菊花 MYB转录因子 CmMYB15-like 拟南芥 抗旱
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DAM-like基因在蔷薇科落叶果树芽休眠调控中的研究进展 被引量:1
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作者 赵亚林 王力荣 《果树学报》 北大核心 2025年第4期890-899,共10页
休眠是植物在长期演化过程中获得的一种适应季节性变化的生物学特性。研究休眠机制对确保果树安全越冬和探索设施果树栽培新模式具有重要意义。在全球气候急剧变化的大背景下,对多年生落叶果树芽休眠进行研究,有利于进一步加深对休眠过... 休眠是植物在长期演化过程中获得的一种适应季节性变化的生物学特性。研究休眠机制对确保果树安全越冬和探索设施果树栽培新模式具有重要意义。在全球气候急剧变化的大背景下,对多年生落叶果树芽休眠进行研究,有利于进一步加深对休眠过程调控机制的理解。对当前在调控芽休眠进程中起关键作用的DAM-like基因鉴定及其功能、DAM基因与激素的关系、表观遗传调控对DAM-like基因的影响进行梳理和综述,以期为解析果树芽休眠调控机制及休眠相关分子育种奠定基础。 展开更多
关键词 落叶果树 芽休眠 DAM-like基因 植物激素 表观遗传
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棉花酵母双杂交文库构建及GhbHLH149-like互作蛋白筛选
4
作者 刘迪 甄军波 +3 位作者 刘琳琳 封丛华 冯晓晴 迟吉娜 《核农学报》 北大核心 2025年第8期1657-1664,共8页
basic helix-loop-helix(bHLH)是植物中广泛存在的一类转录因子,在植物生长发育及非生物胁迫响应中起重要作用,其中GhbHLH149-like基因的表达受盐胁迫诱导。为筛选鉴定与GhbHLH149-like互作的蛋白并从分子层面解析GhbHLH149-like在棉花... basic helix-loop-helix(bHLH)是植物中广泛存在的一类转录因子,在植物生长发育及非生物胁迫响应中起重要作用,其中GhbHLH149-like基因的表达受盐胁迫诱导。为筛选鉴定与GhbHLH149-like互作的蛋白并从分子层面解析GhbHLH149-like在棉花幼苗盐胁迫响应中的调控机制,本研究以陆地棉品种JZ-1为材料,构建了陆地棉酵母双杂交混合cDNA文库。结果表明,获得的初级文库库容量为1.12×10^(7)CFU,次级文库库容量为1.44×10^(7)CFU,两种文库重组率皆为100%,插入片段的平均长度大于1000 bp,酵母文库滴度为1.40×10^(8)cells·mL^(-1)。文库质量合格,满足后续酵母双杂交筛选要求。成功构建了诱饵表达载体pGBKT7-GhbHLH149-like,经鉴定其对酵母菌株无毒性,且无自激活活性。利用诱饵载体对文库进行酵母双杂交筛选,共筛选出8个与GhbHLH149-like互作的候选蛋白,并进行酵母回交一对一验证进一步确认互作关系。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示候选互作蛋白KNOX1-4和EF-Tu的编码基因的表达明显受盐处理诱导。相关结果为进一步研究GhbHLH149-like参与调控棉花幼苗盐胁迫响应的分子机制奠定了理论基础。 展开更多
关键词 棉花 酵母双杂交 互作蛋白 GhbHLH149-like
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林氏扇头蜱抗菌肽Microplusin-like基因原核表达及抗菌功能
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作者 彭维祺 谢子芳 +4 位作者 李晴 黎明成 陈杰 朱勇川 赵建国 《中国热带医学》 北大核心 2025年第7期882-889,共8页
目的 探究林氏扇头蜱抗菌肽Microplusin-like基因的抗菌功能,为了解林氏扇头蜱先天免疫系统和开发蜱类防控药物、新型抗菌药物替代提供新的参考依据。方法 根据林氏扇头蜱Microplusin-like基因序列设计特异性引物,提取林氏扇头蜱RNA并... 目的 探究林氏扇头蜱抗菌肽Microplusin-like基因的抗菌功能,为了解林氏扇头蜱先天免疫系统和开发蜱类防控药物、新型抗菌药物替代提供新的参考依据。方法 根据林氏扇头蜱Microplusin-like基因序列设计特异性引物,提取林氏扇头蜱RNA并反转录为cDNA,通过PCR扩增基因片段,将基因片段连接至pCold-SUMO质粒,构建重组表达载体pCold-SUMO/Microplusin-like后,转入大肠埃希菌Rosetta(DE3)感受态细胞,经诱导表达、纯化后获得蛋白;通过滤纸片法测定重组蛋白对大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈,通过微量对倍稀释法测定其对大肠埃希菌、沙门菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)和最低杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC),并通过测定该蛋白对大肠埃希菌生长曲线、时间-杀菌曲线的影响探究其抑菌效果;通过扫描电镜及透射电镜观察重组蛋白对大肠埃希菌微观形态的影响,并结合分子对接技术探究重组蛋白的抑菌机制。结果 林氏扇头蜱Microplusin-like基因扩增所得片段长度为333 bp,构建了原核表达载体pCold-SUMO/Microplusin-like,经诱导表达、纯化后获得蛋白,大小约为29 kDa。抑菌试验结果表明,重组蛋白对大肠埃希菌(ATCC 25922、1515、987P、K88、K99)及鸡白痢沙门菌CVCC1791的抑菌圈直径分别为15.8、20.58、18.33、15.4、18.24、18.18 mm,表现出中度或高度敏感;MIC(MBC)分别为0.625(5)、0.625(>5)、0.625(5)、1.25(>5)、0.625(>5)、0.625(>5)mg/mL,存在一定差异;对金黄色葡萄球菌无抑制作用;生长曲线及时间-杀菌曲线测定发现,重组蛋白抑菌活性呈浓度依赖性。扫描及透射电镜显示经重组蛋白处理后大肠埃希菌菌体皱缩,边缘模糊,细胞壁及细胞膜出现破损,内容物外泄,细胞内部松散。分子对接显示蛋白通过氢键、盐桥及疏水作用与大肠埃希菌外膜脂多糖转运蛋白结构发生结合。结论 林氏扇头蜱抗菌肽Microplusin-like蛋白具有抗革兰阴性菌活性,初步分析抗菌机制为破坏细胞壁及细胞膜结构,为开发蜱的新防治策略、新型抗生素替代提供了参考依据。 展开更多
关键词 林氏扇头蜱 Microplusin-like基因 抗菌肽 抗菌活性 原核表达
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马铃薯StZIP8–like基因的克隆及镉转运功能分析
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作者 杨丽红 席银凯 +1 位作者 王丹 胡新喜 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期16-23,共8页
为了探讨StZIP8–like基因的表达模式和功能,从马铃薯中克隆得到StZIP8–like基因的全长序列,通过生物信息学方法对该基因的结构、理化性质及亲缘关系进行预测;利用RT–qPCR技术,分析其在镉胁迫下的表达模式;构建融合表达载体,分析StZIP... 为了探讨StZIP8–like基因的表达模式和功能,从马铃薯中克隆得到StZIP8–like基因的全长序列,通过生物信息学方法对该基因的结构、理化性质及亲缘关系进行预测;利用RT–qPCR技术,分析其在镉胁迫下的表达模式;构建融合表达载体,分析StZIP8–like蛋白在烟草叶片中的亚细胞定位;通过酵母异源表达试验,分析St ZIP8–like的镉转运功能。结构分析结果表明,StZIP8–like序列全长1 044 bp,编码347个氨基酸,含有1个ZIP保守结构域及7个跨膜结构域;系统进化分析结果表明,StZIP8–like蛋白与番茄及烟草中的ZIP8蛋白的亲缘关系较近。亚细胞定位结果显示,St ZIP8–like蛋白定位于细胞质膜;RT–q PCR结果表明,St ZIP8–like在马铃薯幼苗的根中表达量较高,并且Cd胁迫诱导下St ZIP8–like基因在马铃薯根、茎和叶中的表达量均上调;酵母试验结果显示,St ZIP8–like过表达的酵母对Cd更加敏感,具有Cd吸收转运活性。以上结果说明St ZIP8–like受到Cd胁迫的诱导表达,可能参与马铃薯吸收Cd的过程。 展开更多
关键词 马铃薯 StZIP8–like 基因表达 酵母
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新疆野苹果MsPYR1-like基因生物信息学分析及其在种子萌发过程中的表达模式
7
作者 房震 李静 +2 位作者 马娟 张凯 叶春秀 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期23-33,共11页
【目的】克隆新疆野苹果(Malus sieversii)脱落酸受体基因MsPYR1-like,研究其在4℃低温沙藏过程中的表达规律,为揭示MsPYR1-like基因的功能及其在新疆野苹果种子休眠解除中的作用提供依据。【方法】从NCBI数据库中选择金冠苹果(Malus do... 【目的】克隆新疆野苹果(Malus sieversii)脱落酸受体基因MsPYR1-like,研究其在4℃低温沙藏过程中的表达规律,为揭示MsPYR1-like基因的功能及其在新疆野苹果种子休眠解除中的作用提供依据。【方法】从NCBI数据库中选择金冠苹果(Malus domestica)PYR1-like基因序列,将其与新疆野苹果转录组数据库进行BLAST同源比对,获得新疆野苹果PYR1-like基因序列。采用在线网站Expasy ProtParma、Expasy ProtScale、TMHMM2.0、SignalP-6.0和Plant-mPLoc,对MsPYR1-like蛋白进行理化特性和亲疏水性分析以及跨膜结构、信号肽和亚细胞定位预测。使用NCBI的CDD数据库、SOPMA和Swiss-Model Workspace,分析MsPYR1-like蛋白的保守结构域、预测蛋白二级和三级结构。利用DNAMAN和MEGA 11进行蛋白序列比对和构建蛋白系统进化树,构建MsPYR1-like基因载体并对侵染烟草叶片进行亚细胞定位。采用室温和4℃低温沙藏层积法处理新疆野苹果种子,于处理0,30,60,90和120 d时取样测定种子萌发率,同时采用实时荧光定量PCR检测种子MsPYR1-like的相对表达量,采用酶联免疫吸附法测定脱落酸含量,分析种子萌发率、MsPYR1-like相对表达量和脱落酸含量三者之间的关系。【结果】MsPYR1-like基因开放阅读框全长621 bp,编码206个氨基酸,分子质量为23.14 ku,等电点5.37,不稳定系数41.16,脂肪族氨基酸指数74.17,为亲水性蛋白,不含信号肽和跨膜结构。其蛋白序列具有SRPBCC超家族结构域,属于PYR/PYL/RACR蛋白家族,α-螺旋和无规则卷曲为二级结构主要组成。MsPYR1-like亚细胞定位在细胞核和细胞质膜中。同源性分析和系统进化树结果显示,MsPYR1-like与欧洲野苹果(Malus sylvestris)同源蛋白的亲缘关系最近。室温处理不同时间的新疆野菜果种子萌发率均为0%,低温沙藏0,30,60,90,120 d的种子萌发率分别为0%,0%,7%,95%和100%;随沙藏层积时间的增加,室温和4℃低温处理新疆野苹果种子的脱落酸含量均呈下降趋势,室温处理MsPYR1-like基因的相对表达量逐渐增加,而低温沙藏处理MsPYR1-like基因的相对表达量呈下降趋势。【结论】MsPYR1-like基因可能参与了新疆野苹果种子的休眠解除。 展开更多
关键词 种子休眠 种子萌发 脱落酸 新疆野苹果 MsPYR1-like 生物信息学
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低温胁迫下外源油菜素内酯对冬小麦REVEILLE 7-like基因表达的影响
8
作者 陈宇姝 张军保 +4 位作者 王雪松 邵庆一 杨森 曹佳昂 刘丽杰 《广西植物》 北大核心 2025年第7期1260-1269,共10页
‘东农冬麦1号’(‘Dn1’)是首个能在严寒地带大面积种植、返青率超过85%的强抗寒冬小麦品种。为探索冬小麦中REVEILLE 7-like基因的功能,以及低温胁迫下外源油菜素内酯(BR)对该基因表达的影响,该研究利用RT-PCR法克隆了冬小麦(Dn1)REVE... ‘东农冬麦1号’(‘Dn1’)是首个能在严寒地带大面积种植、返青率超过85%的强抗寒冬小麦品种。为探索冬小麦中REVEILLE 7-like基因的功能,以及低温胁迫下外源油菜素内酯(BR)对该基因表达的影响,该研究利用RT-PCR法克隆了冬小麦(Dn1)REVEILLE 7-lik e基因的cDNA序列,并对其进行了生物信息学分析,在冬小麦三叶期时叶面喷施BR,并分别于4、0、-10、-25℃时对冬小麦叶片和分蘖节进行取样,用qRT-PCR技术分析该基因在以上不同处理组冬小麦叶片和分蘖节中的表达模式。结果表明:(1)REVEILLES属于MYB类转录因子家族,REVEILLE 7-like基因全长1251 bp,共编码416个氨基酸,编码蛋白为不稳定亲水性蛋白,主要定位于细胞核。(2)REVEILLE 7-like与节节麦、二粒小麦亲缘关系最近,蛋白序列总相似度78.62%。(3)REVEILLE 7-like基因启动子包含参与逆境响应、激素响应及MYB结合位点的顺式作用元件。(4)表达模式分析发现,对照组中REVEILLE 7-like基因的表达量在0、-10、-25℃时与4℃时相比较均有显著提高。处理组与对照组相比,该基因的表达量在-10℃和-25℃时均显著提高。综上推测,该基因在冬小麦受到低温胁迫时起重要作用,并且BR可以提高该基因的表达,从而进一步提高冬小麦的耐寒性。 展开更多
关键词 寒地冬小麦 油菜素内酯 REVEILLE 7-like 基因克隆 低温胁迫
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苹果溶质转运蛋白家族MdSLC25A44-like基因特征和表达分析
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作者 申亚楠 张雪珂 +4 位作者 孙晓慧 秦鑫蓉 赵玲玲 宋来庆 刘学卿 《烟台大学学报(自然科学与工程版)》 2025年第1期47-54,共8页
为研究苹果溶质转运蛋白家族基因MdSLC25A44-like的序列和表达模式,利用荧光定量及生物信息学技术分析该基因序列特征及在不同类型苹果组织中的表达水平,分析结果显示,MdSLC25A44-like蛋白序列与白梨PbSLC25A44-like同源性最高;通过构... 为研究苹果溶质转运蛋白家族基因MdSLC25A44-like的序列和表达模式,利用荧光定量及生物信息学技术分析该基因序列特征及在不同类型苹果组织中的表达水平,分析结果显示,MdSLC25A44-like蛋白序列与白梨PbSLC25A44-like同源性最高;通过构建系统进化树得出,MdSLC25A44-like与白梨、秋子梨×西洋梨亲缘关系最近;生物信息学分析结果表示MdSLC25A44-like蛋白是一个α螺旋转运蛋白、稳定性蛋白并具有疏水性,定位于线粒体;花青苷测定结果表示,苹果红色果皮和红色果肉中的花青苷含量明显高于绿色果皮和白色果肉;实时荧光定量PCR结果表明,在苹果红色果皮和红色果肉中MdSLC25A44-like基因的表达量显著高于绿色果皮和白色果肉。MdSLC25A44-like基因可能参与了花青苷积累过程,基因的表达与花青苷积累量呈正相关关系,本结果为进一步研究苹果果实花青苷积累与转运以及提高果实果色品质提供了一定的科学基础。 展开更多
关键词 苹果 MdSLC25A44-like基因 序列特征 表达分析 花青苷
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(3+1)维Hirota-Satsuma-Ito-like方程的Lax可积性及相关问题研究
10
作者 杨欣冉 套格图桑 《应用数学》 北大核心 2025年第4期1227-1241,共15页
本文基于Bell多项式方法,首先将Hirota-Satsuma-Ito-like方程化为双线性形式,并构造出方程的Bäcklund变换, Lax对,无穷守恒律,说明方程的可积性.其次,利用双线性Bäcklund变换得到非线性叠加公式并得到了叠加解.最后,应用试探... 本文基于Bell多项式方法,首先将Hirota-Satsuma-Ito-like方程化为双线性形式,并构造出方程的Bäcklund变换, Lax对,无穷守恒律,说明方程的可积性.其次,利用双线性Bäcklund变换得到非线性叠加公式并得到了叠加解.最后,应用试探函数法获得方程的呼吸解,复合解, lump孤子解与cosh-M-cos-N型叠加解,选取适当参数,通过符号计算软件Mathematica,绘制解的图像并分析. 展开更多
关键词 Hirota-Satsuma-Ito-like方程 Bäcklund变换 无穷守恒律 非线性叠加公式 精确解
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过表达CGLD27 LIKE影响拟南芥类胡萝卜素的合成
11
作者 胡丽娟 梁岗 《安徽农业科学》 2025年第20期7-14,共8页
[目的]探究拟南芥中CGLD27 LIKE(AT5G11840)蛋白在类胡萝卜素合成中的进化起源、亚细胞定位及功能作用,及其对植物生长和光保护的影响。[方法]通过生物信息学手段分析CGLD27 LIKE起源与进化,通过分子生物学技术构建CGLD27 LIKE过表达植... [目的]探究拟南芥中CGLD27 LIKE(AT5G11840)蛋白在类胡萝卜素合成中的进化起源、亚细胞定位及功能作用,及其对植物生长和光保护的影响。[方法]通过生物信息学手段分析CGLD27 LIKE起源与进化,通过分子生物学技术构建CGLD27 LIKE过表达植株,并测量过表达植株中类胡萝卜素合成途径基因表达和过表达植株中光合色素含量。[结果]CGLD27 LIKE起源于蓝藻门且在光合生物中高度保守,定位于叶绿体。过表达株系表现矮化、黄化及育性降低,光合色素含量显著下降。白化表型具有光依赖性:短日照下加重,持续光照则部分恢复。qRT-PCR显示限速酶编码基因PSY和下游LCYb表达下调,而PDS和ZDS显著上调,提示类胡萝卜素合成存在反馈调节。[结论]CGLD27 LIKE作为进化保守的叶绿体定位蛋白,可能通过调控PSY表达负向调节类胡萝卜素合成,其过表达会破坏光保护机制并影响植物发育,这为作物抗逆性和营养品质的遗传改良提供了新靶点。 展开更多
关键词 拟南芥 类胡萝卜素 CGLD27 like 合成
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基于多尺度聚合与Mamba-Like线性注意力机制的医学影像分割方法研究
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作者 吴能光 林志刚 +2 位作者 陈拓 庄菲菲 陈虹 《中国医疗设备》 2025年第10期51-57,共7页
目的解决医学影像分割时普遍面临复杂化、组织边界模糊、器官对比度低等问题,尤其是随着Transformer自注意力机制在医学影像分割中被广泛应用,其存在分割效果不佳的缺点。方法将多尺度注意力聚合和Mamba-Like线性注意力机制进行融合,构... 目的解决医学影像分割时普遍面临复杂化、组织边界模糊、器官对比度低等问题,尤其是随着Transformer自注意力机制在医学影像分割中被广泛应用,其存在分割效果不佳的缺点。方法将多尺度注意力聚合和Mamba-Like线性注意力机制进行融合,构建U型网络MM-UNet。其中,引入Mamba-Like线性注意力机制,增强模型对全局依赖的学习能力;同时采用多尺度注意力聚合机制,通过多尺度卷积有针对性地捕获和利用关键特征,更加全面地捕获多尺度语义信息,以提升模型对影像边缘分割的准确性。结果MM-UNet、UNet、VM-UNet、LightM-UNet等算法在皮肤镜ISIC18、ISIC17、超声甲状腺结节TN3K共3个数据集上进行对比实验,结果表明,MM-UNet在皮肤镜ISIC18、ISIC17、超声甲状腺TN3K数据集上的mIoU分别为83.22%、83.63%、80.19%,Dice系数分别为90.84%、91.08%、89.00%,准确度分别为95.86%、96.57%、97.38%,特异性分别为97.95%、98.36%、98.70%。其中,与UNet、VM-UNet、LightM-UNet等模型相比,MM-UNet的mIoU、Dice系数和准确度均表现最优;MM-UNet的特异性在ISIC18、TN3K数据集上表现最优。结论MM-UNet在多种不同成像背景医学影像数据上均实现了较高的分割精度,其泛化性也较好,具有一定的应用价值。 展开更多
关键词 MM-UNet 卷积神经网络 Mamba-like线性注意力机制 多尺度注意力聚合 Transformer自注意力机制 医学影像分割
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大豆抗豆卷叶螟GmKTI1-like的功能研究
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作者 谭玉荣 陈东亮 +4 位作者 杨守臻 赖振光 唐向民 孙祖东 曾维英 《生物技术通报》 北大核心 2025年第6期99-108,共10页
【目的】Kunitz型胰蛋白酶抑制剂在增强植物抵抗害虫方面发挥重要作用。前期研究表明胰蛋白酶抑制剂GmKTI1-like与大豆抗豆卷叶螟密切相关,探究GmKTI1-like基因在豆卷叶螟胁迫中的功能,为培育抗虫新品种提供重要抗性基因和育种新材料。... 【目的】Kunitz型胰蛋白酶抑制剂在增强植物抵抗害虫方面发挥重要作用。前期研究表明胰蛋白酶抑制剂GmKTI1-like与大豆抗豆卷叶螟密切相关,探究GmKTI1-like基因在豆卷叶螟胁迫中的功能,为培育抗虫新品种提供重要抗性基因和育种新材料。【方法】从大豆叶片中克隆GmKTI1-like,利用生物信息学方法对其理化性质、蛋白质结构、染色体物理定位、亚细胞定位进行分析,采用RT-qPCR分析不同组织中GmKTI1-like的表达模式;利用农杆菌介导法获得转基因植株,经过多年的分子生物学和表型鉴定,筛选携带目标基因且遗传稳定的转基因抗虫大豆新种质,对其进行接虫鉴定及胰蛋白酶抑制剂酶活测定。【结果】GmKTI1-like位于第1染色体上,其编码的GmKTI1-like包含1个KTI结构域和1个跨膜结构域,亚细胞定位分析表明,GmKTI1-like定位于细胞膜上;荧光定量PCR显示,GmKTI1-like在大豆叶片中表达量最高;与野生型(WT)相比,豆卷叶螟胁迫下,转基因大豆植株抗虫性显著增强、胰蛋白酶抑制剂含量高。【结论】过表达大豆GmKTI1-like转基因株系抗虫性能力显著提高,说明其在大豆抗豆卷叶螟的防御反应中发挥重要作用。 展开更多
关键词 大豆 豆卷叶螟 胰蛋白酶抑制剂 GmKTI1-like
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海棠花青苷调控基因MsMYB44-likes的克隆与鉴定
14
作者 陈雅晴 薛星月 +3 位作者 符嘉庆 马宇航 李增林 段瑛 《南方农业学报》 北大核心 2025年第8期2363-2374,共12页
【目的】克隆和鉴定海棠花青苷生物合成相关转录因子(MYB44-likes),为揭示MsMYB44-likes基因在海棠叶片着色过程中的调控机制及海棠观赏性状改良提供参考依据。【方法】以海棠品种海棠花为研究对象,对海棠组织培养幼苗进行喷施25μmol/... 【目的】克隆和鉴定海棠花青苷生物合成相关转录因子(MYB44-likes),为揭示MsMYB44-likes基因在海棠叶片着色过程中的调控机制及海棠观赏性状改良提供参考依据。【方法】以海棠品种海棠花为研究对象,对海棠组织培养幼苗进行喷施25μmol/L脱落酸(ABA)处理,以喷施清水作为对照(CK)。PCR克隆海棠嫩叶中3个MsMYB44-likes基因(MYB44-like1、MsMYB44-like2和MsMYB44-like3),并对3个MsMYB44-likes基因进行生物信息学分析、编码蛋白亚细胞定位和系统发育分析。在苹果表皮中对MsMYB44-like2基因进行瞬时过表达,并通过凝胶迁移试验(EMSA)研究MsMYB44-like2蛋白与花青苷生物合成途径中结构基因[海棠类黄酮糖基转移酶基因(MsUFGT)]的启动子结合情况。【结果】成功克隆获得3个MsMYB44-likes基因(MsMYB44-like1、MsMYB44-like2和MsMYB44-like3),其cDNA序列全长分别为954、960和942 bp,分别编码317、319和313个氨基酸残基;3个MsMYB44-likes蛋白结构中均以α-螺旋和无规则卷曲占比较高,且这3个蛋白与拟南芥、小麦、水稻、梨同源蛋白序列均含有典型的MYB-DNA结合结构域,MsMYB44-like1、MsMYB44-like2与梨的同源蛋白聚为一支。3个MsMYB44-likes蛋白均定位于细胞核。瞬时转化试验结果表明,注射含pCAMBIA2300-MsMYB44-like2农杆菌菌液后,苹果表皮的注射点周围呈黄绿色,说明该基因抑制苹果表皮花青苷的生物合成。与CK相比,经ABA处理后MsMYB44-like2基因的相对表达量显著降低(P<0.05)。EMSA试验结果显示,MsMYB44-like2蛋白与MsUFGT基因启动子片段的结合导致迁移率上移。【结论】3个MsMYB44-likes蛋白均含有典型的MYB-DNA结合结构域,均定位于细胞核。MsMYB44-like2基因表达受ABA负调控,该蛋白通过与MsUFGT基因的启动子直接结合抑制海棠花青苷的生物合成。 展开更多
关键词 海棠 花青苷 MsMYB44-likes转录因子 脱落酸
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柑橘木虱黏液样蛋白DcMucin-like抗体制备及应用
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作者 蒋丽琴 苏巧灵 +2 位作者 李猷 魏太云 宾羽 《中国农业科学》 北大核心 2025年第2期281-290,共10页
【目的】黏液样蛋白(mucin-like protein)参与半翅目昆虫取食过程中唾液鞘的形成。本研究旨在制备柑橘木虱(Diaphorina citri)黏液样蛋白DcMucin-like特异性抗体并对木虱取食孔进行免疫荧光标记,为DcMucin-like生物学功能研究提供依据... 【目的】黏液样蛋白(mucin-like protein)参与半翅目昆虫取食过程中唾液鞘的形成。本研究旨在制备柑橘木虱(Diaphorina citri)黏液样蛋白DcMucin-like特异性抗体并对木虱取食孔进行免疫荧光标记,为DcMucin-like生物学功能研究提供依据。【方法】通过解剖柑橘木虱唾液腺、中肠、卵巢和精巢组织,根据木虱DcMcuin-like序列设计特异性引物,利用实时荧光定量PCR检测分析各组织中DcMcuin-like在转录水平的差异;扩增无信号肽的DcMucin-like序列并插入pET-28a中构建重组质粒,测序验证后转化Rosetta表达菌株,以终浓度0.5 mmol·L-1 IPTG在37℃下振荡培养8 h诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE凝胶电泳检测重组蛋白表达情况;扩大培养后裂解菌体,裂解液上清经Ni-NTA纯化作为抗原免疫家兔5次,纯化血清IgG获得DcMucin-like多克隆抗体,Western blot检测抗体特异性;利用实时荧光定量PCR和Western blot比较健康木虱和感染黄龙病菌(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)木虱中DcMucin-like在转录水平和蛋白水平的差异;利用交联荧光素(FITC)的DcMucin-like多克隆抗体标记木虱取食后的柑橘叶片,在共聚焦显微镜下观察柑橘木虱取食孔和唾液鞘。【结果】实时荧光定量PCR检测显示DcMcuin-like在木虱唾液腺中大量表达,且表达量显著高于中肠、卵巢和精巢组织。携带有pET28a-DcMucin的Rosetta表达菌株经IPTG诱导后在菌体裂解液的上清中获得大量表达的重组蛋白。重组蛋白免疫家兔后取抗血清纯化IgG,Western blot结果表明获得特异性好的DcMucin-like多克隆抗体。实时荧光定量PCR和Western blot分析结果显示DcMucin-like在木虱响应黄龙病菌侵染时上调表达。DcMucin-like(FITC)荧光抗体标记木虱取食后的柑橘叶片组织切片,共聚焦显微镜下观察到木虱的取食孔,并在取食孔周围检测到特异的FITC荧光信号,表明DcMucin-like随木虱取食释放到植株组织中参与唾液鞘形成。【结论】DcMucin-like在柑橘木虱唾液腺中高表达并响应黄龙病菌侵染上调表达;成功制备了特异性好的柑橘木虱DcMucin-like多克隆抗体;验证了DcMucin-like随木虱取食分泌到柑橘植株组织中。研究结果可为深入探究DcMucin-like在黄龙病菌-木虱-柑橘三者互作中的作用打下基础。 展开更多
关键词 柑橘木虱 唾液鞘蛋白 DcMucin-like 抗体制备 免疫荧光
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苹果MdbHLH96-Like调控果实花色素苷积累
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作者 曹佳诺 田佶 《北京农学院学报》 2025年第4期49-53,共5页
【目的】探明MdbHLH96-Like基因在苹果中花色素苷代谢途径中的调控作用,为苹果果实品种优化及分子育种提供基因资源和理论基础。【方法】以‘红富士’(Malus domestica cv.‘Red Fuji’)果皮为试验材料,通过RNA提取和反转录得到cDNA,克... 【目的】探明MdbHLH96-Like基因在苹果中花色素苷代谢途径中的调控作用,为苹果果实品种优化及分子育种提供基因资源和理论基础。【方法】以‘红富士’(Malus domestica cv.‘Red Fuji’)果皮为试验材料,通过RNA提取和反转录得到cDNA,克隆MdbHLH96-Like基因并进行基因启动子序列顺式作用元件预测等生物信息学分析;并构建MdbHLH96-Like的过表达载体,进行‘王林’(Malus domestica cv.‘Orin’)苹果愈伤组织的遗传转化鉴定。【结果】MdbHLH96-Like基因的表达可能受到茉莉酸甲酯等植物激素及其对应的顺式作用元件的调控。转基因愈伤组织在低温光照下培养,与对照愈伤组织相比呈现明显深红色,推测为MdbHLH96-Like过表达引起。高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)结果显示,MdbHLH96-Like过表达愈伤组织中的花色素苷积累量显著高于对照组。同时,实时荧光定量PCR(Real-Time Quantitative PCR,RT-qPCR)结果显示,MdbHLH96-Like过表达愈伤组织中花色素苷生物合成关键基因的转录水平显著升高。【结论】MdbHLH96-Like基因的表达可以提高苹果果皮细胞内花色素苷的积累量。 展开更多
关键词 苹果 MdbHLH96-like 基因克隆 花色素苷
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Primary Pulmonary Lymphoepithelioma-Like Carcinoma Demonstrates a Favorable Response to Tislelizumab Combined with Chemotherapy: A Case Report
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作者 Qianglong Lin Xiaofen Ma 《Journal of Biosciences and Medicines》 2025年第2期122-128,共7页
Background: Primary pulmonary lymphoepithelioma-like carcinoma (LELC) is a rare subtype of non-small cell lung cancer (NSCLC). Nevertheless, no universally acknowledged standards of care have been reported to be effec... Background: Primary pulmonary lymphoepithelioma-like carcinoma (LELC) is a rare subtype of non-small cell lung cancer (NSCLC). Nevertheless, no universally acknowledged standards of care have been reported to be effective and productive for the treatment of this tumor. Materials and Methods: A patient with advanced primary pulmonary LELC was treated by employing a combination of tislelizumab and chemotherapy. Results: The patient displayed a favorable response to the combination therapy. The tumor size exhibited conspicuous abatement in contrast to the pre-treatment baseline, and the tumor markers normalized. Conclusion: The combination of immunotherapy with chemotherapy appears to be more effective than therapy alone for managing advanced primary pulmonary LELC. On that account, further clinical trials are imperative to establish this combination regimen as a potential first-line treatment option for advanced cases. 展开更多
关键词 Primary Pulmonary Lymphoepithelioma-like Carcinoma LELC Tislelizumab Immune Checkpoint Inhibitor
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转录因子7-like 2在宫颈癌中表达水平及其与顺铂化疗敏感性关系研究 被引量:3
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作者 冯敏娟 蔡东阁 李虹 《陕西医学杂志》 CAS 2024年第10期1335-1339,共5页
目的:探究转录因子7-like 2(TCF7L2)在宫颈癌患者中表达水平及其与顺铂化疗敏感性的相关性。方法:收集68例宫颈癌患者(观察组)和68例体检正常者(对照组)为研究对象。留取两组晨起静脉血样用于血清TCF7L2和β-catenin表达水平测定。分析... 目的:探究转录因子7-like 2(TCF7L2)在宫颈癌患者中表达水平及其与顺铂化疗敏感性的相关性。方法:收集68例宫颈癌患者(观察组)和68例体检正常者(对照组)为研究对象。留取两组晨起静脉血样用于血清TCF7L2和β-catenin表达水平测定。分析血清中TCF7L2和β-catenin与患者临床特征及顺铂化疗敏感性的关系。结果:观察组患者血清TCF7L2和β-catenin表达水平显著高于对照组(均P<0.05)。观察组患者FIGO分期Ⅳa期、肿瘤低分化者血清中TCF7L2、β-catenin表达水平明显高于FIGO分期Ⅱb期、Ⅲ期和肿瘤高分化者,FIGO分期Ⅲ期明显高于FIGO分期Ⅱb期,出现淋巴转移者高于无淋巴转移者(均P<0.05);同时顺铂化疗不敏感者血清TCF7L2、β-catenin表达水平明显高于敏感者(均P<0.05)。Logistic回归分析显示,血清中TCF7L2、β-catenin高表达是顺铂化疗不敏感的危险因素(均P<0.05)。结论:宫颈癌患者中TCF7L2异常高表达,且其高表达可能是导致患者顺铂化疗耐药的原因之一。 展开更多
关键词 宫颈癌 化疗 顺铂 转录因子7-like 2 预后 耐药性
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基于类Minkowski-Like分形结构的5G宽带阵列天线
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作者 王泽敏 逯暄 +1 位作者 彭甫镕 张婷 《测试技术学报》 2025年第2期247-254,共8页
为满足5G通信需求,设计了一款基于类Minkowski分形结构的宽带阵列天线。阵列天线采用厚度为1.2 mm、介电常数为4.4的FR4介质基板,整体尺寸360 mm×158 mm。天线由4个阵元线性排列而成,阵元的微带贴片上刻蚀了2阶类Minkowski分形结构... 为满足5G通信需求,设计了一款基于类Minkowski分形结构的宽带阵列天线。阵列天线采用厚度为1.2 mm、介电常数为4.4的FR4介质基板,整体尺寸360 mm×158 mm。天线由4个阵元线性排列而成,阵元的微带贴片上刻蚀了2阶类Minkowski分形结构,将一分二威尔金森功分器平移复制转换为一分四功分器,各输出端口分别为1×4排列的各阵元馈电,接地面采用多个切角的矩形相连。阵列天线工作于1~6 GHz频段,增益达2~9.18 dB,满足全向辐射特性。HFSS仿真与实测结果验证了设计的准确性和实用性。这一成果展示了分形阵列天线在多频带操作和宽带应用中的潜力,为5G及更高频段通信技术的天线设计提供了理论和实践依据。 展开更多
关键词 5G通信 类Minkowski分形结构 阵列天线 威尔金森功分器 宽带天线
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新型杀虫基因cry39A-like和cry40-like的克隆、表达与活性分析
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作者 丰硕 黄国强 +2 位作者 程佳旭 曹伟平 宋健 《中国生物防治学报》 CSCD 北大核心 2024年第6期1406-1413,共8页
韭菜迟眼蕈蚊是农业上重要难防地下害虫,其幼虫对韭菜等多种作物造成严重为害,研究室前期筛选到1株在室内和田间均对韭菜迟眼蕈蚊幼虫具有高毒力的Bt菌株,但菌株的杀虫蛋白类型尚不明确。本研究对Bt菌株进行了全基因组测序,发现cry39A-l... 韭菜迟眼蕈蚊是农业上重要难防地下害虫,其幼虫对韭菜等多种作物造成严重为害,研究室前期筛选到1株在室内和田间均对韭菜迟眼蕈蚊幼虫具有高毒力的Bt菌株,但菌株的杀虫蛋白类型尚不明确。本研究对Bt菌株进行了全基因组测序,发现cry39A-like和cry40-like两个新型杀虫基因。通过设计特异性引物和PCR获得基因的全长序列,利用生物信息学软件开展序列分析,构建pGS21T表达载体,转入大肠杆菌Rosetta(DE3)表达,最后测定表达蛋白对韭菜迟眼蕈蚊幼虫杀虫活性。结果表明,cry39A-like开放阅读框为1986 bp,编码661个氨基酸,与cry39Aa1亲缘关系最近,氨基酸序列相似性为94.10%,属于第三分类等级,Cry39A-like蛋白大小为76 kDa,对韭菜迟眼蕈蚊幼虫具有杀虫活性,LC_(50)为89.42μg/mL;cry40-like开放阅读框为2001 bp,编码666个氨基酸,与Cry40类聚在一支,亲缘关系最近,氨基酸序列相似性最高为70.88%,属于第二分类等级,Cry40-like蛋白大小为74.5 kDa,对韭菜迟眼蕈蚊幼虫具有杀虫活性,LC_(50)为126.83μg/mL。本研究明确了Bt菌株主要杀虫基因,cry39A-like和cry40-like可作为新型杀虫基因资源在韭菜迟眼蕈蚊的生物防治中应用。 展开更多
关键词 苏云金芽胞杆菌 cry39A-like cry40-like 韭菜迟眼蕈蚊 杀虫活性
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