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黄曲霉毒素B1高敏感性和高特异性单抗的制备及dcELISA检测方法的建立
1
作者 樊振江 王丽莎 +1 位作者 孟楠 张华青 《饲料工业》 北大核心 2025年第11期139-146,共8页
研究旨在制备黄曲霉毒素B1(AFB1)高敏感性和高特异性单克隆抗体(mAb),建立AFB1直接竞争酶联免疫吸附试验(dcELISA)检测方法。试验选用自制人工抗原AFB1-BSA免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合和阳性杂交瘤筛选技术建立AFB1 mAb杂交瘤细胞株,... 研究旨在制备黄曲霉毒素B1(AFB1)高敏感性和高特异性单克隆抗体(mAb),建立AFB1直接竞争酶联免疫吸附试验(dcELISA)检测方法。试验选用自制人工抗原AFB1-BSA免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合和阳性杂交瘤筛选技术建立AFB1 mAb杂交瘤细胞株,体内诱生腹水法制备AFB1 mAb,对其免疫学特性进行鉴定;应用AFB1 mAb建立AFB1 dcELISA检测方法,对其性能进行测定。结果表明,筛选出AFB1 mAbs 1F6-3C8和3G9-2B6 2株杂交瘤细胞株,其中1F6-3C8敏感性更高、特异性更好,间接非竞争ELISA(inELISA)细胞培养上清液和腹水效价分别为1∶(6.4×10^(3))和1∶(1.28×10^(6)),对AFB1的半数抑制浓度(IC_(50))为1.32μg/L,除与黄曲霉毒素B2(AFB2)有15.37%的交叉反应率(CRR)外,与黄曲霉毒素(AFs)其他同系物的CRR均小于3.0%,与其他霉菌毒素的CRR小于0.02%;在优化的条件下,AFB1 dcELISA的检测限(LOD)为0.11μg/L,检测范围为0.15~7.01μg/L;玉米粉、豆饼粉、猪饲料和蛋鸡饲料的批内平均回收率分别为89.07%、86.58%、89.35%和93.62%,批间平均回收率分别为89.97%、88.07%、91.35%和92.48%,批内平均变异系数(CVs)值分别为11.08%、11.67%、11.45%和10.40%,批间平均CVs值分别为11.37%、12.61%、11.87%和10.94%,AFB1 dcELISA具有较好的准确性和稳定性;用AFB1 dcELISA和LC-MS/MS检测40个实际样品和6个已知阳性样品,两者的检测结果一致,符合率为100%,AFB1 dcELISA具有较好的可靠性。 展开更多
关键词 黄曲霉毒素B1 人工抗原 高敏感性和高特异性单克隆抗体 dcelisa 免疫分析
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dcELISA检测泥鳅、鲫肌肉中氯霉素残留方法的应用 被引量：1
2
作者 许美玲 裴道国 +1 位作者 王莲 陈冰君 《齐鲁渔业》 2008年第5期60-62,共3页
应用直接竞争酶联免疫吸附试验方法(dcELISA)快速定量测定泥鳅、鲫肌肉中氯霉素(CAP)残留量。氯霉素浓度在0.05～10 ng/g范围内具有良好的线性关系,线性方程为y=-0.33-1.88x,r^2=0.995,向样品中分别添加0.1、0.3、0.9 ng/g 3个浓度水平... 应用直接竞争酶联免疫吸附试验方法(dcELISA)快速定量测定泥鳅、鲫肌肉中氯霉素(CAP)残留量。氯霉素浓度在0.05～10 ng/g范围内具有良好的线性关系,线性方程为y=-0.33-1.88x,r^2=0.995,向样品中分别添加0.1、0.3、0.9 ng/g 3个浓度水平的氯霉素标准品,泥鳅样品的平均回收率分别为87.2%、88.9%、93.0%,鲫样品的平均回收率分别为86.1%、79.9%、99.0%,最低检测限为0.05 ng/g,批内变异系数为8.0%,批间变异系数为7.2%,结果表明该方法灵敏度高,重复性好,适合在泥鳅、鲫肉样中氯霉素残留筛选检测。 展开更多
关键词 氯霉素残留 直接竞争酶联免疫法 泥鳅鲫
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直接竞争酶联免疫吸附法用于糖浆类保健食品中西地那非检测的研究 被引量：9
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作者 李瑞婷 陆建超 +4 位作者 王弘 杨金易 徐振林 孙远明 沈玉栋 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第24期84-88,95,共6页
建立了一种在保健食品中检测西地那非的直接竞争酶联免疫吸附分析法（dc ELISA）。经优化最佳反应条件为：包被浓度为100ng/m L,酶标抗体稀释倍数为70倍,标准品稀释液为p H=9,0.01mol/L PBST溶液,抗体竞争反应50min。本方法的半抑制浓度... 建立了一种在保健食品中检测西地那非的直接竞争酶联免疫吸附分析法（dc ELISA）。经优化最佳反应条件为：包被浓度为100ng/m L,酶标抗体稀释倍数为70倍,标准品稀释液为p H=9,0.01mol/L PBST溶液,抗体竞争反应50min。本方法的半抑制浓度IC50为1.47ng/m L,线性范围（IC20～IC80）为0.12～17.65ng/m L,检测限IC15为0.0845ng/m L,批内批间变异系数均小于20%,保健食品补肾糖浆的添加回收率在86.0%～111.0%之间,满足实际样品的快速筛检需求。 展开更多
关键词 西地那非 酶联免疫吸附分析法(dc ELISA) 保健食品
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牛奶中β-内酰胺酶抑制剂——舒巴坦直接竞争ELISA的分析研究 被引量：5
4
作者 沙芳芳 刘卫华 +2 位作者 王敬 于文龙 王向红 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期67-71,共5页
建立代表性的β-内酰胺酶抑制剂-舒巴坦直接竞争酶联免疫吸附分析法(dc ELISA)。通过对封闭液浓度、离子浓度、p H、包被条件等分析条件优化后建立dc ELISA,并进行应用。结果表明方法的IC_(50)为5.25 ng/m L,IC_(15)为1.07×10^(-3)... 建立代表性的β-内酰胺酶抑制剂-舒巴坦直接竞争酶联免疫吸附分析法(dc ELISA)。通过对封闭液浓度、离子浓度、p H、包被条件等分析条件优化后建立dc ELISA,并进行应用。结果表明方法的IC_(50)为5.25 ng/m L,IC_(15)为1.07×10^(-3)ng/m L,板内和板间平均变异系数分别为6.69%、9.02%,对他唑巴坦和克拉维酸的交叉反应率分别是7.12%、0.93%。牛奶样品的添加回收率在85.66%~89.23%之间。该方法灵敏度较高,稳定性较好,特异性较强,可以应用于乳制品中舒巴坦残留的快速检测。 展开更多
关键词 舒巴坦 直接竞争酶联免疫法 检测方法
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链霉素残留检测直接竞争ELISA法的建立 被引量：8
5
作者 奚茜 张明洲 +4 位作者 李沐洁 龚云飞 王旻子 陈宗伦 王唯芬 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第11期124-131,共8页
目的：在多克隆抗体的基础上研制1种用于检测牛奶、蜂蜜中链霉素残留量的直接竞争酶联免疫吸附测定法（ELISA）。方法：以兔抗链霉素多抗为包被原,以链霉素-辣根过氧化物连接物为标记物,TMB为显色底物,建立了1种链霉素残留量检测的竞争... 目的：在多克隆抗体的基础上研制1种用于检测牛奶、蜂蜜中链霉素残留量的直接竞争酶联免疫吸附测定法（ELISA）。方法：以兔抗链霉素多抗为包被原,以链霉素-辣根过氧化物连接物为标记物,TMB为显色底物,建立了1种链霉素残留量检测的竞争性直接酶联免疫快速检测方法,并与高效液相色谱（HPLC）分析方法比较和验证。结果：用该检测方法分别检测牛奶、蜂蜜中的链霉素残留情况。结果表明,在0.5~40.5 ng/mL的浓度范围内标准曲线方程为y=-0.4341x＋1.1786（r=0.9708）,半抑制率IC50为3.60 ng/mL,最低检测限IC10为0.43 ng/mL,平均批内与批间变异系数分别为5.78%与8.11%。在牛奶、蜂蜜样品中的检测限分别为2.7 ng/mL、2.8 ng/mL。在添加10.0~400.0 ng/mL范围内,平均回收率在97%~107%。除双氢链霉素外,与其他抗生素药物均无交叉反应。牛奶、蜂蜜样品采用ELISA和HPLC 2种检测方法的相关系数分别为0.99和0.97,说明本研究建立的ELISA方法与HPLC方法具有很好的相符性。结论：直接竞争ELISA法可以满足牛奶、蜂蜜中链霉素残留的检测要求。 展开更多
关键词 链霉素 残留 直接竞争ELISA 快速检测
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