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三氨基酸替换的油菜EPSPS基因在烟草中表达高抗草甘膦特性
1
作者 朱红利 屠钢 +6 位作者 彭琦 孙程明 张维 胡茂龙 付三雄 张洁夫 陈松 《分子植物育种》 北大核心 2025年第7期2211-2218,共8页
5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)是芳香族氨基酸生物合成途径中的关键酶,也是除草剂草甘膦的靶标酶。本研究从基因文库中提取到甘蓝型油菜EPSPS基因的编码区序列计1548 bp,编码515个氨基酸。在其保守结构域^(168)LGNAGT^(173)A^(1... 5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)是芳香族氨基酸生物合成途径中的关键酶,也是除草剂草甘膦的靶标酶。本研究从基因文库中提取到甘蓝型油菜EPSPS基因的编码区序列计1548 bp,编码515个氨基酸。在其保守结构域^(168)LGNAGT^(173)A^(174)MRP^(177)LT^(179)中引入的3个氨基酸的突变,分别是第^(173)位Thr变为Ile、^(174)位的Ala变为Val、^(177)位的Pro变为Ser。其对应碱基突变位点分别为第518处碱基由C变为T、521处由C变为T、529处由C变为T。人工合成突变后的基因Bn-mEPSPS,并构建了含突变基因的植物表达载体pBE,经转基因烟草对突变基因进行了功能验证。结果显示转基因烟草株系具有高抗草甘膦特性,部分转基因烟草耐受草甘膦溶液的浓度达到6000~36000 mg/L。表明同时引入3个氨基酸突变获得的油菜EPSPS基因具有较高的耐受草甘膦除草剂的特性,该基因在抗除草剂基因工程作物培育中具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 epsps基因 人工突变 转基因烟草 草甘膦抗性
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花生AhEPSPS基因的克隆与表达分析
2
作者 刘坤 张召聪 +6 位作者 薛芳 刘慧暄 徐静怡 李唯佳 王鸿梅 仇燕 陈四龙 《中国油料作物学报》 北大核心 2025年第5期1154-1167,共14页
挖掘花生抗除草剂候选基因,研究草甘膦除草剂的靶标,即5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)基因AhEPSPS,采用RT-PCR技术从花生cDNA中克隆到AhEPSPS1和AhEPSPS2的CDS全长序列,分析其时空表达模式及亚细胞定位特征,旨在为深入解析AhEPSP... 挖掘花生抗除草剂候选基因,研究草甘膦除草剂的靶标,即5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)基因AhEPSPS,采用RT-PCR技术从花生cDNA中克隆到AhEPSPS1和AhEPSPS2的CDS全长序列,分析其时空表达模式及亚细胞定位特征,旨在为深入解析AhEPSPS基因的生物功能尤其在草甘膦抗性中的作用奠定基础。经生物信息学预测、亚细胞定位和实时荧光定量检测,结果表明AhEPSPS1和AhEPSPS2基因全长均为1581 bp,编码526个氨基酸,分子质量为55.9 kDa,等电点大小为6.80。系统进化树分析表明AhEPSPS1和AhEPSPS2与GmEPSPS蛋白的亲缘关系最近。烟草表皮细胞瞬时表达亚细胞定位结果证实,AhEPSPS1和AhEPSPS2基因的表达产物定位于叶绿体。荧光定量PCR分析结果表明,AhEPSPS1和AhEPSPS2在根、茎、叶中均有表达;1%草甘膦处理的花生叶片中,两基因的表达水平呈先下降而后升高的变化趋势,说明AhEPSPS1和AhEPSPS2对草甘膦药害能产生转录水平的动态响应。 展开更多
关键词 花生 epsps基因 基因克隆 草甘膦 表达分析 除草剂抗性
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番茄EPSPS基因的克隆及生物信息学分析
3
作者 王天康 刘峰 《分子植物育种》 北大核心 2025年第17期5672-5678,共7页
5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)是合成芳香族氨基酸莽草酸合成途径的关键酶,同时也是除草剂草甘膦的作用靶点酶。为了研究番茄EPSPS基因的功能及结构,本研究利用RT-PCR技术克隆得到番茄的EPSPS的基因并命名为LeEPSPS。经生物信... 5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)是合成芳香族氨基酸莽草酸合成途径的关键酶,同时也是除草剂草甘膦的作用靶点酶。为了研究番茄EPSPS基因的功能及结构,本研究利用RT-PCR技术克隆得到番茄的EPSPS的基因并命名为LeEPSPS。经生物信息学分析,克隆得到的番茄EPSPS基因cDNA的ORF全长为1563 bp,编码520个氨基酸,蛋白质分子质量为55.72 kD,等电位点为7.99;没有跨膜区和信号肽;具有57个蛋白激酶磷酸化位点;亲水系数为负数,推测可能是亲水蛋白。通过对番茄LeEPSPS基因的克隆及分析,将为后续获得具有草甘膦抗性的番茄新品种提供理论基础。 展开更多
关键词 番茄 epsps 草甘膦 生物信息学
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杂草环境下转EPSPS基因大豆NZL06-698的生态适应性研究 被引量：4
4
作者 黄鹞 郭汝清 刘标 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期866-871,共6页
为研究转EPSPS基因大豆NZL06-698在杂草环境中的生态适应性,试验设置杂草处理模拟野外环境,研究转基因大豆NZL06-698(GT698)的生存竞争能力以及外源EPSPS蛋白表达情况。结果表明:在相同处理下转基因大豆GT698的株高(R8期)、百粒重显著... 为研究转EPSPS基因大豆NZL06-698在杂草环境中的生态适应性,试验设置杂草处理模拟野外环境,研究转基因大豆NZL06-698(GT698)的生存竞争能力以及外源EPSPS蛋白表达情况。结果表明:在相同处理下转基因大豆GT698的株高(R8期)、百粒重显著高于亲本大豆蒙豆12(MD12),但单株产量、单株籽粒数、结实率显著低于亲本大豆,说明外源基因的存在并未增强转基因大豆的生存竞争力,且转基因大豆在野外的生存竞争能力与亲本大豆相比较弱。试验注意到,杂草环境对转EPSPS基因大豆的生长有明显的限制作用,杂草处理下转基因大豆的单株产量、单株籽粒数、百粒重、结实率等指标均显著低于对照处理。ELISA检测结果表明,转基因大豆叶片及籽粒中外源EPSPS蛋白在杂草处理及对照中均正常表达,且两种处理下的EPSPS蛋白表达量无显著差异。以上结果表明杂草环境中转基因大豆的EPSPS蛋白正常表达,正常提供抗草甘膦性状,但是外源基因的存在并没有增加转基因大豆的生存竞争能力,且转基因大豆的生长受到杂草环境的显著抑制,由此得出结论:与亲本大豆相比,转EPSPS基因大豆NZL06-698在野外环境中生态适应能力较弱。 展开更多
关键词 转epsps基因大豆 生存竞争能力 epsps蛋白
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抗除草剂草甘膦EPSPs基因在小麦中的转化 被引量：34
5
作者 陈梁鸿 王新望 +3 位作者 张文俊 张晓东 胡道芬 刘广田 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1999年第3期239-243,共5页
通过基因枪法，用抗除草剂车甘膦的EPSPs基因转化小麦京花1号的幼穗约1000个，及幼胚约800个，经草甘膦选择后分别获得38株和4株再生植株。这些再生植株经PCR和（或）Southern杂交证明，其中有部分再生植株的基因组中稳定整合了外源EPSP... 通过基因枪法，用抗除草剂车甘膦的EPSPs基因转化小麦京花1号的幼穗约1000个，及幼胚约800个，经草甘膦选择后分别获得38株和4株再生植株。这些再生植株经PCR和（或）Southern杂交证明，其中有部分再生植株的基因组中稳定整合了外源EPSPs基因，并且转化体中部分是可育的。首次用实验证明，抗除草剂草甘膦的EPSPs基因作为单子叶禾谷类作物小麦基因转化的选择标记是行之有效的。 展开更多
关键词 小麦 epsps基因 基因枪转化
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抗草甘膦EPSPS基因的专利保护分析 被引量：20
6
作者 宋敏 刘丽军 +1 位作者 苏颖异 张锐 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期147-152,共6页
抗草甘膦转基因作物是目前全球播种面积最大的转基因作物,抗草甘膦基因(EPSPS)的克隆、表达及其功能验证等也因此成为现代分子生物育种研究的重点,利用专利等知识产权保护措施将这些功能基因和转化技术转变成自己的独占产权是发达国家... 抗草甘膦转基因作物是目前全球播种面积最大的转基因作物,抗草甘膦基因(EPSPS)的克隆、表达及其功能验证等也因此成为现代分子生物育种研究的重点,利用专利等知识产权保护措施将这些功能基因和转化技术转变成自己的独占产权是发达国家和生物技术公司普遍采取的发展策略。通过检索搜集全球范围内EPSPS基因的专利和转化品系信息,分析研究了EPSPS基因在全球的专利保护、核心技术专利分布与产业化运用状况。结果表明,近几年对EPSPS的专利申请量迅速增加,专利申请人主要集中在美国、法国、中国等国家,但是核心技术和产业化应用的绝大部分专利由孟山都、拜耳、先锋、先正达等跨国公司拥有,相关产业的发展主动权也由此被其掌控。 展开更多
关键词 草甘膦 epsps 基因 专利 产业化
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外源抗草甘膦EPSPs基因在大豆基因组中的整合与定位 被引量：13
7
作者 王晓波 蒋凌雪 +7 位作者 魏利 刘林 陆伟 李文欣 王俊 陶波 常汝镇 邱丽娟 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期365-375,共11页
通过基因特异引物扩增和免疫层析试纸法分别对转基因大豆中外源EPSPs基因和其编码的蛋白进行检测,结果表明,EPSPs基因不仅已整合到大豆基因组中,而且EPSPs蛋白可以正常表达。利用染色体步移法获得了转基因大豆插入位点的侧翼序列,序列... 通过基因特异引物扩增和免疫层析试纸法分别对转基因大豆中外源EPSPs基因和其编码的蛋白进行检测,结果表明,EPSPs基因不仅已整合到大豆基因组中,而且EPSPs蛋白可以正常表达。利用染色体步移法获得了转基因大豆插入位点的侧翼序列,序列比对表明35S上游的大豆DNA序列起始于Gm02:7912740,NOS下游的大豆DNA序列起始于Gm02:7777705。在本研究检测序列范围内发现插入位点两侧不同位置有3个不同的未知片段、2个大豆基因组序列倒位,同时发现2个大豆基因组片段丢失。外源基因不是以点插入方式整合,而是导致大豆基因组约135kb片段的移位;NOS下游大豆基因组序列发生重排,导致一个编码HEC1和HEATrepeat两个功能域的基因(Glyma02g09790)结构受到影响,首次发现该基因在ABA和PEG处理时下调表达,推测该基因通过ABA信号通路参与胁迫应答。本研究通过对抗除草剂EPSPs基因在大豆基因组中的插入位点分析,明确了外源EPSPs基因在大豆基因组中的整合、定位及其侧翼序列,为转基因大豆安全评价提供了依据。 展开更多
关键词 转基因大豆 插入位点 基因组 epsps 抗草甘膦 定位 侧翼序列
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农杆菌介导法向玉米茎尖导入抗草甘膦EPSPS基因的研究 被引量：14
8
作者 孙传波 李海华 +6 位作者 郭嘉 陶蕊 曲文利 孟凡梅 张举仁 刘文国 袁英 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期91-93,共3页
以玉米自交系郑58的茎尖为受体,通过农杆菌介导法将抗草甘膦EPSPS基因转入玉米中,研究以茎尖为受体的农杆菌转化体系的可行性。98株转化苗,经过300 ppm的除草剂(农达)筛选,共获得13株转基因植株,经PCR检测,其中7株表现阳性,转化率达7.14... 以玉米自交系郑58的茎尖为受体,通过农杆菌介导法将抗草甘膦EPSPS基因转入玉米中,研究以茎尖为受体的农杆菌转化体系的可行性。98株转化苗,经过300 ppm的除草剂(农达)筛选,共获得13株转基因植株,经PCR检测,其中7株表现阳性,转化率达7.14%。初步证明外源基因已经整合到玉米基因组中,以玉米茎尖作为受体的转化系统用于基因转化是可行、高效的。 展开更多
关键词 玉米 茎尖 农杆菌介导 epsps基因
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植物莽草酸途径EPSPS蛋白的分子进化和基因结构分析 被引量：8
9
作者 巩元勇 郭书巧 +6 位作者 束红梅 倪万潮 帕尔哈提·买买提 沈新莲 徐鹏 张香桂 郭琪 《植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期295-309,共15页
EPSPS既是植物、微生物和真菌等生物芳香族氨基酸生物合成途径——莽草酸途径中的关键酶,也是除草剂草甘膦的靶标酶。EPSPS的克隆能为草甘膦抗性转基因作物的研发提供候选基因。该研究运用比较基因组学方法,通过对41种不同植物的43条EP... EPSPS既是植物、微生物和真菌等生物芳香族氨基酸生物合成途径——莽草酸途径中的关键酶,也是除草剂草甘膦的靶标酶。EPSPS的克隆能为草甘膦抗性转基因作物的研发提供候选基因。该研究运用比较基因组学方法,通过对41种不同植物的43条EPSPS蛋白序列进行进化分析,取得主要结果如下:(1)不同植物EPSPS蛋白的相似性很高,且具有相同的结构域、保守基序和保守位点,但是其叶绿体转运肽序列差异显著;(2)系统发育分析表明,EPSPS基因按照双子叶植物纲和单子叶植物纲分为2个大的分支,各个小的分支又按照植物的种属亲缘关系进行分支和聚类;(3)基因结构分析表明,植物EPSPS基因基本都含有8个外显子和7个内含子,且所对应外显子的长度相当,而内含子的长度差异很大,说明在植物基因组进化过程中造成EPSPS基因结构差异的主要因素是内含子的改变。研究结果将为揭示植物EPSPS蛋白的结构功能提供参考。 展开更多
关键词 植物 epsps蛋白 系统发育分析 基因结构
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抗除草剂bar基因与EPSPS基因在转基因甘蔗中的应用研究 被引量：7
10
作者 王文治 杨本鹏 +6 位作者 蔡文伟 熊国如 冯翠莲 王俊刚 武媛丽 沈林波 张树珍 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期73-78,共6页
通过农杆菌介导法,分别将bar基因和EPSPS基因导入到甘蔗中,分别获得了抗草铵膦和草甘膦两种除草剂的转基因甘蔗。通过直接喷洒田间施用浓度的草铵膦和草甘膦除草剂,证明了转基因甘蔗T0、T1代、宿根1代和宿根2代外源基因遗传稳定,且均具... 通过农杆菌介导法,分别将bar基因和EPSPS基因导入到甘蔗中,分别获得了抗草铵膦和草甘膦两种除草剂的转基因甘蔗。通过直接喷洒田间施用浓度的草铵膦和草甘膦除草剂,证明了转基因甘蔗T0、T1代、宿根1代和宿根2代外源基因遗传稳定,且均具有稳定的耐除草剂的功能。因此转耐除草剂基因的甘蔗,可以与转耐除草剂基因的玉米、大豆、油菜和棉花一样,有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 转基因甘蔗 耐除草剂 BAR基因 epsps基因 草铵膦 草甘膦
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陆地棉EPSPS基因的克隆及其组织特异性表达分析 被引量：21
11
作者 童旭宏 吴玉香 祝水金 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期259-264,共6页
5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)是莽草酸途径中的一个重要酶,它是非选择性除草剂草甘膦的靶标酶,在高等植物中定位于叶绿体质膜上。根据EST拼接的序列设计引物,从陆地棉品种珂字棉312中获得了全长为1834 bp的cDNA序列,其最大... 5-烯醇式丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)是莽草酸途径中的一个重要酶,它是非选择性除草剂草甘膦的靶标酶,在高等植物中定位于叶绿体质膜上。根据EST拼接的序列设计引物,从陆地棉品种珂字棉312中获得了全长为1834 bp的cDNA序列,其最大可读框为1565bp,编码521个氨基酸。陆地棉EPSPS基因与其它植物中同类酶在氨基酸水平上有广泛的同源性。通过与已知的其它高等植物叶绿体转运肽剪切位点比对,推断棉花EPSPS基因含有74个氨基酸叶绿体运输肽和447个氨基酸组成的熟蛋白。该酶具有保守的PEP结合位点及催化位点的特征序列。半定量分析表明,该基因产物广泛存在于棉花根、茎和叶等各组织中,在叶片中表达量较高。进一步扩增棉花核基因组获得了3344 bp的DNA序列,它包含8个内含子和7个外显子。棉花EPSPS基因的克隆为抗草甘膦棉花种质资源的创制提供了理论基础。 展开更多
关键词 陆地棉 epsps 草甘膦 表达序列标签
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转EPSPS基因抗草甘膦棉花的遗传分析 被引量：7
12
作者 燕树锋 祝水金 +2 位作者 刘海芳 卢彩霞 铁双贵 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第3期54-57,共4页
为分析转基因抗草甘膦棉花早代遗传情况,以花粉管通道法获得的26个转5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶基因(EPSPS)抗草甘膦棉花转化事件为材料,以其背景亲本中棉所49为对照,喷施草甘膦后对转基因棉T1、T2分离比例进行考察。T1田间抗性... 为分析转基因抗草甘膦棉花早代遗传情况,以花粉管通道法获得的26个转5-烯醇式丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶基因(EPSPS)抗草甘膦棉花转化事件为材料,以其背景亲本中棉所49为对照,喷施草甘膦后对转基因棉T1、T2分离比例进行考察。T1田间抗性鉴定结果表明,经卡方检测20个转化事件T1分离符合3∶1的分离规律,即外源基因插入1个位点;6个转化事件不符合1对基因的分离规律,出现了偏分离。T2田间抗性鉴定结果表明,通过花粉通管法共获得152个纯合株系,分别来源于25个转化事件;对T2不纯合株系继续进行分离比例的考察,发现来源于15个转化事件的57个株系符合3∶1的分离规律;此外卡方检测结果表明,每个转化事件都有不符合3∶1分离规律的株系,且其中10个转化事件没有符合3∶1分离规律的株系。表明通过花粉管通道法获得的转基因植株中外源基因的整合和遗传均较复杂。 展开更多
关键词 棉花 草甘膦 epsps基因 遗传分析
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棉花品系Y18在草甘膦胁迫下的epsps基因表达分析研究 被引量：9
13
作者 刘东军 张锐 +4 位作者 郭三堆 孟志刚 孙国清 王成社 张宏纪 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期55-59,共5页
5-烯醇丙酮酰-莽草酸-3-磷酸合成酶(5-enolpyruvyl-shikimate-3-phosphate synthase,EPSPS)是植物或微生物体内合成芳香族氨基酸所必需的一个关键酶,但其受广谱性除草剂草甘膦的强烈抑制。通过对草甘膦胁迫下的棉花品系Y18进行研究发现... 5-烯醇丙酮酰-莽草酸-3-磷酸合成酶(5-enolpyruvyl-shikimate-3-phosphate synthase,EPSPS)是植物或微生物体内合成芳香族氨基酸所必需的一个关键酶,但其受广谱性除草剂草甘膦的强烈抑制。通过对草甘膦胁迫下的棉花品系Y18进行研究发现:棉花品系Y18具有两个不同的5-烯醇丙酮酰-莽草酸-3-磷酸合成酶基因epsps1和epsps2,并且两个基因的编码区与其他植物的epsps基因具有较高的同源性,在草甘膦胁迫作用下,棉花的epsps1基因中表达较为稳定,epsps2基因表达量却提高了1.85～2.3倍,初步认为epsps基因的表达量提高是生物在受到胁迫作用时的一种应激反应。 展开更多
关键词 epsps 草甘膦 应激反应机理
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大豆ms1轮回群体应用于转EPSPS基因大豆育种改良研究 被引量：5
14
作者 赵青松 杨春燕 +7 位作者 赵双进 闫龙 史晓蕾 刘丽娟 赵聪聪 冯燕 赵鑫 张孟臣 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第S1期112-116,共5页
针对抗草甘膦转EPSPS基因大豆遗传基础狭窄的问题,利用ms1轮回群体拓宽抗草甘膦转基因大豆的遗传基础。利用遗传基础丰富的ms1基础群体,与现有的抗草甘膦转EPSPS基因大豆新品系冀K32、冀K331、冀K69、冀K964建立抗草甘膦C0群体,C0群体... 针对抗草甘膦转EPSPS基因大豆遗传基础狭窄的问题,利用ms1轮回群体拓宽抗草甘膦转基因大豆的遗传基础。利用遗传基础丰富的ms1基础群体,与现有的抗草甘膦转EPSPS基因大豆新品系冀K32、冀K331、冀K69、冀K964建立抗草甘膦C0群体,C0群体改良后形成C1群体。分析基础、C0、C1 3个群体的品质、产量等农艺性状。结果表明,C1群体蛋白变化为35.66%~48.02%;脂肪变化为16.34%~22.92%;株高变化为46.00~158.00 cm;分枝数变化为0~8个;百粒质量变化为10.30~25.30 g;单株重变化为1.60~59.60 g。C1群体中不育株所占比例为19.20%,抗草甘膦性株所占比例为70.54%。利用大豆ms1基因构建了一个含EPSPS基因的转基因大豆轮回群体,该群体性状分离广泛,遗传多样性丰富,适合转基因大豆育种材料筛选。 展开更多
关键词 大豆 轮回群体选择 MS1 转基因 epsps 草甘膦
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农杆菌介导法将抗草甘膦基因EPSPS转入玉米自交系的研究 被引量：5
15
作者 孙传波 麻鹏达 +8 位作者 陶蕊 郭嘉 李海华 孟凡梅 曲文利 李海华 刘文国 刘德璞 袁英 《玉米科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期24-26,30,共4页
通过农杆菌介导法将抗草甘膦基因EPSPS转入玉米自交系H99中,同时研究了农杆菌浓度、侵染时间及共生培养条件等因素对转化频率的影响。结果表明:菌液浓度OD600为0.6、侵染时间20 min、共生培养时间3 d为最佳转化条件。获得的转基因植株经... 通过农杆菌介导法将抗草甘膦基因EPSPS转入玉米自交系H99中,同时研究了农杆菌浓度、侵染时间及共生培养条件等因素对转化频率的影响。结果表明:菌液浓度OD600为0.6、侵染时间20 min、共生培养时间3 d为最佳转化条件。获得的转基因植株经PCR分析鉴定,其中7株表现阳性,证明外源基因已经整合到玉米基因组中。 展开更多
关键词 玉米 农杆菌介导 转化频率 epsps基因
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利用玉米茎尖技术转化TR1-EPSPS 被引量：4
16
作者 王楠 杨毅 +7 位作者 王健美 谢树章 邱正高 张亚勤 袁亮 高梅 刘永胜 杨华 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第3期766-770,共5页
茎尖转化法是目前发展较快的农杆菌转化技术。本研究利用茎尖转化法将载体pCambia-35S-TR1-EPSPS转入玉米的自交系中,通过草甘膦除草剂筛选得到46株抗除草剂的玉米幼苗,通过PCR验证,这些幼苗中有9株含有外源载体片段。
关键词 玉米 茎尖(shoot tip) 草甘膦 epsps
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转基因玉米EPSPS蛋白适体的筛选与结构分析 被引量：5
17
作者 江树勋 黄新 +6 位作者 邵碧英 陈敏 陈洪俊 Jun Sheng Lin 陈文炳 吴亚君 潘大仁 《热带作物学报》 CSCD 2010年第4期600-604,共5页
通过体外合成长度为70个碱基的随机ssDNA文库,采用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,以转基因玉米EPSPS蛋白为靶目标进行16轮筛选,将筛选到的适体群进行克隆、测序,初步获得与转基因玉米EPSPS蛋白特异性结合的适体。并用Macaw2.05和DN... 通过体外合成长度为70个碱基的随机ssDNA文库,采用指数富集配基的系统进化(SELEX)技术,以转基因玉米EPSPS蛋白为靶目标进行16轮筛选,将筛选到的适体群进行克隆、测序,初步获得与转基因玉米EPSPS蛋白特异性结合的适体。并用Macaw2.05和DNAMAN软件对每个适体的保守序列和二级结构进行分析。结果表明:一级结构分析序列同源性可分为四大群,其中A群有11条序列含有67个保守碱基;二级结构分析结果表明,茎环状和口袋状等结构可能是适体与转基因玉米EPSPS蛋白结合的结构基础。利用SELEX技术获得与转基因玉米EPSPS蛋白特异结合的适体群,其一级和二级结构与亲和力密切相关。 展开更多
关键词 转基因玉米 epsps蛋白 SELEX 适体 结构
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转EPSPS-G6基因抗草甘膦棉花的获得及抗性鉴定 被引量：6
18
作者 燕树锋 祝水金 铁双贵 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期3944-3949,共6页
为了将抗草甘膦基因EPSPS-G6导入棉花基因组中,以棉花品种中棉所49为受体材料,用草甘膦除草剂作为筛选剂,通过花粉管通道法最终获得了26个遗传转化事件,EPSPS-G6基因的PCR鉴定结果也同时表明目的基因已整合入棉花基因组。此外,15 mmol/... 为了将抗草甘膦基因EPSPS-G6导入棉花基因组中,以棉花品种中棉所49为受体材料,用草甘膦除草剂作为筛选剂,通过花粉管通道法最终获得了26个遗传转化事件,EPSPS-G6基因的PCR鉴定结果也同时表明目的基因已整合入棉花基因组。此外,15 mmol/L浓度草甘膦喷施后非转基因棉花品种TM-1和中棉所49全部死亡,表现为不抗草甘膦;而通过花粉管通道法获得的26个转化事件,对20 mmol/L浓度草甘膦均表现高抗,对40 mmol/L浓度草甘膦11个转化事件仍表现为高抗。 展开更多
关键词 棉花 epsps基因 草甘膦 除草剂 花粉管通道法
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农杆菌介导抗草甘膦基因(EPSPS)的玉米转化及相关因子的影响研究 被引量：11
19
作者 王秀红 白建荣 +2 位作者 孙毅 史向远 任志强 《山西农业科学》 2010年第1期11-14,18,共5页
对影响农杆菌转化效率的一些因素进行了研究优化,结果表明,诱导培养基中添加200 mg/L的头孢霉素既能抑制农杆菌的生长又不影响幼胚的愈伤诱导;诱导和筛选培养基中添加5 mg/L硝酸银能有效抑制玉米愈伤组织褐变,显著改善愈伤组织及胚性愈... 对影响农杆菌转化效率的一些因素进行了研究优化,结果表明,诱导培养基中添加200 mg/L的头孢霉素既能抑制农杆菌的生长又不影响幼胚的愈伤诱导;诱导和筛选培养基中添加5 mg/L硝酸银能有效抑制玉米愈伤组织褐变,显著改善愈伤组织及胚性愈伤组织的诱导率;分化培养基中添加2μmol/L的嘧啶醇能延缓试管苗的生长速度,使苗更健壮。利用优化的根癌农杆菌介导转化体系将抗草甘膦基因(EPSPS)转入玉米杂交材料HiⅡ中,获得了PCR阳性植株。 展开更多
关键词 玉米 农杆菌介导 抗草甘膦基因(epsps) 相关因子
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核酸试纸条在检测转EPSPS基因作物中的应用 被引量：18
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作者 汪琳 罗英 +3 位作者 周琦 赖平安 张向东 柏亚铎 《生物技术通讯》 CAS 2011年第2期238-242,共5页
目的:建立快速、简便和特异的检测转EPSPS基因作物的方法。方法:针对转EPSPS基因作物外源基因cp4-EPSPS的8个区域,设计2对特异性引物和1对环引物,对反应体系中的MgSO4、内引物、环引物、甜菜碱、dNTP浓度和反应温度等条件分别进行优化,... 目的:建立快速、简便和特异的检测转EPSPS基因作物的方法。方法:针对转EPSPS基因作物外源基因cp4-EPSPS的8个区域,设计2对特异性引物和1对环引物,对反应体系中的MgSO4、内引物、环引物、甜菜碱、dNTP浓度和反应温度等条件分别进行优化,并用核酸试纸条对扩增产物进行检测,建立用于检测转EPSPS基因作物的环介导等温扩增方法(LAMP)。结果:用建立的LAMP方法检测转EPSPS基因作物时,在64℃恒温反应30 min,即可根据试纸条显色直接观察结果;该方法具有高度特异性,可检测到10个拷贝的EPSPS DNA。结论:LAMP方法可快速、灵敏、特异、经济地检测转EPSPS基因作物,在基层和实验室都具有良好的应用前景。 展开更多
关键词 核酸试纸条 环介导等温扩增 转epsps基因作物 检测
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