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Science Letters:Transient expression of chicken alpha interferon gene in lettuce 被引量:2
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作者 Li SONG De-gang ZHAO +1 位作者 Yong-jun WU Yi LI 《Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology)》 SCIE CAS CSCD 2008年第5期351-355,共5页
We investigated the possibility of producing chicken alpha interferon (ChlFN-α) in transgenic plants. The cDNA encoding ChlFN-α was introduced into lettuce (Lactuca sativa L.) plants by using an agro-infiltratio... We investigated the possibility of producing chicken alpha interferon (ChlFN-α) in transgenic plants. The cDNA encoding ChlFN-α was introduced into lettuce (Lactuca sativa L.) plants by using an agro-infiltration transient expression system. The ChlFN-a gene was correctly transcribed and translated in the lettuce plants according to RT-PCR and ELISA assays. Recombinant protein exhibited antiviral activity in vitro by inhibition of vesicular stomatitis virus (VSV) replication on chicken embryonic fibroblast (CEF). The results demonstrate that biologically active avian cytokine with potential pharmaceutical applications could be expressed in transgenic lettuce plants and that it is possible to generate interferon protein in forage plants for preventing infectious diseases of poultry. 展开更多
关键词 chicken alpha interferon (ChlFN-α) Expression Transgenic lettuce Bioactivity
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鸡α-干扰素抗家禽病毒作用及机制的研究进展
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作者 管梦迪 郭晶 +5 位作者 刘明凤 石文军 沈金艳 刘丽丽 王梦静 李旭勇 《中国家禽》 北大核心 2026年第3期135-142,共8页
鸡α-干扰素(ChIFNα)是具有广谱抗病毒活性的禽类细胞因子,能够激活宿主细胞的抗病毒防御系统并调节免疫应答。近年来,关于ChIFNα抗家禽病毒的作用及机制已开展大量研究并取得系列成果。病毒感染时,核酸和复制中间体作为病原体相关分... 鸡α-干扰素(ChIFNα)是具有广谱抗病毒活性的禽类细胞因子,能够激活宿主细胞的抗病毒防御系统并调节免疫应答。近年来,关于ChIFNα抗家禽病毒的作用及机制已开展大量研究并取得系列成果。病毒感染时,核酸和复制中间体作为病原体相关分子模式被宿主模式识别受体识别,激活多个先天免疫细胞信号级联通路,最终诱导ChIFNα产生。ChIFNα通过与靶细胞受体结合激活JAK-STAT信号通路,诱导产生多种抗病毒因子以抑制病毒复制。ChIFNα在家禽病毒病防治、新型免疫佐剂研发、提高动物抗病能力等方面具有广阔的应用前景。文章对ChIFNα及其在抗家禽病毒病中介导的免疫调节机制进行综述,旨在为研发新型家禽抗病毒药物和疫苗佐剂提供理论参考。 展开更多
关键词 鸡α-干扰素 家禽病毒病 抗病毒机制 信号通路
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重组鸡α干扰素对不同亚型禽流感病毒在鸡胚中感染增殖的抑制作用 被引量:1
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作者 何兰 赵俊 +4 位作者 俞俊岭 罗婉蓉 周雪 方惟希 何军 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1105-1111,共7页
为评估重组鸡α干扰素对不同禽流感病毒在鸡胚中感染增殖的抑制作用,将重组鸡α干扰素梯度稀释为高、较高、中等、低四个不同浓度,各浓度按照“先给药再攻毒”、“同时给药和攻毒”、“先攻毒再给药”三种不同方式,对适龄SPF鸡胚进行给... 为评估重组鸡α干扰素对不同禽流感病毒在鸡胚中感染增殖的抑制作用,将重组鸡α干扰素梯度稀释为高、较高、中等、低四个不同浓度,各浓度按照“先给药再攻毒”、“同时给药和攻毒”、“先攻毒再给药”三种不同方式,对适龄SPF鸡胚进行给药和接种H10N5、H9N2、H6N6亚型禽流感病毒(AIV),同时设置药物对照和病毒对照。通过检测鸡胚尿囊液各亚型AIV凝集红细胞效价的变化,评价重组鸡α干扰素对不同亚型AIV感染和增殖的抑制效力。结果在100EID50病毒剂量下,“先给药后攻毒”方式有抑制各亚型病毒在鸡胚中感染和增殖的作用,且感染抑制比和血凝效价均随药物浓度的升高而降低,不同浓度差异具有统计学意义(P<0.01)。“同时给药和攻毒”方式对H9N2、H6N6亚型AIV感染有抑制作用,对H10N5亚型AIV感染无抑制作用,但能显著降低病毒凝集效价。“先攻毒后给药”方式均不能阻断各亚型AIV感染,但低药物浓度就能显著降低H6N6亚型AIV凝集效价(P<0.01),而H10N5亚型AIV在中等药物浓度、H9N2亚型AIV在高药物浓度中凝集效价有显著降低(P<0.05)。表明“先给药后攻毒”能在鸡胚中显著抑制H10N5、H9N2、H6N6亚型AIV感染,“同时给药和攻毒”能抑制部分感染和增殖,“先攻毒再给药”不能阻止感染,但高浓度药物亦可抑制病毒增殖。本研究为今后干扰素在预防、治疗AIV感染的应用提供了相关实验根据。 展开更多
关键词 重组鸡α干扰素 禽流感病毒 抑制作用
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重组酵母鸡α干扰素的诱导表达及其抗MDV、NDV能力 被引量:8
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作者 蔡梅红 曹瑞兵 +2 位作者 曹景立 王秀红 陈溥言 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2010年第9期37-41,共5页
【目的】获得鸡α干扰素重组酵母菌诱导表达的最佳诱导时间和甲醇的体积分数,并测定诱导表达产物对鸡马立克氏病毒(MDV)和鸡新城疫病毒(NDV)的抑制能力。【方法】挑取2个鸡α干扰素重组酵母菌单菌落至BMGY培养基中培养,待菌液OD600为4... 【目的】获得鸡α干扰素重组酵母菌诱导表达的最佳诱导时间和甲醇的体积分数,并测定诱导表达产物对鸡马立克氏病毒(MDV)和鸡新城疫病毒(NDV)的抑制能力。【方法】挑取2个鸡α干扰素重组酵母菌单菌落至BMGY培养基中培养,待菌液OD600为4左右时,分别转接至BMMY培养液诱导,1瓶每隔12 h补加1次体积分数0.5%甲醇,另1瓶每隔12 h补加1次体积分数1%甲醇,于24,48,72 h收集样品,备SDS-PAGE检测用。根据不同时间(24,48,72,96 h)诱导上清液表达量的差异,留用表达量最高时段的上清液,经初步纯化后,利用鸡胚成纤维细胞(CEF),分别测定重组酵母鸡α干扰素抑制MDV及NDV的能力。【结果】鸡α干扰素重组酵母菌在每隔12 h补加1次体积分数1%甲醇诱导48 h时,或每隔12 h补加1次体积分数0.5%甲醇诱导72 h时,重组酵母鸡α干扰素表达量均达到最高;且诱导上清液具有较好地抑制MDV、NDV的能力。【结论】获得了鸡α干扰素重组酵母菌小量发酵的最佳条件;获得的重组酵母鸡α干扰素对MDV和NDV有明显的抑制作用。 展开更多
关键词 鸡α干扰素 酵母 MDV NDV
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鸡α干扰素/白细胞介素2基因的融合表达及活性研究 被引量:16
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作者 闫若潜 谢彩华 +3 位作者 吴志明 张志凌 刘光辉 刘梅芬 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期594-604,共11页
【目的】研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha,ChIFN-α)与鸡... 【目的】研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂以对鸡的病毒性疾病进行防治。【方法】采用重叠延伸PCR(splicing by overlap extension-PCR,SOE-PCR)方法通过一基因柔性接头将鸡α干扰素(chicken interferon alpha,ChIFN-α)与鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)基因构建成ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-T Easy载体,将嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达。通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rChIFN-α-linker-ChIL-2)进行纯化。采用细胞病变抑制法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)增殖活性。采用ChIL-2ELISA试验方法检测rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白与抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应的活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚上对新城疫病毒(NDV)和禽流感H9N2亚型病毒(AIV H9N2)的抑制活性以测定其在鸡胚内抗病毒活性。分别测定rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内对NDV活疫苗和灭活疫苗的免疫增强作用以测定其在鸡体内的活性。【结果】成功构建并克隆了ChIFN-α-linker-ChIL-2嵌合基因。嵌合基因在大肠杆菌中表达的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白分子量大小约35.9kD,蛋白经纯化后纯度在96%以上。rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在CEF细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和IBDV活性明显高于单一rChIFN-α的抗病毒活性;rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白可以和抗ChIL-2单抗发生特异性免疫反应。IFN-α活性单位为200IU的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在SPF鸡胚内可明显降低NDV和AIV H9N2所引起的鸡胚死亡和胚体出血,并能显著延长鸡胚存活时间,但过高剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白抑制鸡胚死亡和出血能力有所下降。合适剂量的rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内具有显著的抗病毒活性和免疫增强活性。【结论】rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白在鸡体内外均具有ChIFN-α和ChIL-2蛋白的双重生物学活性,这为进一步研究以rChIFN-α-linker-ChIL-2蛋白为主要成分的基因工程抗病毒制剂在鸡体内抗病毒活性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡α干扰素 鸡白细胞介素2 嵌合基因 融合表达 活性
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ChIFN-α基因在烟草中的表达及转基因烟草对TMV的抗性 被引量:6
6
作者 宋莉 赵德刚 +1 位作者 田晓娥 吴拥军 《中国农业科技导报》 CAS CSCD 2010年第1期118-122,共5页
动物α干扰素具有高效广谱的抗病毒作用,通过农杆菌介导法将35S驱动的干扰素基因ChIFN-α转化烟草,Southern杂交和W estern杂交进行目的基因的转化、表达检测,重组蛋白的数量通过ELISA测定,对获得的转基因烟草植株进行TMV接种实验,结果... 动物α干扰素具有高效广谱的抗病毒作用,通过农杆菌介导法将35S驱动的干扰素基因ChIFN-α转化烟草,Southern杂交和W estern杂交进行目的基因的转化、表达检测,重组蛋白的数量通过ELISA测定,对获得的转基因烟草植株进行TMV接种实验,结果表明ChIFN-α基因的转化赋予了转基因烟草对TMV的抗性,进一步的荧光定量PCR差异表达检测结果表明,该抗性可能与转基因烟草体内防卫基因PR-1 a、抗病N基因和信号转导MAPK基因受到上调表达有关。 展开更多
关键词 鸡α干扰素 转基因烟草 烟草花叶病毒 抗病性
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鸡α干扰素/白细胞介素18基因的融合表达及抗病毒活性研究 被引量:6
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作者 何静 张盼盼 +6 位作者 孙敏华 康银峰 谢鹏 向斌 韩翡 谭阳通 任涛 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期18-22,共5页
【目的】构建原核表达载体p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18、大肠埃希菌Escherichia coli表达及产物纯化与活性检测,研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,以对鸡的病毒性疾病进行防治.【方法】采用融合PCR(Fusion PCR)方法,利用具... 【目的】构建原核表达载体p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18、大肠埃希菌Escherichia coli表达及产物纯化与活性检测,研究高效广谱鸡基因工程重组复合抗病毒制剂,以对鸡的病毒性疾病进行防治.【方法】采用融合PCR(Fusion PCR)方法,利用具有互补末端的引物,形成具有重叠链的PCR产物,通过PCR产物重叠链的延伸将鸡α干扰素(Chicken interferon alpha,Ch IFN-α)与鸡白细胞介素18(Chicken interleukin-18,Ch IL-18)基因构建Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因并克隆入p ET-28a原核表达载体中进行原核表达.通过镍柱亲和层析法纯化可溶性蛋白,并进行SDSPAGE分析、Western-blot鉴定.采用细胞病变抑制法检测r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在细胞上抑制水泡性口炎病毒(VSV)及新城疫病毒(NDV)增殖活性.【结果和结论】成功构建并克隆了p ET28a-r Ch IFN-α-Ch IL-18融合基因.融合基因在大肠埃希菌中表达的r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白相对分子质量约为38 000,蛋白经纯化后纯度在90%以上.r Ch IFN-α-Ch IL-18蛋白在鸡胚成纤维(CEF)细胞上具有明显抗病毒活性,其抗VSV和NDV的活性明显高于单一r Ch IFN-α、r Ch IL-18蛋白的抗病毒活性. 展开更多
关键词 鸡α干扰素 鸡白细胞介素18 融合PCR 抗病毒活性
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鸡α干扰素基因的原核表达及其活性测定 被引量:4
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作者 戴华 郑佳玉 +2 位作者 陈俊华 潘志明 焦新安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期804-807,共4页
应用RT-PCR技术,从被刺激诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡α-干扰素(ChIFN-α)基因cDNA,经克隆和测序后,构建原核表达重组质粒pGEX-proChIFN-α(全长序列)和pET-ChIFN-α(不含信号肽序列),并分别转化相应的表达菌。重组菌经IPTG诱导,SDS-P... 应用RT-PCR技术,从被刺激诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡α-干扰素(ChIFN-α)基因cDNA,经克隆和测序后,构建原核表达重组质粒pGEX-proChIFN-α(全长序列)和pET-ChIFN-α(不含信号肽序列),并分别转化相应的表达菌。重组菌经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,ChIFN-α基因均获得表达,重组蛋白大小分别为45ku、26ku左右,表达的蛋白以包涵体形式存在。表达产物经变性、提纯、复性,重组蛋白的含量约为1mg/mL。复性后的ChIFN-α能够在鸡胚成纤维细胞上抑制H5N1禽流感病毒的复制;用水泡性口炎病毒检测结果表明,重组ChIFN-α具有较高的抗病毒作用,其生物学活性达到2×106u/mg。 展开更多
关键词 鸡α-干扰素基因 原核表达 抗病毒活性
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3个品种鸡α干扰素基因的克隆与序列分析 被引量:2
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作者 陈红英 宋凌云 +2 位作者 李新生 杨明凡 崔保安 《云南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期552-556,共5页
根据GenBank中鸡α干扰素(IFN-α)基因序列设计1对引物,应用PCR技术直接从鸡肝组织基因组中扩增罗曼鸡、海兰鸡及固始鸡α干扰素基因,并进行克隆和测序。结果表明,获得了3个品种鸡IFN-α全基因序列,长度均为582bp,编码193个氨基... 根据GenBank中鸡α干扰素(IFN-α)基因序列设计1对引物,应用PCR技术直接从鸡肝组织基因组中扩增罗曼鸡、海兰鸡及固始鸡α干扰素基因,并进行克隆和测序。结果表明,获得了3个品种鸡IFN-α全基因序列,长度均为582bp,编码193个氨基酸残基。3个品种鸡IFN—α基因及推导的氨基酸序列比较结果显示,海兰鸡和罗曼鸡IFN-α基因序列完全一致,而固始鸡与海兰鸡和罗曼鸡IFN-α基因核苷酸同源性99.3%,有4个碱基发生非同义变异,氨基酸同源性为97.9%。克隆的3个品种鸡IFN-α基因序列与Gen-Bank上发表的7条鸡IFN-α基因序列进行比较分析发现,核苷酸同源性在98.1%~100%之间,氨基酸同源性在96.9%-100%之间。 展开更多
关键词 Α干扰素 基因克隆 序列分析
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表达鸡α干扰素重组酿酒酵母菌的构建与鉴定 被引量:1
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作者 杜伟立 尹美辰 +3 位作者 杨理凯 张涛 王令 路宏朝 《动物医学进展》 北大核心 2017年第9期28-31,共4页
通过构建鸡α干扰素真核表达载体,以获得能够表达鸡α干扰素的酵母工程菌株。首先根据GenBank公布的鸡α干扰素基因序列设计上、下游引物,以略阳乌鸡基因组DNA为模板,PCR扩增鸡α干扰素基因片段。然后,利用基因重组技术将鸡α-干扰素基... 通过构建鸡α干扰素真核表达载体,以获得能够表达鸡α干扰素的酵母工程菌株。首先根据GenBank公布的鸡α干扰素基因序列设计上、下游引物,以略阳乌鸡基因组DNA为模板,PCR扩增鸡α干扰素基因片段。然后,利用基因重组技术将鸡α-干扰素基因插入真核表达载体,通过菌落PCR和DNA测序确定目标载体,构建成功后转化至酿酒酵母AH109,再通过营养缺陷培养、质粒提取和PCR鉴定带JMB440-ChIFN-α载体的重组酵母菌株。最终通过酵母培养、总蛋白收集、SDS-PAGE电泳和Western blot等,确定鸡α干扰素基因能够与酵母菌株重组,并表达α干扰素,蛋白条带大小约为23ku,与预期结果一致,表明成功构建了表达鸡干扰素基因的工程酵母菌株。 展开更多
关键词 略阳乌鸡 鸡α-干扰素 真核表达载体 酿酒酵母
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鸡α干扰素在家蚕中的表达及抗病毒活性测定 被引量:3
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作者 李田田 杨灵 +3 位作者 易咏竹 沈桂芳 张志芳 李轶女 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期171-176,共6页
鸡α干扰素在防御病毒感染及治疗病毒性疾病中起着重要的作用。旨在利用家蚕杆状病毒表达系统研制有活性的鸡α干扰素。首先对鸡α干扰素基因(ChIFN-α)进行了优化与合成,将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中,与ORF1629缺损的亲本病毒B... 鸡α干扰素在防御病毒感染及治疗病毒性疾病中起着重要的作用。旨在利用家蚕杆状病毒表达系统研制有活性的鸡α干扰素。首先对鸡α干扰素基因(ChIFN-α)进行了优化与合成,将其克隆到杆状病毒转移载体pVL1393中,与ORF1629缺损的亲本病毒BmBcmid共转染,纯化重组病毒,再感染家蚕幼虫,收集蚕血淋巴以检测α干扰素基因的表达。Western blot分析结果显示,成功表达出分子量约为19 kD的鸡α干扰素。采用细胞病变抑制法在Vero-VSV*GFP系统中测定表达产物的抗病毒活性。所的表达的鸡α干扰素具有明显的抗病毒活性,活性不低于3.2×105 U/mL。利用杆状病毒载体系统成功地表达了具有抗病毒活性的鸡α干扰素的成熟蛋白,为开发廉价高效的鸡干扰素生物制剂奠定了物质基础。 展开更多
关键词 鸡α干扰素 家蚕 杆状病毒表达系统 抗病毒活性
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三黄鸡α干扰素的克隆、表达及抗病毒活性初步研究 被引量:5
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作者 李秋霞 刘永录 +4 位作者 龚剑 马仲彬 陈乃壮 杨明锋 张国祖 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第10期63-66,共4页
采用PCR方法从三黄鸡血液基因组中扩增鸡α干扰素全基因,并克隆和测序。序列分析表明,基因全长为582bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因489bp。将该片段与表达载体pET-28a连接克隆至大肠埃希菌DH5α菌株,经测序和酶切鉴定,选取正向插入、读码... 采用PCR方法从三黄鸡血液基因组中扩增鸡α干扰素全基因,并克隆和测序。序列分析表明,基因全长为582bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因489bp。将该片段与表达载体pET-28a连接克隆至大肠埃希菌DH5α菌株,经测序和酶切鉴定,选取正向插入、读码框正确的阳性克隆。构建重组质粒并转化BL21(DE3),经IPTG诱导,融合蛋白以包涵体形式在BL21(DE3)高效表达,经His亲和层析柱得以纯化。鸡胚试验表明,重组干扰素抵抗新城疫病毒效果显著,能保护鸡胚并能够延迟和减少新城疫病毒的复制。 展开更多
关键词 鸡α干扰素 原核表达 抗病毒活性
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荧光定量RT-PCR检测鸡α干扰素mRNA方法的建立 被引量:5
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作者 雷小文 岳华 +1 位作者 李明义 汤承 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期292-295,共4页
根据鸡IFN-α基因序列设计引物,建立了定量检测鸡IFN-α基因表达水平的荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,并对新城疫病毒(NDV)感染的鸡法氏囊、胸腺中IFN-αmRNA表达水平进行了检测.结果表明,该方法对鸡IFN-αmRNA的扩增效率为103.99%,... 根据鸡IFN-α基因序列设计引物,建立了定量检测鸡IFN-α基因表达水平的荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)方法,并对新城疫病毒(NDV)感染的鸡法氏囊、胸腺中IFN-αmRNA表达水平进行了检测.结果表明,该方法对鸡IFN-αmRNA的扩增效率为103.99%,线性范围为10-2~10-9,相关系数为0.996,最低能检出73拷贝/反应;熔解曲线分析RRT-PCR产物在(88.6±0.2)℃出现单特异峰;特异性评价结果显示,本方法只扩增鸡IFN-αmRNA,不与常见禽源病原微生物发生交叉反应.对NDV感染鸡的法氏囊、胸腺中IFN-αmRNA表达水平的定量检测结果表明,IFN-αmRNA在感染后36,48 h显著升高.本研究建立的检测鸡IFN-αmRNA表达水平的RRT-PCR方法具有敏感性高、稳定性好和特异性强的特点,为鸡IFN-αmRNA的精确定量提供了新方法. 展开更多
关键词 新城疫病毒 干扰素Α mRNA 荧光定量RT-PCR
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鸡重组α-干扰素冻干粉剂的冻干保护剂的筛选 被引量:2
14
作者 姜正军 康梅 +1 位作者 王少娟 黄金 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期89-91,96,共4页
以获得适宜于制备鸡重组α-干扰素冻干粉剂的冻干保护剂为目标,通过冻干保护剂的筛选及冻干保护剂浓度的优化,确定了最优的冻干保护剂配方和装液量等工艺参数。结果显示:在最优配方(甘露醇(3%)+PEG(3%))和最佳的装液量(40%)条件下,冻干... 以获得适宜于制备鸡重组α-干扰素冻干粉剂的冻干保护剂为目标,通过冻干保护剂的筛选及冻干保护剂浓度的优化,确定了最优的冻干保护剂配方和装液量等工艺参数。结果显示:在最优配方(甘露醇(3%)+PEG(3%))和最佳的装液量(40%)条件下,冻干粉剂外观呈海绵状、表面平整、体积与冻结时的体积基本一致,颜色均匀,无起泡现象,复水迅速而完全。通过生物活性稳定性实验,证明在最优条件下制备的鸡重组α-干扰素冻干粉的生物学效价较为稳定(40℃条件下贮藏12个月,生物活性无变化)。最终获得的冻干保护工艺,对鸡重组α-干扰素冻干粉剂工业化生产具有一定的指导和借鉴意义。 展开更多
关键词 鸡α-干扰素 冻干保护剂 优化 筛选
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毕赤酵母高密度培养表达鸡α-干扰素的工艺研究 被引量:2
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作者 姜正军 刘树海 +2 位作者 王茂超 程全明 黄金 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期115-119,共5页
考察了10 L罐规模条件下pH、温度、装液量以及碳源流加模式对毕赤酵母高密度培养表达鸡α-干扰素的影响,确定了最优的生产工艺:在pH5.5、28℃、40%装液量条件下,当初始碳源耗尽的情况下,进行甘油和甲醇混合(流加体积速率比为20∶1)脉冲... 考察了10 L罐规模条件下pH、温度、装液量以及碳源流加模式对毕赤酵母高密度培养表达鸡α-干扰素的影响,确定了最优的生产工艺:在pH5.5、28℃、40%装液量条件下,当初始碳源耗尽的情况下,进行甘油和甲醇混合(流加体积速率比为20∶1)脉冲流加,产物鸡α-干扰素抗病毒活性最高,可达3×106 IU/mL。将该工艺在50 L发酵罐规模条件下进行放大,重复20批,结果表明此过程重复性较好,且目的蛋白表达量稳定,具有工业化生产的实际应用价值。 展开更多
关键词 毕赤酵母 鸡α-干扰素 优化 放大
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鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子-猪干扰素α1融合基因在大肠埃希菌中的可溶性表达及其生物学活性研究
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作者 胡涛 何志远 +2 位作者 张文昌 赵俊 王明丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期579-583,共5页
为可溶性表达重组鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(ChGM-CSF)与猪干扰素α1(PoIFNα1)融合蛋白,并研究其生物学活性,本研究分别提取鸡、猪肝脏细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增ChGM-CSF和PoIFNα1基因,经linker连接上述两种基因后将其克隆于p... 为可溶性表达重组鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(ChGM-CSF)与猪干扰素α1(PoIFNα1)融合蛋白,并研究其生物学活性,本研究分别提取鸡、猪肝脏细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增ChGM-CSF和PoIFNα1基因,经linker连接上述两种基因后将其克隆于pET-32a原核表达载体,转化E.coliBL21(DE3)菌株进行诱导表达,SDS-PAGE和western blot检测融合蛋白表达产物。在ST细胞/VSV病毒测定系统以细胞病变抑制法滴定该融合蛋白的抗病毒活性;同时用MTT法检测其对鸡淋巴细胞增殖活性的促进作用。结果显示,PCR扩增并融合后的ChGM-CSF和PoIFNα1融合基因约为1000bp,构建重组表达载体后,诱导表达的rChGM-CSF-PoIFNα1融合蛋白分子量约55ku,主要存在于破碎菌体的上清中,表达量较高。Westernblot检测结果显示,该融合蛋白分别能够与ChGM-CSF多抗和PoIFNα单克隆抗体特异性结合,其抗病毒比活性约为1.1×10^6IU/mg,并且具有促进鸡淋巴细胞增殖的活性。本研究为rChGM-CSF-PoIFNα1重组融合蛋白的研制及其相关活性的测定提供实验依据。 展开更多
关键词 鸡粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(ChGM-CSF) 猪干扰素α1(PoIFNα1) 融合基因 可溶性表达 促淋巴细胞增殖 抗病毒活性
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产鸡α干扰素的毕赤酵母菌高密度发酵工艺研究
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作者 曹丁 李学优 +1 位作者 肖宏艳 昝继清 《中国饲料》 北大核心 2019年第23期21-25,共6页
本试验以表达鸡α干扰素的毕赤酵母工程菌为研究对象,在50 L发酵罐水平,研究pH、装液量、溶氧、诱导条件等因素对发酵产鸡α干扰素的影响。确定了最优发酵工艺为菌体增殖阶段:控制pH为6.0,溶氧控制在30%~40%,诱导前菌体浓度为400 g/L,... 本试验以表达鸡α干扰素的毕赤酵母工程菌为研究对象,在50 L发酵罐水平,研究pH、装液量、溶氧、诱导条件等因素对发酵产鸡α干扰素的影响。确定了最优发酵工艺为菌体增殖阶段:控制pH为6.0,溶氧控制在30%~40%,诱导前菌体浓度为400 g/L,诱导时控制pH为5.5,溶氧控制在20%~30%,用50%质量浓度的山梨醇:甲醇=1:4的诱导剂,采取连续补料方式,诱导初期补料速度为1 mL/(L·h),每小时提升一个单位,5 h后控制流加速度为5~6 mL/(L·h)。此工艺条件可实现500 L规模发酵生产鸡α干扰素,并且工艺稳定,鸡α干扰素的抗病毒活性可达到4.5×107 U/mL以上,生产成本降低55%,发酵效价提高了3.5倍,并且控制简单,适合规模化生产。 展开更多
关键词 毕赤酵母 鸡α干扰素 高密度发酵 工艺优化
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