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双重PCR检测麻风分枝杆菌的应用研究
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作者 陈依江 黄俊飞 +6 位作者 王希 郑雯琳 张正禹 韦小瑜 李进岚 李世军 童毅 《贵州医药》 2025年第12期1875-1879,共5页
目的建立基于16S rDNA和多拷贝重复序列(RLEP)双靶标基因的双重PCR检测麻风分枝杆菌技术,为麻风早期诊断、早期治疗提供技术支持。方法选择分枝杆菌属特异性基因16S rDNA和麻风分枝杆菌种特异性基因RLEP进行属—种双靶标组合,通过对麻... 目的建立基于16S rDNA和多拷贝重复序列(RLEP)双靶标基因的双重PCR检测麻风分枝杆菌技术,为麻风早期诊断、早期治疗提供技术支持。方法选择分枝杆菌属特异性基因16S rDNA和麻风分枝杆菌种特异性基因RLEP进行属—种双靶标组合,通过对麻风分枝杆菌核酸的梯度稀释液进行测试,探索双重PCR检测的灵敏性。对收集的33株病原核酸进行特异性研究(16株分枝杆菌属菌株核酸和17株其他非分枝杆菌属病原核酸)。随后将该技术应用于收集的26例麻风病患者标本检测。结果在麻风分枝杆菌基因组核酸灵敏性的检测中,16S rDNA-RLEP双重PCR检测限为每管31 pg。对分枝杆菌属及其他非分枝杆菌属的特异性检测中,16S rDNA-RLEP双重PCR的特异性为93.94%(31/33)。在麻风病例26份标本检测中16S rDNA-RLEP双重PCR的检出率为73.08%(19/26)。结论16S rDNA-RLEP双重PCR检测麻风分枝杆菌技术是一种灵敏性强,特异性高的分子检测手段,可提高麻风检测阳性率,为麻风早期诊断、早期治疗提供技术支持。 展开更多
关键词 麻风分枝杆菌 双重pcr检测 灵敏性 特异性
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犬冠状病毒和犬细小病毒双重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:1
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作者 宫英杰 扈富哥 +4 位作者 王蕾 毕振威 钱晶 王建发 谭业平 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2025年第1期74-78,共5页
旨在建立犬冠状病毒(CCoV)和犬细小病毒(CPV)双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。针对CCoV的3′UTR与CPV的VP2设计引物与探针,通过对反应体系与条件进行优化,建立了CCoV与CPV的双重荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性、重... 旨在建立犬冠状病毒(CCoV)和犬细小病毒(CPV)双重TaqMan荧光定量PCR检测方法。针对CCoV的3′UTR与CPV的VP2设计引物与探针,通过对反应体系与条件进行优化,建立了CCoV与CPV的双重荧光定量PCR检测方法,并对该方法进行敏感性、特异性、重复性验证与临床样品检验。结果:CCoV与CPV阳性参考质粒浓度在10^(2)~10^(7) copies/μL,CCoV与CPV的标准曲线R^(2)分别为0.999与0.996,线性关系良好,CCoV与CPV的最低检测限均为5 copies/μL,与其他病原无交叉反应,组内与组间的变异系数均小于1.38%,说明该方法灵敏度高、特异性强、重复性良好;对113份临床样本进行检测,与普通PCR比较,该方法对CCoV和CPV的检出率较高,分别为37.2%和40.7%。研究表明,本试验建立的CCoV和CPV双重荧光定量PCR方法检测效果良好,为相关疾病的临床诊断、流行病调查等提供了有力工具。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 犬细小病毒 双重实时荧光定量pcr TAQMAN探针
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鸭瘟病毒强毒株与弱毒株双重PCR鉴别检测方法的建立与应用
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作者 周婉婷 崔雪志 +9 位作者 毛秋艳 汪建华 李玉峰 李金平 刘朔 彭程 杨吉喆 侯广宇 刘华雷 蒋文明 《中国动物检疫》 2025年第8期108-114,共7页
鸭瘟是一种由鸭瘟病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病,对养鸭业造成了严重威胁。目前,该病主要依靠鸭瘟弱毒活疫苗进行防控。鸭瘟病毒属于疱疹病毒科,其基因组为双链DNA,具有复杂的结构和多种变异类型。为建立一种能够区分鸭瘟病... 鸭瘟是一种由鸭瘟病毒引起的急性、热性、高度接触性传染病,对养鸭业造成了严重威胁。目前,该病主要依靠鸭瘟弱毒活疫苗进行防控。鸭瘟病毒属于疱疹病毒科,其基因组为双链DNA,具有复杂的结构和多种变异类型。为建立一种能够区分鸭瘟病毒强毒株与弱毒株的双重PCR鉴别检测方法,以提高临床诊断的准确性和效率,通过分析鸭瘟病毒基因组序列,设计针对UL2和LORF5基因的特异性引物,建立了双重PCR方法。该方法具有良好的特异性,能够准确区分鸭瘟病毒强毒株与弱毒株,同时对其他禽类病原无交叉反应:最低可检测到10拷贝的鸭瘟病毒DNA,表现出较高的灵敏度。使用建立的方法对2019-2024年收集的临床疑似鸭瘟病料进行检测,发现经典强毒株集中流行于2019-2022年,而变异强毒株在2023-2024年更为常见,表明鸭瘟病毒优势流行株可能正在发生变化。综上,本研究建立的双重PCR鉴别检测方法为鸭瘟病毒的快速、准确检测提供了技术支持,对鸭瘟防控及流行病学调查具有重要意义。 展开更多
关键词 鸭瘟病毒 UL2基因 LORF5基因 双重pcr 强毒株 变异株
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马鼻疽和马鼻肺炎双重荧光定量PCR检测方法的建立
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作者 鱼海琼 李娟 +11 位作者 梁佳琪 李明 王国胜 王莹 陈芳 吴晓薇 曾潇 佟铁铸 魏俊 张璐 孙铭飞 苏飞雄 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第9期1190-1197,共8页
为快速检测进出境马匹样品中马鼻疽和马鼻肺炎病原的核酸,选取两种病原保守基因片段,分别设计了适合的荧光定量PCR引物和探针,筛选和优化了试验最佳反应浓度和反应条件,建立了针对马鼻疽和马鼻肺炎病原核酸检测的双重荧光定量PCR(FQ-PCR... 为快速检测进出境马匹样品中马鼻疽和马鼻肺炎病原的核酸,选取两种病原保守基因片段,分别设计了适合的荧光定量PCR引物和探针,筛选和优化了试验最佳反应浓度和反应条件,建立了针对马鼻疽和马鼻肺炎病原核酸检测的双重荧光定量PCR(FQ-PCR)方法。结果显示,所建立的方法和体系能很好地区分马鼻疽、马鼻肺炎和其他马属动物疫病的病原核酸,检测马鼻疽和马鼻肺炎双重定量PCR标准曲线的相关系数分别为R^(2)=0.996 7和R^(2)=0.996 5,DNA含量最低检测限度分别为44.7 copies/μL和32.6 copies/μL。结果表明,本研究建立的方法具有较高的特异性、敏感性和可重复性。该方法可用于马匹疫病检测实验室快速检测,并能同时检测马鼻疽和马鼻肺炎两种病原核酸,具有重要的实际应用价值。 展开更多
关键词 马鼻疽 马鼻肺炎 双重荧光定量pcr
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小麦优质亚基7^(OE)通用双色荧光定量PCR标记的开发
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作者 刘海晨 张俊敏 +7 位作者 焦博 王娇 董福双 杨帆 赵璞 马春红 柴建芳 周硕 《华北农学报》 北大核心 2025年第5期20-25,共6页
小麦优质亚基7^(OE)在优质小麦培育方面具有重要作用,虽然针对该优质亚基已开发了高通量的KASP标记,但与由SNP开发的KASP标记不同,仍存在无法有效区分纯合与杂合的问题。为明确7^(OE)亚基是否纯合的问题,以含有7^(OE)亚基的津强6号(含7^... 小麦优质亚基7^(OE)在优质小麦培育方面具有重要作用,虽然针对该优质亚基已开发了高通量的KASP标记,但与由SNP开发的KASP标记不同,仍存在无法有效区分纯合与杂合的问题。为明确7^(OE)亚基是否纯合的问题,以含有7^(OE)亚基的津强6号(含7^(OE)+8*亚基)和不含7^(OE)亚基的科农199(含7+9亚基)及其杂交后代为材料,把小麦的Waxy-D1基因作为内参基因,利用KASP标记中使用的通用双色荧光,通过定量PCR检测7^(OE)基因相对内参基因的相对拷贝数来确定7^(OE)基因是否存在以及是否纯合,并用相关分子标记对检测结果进行验证。结果表明,含7^(OE)基因的亲本津强6号相对拷贝数最高,不含7^(OE)基因的亲本科农199相对拷贝数为0,其杂交F1相对拷贝数居中,3种类型很容易分开。在其F2分离群体,7^(OE)基因的相对拷贝数也很容易分为高、中和03种类型,对其中检测为7^(OE)基因纯合与杂合的基因型进一步用9亚基的PCR标记(能同时检测分别与7亚基和7^(OE)亚基紧密连锁的9亚基和8*亚基)进行检测,检测结果完全一致。建立的高通量7^(OE)通用双色荧光定量PCR标记能准确区分7^(OE)亚基是否存在以及是否纯合,对促进优质亚基7^(OE)的分子标记辅助选择具有积极作用。 展开更多
关键词 小麦 优质亚基 7^(OE) 双色荧光 定量pcr
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鹅星状病毒Ⅰ型与Ⅱ型双重荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量:1
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作者 姚展杏 王超 +6 位作者 林寅盛 赵丹 张嘉家 伍辉吉 朱婉君 张济培 陈济铛 《中国家禽》 北大核心 2025年第1期64-70,共7页
为建立一种快速检测鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)Ⅰ型(GAstV-1)与Ⅱ型(GAstV-2)的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR检测方法,试验根据GAstV-1的ORF1a特异保守序列与GAstV-2的ORF2特异保守序列分别设计1对引物,将PCR扩增的两个片... 为建立一种快速检测鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAstV)Ⅰ型(GAstV-1)与Ⅱ型(GAstV-2)的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR检测方法,试验根据GAstV-1的ORF1a特异保守序列与GAstV-2的ORF2特异保守序列分别设计1对引物,将PCR扩增的两个片段分别克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒作为阳性质粒标准品,建立检测并鉴别GAstV-1与GAstV-2的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行评估,并运用该方法对28份疑似痛风雏鹅临床样品进行检测。结果显示:建立的SYBR GreenⅠ双重实时荧光定量PCR方法检测GAstV-1、GAstV-2的标准曲线相关系数均在0.99以上,批间、批内重复变异系数均小于0.7%,最低检测限度均为10 copies/μL;该方法对鸭肝炎病毒、禽流感病毒、鹅细小病毒均无特异性扩增,同时检测GAstV-1与GAstV-2未出现交叉反应;该方法检测28份临床样品的GAstV阳性率为92.8%,其中GAstV-1和GAstV-2均为阳性的有6份,仅GAstV-2阳性的有18份,仅GAstV-1阳性的有2份。研究表明,建立的荧光定量PCR检测方法可用于GAstV-1与GAstV-2的鉴别检测,并且当前引发GAstV感染的主要病原依然是GAstV-2,GAstV-1和GAstV-2混合感染情况也同时存在。 展开更多
关键词 鹅星状病毒 GAstV-1 GAstV-2 双重荧光定量pcr 雏鹅 痛风
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猪圆环病毒2型和3型双重荧光PCR的应用研究进展
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作者 乔萌 徐丽媛 +5 位作者 李梅 庄金山 董佳 岳俊峰 陈君彦 王文龙 《现代畜牧兽医》 2025年第11期85-90,共6页
猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是严重危害全球养猪业的重要病原体,其中猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2,PCV2)和猪圆环病毒3型(porcine circovirus type3,PCV3)因高度相似的临床特征和频繁的混合感染而成为当前研究的重... 猪圆环病毒(porcine circovirus,PCV)是严重危害全球养猪业的重要病原体,其中猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2,PCV2)和猪圆环病毒3型(porcine circovirus type3,PCV3)因高度相似的临床特征和频繁的混合感染而成为当前研究的重点。文章综述了PCV2和PCV3双重荧光PCR检测技术的研究进展,总结了双重荧光PCR在提高检测效率、降低成本和实现精准鉴别诊断方面的优势,探讨了该技术在流行病学调查、疫苗效果评估及混合感染诊断中的实际应用价值,并对未来发展方向提出了展望,为猪圆环病毒病的防控提供参考。 展开更多
关键词 PCV PCV2 PCV3 双重荧光pcr
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猪圆环病毒2型和弓形虫双重TaqMan荧光定量PCR法的建立及应用 被引量:1
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作者 王海燕 仇德洋 +5 位作者 蔺雅婷 杜建才 姚方方 吕延飞 刘洋 郑佳 《中国动物检疫》 2025年第6期92-98,共7页
猪圆环病毒2型(PCV2)感染和弓形虫病(toxoplasmosis)在临床症状上具有一定的相似性因而难以准确辨别。为建立可同时鉴别PCV2和弓形虫(Toxoplasma gondii,Tox)的检测方法,针对PCV2 ORF2和Tox基因组529重复序列(Rep G529)设计特异性引物和... 猪圆环病毒2型(PCV2)感染和弓形虫病(toxoplasmosis)在临床症状上具有一定的相似性因而难以准确辨别。为建立可同时鉴别PCV2和弓形虫(Toxoplasma gondii,Tox)的检测方法,针对PCV2 ORF2和Tox基因组529重复序列(Rep G529)设计特异性引物和Taq Man探针,经过优化引物、探针浓度和反应条件,建立了同时检测这两种病原的双重Taq Man荧光定量PCR方法。该方法仅特异性扩增PCV2和Tox,与其他病原无交叉反应,特异性强;对PCV2质粒标准品的最低检测限为1.21×10~1 copies/μL,对Tox质粒的最低检测限为1.17×10~1 copies/μL,具有较高的敏感性;组内和组间变异系数均小于5%,具有良好的重复性。应用本试验建立方法和国标荧光定量PCR方法同时检测187份血清、脾脏临床样品,结果PCV2和Tox的阳性符合率分别为93.33%和100%。该方法的建立为PCV2和Tox的批量、快速和特异性鉴别检测提供了技术支撑。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 弓形虫 双重荧光定量pcr
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双重TaqMan探针实时荧光PCR法鉴别威灵仙和升麻
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作者 解盈盈 刘丽 +4 位作者 林永强 刘杰 薛菲 张全芳 汪冰 《中药材》 北大核心 2025年第5期1113-1118,共6页
目的:建立威灵仙及其掺伪品升麻的双重TaqMan探针实时荧光PCR鉴别方法。方法:以psbA-trnH序列为基础,分别设计威灵仙和升麻的特异性引物和探针,通过筛选和优化引物浓度、探针浓度、退火温度等主要条件,建立双重TaqMan探针实时荧光PCR反... 目的:建立威灵仙及其掺伪品升麻的双重TaqMan探针实时荧光PCR鉴别方法。方法:以psbA-trnH序列为基础,分别设计威灵仙和升麻的特异性引物和探针,通过筛选和优化引物浓度、探针浓度、退火温度等主要条件,建立双重TaqMan探针实时荧光PCR反应体系;同时对该方法的精密度、重复性、特异性、灵敏度、掺伪量检测限等指标进行了专项考察,并对混合样品进行了可行性验证。结果:所建立的方法检测威灵仙的精密度试验平均Ct值为22.070,RSD为1.53%,检测升麻的精密度试验平均Ct值为19.438,RSD为1.44%;威灵仙重复性试验平均Ct值为22.800,RSD为2.30%,升麻重复性试验平均Ct值为19.280,RSD为1.89%;在浓度为0.0288~90 ng/μL的范围内,线性关系良好,威灵仙线性方程为y=-3.7703x+22.233,相关系数为0.9967,升麻的线性方程为y=-3.9525x+21.447,相关系数为0.9988;当二者相互掺入的比例低至1%时,仍可获得典型的荧光扩增曲线。结论:该研究建立的双重TaqMan探针实时荧光PCR方法可有效检出威灵仙和升麻,为威灵仙药材的质量控制提供了专属性更强、灵敏度更高的检测方法。 展开更多
关键词 威灵仙 升麻 PSBA-TRNH 双重实时荧光pcr TAQMAN探针
原文传递
传染性造血器官坏死病毒和传染性胰脏坏死病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立
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作者 张文 徐立蒲 +7 位作者 吕晓楠 潘勇 王小亮 曹欢 王静波 王姝 阴鸿达 王澎 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第5期494-500,共7页
为建立一种快速、高效、敏感的传染性造血器官坏死病毒(IHNV)和传染性胰脏坏死病毒(IPNV)的双重荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测方法,本研究参照世界动物卫生组织(WOAH)最新推荐的IHNV RT-qPCR方法,根据IHNV N基因合成1对特异性引物和1条经... 为建立一种快速、高效、敏感的传染性造血器官坏死病毒(IHNV)和传染性胰脏坏死病毒(IPNV)的双重荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)检测方法,本研究参照世界动物卫生组织(WOAH)最新推荐的IHNV RT-qPCR方法,根据IHNV N基因合成1对特异性引物和1条经FAM标记的Taq Man探针;根据本研究室建立的6种基因型IPNV(VP2基因)RT-qPCR方法合成1对特异性引物和1条经VIC标记的Taq Man探针。经优化各反应条件,初步建立了IHNV的和IPNV双重RT-qPCR检测方法。分别以IHNV、IPNV、鲤春病毒血症病毒(SVCV)的cDNA以及病毒性出血性败血症病毒(VHSV)和传染性鲑鱼贫血症病毒(ISAV)的重组质粒作为模板,采用本研究建立的双重RT-qPCR检测,评估该方法的特异性;以终浓度分别为1.0×10^(1)拷贝/μL~1.0×10^(9)拷贝/μL pIHNV和p IPNV质粒标准品的混合物作为模板,采用建立的双重RT-qPCR方法扩增,评估该方法的敏感性;以3个不同终浓度的质粒标准品混合物作为模板,采用本研究建立的双重RT-qPCR分别于同一时间和不同时间检测,评估该方法的重复性。结果显示,该方法仅能特异性扩增IHNV和IPNV及二者的质粒标准品混合物,其他相关水生动物病毒均无扩增曲线,特异性较强;对pIHNV和pIPNV质粒标准品的检测限均为1.25拷贝/μL,敏感性较高;组内和组间的变异系数均小于3%,重复性较好。将本实验室保存的45份虹鳟组织上清液传1~2代后,取出现典型CPE的细胞培养物,采用本实验建立的双重RT-qPCR方法和国标中的IHNV RT-PCR及已报道的IPNV RT-PCR方法同时检测。结果显示,3种方法均检出35份阳性样品,其中,IHNV的阳性检出率均为33.3%(15/45),IPNV的阳性检出率均为44.4%(20/45),3种方法的符合率均达100%。本研究首次建立了同时鉴别检测IHNV和IPNV的双重RT-qPCR方法,其特异性强、敏感性高、重复性和稳定性好,可为IHNV和IPNV的鉴别检测及流行病学调查提供新的技术手段。 展开更多
关键词 传染性造血器官坏死病毒 传染性胰脏坏死病毒 双重荧光定量RT-pcr
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猪繁殖与呼吸综合征病毒NADC30毒株鉴别诊断荧光RT-PCR检测方法的建立
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作者 覃国喜 米树运 +3 位作者 孙竹筠 刘德清 罗婷婷 熊炜 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期84-90,共7页
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的危害生猪养殖业的重要传染病之一。NADC30毒株是PRRSV的一种新毒株,其Nsp2存在131个不连续氨基酸缺失。该毒株在临床流行中致病力不同,且常规PRRSV疫苗免疫无法有效预... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的危害生猪养殖业的重要传染病之一。NADC30毒株是PRRSV的一种新毒株,其Nsp2存在131个不连续氨基酸缺失。该毒株在临床流行中致病力不同,且常规PRRSV疫苗免疫无法有效预防其感染,给养殖企业防控PRRSV带来困难。本研究基于TaqMan探针技术,针对经典型PRRSV保守基因序列及PRRSV NADC30缺失区域保守序列,设计不同荧光标记探针,建立双重实时荧光RT-PCR鉴别方法,可区分经典型PRRSV与PRRSV NADC30毒株。结果表明,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可快速区分经典型PRRSV毒株与PRRSV NADC30毒株,对PRRSV经典型疫苗毒株及临床NADC30毒株样本检测效果良好,适用于猪场临床样品中PRRSV NADC30毒株的快速鉴别诊断。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 NDAC30毒株 双重实时荧光RT-pcr
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双重抑制PCR技术分离鹅微卫星标记 被引量:13
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作者 杜文兴 虞德兵 +3 位作者 刘红林 练春兰 候水生 王林云 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期63-67,共5页
用双重抑制PCR技术分离11对鹅的特异微卫星引物,应用于浙东白鹅和太湖鹅的基因组PCR扩增。结果表明:11对引物在浙东白鹅和太湖鹅中分别扩增出37和36个清晰条带,20个等位基因为两品种所共有,11对引物中有5对呈中等多态、6对呈高度多态。... 用双重抑制PCR技术分离11对鹅的特异微卫星引物,应用于浙东白鹅和太湖鹅的基因组PCR扩增。结果表明:11对引物在浙东白鹅和太湖鹅中分别扩增出37和36个清晰条带,20个等位基因为两品种所共有,11对引物中有5对呈中等多态、6对呈高度多态。各位点产生2~6个等位基因,各位点的平均杂合度为0.456~0.772,以G07位点为最高,G06位点为最低;平均多态信息为0.375~0.737,以G07位点为最高,G01、G03和G11位点为最低。浙东白鹅和太湖鹅有效等位基因数分别为2.655和2.558,与实际测得的两品种平均值3.364和3.273较接近。研究结果表明,两品种的等位基因分布较为均匀,与鹅的实际品种特征一致,因此,双重抑制PCR技术适合于鹅的基因组结构研究。 展开更多
关键词 双重抑制pcr技术 微卫星标记
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甘蔗宿根矮化病菌PCR检测技术研究 被引量:19
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作者 周凌云 周国辉 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2006年第2期172-174,共3页
以甘蔗茎组织总DNA为模板,以16S rRNA基因赖氏细菌属(L eif son ia)通用引物为第一轮引物、甘蔗宿根矮化病菌(L eif son ia xy li subsp.xy li,Lxx)亚种特异引物为第二轮引物建立了Lxx巢式PCR检测技术。根据已报道的Lxx巴西分离物基因... 以甘蔗茎组织总DNA为模板,以16S rRNA基因赖氏细菌属(L eif son ia)通用引物为第一轮引物、甘蔗宿根矮化病菌(L eif son ia xy li subsp.xy li,Lxx)亚种特异引物为第二轮引物建立了Lxx巢式PCR检测技术。根据已报道的Lxx巴西分离物基因组全序列(G enB ank登录号AE 016822.1)设计了扩增致病相关基因片段的3个引物对,经多种组合进行了RCR检验,筛选出两个特异性好、灵敏高的引物对,建立了Lxx的多重PCR检测技术。克隆测序表明,PCR产物与巴西分离物基因组相应区段同一率为99%以上,从而证实了上述PCR技术的正确性。检测结果表明,广东样品的阳性率为90%,海南样品的阳性率为60%。 展开更多
关键词 甘蔗宿根矮化病菌 甘蔗 巢式pcr 双重pcr 检测
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沙门菌和副溶血性弧菌双重荧光PCR快速检测方法的建立 被引量:9
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作者 许如苏 林彩华 +3 位作者 陈其生 林志雄 杨奇志 蔡颖 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期465-469,共5页
根据沙门菌invA基因和副溶血性弧菌toxR基因的保守序列设计引物和探针,通过优化反应条件与参数,建立了可同时检测沙门菌和副溶血性弧菌的双重荧光PCR方法。结果显示,该方法敏感度高,特异性强,重复性好。对沙门菌和副溶血性弧菌的检测低... 根据沙门菌invA基因和副溶血性弧菌toxR基因的保守序列设计引物和探针,通过优化反应条件与参数,建立了可同时检测沙门菌和副溶血性弧菌的双重荧光PCR方法。结果显示,该方法敏感度高,特异性强,重复性好。对沙门菌和副溶血性弧菌的检测低限均低于每反应体系10CFU,经对29株非目标菌进行检测均呈阴性,而定量检测批内和批间的变异系数均小于2%;应用该方法检测人工染菌样品和实际样品,结果与SN标准方法的检测结果一致;应用该法可在8h内完成对样品中沙门菌和副溶血性弧菌的同步检验。 展开更多
关键词 沙门菌 副溶血性弧菌 双重荧光pcr
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利用双重抑制PCR技术分离鸭微卫星标记 被引量:3
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作者 王利刚 虞德兵 +5 位作者 杜文兴 徐银学 刘红林 练春兰 候水生 王林云 《扬州大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期72-75,90,共5页
用双重抑制PCR技术分离10对鸭的特异微卫星引物,应用于北京鸭、樱桃谷鸭、高邮鸭3个品种的基因组PCR扩增。结果表明:10对引物中有7对引物具有多态,3对呈高度多态,4对呈中度多态。7对引物在上述3个鸭品种中分别扩增出23、22、23个等... 用双重抑制PCR技术分离10对鸭的特异微卫星引物,应用于北京鸭、樱桃谷鸭、高邮鸭3个品种的基因组PCR扩增。结果表明:10对引物中有7对引物具有多态,3对呈高度多态,4对呈中度多态。7对引物在上述3个鸭品种中分别扩增出23、22、23个等位基因,其中15个等位基因为3个品种所共有;各位点产生4~7个等位基因,平均杂合度为0.494~0.650,平均多态信息含量为0.414~0.586,平均有效等位基因数为2.001~2.870。3个鸭品种的平均杂合度分别为0.578、0.566、0.594,平均多态信息含量分别为0.496、0.480、0.524;平均有效等位基因数分别为2.441、2.340、2.615,与实测平均等位基因数3.286、3.1z12、3.286较接近。 展开更多
关键词 双重抑制pcr技术 微卫星标记
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一种基于磁性纳米粒子PCR的高通量SNP分型方法 被引量:7
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作者 刘洪娜 李松 +2 位作者 王志飞 何农跃 贺全国 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第6期1035-1038,共4页
利用磁性纳米粒子PCR扩增(MNPs-PCR)和等位基因特异性双色荧光探针(Cy3,Cy5)杂交,建立了一种单核苷酸多态性(SNP)分型的新方法.应用该方法对9个样本MTHFR基因的C677T多态进行检测,野生和突变型样本正错配信号比大于9·0,杂合型正错... 利用磁性纳米粒子PCR扩增(MNPs-PCR)和等位基因特异性双色荧光探针(Cy3,Cy5)杂交,建立了一种单核苷酸多态性(SNP)分型的新方法.应用该方法对9个样本MTHFR基因的C677T多态进行检测,野生和突变型样本正错配信号比大于9·0,杂合型正错配信号比接近1·0,分型结果经测序验证.此方法无须产物纯化、浓缩,扫描分型结果快速、直观,是一种操作简单、快速、高通量、高灵敏度的分型方法. 展开更多
关键词 磁性纳米粒子 pcr 双色荧光杂交 SNP分型
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二重PCR方法鉴别气肿疽梭菌和腐败梭菌 被引量:6
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作者 彭小兵 李旭妮 +3 位作者 王楠 何宇 丁家波 蒋玉文 《中国兽药杂志》 2011年第3期20-22,共3页
用包含16S~23S rDNA间隔区和23S rDNA的部分序列作为气肿疽梭菌特异性标志,以α毒素部分序列作为腐败梭菌特异性标志,建立了鉴别气肿疽梭菌和腐败梭菌的二重PCR方法。结果显示:气肿疽梭菌C54-1株扩增出大小为509 bp的条带,腐败梭菌C55-... 用包含16S~23S rDNA间隔区和23S rDNA的部分序列作为气肿疽梭菌特异性标志,以α毒素部分序列作为腐败梭菌特异性标志,建立了鉴别气肿疽梭菌和腐败梭菌的二重PCR方法。结果显示:气肿疽梭菌C54-1株扩增出大小为509 bp的条带,腐败梭菌C55-1株、C55-16株均扩增出大小为148 bp的条带,均与预期吻合;而产气荚膜梭菌C57-1株、C59-37株,肉毒梭菌C62-4株,诺维梭菌C61-4株均未扩增出任何条带。扩增产物的测序结果进一步证实了本方法的特异性。菌株的生物学特性试验结果也符合相应气肿疽梭菌和腐败梭菌的特点。本研究所建立的二重PCR方法可用于气肿疽梭菌和腐败梭菌的快速鉴定。 展开更多
关键词 气肿疽梭菌 腐败梭菌 16S^23SrDNA 二重pcr
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大鼠细小病毒双重PCR检测方法的建立 被引量:3
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作者 饶丹 朱余军 +12 位作者 伍妙梨 袁文 王静 尹雪琴 丛锋 练月晓 黄碧洪 徐凤娇 刘向楠 刘助红 黄韧 张钰 郭鹏举 《实验动物与比较医学》 CAS 2017年第1期32-35,共4页
目的建立快速检测大鼠细小病毒的PCR方法。方法根据大鼠细小病毒基因序列的特点,建立鉴别检测大鼠细小病毒(RPV)与其他三种大鼠细小病毒(H-1、KRV、RMV)的双重PCR方法。根据RPV核酸序列的性质,在VP2基因筛选了一对用于特异扩增RPV株的引... 目的建立快速检测大鼠细小病毒的PCR方法。方法根据大鼠细小病毒基因序列的特点,建立鉴别检测大鼠细小病毒(RPV)与其他三种大鼠细小病毒(H-1、KRV、RMV)的双重PCR方法。根据RPV核酸序列的性质,在VP2基因筛选了一对用于特异扩增RPV株的引物,在NS1基因设计了一对用于特异性扩增H-1、KRV和RMV的引物。结果两对引物组成的二重PCR方法可以特异性的扩增RPV而不扩增核酸同源性高的小鼠细小病毒和多种其他病原微生物;敏感性实验表明,二重PCR的最低检测限可达1 000拷贝/μL。双重PCR结合测序在检测23份临床样本中,检测出7份RMV阳性,包括1份与RPV共感染阳性样本。结论本研究建立的检测RPV的双重PCR方法具有特异性好、灵敏度高及操作简单等优点,是一种简便、可靠的检测方法。 展开更多
关键词 大鼠细小病毒(RPV) H-1 KRV RMV 双重pcr
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双重RT-PCR同时检测兰花两种主要病毒的研究 被引量:2
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作者 张妙彬 潘丽晶 +1 位作者 肖杨 杨玉环 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期166-167,180,共3页
以利用Trizol试剂盒提取的蝴蝶兰组培苗叶片总RNA为模板,根据已报道的建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglussm ringspot virus,ORSV)外壳蛋白基因(cp)的保守序列设计特异性引物,探索RT-PCR反应条件,建... 以利用Trizol试剂盒提取的蝴蝶兰组培苗叶片总RNA为模板,根据已报道的建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglussm ringspot virus,ORSV)外壳蛋白基因(cp)的保守序列设计特异性引物,探索RT-PCR反应条件,建立了可同时检测CyMV和ORSV的双重RT-PCR体系。 展开更多
关键词 兰花 双重RT-pcr 建兰花叶病毒 齿兰环斑病毒 检测
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兰花上凤仙花坏死斑病毒和建兰花叶病毒双重RT-PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 丁元明 张巧萍 +5 位作者 王云月 李旻 周剑 白永华 段禄华 和万忠 《植物检疫》 北大核心 2009年第4期32-33,共2页
根据凤仙花坏死斑病毒(Impatiens necrotic spot virus,INSV)和建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)的保守序列设计特异性引物,建立了双重RT-PCR同时检测两种病毒的方法。用该方法对兰花基地的可疑发病兰株进行检测,结果从田间... 根据凤仙花坏死斑病毒(Impatiens necrotic spot virus,INSV)和建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)的保守序列设计特异性引物,建立了双重RT-PCR同时检测两种病毒的方法。用该方法对兰花基地的可疑发病兰株进行检测,结果从田间采取的12株可疑兰花中有6株检出INSV,1株检出CyMV,2株同时检出两种病毒。 展开更多
关键词 凤仙花坏死斑病毒 建兰花叶病毒 双重RT—pcr
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