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GTP环化水解酶——一种防治褐飞虱(Nilaparvata lugens)的RNAi靶标基因 被引量:1
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作者 董代幸 羊桂英 +2 位作者 王爱英 罗举 刘淑华 《浙江农业学报》 北大核心 2025年第6期1285-1292,共8页
磷酸鸟苷环化水解酶I(guanosine triphosphate cyclohydrolase I, GCHI)是全变态昆虫重要的生长发育调节因子,参与黑色素形成和蜕皮过程。为探讨了GCHI编码基因作为褐飞虱RNA干扰(RNA interference, RNAi)防控靶标基因的可行性,克隆了... 磷酸鸟苷环化水解酶I(guanosine triphosphate cyclohydrolase I, GCHI)是全变态昆虫重要的生长发育调节因子,参与黑色素形成和蜕皮过程。为探讨了GCHI编码基因作为褐飞虱RNA干扰(RNA interference, RNAi)防控靶标基因的可行性,克隆了褐飞虱的NlGCHI基因,分析了其时空表达特征,并采用显微注射方式进行了功能验证。结果表明,NlGCHI有2个转录本,分别命名为NlGCHIa和NlGCHIb。其中,NlGCHIb在高龄褐飞虱若虫期存在周期性表达动态,且在表皮中表达水平最高。无论是注射dsNlGCHI还是喂食GCHI抑制剂(3-deoxy-D-arabino-heptulosonate-7-phosphate, DAHP),褐飞虱都有极高的死亡率,主要是死于蜕皮障碍,表现为虫蜕不能顺利脱离虫体。dsNlGCHI处理试虫还表现出不能正常黑化的现象。以上结果表明,GCHI在全变态昆虫和不完全变态昆虫中的功能相对保守,影响昆虫的表皮形成和蜕皮过程,其编码基因可用于开发防治褐飞虱的RNAi农药。 展开更多
关键词 褐飞虱 rna干扰 磷酸鸟苷环化水解酶Ⅰ 表皮
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温度胁迫及恢复过程中褐牙鲆幼鱼GH、IGF-I、RNA/DNA比值和糖原的变化 被引量:10
2
作者 黄国强 李洁 +1 位作者 唐夏 张灵燕 《南方水产科学》 CAS 北大核心 2012年第6期16-21,共6页
褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)幼鱼分别在温度8.5℃(T8.5)、13.0℃(T13.0)、17.5℃(T17.5)、22.0℃(T22.0)、26.5℃(T26.5)下养殖10 d后,调整至生长最快的温度22.0℃养殖30 d,研究了生长激素(GH)、类胰岛素生长因子I(IGF-I)、RNA/DNA... 褐牙鲆(Paralichthys olivaceus)幼鱼分别在温度8.5℃(T8.5)、13.0℃(T13.0)、17.5℃(T17.5)、22.0℃(T22.0)、26.5℃(T26.5)下养殖10 d后,调整至生长最快的温度22.0℃养殖30 d,研究了生长激素(GH)、类胰岛素生长因子I(IGF-I)、RNA/DNA比值和糖原质量分数的变化。除在胁迫阶段T17.5处理血浆IGF-I质量浓度显著低于T22.0处理外,不同处理的血浆GH和IGF-I质量浓度在胁迫和恢复阶段均无显著差异。不同处理的肝脏RNA/DNA比值仅在20~40 d阶段有显著差异,不同处理的肌肉RNA/DNA比值在所有时间均无显著差异。胁迫结束时T8.5、T13.0、T26.5处理的肝脏糖原质量分数显著低于T17.5处理,试验结束时T22.0处理肝糖原质量分数略低于其余处理。胁迫结束时T26.5处理肌肉糖原质量分数最高,而在恢复的第一个10 d时T13.0处理肌肉糖原质量分数最高。不同温度下养殖10 d导致的生长减缓能够在恢复至22.0℃后的30 d内获得完全补偿生长,但此试验中GH、IGF-I和RNA/DNA比值与生长率不存在明显的相关性。 展开更多
关键词 褐牙鲆 GH IGF-I rna DNA比值 温度操作
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慢病毒介导 shRNA 沉默鼠肝星状细胞 TGFβ1 对 α1Ⅰ型胶原表达的影响 被引量:4
3
作者 张荣华 闫国和 +1 位作者 汪国建 粟永萍 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期456-460,共5页
目的构建大鼠转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)基因RNA干扰慢病毒载体,并观测其对大鼠肝星状细胞HSC-T6的TGFβ1基因沉默效应与对Ⅰ型胶原α1(alpha-1 typeⅠcollagen,Col1α1)表达的影响。方法针对大鼠TGFβ1基因CD... 目的构建大鼠转化生长因子β1(transforming growth factor,TGFβ1)基因RNA干扰慢病毒载体,并观测其对大鼠肝星状细胞HSC-T6的TGFβ1基因沉默效应与对Ⅰ型胶原α1(alpha-1 typeⅠcollagen,Col1α1)表达的影响。方法针对大鼠TGFβ1基因CDs序列,筛选3个干扰靶点,合成其3对小干扰RNA(siRNA),将各对siRNA分别转入HSC-T6细胞,采用RT-PCR法从3对siRNA中筛选出最佳siRNA,设计并合成针对最佳siRNA靶序列的shRNA,退火形成双链,与载体pGreenPuro连接,构建pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体,予以酶切与测序鉴定。pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体经293细胞包装,将包装产生的高感染力的慢病毒颗粒感染HSC-T6细胞,倒置显微镜观察经感染的HSC-T6细胞的GFP表达情况,在mRNA与蛋白水平检测重组慢病毒pGreenPuro/TGFβ1 shRNA对HSC-T6细胞的TGFβ1基因的沉默效应及对Col1α1表达的影响。结果筛选到TGFβ1基因的最佳干扰靶序列。酶切与测序结果证实,构建pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒载体成功。HSC-T6细胞经pGreenPuro/TGFβ1 shRNA慢病毒感染48 h后,RT-PCR检测未见TGFβ1基因表达,Col1α1基因较弱表达;Western blot检测显示TGFβ1、Col1α1蛋白表达均非常弱。结论成功构建大鼠TGFβ1基因RNA干扰慢病毒载体,该载体能有效沉默HSC-T6细胞的TGFβ1基因,并抑制Col1α1的表达。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 Ⅰ型胶原α1 rna干扰 小分子 慢病毒载体
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RNA干扰TGF-β信号通路对人膀胱癌T24细胞迁移和侵袭能力的影响 被引量:3
4
作者 李玉兵 江少波 +2 位作者 任小刚 孙洁 谢立平 《医学研究杂志》 2013年第7期150-154,共5页
目的探讨过表达的TGF-β1和作用于TGF-β受体Ⅰ的干扰RNA(TsiRNA)在体外对人膀胱癌T24细胞迁移、侵袭能力的影响。方法采用Transwell迁移试验、划痕试验以及Transwell侵袭实验观察过表达的TGF-β1和TsiRNA在体外对人膀胱癌T24细胞迁移... 目的探讨过表达的TGF-β1和作用于TGF-β受体Ⅰ的干扰RNA(TsiRNA)在体外对人膀胱癌T24细胞迁移、侵袭能力的影响。方法采用Transwell迁移试验、划痕试验以及Transwell侵袭实验观察过表达的TGF-β1和TsiRNA在体外对人膀胱癌T24细胞迁移、侵袭能力的影响,RT-PCR技术和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TGF-β1及TsiRNA处理后TGF-β受体Ⅰ基因与蛋白表达水平的变化。结果过表达的TGF-β1可以显著提高膀胱癌T24细胞的迁移、侵袭能力,而TsiRNA可以完全降低由TGF-β1引起的T24的迁移、侵袭能力的变化。结论膀胱癌细胞的迁移、侵袭能力与过表达的TGF-β1密切相关,TsiRNA可以降低T24细胞的迁移、侵袭能力。 展开更多
关键词 膀胱癌 转化生长因子Β1 转化生长因子β受体Ⅰ rna干扰 细胞迁移 侵袭
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靶向抑制人木糖基转移酶-I基因的shRNA真核表达载体的构建 被引量:4
5
作者 石宏 王洁 +3 位作者 王旭 顾洪涛 侯亚丽 于利洁 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期206-210,共5页
目的构建靶向抑制人木糖基转移酶-Ⅰ(XT-Ⅰ)基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,为探讨唾液腺肿瘤性肌上皮细胞合成及分泌蛋白多糖(PG)的研究奠定基础。方法根据GenBank提供的XT-Ⅰ基因序列,设计短链寡核苷酸,化学合成后经退火形成双... 目的构建靶向抑制人木糖基转移酶-Ⅰ(XT-Ⅰ)基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体,为探讨唾液腺肿瘤性肌上皮细胞合成及分泌蛋白多糖(PG)的研究奠定基础。方法根据GenBank提供的XT-Ⅰ基因序列,设计短链寡核苷酸,化学合成后经退火形成双链DNA片段,克隆到Pgenesil-1载体中,构建shRNA真核表达载体WJ1-WJ6,行酶切及核酸测序鉴定;将构建的XT-Ⅰ特异性shRNA表达载体转染体外培养的人唾液腺腺样囊性癌细胞株ACC-M,在荧光倒置显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,流式细胞术检测转染效率,并采用半定量RT-PCR和Western blot分别检测转染后细胞XT-Ⅰ基因mRNA和蛋白表达水平的变化。结果经酶切、连接后构建的6个质粒命名为WJ1、WJ2、WJ3、WJ4、WJ5、WJ6。酶切及核酸测序鉴定证实,构建的shRNA表达载体WJ1-WJ6序列正确;转染WJ1-WJ6后ACC-M细胞均可表达绿色荧光;流式细胞术测定转染效率平均为50.26%;RT-PCR结果显示,WJ3显著抑制XT-Ⅰ mRNA的表达,抑制率为72.39%;Western blot结果显示,WJ3有效抑制XT-Ⅰ的蛋白表达,抑制率为70.18%。结论成功构建靶向抑制XT-Ⅰ的shRNA真核表达载体WJ1-WJ6,其中WJ3可高效抑制XT-Ⅰ基因mRNA及蛋白水平的表达,为唾液腺肿瘤中PG的RNAi研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人木糖基转移酶-I 短发夹状shrna 唾液腺肿瘤 肌上皮细胞 蛋白多糖
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RNA病毒阻断RIG-I样受体识别dsRNA机制研究进展 被引量:6
6
作者 王国庆 朱紫祥 +2 位作者 曹伟军 刘磊 郑海学 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期704-712,共9页
RIG-I样受体(RIG-I-like receptors,RLRs)是一类重要的模式识别受体,其在机体抵抗病毒感染过程中发挥着至关重要的作用。RLRs通过级联放大效应,诱导I型干扰素的表达,激活干扰素通路,最终发挥抗病毒效应。而病毒为了自身长期的生存和繁殖... RIG-I样受体(RIG-I-like receptors,RLRs)是一类重要的模式识别受体,其在机体抵抗病毒感染过程中发挥着至关重要的作用。RLRs通过级联放大效应,诱导I型干扰素的表达,激活干扰素通路,最终发挥抗病毒效应。而病毒为了自身长期的生存和繁殖,在长期的进化和演化过程中,不断的与机体免疫系统进行着抗衡和斗争,由此演化出了一系列的拮抗策略。RLRs主要识别5′端带有三磷酸基团的RNA(包括单链和双链RNA)和双链RNA,其在启动免疫应答过程中可以通过与病毒RNA结合而得以激活,然后招募下游分子,激活整个通路的信号转导。病毒为了阻断RLRs对病毒RNA的识别,拮抗RLRs通路的激活,进化出了非常精细的对抗策略,主要分为:躲避、伪装和攻击三种策略。了解清楚病毒拮抗RLRs抗病毒的分子机制对于研制新的抗病毒药物及发展新的抗病毒策略具有深远意义。本文主要对RNA病毒阻断RLRs识别dsRNA机制的研究进展进行综述。希望为研究不同RNA病毒拮抗RLRs分子机制提供一定的参考和依据。 展开更多
关键词 RIG-I样受体 DSrna rna病毒 拮抗作用
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龙麻金宁方对热哮大鼠肺组织PKBmRNA、α-SMAmRNA表达的影响 被引量:7
7
作者 方向明 严郑元 +1 位作者 李泽庚 刘静 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2015年第2期5-8,共4页
目的:研究龙麻金宁方对热哮大鼠气道重塑及其肺组织中蛋白激酶B(PKBm RNA)、成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA m RNA)、血小板衍生因子(PDGF)、I、III胶原蛋白表达水平的影响。方法:雄性SD大鼠,70只,随机分成以下7组:正常组、模型组... 目的:研究龙麻金宁方对热哮大鼠气道重塑及其肺组织中蛋白激酶B(PKBm RNA)、成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA m RNA)、血小板衍生因子(PDGF)、I、III胶原蛋白表达水平的影响。方法:雄性SD大鼠,70只,随机分成以下7组:正常组、模型组、地塞米松组、麻杏石甘汤组以及龙麻金宁高、中、低剂量组,每组10只。在第1天和第8天,以10%卵蛋白腹腔注射致敏及细菌脂多糖(LPS)滴鼻制热(终浓度400μg·m L-1)复制大鼠热哮模型。第15天开始1%卵蛋白雾化激发,连续7 d,第21天模型复制成功,开始治疗。正常组、模型组每天给予等量蒸馏水灌服,地塞米松组、麻杏石甘汤组、龙麻金宁高、中、低剂量组按人体与大鼠体表面积换算比折算剂量灌胃,灌胃4周后解剖大鼠并取出肺组织。采用HE染色法观察肺组织的病理形态学改变;采用免疫组化法观察肺组织的中、小气道I、III胶原蛋白的阳性表达;采用酶联免疫吸附反应定量肺组织的PDGF含量;采用逆转录-聚合酶链反应以半定量测定PKBm RNA、α-SMA m RNA的表达丰度。结果:与正常组比较,模型组发生明显肺组织炎症反应和气道重塑现象,α-SMAm RNA、PKBm RNA、PDGF、I、III胶原表达水平显著升高(P<0.01);龙麻金宁高、中、低剂量治疗组与模型组比较,α-SMAm RNA、PKBm RNA、PDGF、I、III胶原表达水平显著降低(P<0.01)。结论:龙麻金宁明显减轻热哮大鼠气道炎症反应,抑制热哮大鼠肺组织中α-SMA m RNA、PKBm RNA、PDGF、I、III胶原的表达,延缓气道重塑而治疗哮喘。 展开更多
关键词 热哮 龙麻金宁 血小板衍生因子 Α-平滑肌肌动蛋白 蛋白激酶B I、III胶原蛋白
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鲎源抗菌肽对大肠杆菌基因组DNA和RNA作用的分子机制 被引量:5
8
作者 洪军 胡建业 +2 位作者 王福梅 陈兰英 王者 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期71-75,共5页
为了探讨鲎素对细菌基因组DNA和RNA作用的分子机制,采用琼脂糖凝胶阻滞电泳、荧光和紫外光谱的方法研究了鲎素对细菌基因组DNA和RNA的影响,结果表明鲎素能够与大肠杆菌基因组DNA发生作用,并呈浓度依赖关系,浓度越高对细菌基因组DNA损伤... 为了探讨鲎素对细菌基因组DNA和RNA作用的分子机制,采用琼脂糖凝胶阻滞电泳、荧光和紫外光谱的方法研究了鲎素对细菌基因组DNA和RNA的影响,结果表明鲎素能够与大肠杆菌基因组DNA发生作用,并呈浓度依赖关系,浓度越高对细菌基因组DNA损伤越大;鲎素也能与基因组DNA和RNA结合,抑制其迁移。鲎素与基因组DNA的结合方式有待进一步研究,此结果为在分子水平上深入了解鲎素的杀菌机制提供重要的理论依据。 展开更多
关键词 鲎素 大肠杆菌 基因组DNA rna 相互作用
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Poly(I:C)模拟RNA病毒在气道炎症研究中的应用 被引量:5
9
作者 陈瑶 李云珠 +1 位作者 俞善昌 邵洁 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期768-771,共4页
目的使用poly(I:C)模拟RNA病毒感染,建立一个安全有效的病毒感染模型,探讨病毒诱发气道的炎症。方法BALB/c小鼠随机分为对照组和poly(I:C)组,poly(I:C)组连续3d应用poly(I:C)滴鼻后,连续5d观测小鼠肺泡灌洗液(BALF)细胞学改变,ELISA测定... 目的使用poly(I:C)模拟RNA病毒感染,建立一个安全有效的病毒感染模型,探讨病毒诱发气道的炎症。方法BALB/c小鼠随机分为对照组和poly(I:C)组,poly(I:C)组连续3d应用poly(I:C)滴鼻后,连续5d观测小鼠肺泡灌洗液(BALF)细胞学改变,ELISA测定IFN-γ浓度,同时观察小鼠肺病理改变。结果对照组小鼠BALF中中性粒细胞数和IFN-γ浓度分别为(1.53±0.06)×106/L和(7.11±1.11)ng/L。自Poly(I:C)滴鼻后第1天起,小鼠BALF中性粒细胞数和IFN-γ浓度开始升高,分别为(2.00±0.12)×106/L和(8.01±1.79)ng/L,肺间质内出现炎症细胞。这些变化在滴鼻后的第3天达到高峰,BALF中性粒细胞数和IFN-γ浓度分别为(4.30±0.32)×106/L和(13.51±1.40)ng/L,大量炎症细胞聚集在肺间质,随后炎症变化开始下降。对照组和poly(I:C)刺激组的BALF中淋巴细胞数均为(2.10±0.11)×106/L。结论Poly(I:C)可以模拟RNA病毒感染,诱发病毒感染相似的气道炎症,促使中性粒细胞聚集,破坏正常气道,刺激IFN-γ分泌。但是poly(I:C)诱发的气道炎症是有时间限制的。 展开更多
关键词 rna病毒 poly(I∶C) 气道炎症 小鼠
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miRNA表达谱改变与卵巢癌转移潜力相关性的研究 被引量:1
10
作者 王悦 董丽 +3 位作者 崔恒 白符 付天云 姚远洋 《现代妇产科进展》 CSCD 北大核心 2010年第1期1-6,共6页
目的:探讨卵巢癌转移的相关机制,检测有不同侵袭力卵巢癌细胞的miR-NA差异表达谱。方法:应用包含924条成熟miRNA探针的哺乳动物miRNA芯片V3.0杂交检测具有不同侵袭力的人卵巢乳头状腺癌SKOV3.ip1细胞与其母系SKOV3细胞miRNA表达谱的差异... 目的:探讨卵巢癌转移的相关机制,检测有不同侵袭力卵巢癌细胞的miR-NA差异表达谱。方法:应用包含924条成熟miRNA探针的哺乳动物miRNA芯片V3.0杂交检测具有不同侵袭力的人卵巢乳头状腺癌SKOV3.ip1细胞与其母系SKOV3细胞miRNA表达谱的差异,并与cDNA芯片基因检测结果进行比对分析。结果:miRNA芯片检测到39个2倍以上差异表达miRNA,对比SKOV3细胞,SKOV3.ip1细胞中有11个miRNA表达上调和28个miRNA表达下调,其中包括了hsa-miR-200a/b、-10b、-34a、-224、-148a等已知与侵袭转移相关的重要miRNA。比对cDNA芯片检测结果,提供了IG-FBP1、VEGFB、NME1等重要侵袭相关基因可能调控miRNA的机制。结论:卵巢癌侵袭转移过程中,多个miRNA参与其中,担当重要的调控作用。miRNA有望成为卵巢癌转移的标记物和治疗的靶点。 展开更多
关键词 卵巢肿瘤 MIrna MIrna芯片 肿瘤转移
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一种新的基于A-I RNA编辑预测乳腺癌预后模型的建立和验证 被引量:1
11
作者 李健 刘阳 +1 位作者 闫霞 王颜 《中国现代普通外科进展》 CAS 2024年第5期359-363,共5页
目的:开发一种基于腺苷到肌苷的脱氨基(A-to-I RNA编辑,ATIRE)的预后模型用于改善乳腺癌的个体化治疗。方法:首先使用单变量Cox回归分析来获得训练集中与总生存(OS)相关的ATIRE位点,然后进行最小绝对收缩和选择算子(LASSO)回归算法来确... 目的:开发一种基于腺苷到肌苷的脱氨基(A-to-I RNA编辑,ATIRE)的预后模型用于改善乳腺癌的个体化治疗。方法:首先使用单变量Cox回归分析来获得训练集中与总生存(OS)相关的ATIRE位点,然后进行最小绝对收缩和选择算子(LASSO)回归算法来确定最佳预后ATIRE位点,进行多因素Cox比例风险回归分析建立风险模型,纳入ATIRE风险评分和临床病理学特征变量构建预后列线图,绘制校准曲线并计算一致性指数以评价模型的预测概率与实际的一致性,通过决策曲线分析(DCA)评价该模型的临床收益价值。结果:确定18个预后位点用来构建预后模型,并生成ATIRE风险评分。高风险评分患者的中位生存时间显著缩短,列线图在预测乳腺癌的OS概率方面表现良好。校准曲线表现出优异的一致性,决策曲线显示其具有更高的净收益。结论:分析ATIRE事件在预测乳腺癌生存中的作用,基于AITRE的预后模型可以帮助临床医师更好进行临床决策。 展开更多
关键词 乳腺癌 A-to-I rna编辑 总生存 列线图
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人IGF-I基因慢病毒介导RNA干扰有效靶点的设计及筛选 被引量:3
12
作者 刘红升 赵晓东 +4 位作者 苏琴 党伟 果应菲 袁晓玲 姚咏明 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期421-426,I0001,共7页
目的 设计并筛选人IGF-I有效RNA干扰片段,构建IGF-I-siRNA慢病毒表达载体.方法 对人IGF-I基因编码区分析、筛选序列4条,阴性对照序列1条.与pGCL-GFP质粒重组后,转染大肠杆菌感受态细胞.阳性克隆经过鉴定后得到正确重组子,制备编码慢病... 目的 设计并筛选人IGF-I有效RNA干扰片段,构建IGF-I-siRNA慢病毒表达载体.方法 对人IGF-I基因编码区分析、筛选序列4条,阴性对照序列1条.与pGCL-GFP质粒重组后,转染大肠杆菌感受态细胞.阳性克隆经过鉴定后得到正确重组子,制备编码慢病毒颗粒的重组病毒质粒及其两种辅助包装原件载体质粒,共转染293T 细胞,体外直接感染表达IGF-I的人血管平滑肌细胞.通过用Realtime-PCR检验干扰效果.结果 ①成功地合成四条编码发夹siRNA序列的单链DNA,并将其克隆到pGCSIL-GFP载体中,构建重组质粒PscSI-1、2、3、4,及无关基因的重组质粒PscNC,酶切鉴定和测序证实载体构建成功;②Realtime-PCR检测IGF-I的mRNA表达,发现重组质粒PscSI-1转染人血管平滑肌细胞后IGF-I mRNA表达最低,重组质粒PscNC转染组细胞内IGF-I mRNA的表达量与空白对照的水平接近(P〉0.05).结论 成功构建了小的发夹式IGF-I慢病毒表达载体.在人IGF-I序列位点1010~1028 bp、序列为ACCTTGTCTAAGTGGTTTA可以在人血管平滑肌细胞中实现对人IGF-I基因表达的有效沉默. 展开更多
关键词 类胰岛素生长因子-I(IGF-Ⅰ) 慢病毒表达载体 rna干扰
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RIG-I样受体与RNA病毒识别 被引量:15
13
作者 秦成峰 秦鄂德 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1418-1423,共6页
RIG-I样受体(RIG-I likereceptors,RLR)是一类新发现的模式识别受体,能够识别细胞质中的病毒RNA,通过RLR级联信号诱导干扰素和促炎症细胞因子的产生,对抗病毒天然免疫的建立起着非常重要的作用。RLR信号通路既受宿主的严格调控,也能够... RIG-I样受体(RIG-I likereceptors,RLR)是一类新发现的模式识别受体,能够识别细胞质中的病毒RNA,通过RLR级联信号诱导干扰素和促炎症细胞因子的产生,对抗病毒天然免疫的建立起着非常重要的作用。RLR信号通路既受宿主的严格调控,也能够作为病毒逃避宿主干扰素反应的靶点。本文重点讨论了RLR及其在RNA病毒识别和抗病毒天然免疫中的作用。 展开更多
关键词 天然免疫 rna病毒 干扰素 RIG-I MDA5 RLR
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人乳腺癌干细胞中PIWI基因及piRNAs的表达分析 被引量:3
14
作者 李玉凤 刘岩 +3 位作者 李玉辉 韩素桂 刘艳坤 张景华 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期2211-2216,共6页
piRNAs是一类与Piwi蛋白家族相互作用的非编码小RNA。Piwi-piRNA通路的主要功能是调控生殖干细胞内转座子沉默,且该通路从果蝇到哺乳动物高度保守。然而,人乳腺癌干细胞中PIWI基因和piRNA的表达尚不明了。本研究采用流式细胞仪分选乳腺... piRNAs是一类与Piwi蛋白家族相互作用的非编码小RNA。Piwi-piRNA通路的主要功能是调控生殖干细胞内转座子沉默,且该通路从果蝇到哺乳动物高度保守。然而,人乳腺癌干细胞中PIWI基因和piRNA的表达尚不明了。本研究采用流式细胞仪分选乳腺癌MCF-7细胞中的侧群细胞(SP)和非侧群的乳腺癌细胞(NSP),采用RT-PCR法及软琼脂克隆形成实验鉴定SP细胞的干细胞特性,采用实时荧光定量PCR法检测SP及NSP细胞中3种PIWI基因(HIWI,HILI和HIWI2)以及4种piRNA(piR-4987,piR-20365,piR-20485和piR-20582)的表达水平。结果显示:SP细胞亚群富含肿瘤干细胞样细胞;HIWI和HIWI2在SP细胞中的水平显著高于NSP细胞(p<0.05);piR-4987、piR-20365和piR-20582在SP细胞中的表达显著高于NSP细胞(p<0.01)。结果提示乳腺癌干细胞内可能存在类似生殖干细胞内的Piwi-piRNA通路,HIWI、HIWI2、piR-4987、piR-20365、piR-20485和piR-20582可能参与调控乳腺癌干细胞的生物学特性。 展开更多
关键词 乳腺癌干细胞 PIWI基因 非编码小rna PIrna
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MACC1基因shRNA慢病毒表达载体的构建及转染MB-231细胞
15
作者 闵捷 吕钢 +3 位作者 王婷 甘霖 曾真 王亚冬 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期1474-1475,1479,共3页
目的构建结肠癌转移相关基因1(MACC1)RNAi慢病毒表达载体,并转染人乳腺癌细胞株MB-231,观察其最佳感染条件。方法设计并合成MACC1基因特异性的DNA寡核苷酸,连接到经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切线性化的pMAGic慢病毒质粒载体中,转化大肠埃希菌D... 目的构建结肠癌转移相关基因1(MACC1)RNAi慢病毒表达载体,并转染人乳腺癌细胞株MB-231,观察其最佳感染条件。方法设计并合成MACC1基因特异性的DNA寡核苷酸,连接到经AgeⅠ和EcoRⅠ双酶切线性化的pMAGic慢病毒质粒载体中,转化大肠埃希菌DH5a感受态细胞,筛选阳性菌落、扩增后提取质粒,进行DNA测序鉴定。用293FT细胞包装产生慢病毒,感染MB-231细胞,选择感染效率高、感染复数(MOI)低的感染条件。结果 PCR与测序鉴定证实成功构建了MACC1RNAi的慢病毒载体,可以高效转染MB-231细胞,其最佳感染条件为MOI=40。结论成功构建了MACC1RNAi慢病毒表达载体,其可高效感染MB-231,为进一步研究靶向MACC1RNAi对乳腺癌细胞恶性生物学行为变化及基因治疗研究奠定了实验基础。 展开更多
关键词 结肠癌转移相关基因1 rna干扰 慢病毒载体 人乳腺癌细胞株MB-231
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逆转大鼠胶质瘤细胞耐药性MRP1-siRNA的筛选实验 被引量:1
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作者 聂晓奇 陈治标 +3 位作者 徐海涛 许州 毛立武 符常涛 《中国临床神经外科杂志》 2013年第3期154-157,共4页
目的 拟筛选出能逆转大鼠胶质瘤多药耐药细胞株C6/VP16对依托泊苷耐药性的多药耐药相关蛋白1基因小干扰RNA(MRP1-siRNA)。方法 人工合成4对靶向MRP1的siRNA分别为siRNA1、siRNA2、siRNA3和siRNA4,以脂质体2000作为载体;以6-羧基荧光... 目的 拟筛选出能逆转大鼠胶质瘤多药耐药细胞株C6/VP16对依托泊苷耐药性的多药耐药相关蛋白1基因小干扰RNA(MRP1-siRNA)。方法 人工合成4对靶向MRP1的siRNA分别为siRNA1、siRNA2、siRNA3和siRNA4,以脂质体2000作为载体;以6-羧基荧光素标记转染siRNA的C6细胞评价转染效率;采用逆转录-PCR和免疫印迹分别检测MRP1mRNA和蛋白的表达。细胞计数盒-8试剂盒检测转染前后依托泊苷对肿瘤细胞的半生长抑制浓度(IC50)。结果 与siRNA1、siRNA4相比,siRNA2、siRNA3对MRP1基因的抑制作用更明显。转染siRNA2前后,依托泊苷对C6细胞的半生长抑制浓度分别为(0.873±0.0462)、(0.0927±0.039)μg/μl,两者相较差异显著(P<0.05)。结论 siRNA2、siRNA3可以有效抑制MRP1基因的表达,并能逆转肿瘤细胞对依托泊苷的耐药性。 展开更多
关键词 胶质瘤 C6细胞 多药耐药相关蛋白1 依托泊苷 小干扰rna
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LncRNA COL1A2-AS1调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞功能的研究 被引量:2
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作者 詹明峰 张文娟 +2 位作者 孙士芳 尚佩生 沈晓峰 《河北医药》 CAS 2023年第17期2565-2570,共6页
目的研究长链非编码RNA(LncRNA)Ⅰ型胶原α2自然反义转录物1(COL1A2-AS1)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡、迁移的影响。方法在COL1A2-AS1的功能研究中将人成纤维细胞分为3组:空白组、空载组、COL1A2-AS1-过表达组。qRT-PCR检测miR-18... 目的研究长链非编码RNA(LncRNA)Ⅰ型胶原α2自然反义转录物1(COL1A2-AS1)对人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡、迁移的影响。方法在COL1A2-AS1的功能研究中将人成纤维细胞分为3组:空白组、空载组、COL1A2-AS1-过表达组。qRT-PCR检测miR-181a-5p、TGF-β1、Smad7、Col-Ⅲ、COL1A2-AS1的表达。CCK-8法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞迁移,Western blot检测TGF-β1、Smad7、Col-Ⅲ蛋白的表达水平。双荧光素酶报告实验验证COL1A2-AS1与所预测的靶标miR-181a-5p的结合关系。结果与空载组比较,COL1A2-AS1-过表达组的人成纤维细胞增殖OD值、迁移细胞数以及Col-Ⅲ的表达都明显下调(P<0.05),而TGF-β1和Smad7的表达水平都明显升高(P<0.05)。与空载组比较,COL1A2-AS1-过表达组细胞的凋亡率增加(P<0.05)。另外,与空载组比较,COL1A2-AS1-过表达组明显抑制miR-181a-5p的表达(P<0.05),且经过双荧光素酶报告实验验证COL1A2-AS1和miR-181a-5p可直接结合。结论COL1A2-AS1直接靶向抑制miR-181a-5p的表达,并抑制人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和迁移,促进细胞的凋亡。 展开更多
关键词 COL1A2-AS1 miR-181a-5p 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 细胞凋亡
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慢病毒介导的Ⅰ型胶原shRNA在大鼠系膜细胞中的表达
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作者 单毅 周春华 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期182-184,188,共4页
目的探讨慢病毒介导的Ⅰ型胶原(ColⅠ)短发夹RNA(shRNA)在大鼠系膜细胞的表达情况。方法利用三质粒合成法将表达质粒合成慢病毒表达载体,分别用感染增强剂(对照组)、空慢病毒载体(pSC-GFP组)和慢病毒表达载体(pSC-GFP/ColⅠ组)感染大鼠... 目的探讨慢病毒介导的Ⅰ型胶原(ColⅠ)短发夹RNA(shRNA)在大鼠系膜细胞的表达情况。方法利用三质粒合成法将表达质粒合成慢病毒表达载体,分别用感染增强剂(对照组)、空慢病毒载体(pSC-GFP组)和慢病毒表达载体(pSC-GFP/ColⅠ组)感染大鼠系膜细胞。采用流式细胞仪检测各组大鼠系膜细胞的转染效率,并采用RT-PCR和Western blotting方法检测各组ColⅠmRNA及ColⅠ蛋白表达情况。结果pSC-GFP和pSC-GFP/ColⅠ均能高效感染大鼠系膜细胞,其中pSC-GFP感染效率为72.42%,pSC-GFP/ColⅠ感染效率高达75.42%。RT-PCR检测提示pSC-GFP/ColⅠ组细胞ColⅠmRNA表达量较对照组、pSC-GFP组显著降低(P<0.05),其抑制效率为32.64%±0.12%,而后两组ColⅠmRNA表达差异无统计学意义。Western blotting检测显示,与对照组、pSC-GFP组比较,pSC-GFP/ColⅠ组蛋白表达明显降低(P<0.05),而对照组与pSC-GFP组之间ColⅠ蛋白表达差异无统计学意义。结论慢病毒载体能稳定、高效地将ColⅠshRNA转染系膜细胞,并明显抑制ColⅠ的表达,为肾脏纤维化的基因治疗提供了理论依据。 展开更多
关键词 胶原Ⅰ型 rna干扰 慢病毒感染
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剑麻不同组织RNA提取方法比较分析 被引量:12
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作者 张燕梅 周文钊 李俊峰 《分子植物育种》 CAS CSCD 2010年第1期201-208,共8页
本研究以剑麻茎尖、花和成熟叶片为材料,比较了SDSⅠ、SDSⅡ、CTABⅠ、CTABⅡ共4种提取缓冲液组成以及Promega公司RNA提取试剂盒、Qiagen植物RNA分离试剂盒、改良Trizol法、改良SDSⅠ法、改良CTABⅠ法以及优化后的改良CTABⅠ法等6种RNA... 本研究以剑麻茎尖、花和成熟叶片为材料,比较了SDSⅠ、SDSⅡ、CTABⅠ、CTABⅡ共4种提取缓冲液组成以及Promega公司RNA提取试剂盒、Qiagen植物RNA分离试剂盒、改良Trizol法、改良SDSⅠ法、改良CTABⅠ法以及优化后的改良CTABⅠ法等6种RNA提取方法提取RNA的效果,结果表明:不同缓冲液组成对实验结果影响很大,其中缓冲液CTABⅠ提取的RNA质量和产率均较理想。6种RNA提取方法提取的RNA差异明显,其中优化后的改良CTABⅠ法可同时适合于剑麻茎尖、花和成熟叶片RNA的提取,不仅产率高,而且RNA的质量也较好,无DNA污染,OD260/OD280分别为1.87、2.04和1.98,OD260/OD230分别为2.46、2.10和2.15,产率分别为84.7μg/gFW、65.8μg/gFW和4μg/gFW。用该方法提取的RNA可满足下一步文库构建及基因克隆等分子生物学研究。 展开更多
关键词 剑麻 rna提取 优化后的改良CTABⅠ法 茎尖 成熟叶片
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用核酸杂交技术检测抗病毒i-RNA制剂中病毒核酸的残留及其在免疫小鼠体内的动态变化
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作者 谢光临 杨明久 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 1993年第5期344-346,共3页
以生物素化dUTP标记CI(?)、株基因组Hind Ⅲ酶切Y片段为探针,用核酸杂交技术检测抗HCMV-iRNA制剂中巨细胞病毒核酸的残留,同时用HCMV免疫小鼠观察病毒核酸在小鼠体内的存留时间。结果,HCMV DNA在小鼠体内的存留时间有明显的个体差异,而... 以生物素化dUTP标记CI(?)、株基因组Hind Ⅲ酶切Y片段为探针,用核酸杂交技术检测抗HCMV-iRNA制剂中巨细胞病毒核酸的残留,同时用HCMV免疫小鼠观察病毒核酸在小鼠体内的存留时间。结果,HCMV DNA在小鼠体内的存留时间有明显的个体差异,而与HCMV DNA有同源序列的RNA在免疫后7天被清除。在4批来自羊肝、脾组织的抗HCMV-iRNA 制剂中,有3批查出HCMV核酸。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 免疫核糖核酸 DNA探针
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